الدرس العملي الثالث

19
ة ي ئ ا ذ غ ل ا ة ي ي ب ل ا ات ون ك م راعة ز ل ا ة ي بCulture Medium ات ب لي ا ل ما الك و ه) ن ئا الك ي ح ل ا ذ ب ح و ل ا ي الذ ع ي ط تس ي) ن ا) ون ك ن ة ات اج ب ت ج ا ا ب ل ج دا) ن ع ق ي ر ط ة ي ل م ع اء ب لي ا، ي ئ و ض ل اL ث ي ح ع ي ط ت س ي) ن ا ل ص ح ي ي عل ي ئ اL ن ذ ب س ك ا) ون ي ر لك ا) ن م و ج ل ا ماء ل وا) ن م ة رت لت ا ع م ر ص ا ب ع ل ا ة ي ئ غذ م ل ا ذام خ ت س ا ن ة لطاق ا ة ي ئ و ض ل ا ها ل و ج ي ي لn ا ة طاق ة ي ئ ا ب م ي ك ها م ذ خ ت س يال ل ج وعة م ج م) ن م لات ع ا ف ي ل ا ة ماوت ي ك ل ا) ون ك ب ل واد م ل ا ة ي س سا لا ا ا ص ي وا) ذات ب! لي- ات ب ي برو ب- ذرات ب ه و ي ز ك( ) ون ك ن ات ون م ر له ا ات ب مي ا ب ت ف ل وا ماض ح لا وا ة وت و ن ل ا، مات ي ر بn لا وا ما ك) ج ت ي ب) ن ع ات ب ل م ع ل بL مي ي ل ا ي ئ ا ذ غ ل ا ل ج دا ات ب لي ا وعة م ج م) ن م ات ب ك ر م ل ا ة وت ي اL ب ل ا هامة ل ا ا كذ ه . وً ذا جL خذت ي ة ي س لن ا ن ات ان ب لي ل و ا اء ر ج لا ا ة ي ئ ا ب لي ا رعة ر مت ل ا ل ج ذا ن ة ي ع و لا ا ة ي ح ا ج ز ل ا ل. م ع م ل ا ن ال و س ل وا) ن لا ا ما ي ه ة ي ي ب ل ا ؟-: ة ي ي ب ل ا وم ه ف م ي ط ت س ي ي ه وسط ل ا ي ئ ا ذ غ ل ا ي الذ ذم خ ت س ي ي ف راعة ر ة ج س ي لا ا ي لت وا ي م ي ئ ها لي ع اء ر ج ا ات ب لي ا ة ف ل ت خ م ل ا رعة ر مت ل وا هذف ب ول ض ح ل ا ها مي ي عل رض غ ذ ف ف.) ن غي م) ون ك ن هذف ل ا ها مي و ه ول ض ح ل ا ي عل س لا الك و اار ر م ي سلا ا ي ف فL س ك ب ل ا سام ق نلا وا ي حت ل ص ح ي ي عل وات م ي ة رت ض خ و ا ة رت ذ ج و اار ر م ي سلا ا ي حت ل ص ح ي ي عل ات ب ئ ل م كا ا ب ه و ث خ ي) ن ا رف ع ي ئ ي عل ومات ق م ة ي ي ب ل ا ة ي ع را ز ل ا ي ه و ما ك-: ي ل ن16

Post on 29-Jul-2015

214 views

Category:

