Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный...
DESCRIPTION
Разработка экспрессного биолюминесцентного метода оценки реакции организма спортсмена на физическую нагрузку. Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В. Выполнил: магистрант 2 года Иванова Г.В. Проблема. Эмоциональная нагрузка:. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/1.jpg)
РАЗРАБОТКА ЭКСПРЕССНОГО БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНОГО
МЕТОДА ОЦЕНКИ РЕАКЦИИ ОРГАНИЗМА СПОРТСМЕНА НА
ФИЗИЧЕСКУЮ НАГРУЗКУ
Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А.
Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В.
Выполнил: магистрант 2 года Иванова Г.В.
![Page 2: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/2.jpg)
Проблема
Физическая нагрузка:
Эмоциональная нагрузка: Умственная нагрузка
Перегрузка организма
Травмы организма
Отсутствие объективных
экспресс методов контроля
Недостатки известных методов:• длительность, • сложность проведения анализа, • трудоемкость, • необходимость предварительной пробоподготовки в лаборатории, • инвазивность при анализе сыворотки и плазмы крови.
Сбор суточной мочи
ПульсометрыНаблюдения тренера
Анализ крови
Измерение гемодинамики
Определение максимального потребления кислорода (МНК), показателей анаэробного обмена (ПАНО) Фото электронного ресурса
www.google.ru
![Page 3: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/3.jpg)
Цель работы:
Изучить закономерности влияния слюны на биолюминесцентную
биферментную реакцию НАДН:ФМН-оксидоредуктаза-
люцифераза для разработки метода контроля стресса, связанного
с физическими и умственными перегрузками
Задачи:
1.Изучить влияние слюны на кинетику биолюминесцентной биферментной реакции: НАДН:ФМН-оксидоредуктаза-люцифераза
2.Определить факторы, влияющие на степень действия слюны на биолюминесцентную биферментную реакцию: НАДН:ФМН-оксидоредуктаза-люцифераза
3.Выбрать условия, обеспечивающие наибольшую чувствительность биолюминесцентного метода контроля стресса, связанного с физическими и умственными перегрузками
4.Изучить условия отбора и транспортировки проб слюны для получения повторяющихся результатов.
![Page 4: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/4.jpg)
NADH:FMN-oxidoreductase (R)NADH:FMN-oxidoreductase (R)
NADH (NADPH) + H+ + FMN NAD(NADP)+ + FMNH2
Luciferase (L)Luciferase (L)
FMNH2 + RCHO + O2 FMN
+ RCOOH + H2О + h Состав реакционной смеси:50 мкл 0.0025%-ного водного раствора
альдегида;5мкл смеси ферментов L+R;300 мкл 0.25 M фосфатного буфера, рН
7.0;10 мкл 5,4х10-4M раствора FMN;100 мкл 4х10-4М раствора NADH;+ 50 мкл слюны
Материалы и методы
![Page 5: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/5.jpg)
ПРОБОПОДГОТОВКА
Центрифуга Eppendorf Centrifuge 5810 r (Eppendorf , Германия)
Люминометр 20/20n (Turner BioSystems, США)
TriStar LB 941 Multimode Microplate ReaderФото электронного ресурса www.google.ru
![Page 6: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/6.jpg)
6
Результаты
Данные Кратасюк В.А.
![Page 7: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/7.jpg)
7
![Page 8: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/8.jpg)
8
![Page 9: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/9.jpg)
9
![Page 10: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/10.jpg)
10
![Page 11: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/11.jpg)
Диплом Черняева В.2011г.
