流式细胞术

在微生物学中的应用

彭公峰 10808058

流式细胞术原理

流式细胞术在微生物学中的应用

FISH-FCM 技术检测活性污泥中微生物群落结构

1. 制备活性污泥悬浊液

2. 制备菌悬液以及原位杂交

3. 流式细胞仪的校正以及 cell quest 软件分析

5‘ 端经过羧基荧光素标记，适量的甲酰胺溶液，目的是为了增加探针杂交严格性，探针 BET 与 GAM 之间只有一个碱基的差别

将阴性区域设定在 Rejected region内， G1 中的每一个小点均代表探针阳性细胞，利用 CellQuest 软件统计G1 中的微生物数目

100 ～ 10 1 区域为 NON 探针标记的阴性区域，FL1 一 H 值大于 10 的区域为阳性区域

A.bacteria ； B ： Eucarya  ； c ： d-Proteobacteria ； D ： B Proteobacteria ； E ： Proteobacteria ； F ： Comamonas spp ．

I ： Eucarya  ； 2 ： Proteobacteria ； 3 ： BProteobacteria ；4 ： Proteobacteria ； 5 ： Comamonas spp ．

类群相对含量（ % ） = 特异性探针标记的细胞数目 /探针

EUB 标记的数目 X100%

FISH-FCM 方法检测酵母 - 细菌二元体系中微生物数量

• 微生物样品固定 (E.COLI, 酵母，两种二元体系）

• 荧光原位杂交（细菌通用探针 EUB33 ， 5’ 端用荧光染料 Cy5修饰；酵母探针为 PF2 ， 5’ 端用荧光染料 Cy3 修饰）

• 流式细胞仪计数

• 微生物样品超声预处理研究

• FISH-FCM 同时检测不同浓度的细菌与酵母数量

染色后的细菌或酵母都能够发出强烈荧光，并与荧光微球、噪音 明显分开。

FISH 杂交后微生物散点图 图 a 为细菌单一体系的 FI4—SSC 散点图，图 b 为酵母单一体系

的 FL2-SSC 散点图，图 c 为二元体系的 FL2 一 FIA 双通道散点图

Measured concentration(cell ／ ml) Measured concentration(cell ／ ml)

单一体系和二元体系中酵母数量测定 单一体系和二元体系中细菌数量测定

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