Documents


2 download

TRANSCRIPT

Page 1: الدرس العملي الثالث

الغذائية البيئة مكونات

الزراعــــــــــــــــة Culture Mediumبيئــــــــــة

عن داخليا احتياجاته يكون أن يستطيع الذي الوحيد الحي الكائن هو الكامل النبات

الجو من الكربون أكسيد ثاني على يحصل أن يستطيع حيث الضوئي، البناء عملية طريق

طاقة إلى يحولها الضوئية الطاقة باستخدام المعدنية العناصر مع التربة من والماء

األساسية المواد ليكون الكيماوية التفاعالت من مجموعة خالل يستخدمها كيميائية

واألحماض والفيتامينات الهرمونات يكون )كربوهيدرات- بروتينات- لبيدات( وأيضا

من مجموعة النبات داخل الغذائي التمثيل عمليات عن ينتج كما واإلنزيمات، النووية

L. وهكذا الهامة الثانوية المركبات المنزرعة النباتية األجزاء أو للنباتات بالنسبة يحدث جدا

بالمعمل. الزجاجية األوعية بداخل

؟ البيئة هي ما اآلن والسؤال

والتي األنسجة زراعة في يستخدم الذي الغذائي الوسط هي بسيط بمفهوم البيئة:-

معين. غرض على منها الحصول بهدف والمنزرعة المختلفة النبات أجزاء عليها ينمي

واالنقسام التكشف في االستمرار أو الكالس على الحصول هو منها الهدف يكون فقد

كامل نبات على تحصل حتى االستمرار أو جذرية أو خضرية نموات على نحصل حتى

يلي:- كما وهي الزراعية البيئة مقومات على نتعرف أن يجب وهنا

Macro elements. الكبرى - العناصر1Micro elements. الصغرى - العناصر2 Vitamins . - الفيتامينات3 Amino acid. األمينية - األحماض4 Carbohydrates. الكربون أو الطاقة - مصدر5 Plant hormones . النباتية - الهرمونات6

من الهدف حسب مختلفة أشكال لها المستخدمة الغذائية البيئة أن تامعروف ومن

والتيSemi solid medium الصلبة شبه أوSolid medium الصلبة البيئة فهناك استخدامها

االجار. تركيبها في يدخل

Stationary liquid متحركة غير األولى نوعين تحت تندرج والتي السائلة البيئات وهناك

mediumالمتحركة والثانية Agitated liquid mediumالهزاز جهاز معها يستخدم والتي

حالة في ولكن وعيوبه مميزاته له منها نوع وكل التجربة فترة معها ويظل الكهربي

ورق من يكون معين حامل أو كوبري على النبات وضع يلزم السائلة البيئة استخدام

المختار. النباتي الجزء عليه ويوضع البيئة في غمره ويتم الترشيح16

Page 2: الدرس العملي الثالث

؟ البيئة مكونات من مكون كل وظيفة هي ما التالي السؤال ولكن للبيئة الرئيسية المكونات تفصيل معرفة يجب السؤال هذا على ولإلجابة

الزراعية:-

Basic Mineral Salts األساسية:- أوال: العناصر ألنسجة الغذائي الوسط يتطلب حيث العضوية، غير األمالح من مجموعة وهي

L النبات قسمين:- إلى وتنقسم العضوية غير المركبات من دائما مصدرا- : ى الكبر العناصر عناصر سبعة عن عبارة وهي قليلة غير بكميات النبات يحتاجها التي وهي الصوديوم- –كالتالي:- النيتروجين- الفسفور- البوتاسيوم- الكالسيوم أساسية

الماغنسيوم- الكبريت. الصغرى:- العناصرL، صغيرة بكميات إليها النبات يحتاج التي العناصر وهي بضع عن تزيد ال بحيث جدا

L عليها ويطلق ملليجرامات وهي: الحديد- المنجنيز- الزنك- األثرية العناصر أيضا

العناصر هذه أن ثبت البورون- النحاس- المولبيدنيوم- اليود- األمنيوم- الكلور- وقد

لألنزيمات. كمنشطات تعمل

بيئة وخاصة األنسجة زراعة مجال في المستخدمة البيئات معظم أظهرت وقد

L. النبيتات نمو كفاءة لتحسين أدخلت بأنها م1962 سنة وسكوج موراشيج معمليا

سواء المغذية البيئة في العناصر تلك اختيار كيفية عن التساؤل يجب هنا ومن

يحتاجها أن المفترض النسبة تحديد وكيفية صغرى، أو كبرى العناصر هذه أكانت

الحيوية. العمليات في ضرر أي حدوث دون النبات

المثال سبيل فعلي النبات، نمو مراحل في معين دور له عنصر لكل أن فنجد

كأحد يدخل الكالسيوم أما ،لالكلوروفي جزيء تركيب في أساسي جزء الماغنسيوم

تركيب في يدخل أنه إلى أهمية فترجع للنيتروجين وبالنسبة الخلية جدار مكونات

في أيضا ويدخل الخلية بناء أساس وهو البروتين تكون والتي األمينية األحماض

عملية إتمام على تساعد التي واإلنزيمات النووية واألحماض الفيتامينات تركيب

تركيب من جزء والمولبدنيوم والزنك الحديد عنصر أن نجد كما الضوئي، البناء

األنزيمات.