![Page 12: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/12.jpg)
Влияние слюны спортсменов (ориентирование) до и после тренировки
Диплом Черняев В. 2011г
![Page 13: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/13.jpg)
Диплом Черняев В. 2011г
![Page 14: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/14.jpg)
14
Пациент, №
Повторности
Воспроизводимость результатов анализа (Тип влияния слюны испытуемых на L+R при действии
физической нагрузки)1 2 3 Тип
Пациенты иппотерапии1 LI не изменяется LI не изменяется LI не изменяется 12 LI не изменяется LI не изменяется LI не изменяется 13 LI↓ LI ↓ LI не изменяется 24 LI не изменяется LI не изменяется LI не изменяется 15 LI ↓ LI ↓ LI ↓ 26 LI ↓ LI ↓ LI ↓ 27 LI не изменяется LI↓ LI ↓ 28 LI ↑ LI ↑ LI ↑ 3
Студенты1 LI не изменяется LI не изменяется LI не изменяется 12 LI не изменяется LI не изменяется LI не изменяется 13 LI ↓ LI ↓ LI ↓ 24 LI ↑ LI ↑ LI↑ 35 LI ↑ LI не изменяется LI ↑ 3
Диплом Черняев В. 2011г
![Page 15: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/15.jpg)
Контроль эффективности лечения Контроль эффективности лечения методами иппотерапииметодами иппотерапии
III
I
IIIIII
III
III
I
№ пациента
LI,%
Диплом Черняев В. 2011г
![Page 16: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/16.jpg)
СТУДЕНТЫ, ФИЗИЧЕСКАЯ НАГРУЗКА
2 человека
2 тип
0
20
40
60
80
100
1 2 3 4 5 6 7
Повторности
ЛИ
до
во время
после
1 тип2 человека
2 тип
0
20
40
60
80
100
1 2 3 4 5 6 7
Повторности
ЛИ
до
во время
после
2 тип
0
20
40
60
80
100
1 2 3 4 5 6 7
Повторности
ЛИ до
во время
после
3 тип1 человек
Разделение на 3 группы:ЛИ увеличивается после нагрузкиЛИ уменьшается после нагрузкиЛИ почти не изменятся
Эффект сохраняется в нескольких экспериментах
Диплом Черняев В. 2011г
![Page 17: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/17.jpg)
Сравнение результатов, полученных биолюминесцентным методом анализа слюны с результатами, полученными иными
экспериментальными и классическими методами (кардиограмма)
![Page 18: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/18.jpg)
Исследование биохимического состава слюны на биохимических анализаторах
Диплом Гриценко Е.В.1998
![Page 19: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/19.jpg)
![Page 20: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/20.jpg)
РЕЗУЛЬТАТЫ•Использование метода атомно-абсорбционной спектроскопии для определения концентраций металлов в слюне.•Измерение активности ферментов слюны кинетическим методом на фотометре Humalyzer Junior.•Измерение физико-химических параметров слюны электрохимическим методом на газоанализаторе ABL50.Получение спектров поглощения слюны на двухлучевом регистрирующем спектрофотометре UVIKON 943.Получение ЯМР-спектра слюны.Показана зависимость величины ЛИ от концентрации ионов кальция, водородных ионов, активности ферментов: лактатдегидрогеназа, амилаза, аспартат-аминотрансфераза, креатинкиназа; концентрации ионов натрия, калия. Концентрация креатинина не связана с величиной ЛИ.
![Page 21: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/21.jpg)
Получена динамика влияния слюны на биотест в течение дня, для людей живущих в одинаковых условиях(температура, питания, работа.)
0
20
40
60
80
100
120
1 2 3 4 5 6 7
LI%
Участник
Динамика влияния слюны на биотест в течении дня.
утро
День
вечер
Диплом Черняева В.2011г.
![Page 22: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/22.jpg)
ПОЛУЧЕНО ВЛИЯНИЕ СЛЮНЫ НА БИОТЕСТ ПОСЛЕ ПРИЕМА ПИЩИ
0
20
40
60
80
100
120
1 2 3 4 5
Испытуемые(4,9,3,1,8)
ЛИ до еды
после еды
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
1 2 3 4 5 6
Участник
LI%
до
после
Диплом Черняева В.2011г.
![Page 23: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/23.jpg)
анализ биологической жидкости спортсмена, не употребляющего стероиды.
анализ биологической жидкости спортсмена, употребляющего стероиды
Эффект употребления стероидов на результаты биолюминесцентного теста
![Page 24: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/24.jpg)
ВЛИЯНИЕ ВОЗРАСТА, ПОЛА, ВЕСА НА РЕАКЦИЮ БИОЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ
![Page 25: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/25.jpg)
Результаты
![Page 26: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/26.jpg)
![Page 27: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/27.jpg)
Хранение
![Page 28: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/28.jpg)
![Page 29: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/29.jpg)
![Page 30: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/30.jpg)
![Page 31: Руководитель: профессор, д. б. н. Кратасюк В.А. Научный консультант: м.н.с. Римацкая Н.В](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022062308/568130eb550346895d970aaa/html5/thumbnails/31.jpg)
ВЫВОДЫ
1 Обнаружена индивидуальная реакция организма на физическую и
умственную нагрузку, деление на 3 типа
2Предположено, что такие факторы как: концентрация химических
элементов, пол, вес, возраст, питание, применение препаратов влияют
на биферментную систему
3 Выбран оптимальный состав реакционной смеси для обеспечения
наибольшей чувствительности биолюминесцентного метода контроля
стресса, связанного с физическими и умственными перегрузками
4 Показано, что анализ слюны должен быть проведен в течение 4
часов после пробоотбора.