Белянкина Е.Ю. , Родина И.А., Шевченко Т.В., Тихонов В.П
DESCRIPTION
Возможности применения метода высокочастотной ультразвуковой допплерографии на модели сосудов куриного эмбриона ex vivo в доклинических исследованиях. Белянкина Е.Ю. , Родина И.А., Шевченко Т.В., Тихонов В.П. ОАО Завод экологической техники и экопитания «ДИОД». «Минимакс-Допплер-К». - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
Возможности применения метода Возможности применения метода высокочастотной ультразвуковой высокочастотной ультразвуковой
допплерографии на модели допплерографии на модели сосудов куриного эмбриона сосудов куриного эмбриона
ex vivoex vivo в доклинических в доклинических исследованияхисследованиях
Белянкина Е.Ю., Родина И.А., Шевченко Т.В., Тихонов В.П. ОАО Завод экологической техники и экопитания «ДИОД»
«Минимакс-Допплер-К»«Минимакс-Допплер-К»
10-дневный куриный эмбрион10-дневный куриный эмбрион
1- сосуд венозного типа; 2 – сосуд артериального типа
1 2
Допплерограммы сосудовДопплерограммы сосудов
Допплерограмма сосуда венозного типа
Допплерограмма сосуда артериального типа
Исследуемые биологические Исследуемые биологические эффектыэффекты
Местнораздражающее действие
Антиаритмическое действие
Гипо- или гипертензивная активность
Местнораздражающее действиеМестнораздражающее действие
Cтандартный раздражающий агентРаствор калия гидроксида / Kalium hydroxidum (KOH)
Схема эксперимента 0 мин 80 сек
Раствор сравнения – физиологический раствор
Измеряемые показатели1. Линейная скорость кровотока Vs (см/сек)2. Изменение скорости ((Vs)n – (Vs)o) х 100%, кровотока (%) = (Vs)о
измерение скорости измерение скорости кровотока в кровотока в
интактных сосудахинтактных сосудах
измерение скорости измерение скорости кровотока после кровотока после
воздействиявоздействия
нанесение нанесение KOHKOH
Раздражающее действие Раздражающее действие KOHKOH на на сосуды ХАО куриных эмбрионовсосуды ХАО куриных эмбрионов
Концент-рация
KOH, %
Изменение скорости
кровотока, %
Визуальная оценка состояния сосудов
(ХЕТ-КAM-тест)
Выраженность эффекта
Физ. раствор
-2,6±1,2 без измененийотсутствие действия
1,0 -12,8 ±2,2мелкие кровоизлияния в отдельных капиллярах
слабое
1,5 -20,3 ±1,8кровоизлияния в
капиллярах, слабая гиперемия
умеренное
2,5 -38,7 ±2,2точечные кровоизлияния
по всей поверхности, выраженная гиперемия
выраженное
Оценка антиаритмического действия Оценка антиаритмического действия Исследуемые препараты1. Аритмогенный препарат 2. Антиаритмический препарат Строфантин УнитиолStrophanthidin (кат. № 66-28-4, Sigma) Dimercaptopropansulfonate sodium
Схема эксперимента нанесение нанесение унитиола строфантина
0 мин 5 мин 10 мин 30 мин 60 мин
измерение скорости измерение скорости кровотока кровотока в сосудах в сосудах после воздействия
Оцениваемые показателиЧастота возникновения аритмии (%).Выживаемость эмбрионов (%).