L التي العناصر فإن النبات لفسيولوجيات الدولية الجمعية للتوصيات وطبقا

أما كبرى عناصر أنها على تصنف مليجرام/لتر0,5 عن تزيد بكميات النبات يحتاجها

L أكثر صغرى. وبصورة عناصر فهي ذلك من األقل تؤخذ العناصر أن نجد فأننا شموال

المثال سبيل للنبات. على ميسرة صورة في تكون لكي أيونات أو أمالح شكل على

17

Page 3: الدرس العملي الثالث

ويكون النبات منه يستفيد حتى البيئة في النترات أيون صورة على يكون النيتروجين

أن كما ،(NH4 NO3 & KNO3) بوتاسيوم نترات أو أمونيوم نترات هيئة على البيئة في

ثنائي بوتاسيوم أو بوتاسيوم نترات هيئة على البيئة في يمد البوتاسيوم أيون

MgSO4.7H2) الماغنسيوم ( وكبريتاتKCI) البوتاسيوم كلوريد ( أوKH2PO4) الفسفور

Oمنه فيستفاد الفسفور أما والماغنسيوم الكبريت من النبات احتياجات ( تكفي

على فيكون الكالسيوم أما الهيدورجين ثنائي الصوديوم فوسفات صورة على النبات

النبات. منه يستفاد حتى كالسيوم كلوريد أو كالسيوم نترات هيئة

في أبدا منفردة توجد ال العناصر هذه أن نجد فأننا الصغرى للعناصر بالنسبة أما

وكبريتات النحاس كبرتيات مثل المركبة الصورة في أما توجد فهي لذا الطبيعة

وسكوج- موارشجي بيئة في الخامسة المجموعة )تمثل المنجنيز وكبريتات والزنك

الصورة على الحديد يكون بأن يوصي حيثEDTA المخلبية الصورة على (. أو1962

صوديوم في إذابته ويتم بالبيئة ترسيبه لمنع وذلك البيئة في للحديد كمصدر المخلبية

(.Na2 EDTA) أدتا

Vitamins- : : الفيتامينات ثانيا بكميات مطلوبة وهي األنزيمية، النظم في مساعد كعامل الفيتامينات تعمل

مزارع في استخداما الفيتامينات أكثر وهو الثيامين شيوعا أكثرها ومن جدا قليلة

بنتوثيانيت والكالسيوم والبيرودكسين النيكوتين حمض أيضا النباتية, ومنها األنسجة

منظمة مادة وهي ملليجرام/لتر100 بتركيز عادة يستخدم والذي ومايوانستول

المرشحات خالل من الفيتامينات بتعقيم ينصح لذا بالحرارة تتأثر والفيتامينات حيوية

دافئة. وهي البيئة تعقيم بعد بالماصة إضافتها ثم

Amino Acid:- األمينية : األحماض ثالثا بعض إال األنسجة مزارع في الغذائي للوسط األمينية األحماض يضاف ال عادة

D من بدالL المشابه يستخدم ما بذلك. وعادة تقتضي والتي الخاصة الحاالت

كازين العضوي النيتروجين من مخلوط استخدام يفضل الجليسين. وكما بإستثناء

يحتاج وقد ببتيدية بروابط مرتبطة االمينية األحماض من مخلوط وهو هيدروليزات

L حمض مثل مطلوب فسيولوجي تأثير إلحداث معين أميني حمض إلضافة أحيانا

أيضا. منبه تأثير وله االيثيلين تخليق في مؤثر دور له والذي الميثونين

سبيل على منها األنسجة مزارع في تستخدم التي األمينية األحماض أهم ومن

منهم خليط واالمونيا. واستخدام واالسبارجين وجلوتامين واليوريا االرجنين المثال

18

Page 4: الدرس العملي الثالث

معمليا. واالتجاه النبيتات نمو تثبيط إلى يؤدى مما بينهما تداخل حدوث يسبب قد

L الحديث مع غذائي وسط كل مكونات تحديد هو النباتية األنسجة مزارع فى حاليا

ومستخلص ومولت الببتون مثل النقية غير الطبيعية المستخلصات استخدام استبعاد

الخميرة.

6 Carbohydrates :- الكربوهيدراتية : المواد رابعا الحيوية العمليات جميع إلتمام وذلك للطاقة مصدر إلى يحتاج حي كائن كل

كمصدر السكريات إلى يحتاج غذائي وسط كل فإن وعليه الحي، الكائن بداخل

L السكريات أكثر هو والسكروز والطاقة، للكربون غير ثنائي سكر وهو استعماال

L فعال )جلوكوز+ فركتوز(. وتأثيره من يتكون كيتونى مختزل بعكس النمو على جدا

العالية الحرارة متحمل والسكروزوالالكتوز. المالتوز مثل األخرى السكريات بعض

الوسيط فى%5-2 من بتركيز يستخدم ما عادة ويستخدم األخرى السكريات عن

وإتمام األنسجة زراعة فى النباتية األجزاء ونمو تطور على يساعد لكي الغذائي

L يكون ال قد والذي الضوئي البناء عملية إظالم فى كالزراعة العملية تلك إلتمام كافيا

باإلضافة اللون. وهذا بيضاء األوراق وتكون الكلوروفيل النبات يكون ال وبالتالي تام

الضوئي. وعلى للتمثيل كافي غير األنابيب فى الكربون أكسيد ثاني تركيز أن إلى

داخل الضوئي البناء بعملية والقيام الكربون لمصدر بديل يكون السكر فإضافة ذلك

األكمل. الوجه على الزراعة أوعية

زراعة معامل داخل المحلية األسواق فى الموجود السكر استخدام ويمكن

من للتخلص إذابته بعد السكر ترشيح االعتبار فى األخذ النباتية. مع األنسجة

به. العالقة الشوائب

6 Plant Growth Regulators:- النباتية النمو : منظمات خامسا أن نجد فأننا وبالتالي وأعضائه وأنسجته خالياه جميع لنمو محصلة هو النبات نمو

النبات بداخل والتطور النمو تنظيم على تعمل النبات بداخل تنتج عضوية مواد هناك

L صغيرة بكميات تتكون العضوية المواد الطبيعية. وهذه الهرمونات عليها يطلق جدا

الفسيولوجي. تأثيرها ألحداث أخرى أماكن إلى تنتقل ثم النبات من معينة أماكن فى

للنمو والموقفة والمثبطة المنشطة هي مجاميع ثالثة إلى النباتية الهرمونات وتنقسم

باختصار. المجموعات هذه عن نتكلم وسوف

Growth Position :- النمو - موقفات1

19

Page 5: الدرس العملي الثالث

لفترة معينة ساللة أو معين صنف على الحفاظ الغرض حالة فى عادة وتستخدم

ومن النبات فى تدهور يحدث ال حتى ذلك عن تزيد وال شهر،12:6 من الزمن من

(.CCC) السيكوسيل هرمون المجموعة هذه أشهر

Growth Inhibitors :- النمو - مثبطات2 جميع تم وفيها النبات نمو من لتبطئ البيئة على تضاف الهرمونات وهذه

حتى محددة لفترة النبات تأخير منها والهدف شديد ببطء ولكن الحيوية العمليات

عند الطبيعة فى ذلك نالحظ لنموه. حيث مالئمة الغير بالظروف المرور من يتمكن

( إلىABA) االبسيسك حمض ينتقل حيث الجفاف أو اإلجهاد لبعض النباتات تعرض

هذه مرور وبعد النبات بداخل النتح عملية من لتقليل الثغور بغلق ويقوم األوراق

كانت كما الثغور تعمل وبالتالي مكانه إلى أخرى مرة يرجع المالئمة الغير الظروف

لنموه. المناسبة العادية الظروف فى

األقلمة لمرحلة النبات خروج تأخير حالة فى يستخدم فقد األنسجة زراعة فى أما

عالقة له وهذا مناسب بسعر األسواق فى بيعه بهدف أشهر ثالثة عن تزيد ال لمدة

السوق. ومستلزمات والطلب بالعرض

Growth Activated- : النمو - منشطات3 تساعد لكي المركبات هذه من أكثر أو عنصر إضافة الضروري من عام بوجه