Допплерограммы сосудовДопплерограммы сосудов после после воздействия строфантинавоздействия строфантина
до последо посленанесения строфантинананесения строфантина
Оценка действия Оценка действия антиаритмического препаратаантиаритмического препарата
0
20
40
60
80
100
5 10 30 60
Время наблюдения, мин
Возникновение аритмии
Строфантин Унитиол +Строфантин
0
20
40
60
80
100
5 10 30 60
Время наблюдения, мин
Выживаемость эмбрионов
Строфантин Унитиол +Строфантин
Гипо- и гипертензивное действиеГипо- и гипертензивное действиеИсследуемые стандартные препараты
Схема эксперимента 0 мин 5 мин 10 мин 30 мин 60 мин
измерение скорости нанесение измерение скорости кровотока в кровотока в исследуемого сосудах после воздействия интактных сосудах препарата
Измеряемые показатели1. Линейная скорость кровотока Vs (см/сек)2. Изменение скорости ((Vs)n – (Vs)o) х 100%, кровотока (%) = (Vs)о
Вазоконстриктор Вазодилятатор
Noradrenaline (кат. № 51-41-2, Sigma) Atenolol (кат. № 29122-68-7, Sigma)
Допплерограммы сосудов после Допплерограммы сосудов после воздействия норадреналинавоздействия норадреналина
Допплерограмма сосуда венозного типа
Допплерограмма сосуда артериального типа
до после нанесения норадреналина
Оценка действия Оценка действия гипо-/гипертензивных препаратов на гипо-/гипертензивных препаратов на скорость кровотока в сосудах ХАОскорость кровотока в сосудах ХАО
-20
0
20
40
60
0 5 10 30 60
Время наблюдения, минИзм
енен
ие
скор
ости
кро
вото
ка,
%
Атенолол 10-5М Атенолол 10-4М Атенолол 10-3М
Норадреналин 3х10-5М Норадреналин 10-5М Норадреналин 3х10-4М
Оценка гипотензивного действия Оценка гипотензивного действия растительных экстрактоврастительных экстрактов
Исследуемые препараты1.Экстракт сушеницы 2. Экстракт листа оливы
(Gnaphalii uliginosi extract siccum) (Olive leaf powder extract)
Схема эксперимента 0 мин 5 мин 10 мин 30 мин 60 мин
измерение скорости нанесение нанесение измерение скорости кровотока
кровотока в норадреналина экстракта в сосудах после воздействия
интактных сосудах
Измеряемые показатели1. Линейная скорость кровотока Vs (см/сек)
2. Изменение
скорости ((Vs)n – (Vs)o) х 100%,
кровотока (%) = (Vs)о
Оценка гипотензивного действия Оценка гипотензивного действия растительных экстрактоврастительных экстрактов
0
10
20
30
40
50
0 5 10 30 60Время наблюдения, мин
Изм
енен
ие
скор
ости
кро
вото
ка,
%
Норадреналин + Физ. раствор Норадреналин + Атенолол
Норадреналин +Экстракт сушеницы Норадреналин + Экстракт оливы
Характеристика аналитических Характеристика аналитических показателей экстракта сушеницыпоказателей экстракта сушеницы
Номер партии
Содержание дубильных веществ, %
Содержание флавоноидов, %
Содержание гидроксикорич-ных кислот, %
1 8,0 ± 0,1 0,83 ± 0,02 0,54 ± 0,05
2 8,1 ± 0,3 0,64 ± 0,01 0,65 ± 0,06
3 9,9 ± 0,5 1,15 ± 0,02 2,03 ± 0,02
4 9,5 ± 0,5 1,16 ± 0,02 1,36 ± 0,05
Сравнение действия экстрактов Сравнение действия экстрактов сушеницы разных партийсушеницы разных партий
0
10
20
30
40
50
0 5 10 30 60Время наблюдения, мин
Изм
енен
ие
скор
ости
к
ров
оток
а,%
Норадреналин + Экстракт сушеницы №1Норадреналин + Экстракт сушеницы №2Норадреналин +Экстракт сушеницы №3Норадреналин + Экстракт сушеницы №4
ЗаключениеЗаключение
Область применения:1. Оценка безопасности средств наружного применения (лекарственные, косметические и др);
2. Контроль качества субстанций и готовой продукции по некоторым видам биологической активности.3. Скрининговые исследования препаратов, обладающих потенциальным антиаритмическим, гипер- и гипотензивным действием;
СпасибоСпасибо за за
внимание!внимание!