L المنزرع النباتي للجزء جيد نمو على فنحصل النمو، على الهرمون ويختلف معمليا

فى المستخدم النباتي الجزء ونوع نموه ومرحلة النباتي نوع حسب على المضاف

هي: رئيسية أقسام ثالثة إلى الزراعة. وتنقسم

Auxins: أ( االوكسينات IAA, NAA, IBA, NOA, 2,4-D and 2,4,5-T مثــــــــــــــــــل

على تعمل حيث النبات، فى الطبيعي تأثير عملها فى تماثل مركبات وهى

الخاليا وانقسام النبات عن األوراق وانفصال البراعم وتكوين النبات استطالة

L. النبيتات تجذير على وتساعد القمية والسيادة النبات وانتحاء معمليا

L أكثر ألنهمIAA عن التجذير عملية فى استخداما األكثر هماNAA, IBA ويعتبر ثباتا

L وأقل منه L األكثر D & 2,4,5-T-2,4يعتبر والضوء. كما بالحرارة تأثيرا نمو فى استعماال

من كال بوظيفةD-2,4 يقوم قد األحيان بعض العرضية. وفى األجنة وتكون الكالس

L والسيتوكينينات االوكسينات بالنبات. لهم بديل ركمصد معا

Cytokinins: ب( السيتوكينينات BA, Kin, 2iP and Zin مثــــــــــــــــــل

20

Page 6: الدرس العملي الثالث

أساسين دورين لها أن حيث الخاليا، وانقسام االستطالة بهرمونات تعرف وهى

كبديل الهند جوز يستخدم البراعم. وقد وإخراج الخاليا انقسام هي اإلكثار عملية فى

العالية النسبة أن وجد فقد عامة وبصفة البيئة فى للسيتوكينينات

أما ، الخضرية النموات وتكوين الخاليا انقسام من تشجيع للسيتوكين/االوكسين

ال والسيتوكينينات بأن العلم الجذور. مع تكوين على تشجع منها المنخفضة النسبة

االوكسينات. بدون منفردة النبات على الجذور بتكوين تقوم

)HCL الهيدروكلوريك حمص فى بالمعمل تحضيرها عند تالسيتوكينينا تذوب

فى إذابته ثم تحضيره المراد السيتوكينين من جم0,1 بوزن ذلك يتم عيارى( حيث1

HCLبنسبة تحضيرة تمت قد يكون وبالتالي مقطر، ماء ملى100 إلى استكماله ثم

ماء(.1: هرمون1)

من جم0,1 بوزن بالمعمل تحضيرها فيتم والجبريلينات االوكسينات بالنسبة أما

هيدروكسيد أو الصوديوم هيدروكسيد فى إذابته ثم تحضيره المراد االوكسين

مقطر، ماء ملى100 إلى استكماله عيارى( ثم1 )KOH & NaOH البوتاسيوم

مقطر(. ماء1: هرمون1) بنسبة تحضيرة تمت قد يكون وبالتالي

Gibberelins (GA3): ج- الجبريلليناتL الجبريللينات أكثر وهو يشجع نوع. الجبريللين52 من أكثر منه أن حيث شيوعا

مع مساعد عامل يكون أنه إلى باإلضافة األجنة، ونمو الجذور تكوين نمو على

أساسيته. بصفته مطلوب يكون ال وقد ،تالسيتوكينينا مع وكذلك االوكسينات

ذلك عن بتعويضها يقوم حيث الطويل النهار ذات النباتات مع استخدامه ويفضل

معمليا.

بزراعة الناتجة للنباتات التشكيل فى النمو منظمات أهمية نالحظ هنا ومن

L المهمة العوامل . ومن األنسجة .االدنين كبريتات مثل النيتروجينية القواعد هي أيضا

التالية: النقاط ( فىAdenine sulfate- AdSO4) االدنين كبريتات أهمية وترجع . النمو على - يساعد1. االبطية البراعم إكثار معدل - يرفع2. السيتوكينين لتأثير مشابه تأثير - له3. الورقية المساحة زيادة على إيجابي تأثير - له4. السيتوكينينات وجود فى العرضية األفرع تكوين على - يشجع5

بتركيز يستخدم ما وعادة النباتات لبعض أهمية السابقة الدراسات من ونالحظ إضافة إلى تحتاج ال أخرى نباتات هناك أن من الرغم ملجم/لتر. وعلى80-40 من

مستمرة. بصفة

األخرى: سادسا6: اإلضافات21

Page 7: الدرس العملي الثالث

Agar: اآلجار - 1 %1-0,6 بتركيز الصالبة إلعطائها للبيئة تضاف عديدة كربوهيدراتية مادة هما البيئة فى الستخدام أساسيين سببين البحرية. وله الطحالب من عليها ونحصل

عند وتصلبة التسخين عند إذابته : سهولةوالثانيةالحيوية. الناحية من خمولةاألول:الغرفة. حرارة درجة

وهو الكبريتات، مع استر فى ويدخل الالكتوز سكر من وحدات من يتركب اآلجار المسئول هو واالجروز واالجروبكتين، االجروز من يتكون متجانس غير عديد سكرلالجار. الجيل صفة عن

Activated charcoal : النشط - الفحم2

منها:- أسباب لعدة النباتية األنسجة مزارع فى النشط الفحم يستخدم البيئة من المنزرع النسيج بواسطة تنتج والتي للنمو المثبطة المواد - امتصاص

المغذية. االرتباط فى عالية قابلية لها المواد هذه أن حيث مثل النمو منظمات - امتصاص

النشط. بالفحم فى كالتربة األسود اللون إلى الشفاف األبيض اللون من المغذية البيئة - تحول

الجذور. تكوين على يساعد مما الطبيعةالمنزرعة. األنسجة من تنتج التي الفينولية بالمواد باالرتباط عالية قابلية - ذات

pH :- الحموضة - درجة الدليل الهيدروجين. وهي أيون لتركيز السالب اللوغاريتم بأنه pH الــ يعرف

منpH الــ ويتدرج المستعملة المحاليل قلوية أو حموضة لمعرفة والسريع السهل

على فيدل ذلك من األقل أما pH = 7عن التعادل نقطة وتكون درجة14 حتى صفر

(.14-7) قلوي الوسط فيكون ذلك من األعلى أما حامضي، الوسط أن

L ضروريpH والــ صورة في وجعلها البيئة في المعادن أيونات لتسهيل جدا

يكون حتى متعادلة إلى حامضية تكون ما غالبا وهي عليه النامية للنباتات ميسرة

منه ةاالستفاد من النبات تمكن لها الميسرة الصورة في الغذائية العناصر جميع

.عليه ضرر أي حدوث دون

:- هما بطريقتينpH الـــ تقدير ويتم :- pH -meter جهاز أ(

األلكترود هذا أن األلكترود, حيث طريق عن الهيدروجين أيون تركيز يقيس الذي

L حساس يكون قياس محلول في وضعه الهيدروجين. ويتم أيون من تركيز ألي جدا

L للجهاز الحموضة درجة لضبط منظم ويتم الغذائية البيئة حموضة قياس قبل أوال

مباشرة. لهاpH الــ ضبط قبل الغذائي للوسط الحرارة درجة ضبط

22

Page 8: الدرس العملي الثالث

)KOH أوNaOH مثل قلوية مادة أي باستخدام الغذائي للوسطpH الـ ضبط ويتم

عياريHCL( 0.1.) الهيدروكلوريك حمض مثل حامضية مادة بأي عياري( أو0.1

وبعد الغذائي الوسط إلى اآلجار إضافة قبل أي مباشرة التسخين قبل ذلك ويتم

البيئة. معايرة

الـ يكون تسخينه يتم اآلجار إليه المضاف الصلب الغذائي الوسط فإن وعموما

pHالـ يكون السائل المغذي الوسط في أما ،1 5,7 حوالي له pH5,1 حوالي له

1.

:- pH ب( أوراق المحلول, في الورقة طرف بغمس وذلك والبيئات المائية المحاليل في يستخدم

درجة كل أن حيث الدليل في الموجودة القياسية األلوان مع الناتج اللون يقارن ثم

.pH من معنية قيمة يقابلها لون

:- المغذية البيئة - تعقيم الكائنات لنمو الالزمة الغذائية العناصر معظم على المغذي الوسط الحتواء نظرا

المغذي للوسط التعقيم عملية وغيرها. فإن والخمائر والفطريات كالبكتريا الدقيقة

التي الملوثات هذه من عليه للحفاظ جدا ضروري عليه النباتي الجزء زراعة قبل

وهالكه. موته إلى تؤدي سامة مواد وتفرز الغذاء على تنافسه

:- هي المغذي الوسط لتعقيم طرق عدة وهناك Autoclaving :- بالبخار ( التعقيم1

االستعمال في وأسهل األنسجة زراعة معامل في استعماال الطرق أكثر وهو

وضع يتم التعقيم( حيث )حلقة باألتوكالف يسمى جهاز طريق عن ذلك يتم حيث

وضغط ْ م121 حرارة درجة على الجهاز في وضعه ثم أوعية في المغذي الوسط

إلى تصل وقد دقيقة20 ولمدة المربعة رطل/بوصة1,5 = 2 كجم/سم1,5 جوي

معظم على بالقضاء يسمح تعقيمها. مما المراد الكمية حسب على ساعة نصف

23

Page 9: الدرس العملي الثالث

من يحتويه بما المغذي الوسط بتعريض تسمح ال الوقت نفس الملوثات. وفي

كبيرة. بكميات التكسير أو الفقد إلى العالية الحرارة لدرجة حساسة مكونات

بالبخار:- التعقيم مميزات ومن. الفيروسات خاصة الملوثات على السرعة- البساطة- القضاء

:- فهي عيوبه أما. المغذي الوسط حموضة في تغير يحدث أن - يمكن

النباتية والهرمونات كالفيتامينات للحرارة الحساسة خاصة المكونات بعض - تكسير. واألنزيمات الحيوية والمضادات

وجلوكوز. وزيادة فركتوز األحادي السكر من وحدتين إلى ينكسر - السكروز: حيث )مادة النباتي للنسيج سامة مواد وتكوين السكر كرملة إلى يؤدي التعقيم

الفورفورال(.. نشاطها : تفقد النباتية - المستخلصات

. التفاعل على قدرته في فقد له يحدث % منه90 من : أكثر - الجبريلك

Cold sterilization : البارد ( التعقيم2 والزياتين الجبريللين مثل العالية بالحرارة تتأثر التي المركبات بعض هناك

في تعقيمها يمكن ال التي األخرى النمو منظمات وبعض االبسيسك وحمض

L تعقيمها يتم األتوكالف. لذا 0,45 – 0,22 قطر ذات الغشائية المرشحات في أوال

على تكون عندما وتعقيمها تسخينها بعد الصلبة البيئة على أضافتها ثم ميكرون،

إلى تصل أن بعد إضافتها يتم السائلة البيئة في أما ْ م،40 - 37 من حرارة درجة

الغرفة. حرارة درجة

:- الطريقة هذه مميزاتبها. تغير أي حدوث دون العالية بالحرارة تتأثر التي المواد على الحفاظ

:- الطريقة هذه عيوب أما الفلتر- تحتاج من الفيروسات جزئيان بعض الفلتر- مرور على المواد صأدمصا

األتوكالف. في التعقيم ببساطة وليس طويل وقت إلى الطريقة هذه

sterilization Radio :- اإلشعاعي ( التعقيم3 خطورته من بالرغم الغذائي الوسط تعقيم في اإلشعاعات بعض استخدام يمكن

من العديد تكسير إلى تؤدي أنها حيث الحدود، أضيق في أال باستخدام ينصح وال الغذائي الوسط في مساحة مواد تكوين إلى وتؤدي والفيتامينات العضوية األحماض

أشعة مثل العالية تكلفتها إلى باإلضافة األمينية. وهذا واألحماض السكر لتكسير نتيجة

24

Page 10: الدرس العملي الثالث

على أما ...... الخ، واألنابيب البالستكية واألوعية البيئات تعقيم في تستخدم جاما للقضاء وذلك(UV) بنفسجية الفوق األشعة لمبة )الهود( فيستخدم الزراعة كابينة ساعة من بأكثر الزراعة قبل تشغيلها ويتم المكان هذا داخل حية كائنات أي على

ق.10 عن تزيد ال ولمدة :- البيئات وحفظ تحضير في إتباعها الواجب الشروط

.تالكيماويا أنواع أنقى من المغذية البيئة - تحضر1المتلوث. لتجنب المستخدمة األدوات - تعقيم2. لتحليلها منعا اللون بنية زجاجيات في كالحديد المحاليل بعض - حفظ3 في وحفظها الصغرى المعادن وأمالح والفيتامينات النباتية الهرمونات - تحضير4

المغذية. البيئة على وضعها عند بها ويعمل الثالجة البيئة على البيئات نمو نجاح في ألهميته البيئة حموضة درجة من - التأكد5

المغذية. األوزان ذات المعادن وزن من لتمكن عشرية أرقام4 حساس ميزان - استخدام6

جدا. الصغيرة استخدام وعدم فيه للوزن زجاجي كأس أو ناعم بالستيك استخدام - يراعي7

بالكامل. الوزن نقل ويتم ملساء تكون حتى أوراق تحضيرها المطلوب البيئة مكونات فيه مدون سجل أمامه الباحث - يضع8

حدا. على مركب كل المطلوبة بالكميات ال حتى ملي200 تتعدى ال قليلة بكميات والفيتامينات الهرمونات تحضير - يتم9

كلها. الكمية فتفقد الملوثات ألحد تتعرض قد أو تكسير أو فقد لها يحدثالعذب. الماء من المغذية البيئة في المقطر الماء - يستخدم10ْ م.4 حرارة درجة على الثالجة في المحاليل - حفظ11 ال رايت الجيل % , أما1 - 0.6 بين ما تتراوح الصلبة البيئة في األجار - كمية12المغذي. الوسط % في0.2 يتعدى. األنسجة مزارع في االستعمال أنواع لكل صالحة واحدة بيئة توجد - ال13. واستعمالها تثبتها حتى اختبارها من البد مستخدمة جديدة مادة - أي14. ثابتة بنسب والصغرى الكبرى العناصر على تحتوي أن البد البيئات - جميع15 النمو على تعمل السيتوكينينات أما والتحذير النمو على تشجع - االوكسينات16البراعم. وتكوين الخطأ لتفادي األحيان أغلب في المناسبة تعتبر التجارية الزراعية - البيئات17

. التجريبي

Table 1: Basal Medium Murashige and Skoog (1962).

Stock solution

Constituentsconcentrations

g/liter

To make up 1 liter of MS

medium (mgl-1)

Final conc. in MS

medium (mgl-1)

A NH4NO3 82.50 20 1650.00

B KNO3 95.00 20 1900.00

C H3BO3 1.240 5 6.20

KH2PO4 34.00 170.00

25

Page 11: الدرس العملي الثالث

KI 0.166 0.83

Na2MoO4.2H2O 0.050 0.25

CoCl2.6H2O 0.005 0.025

D CaCl2.2H2O 88.00 5 440.00

E

MgSO4.7H2O 74.00 5 370.00

MnSO4.4H2O 4.460 22.30

ZnSO4.7H2O 1.720 8.60

CuSO4.5H2O 0.005 0.025

F*Na2.EDTA 7.450 5 37.25

FeSO4.7H2O 5.570 27.85

G

Thiamine. HCl 0.200 5 0.10

Nicotinic acid 0.100 0.50

Pyrodoxine. HCl 0.100 0.50

Glycine 0.400 2.00

*This stock solution was prepared by dissolving each constituent in 200 ml-distilled

water. The Na2.EDTA.2H2O solution was heated and the 2nd FeSO4.7H2O solution was added to

the 1st one with continuous stirring. After cooling, it was diluted to 1000 ml with distilled water.

All stocks were stored in amber colored bottle in refrigerator.

26