丙二酸对琥珀酸脱氢酶丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用

PP 、、 9797教师教师： ： * * ** * *

生物化学与分子生物学实验室 CQMU 2008

一、实验目的一、实验目的

学习掌握酶竞争性抑制的概念和特点学习掌握酶竞争性抑制的概念和特点

学习丙二酸对琥珀酸脱氢酶竞争性抑制学习丙二酸对琥珀酸脱氢酶竞争性抑制 实验的设计思路和方法实验的设计思路和方法

二、实验原理二、实验原理

抑制剂和底物结构相似，可与底物竞争结合酶的活性中心，阻碍酶 - 底物复合物形成

酶的竞争性抑制作用酶的竞争性抑制作用

抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力，以及抑制剂与底物浓度的相对比例（ [I]/[S] ）

HOOC—CHHOOC—CH22—CH—CH22——COOHCOOH

HOOC—CH=CH—COOH

FAD

FADH2

甲烯白 MBH2

（无色）

甲烯蓝 MB （蓝色）

在无氧条件下以甲烯蓝褪色时间判断琥珀酸脱氢酶活性高低，观察竞争性抑制作用

丙二酸HOOC—CH2—COOH

琥珀酸脱氢酶琥珀酸脱氢酶

三、实验步骤三、实验步骤1. 1. 酶提取液的制备酶提取液的制备 处死大白鼠，分离出肌肉。处死大白鼠，分离出肌肉。 制备匀浆液。制备匀浆液。

２ . 酶促反应及竞争性抑制作用　 取试管 6 支，按表所列步骤操作。　 加液体石蜡以隔绝空气 37℃ 水浴保温 随时观察并记录各管褪色时间！！！

3. 3. 实验记录和结果分析实验记录和结果分析 试管编号试管编号

11 22 33 44 55 66

[I]/[S][I]/[S] 0:10:1 1:101:10 1:11:1 10.110.1 -- --

褪色时间褪色时间

酶提取液中有没有琥珀酸脱氢酶活性？

各管的褪色情况有何区别？为什么？

丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型及其特点是什么？

本实验中 5 号、 6 号试管的作用是什么？

四、结果分析四、结果分析1 、酶提取液中有没有琥珀酸脱氢酶活性？

2 、各管的褪色情况有何区别？为什么？

3 、丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型

及其特点是什么？如何证明的？

4 、本实验中 5 号、 6 号试管的作用是什么？

五、注意事项五、注意事项 加试剂时加试剂时看清底物与抑制剂的浓度看清底物与抑制剂的浓度。。

注意注意随时观察记录随时观察记录各管褪色时间。各管褪色时间。

37℃37℃ 水浴保温过程中，水浴保温过程中，不能振摇试管不能振摇试管，避，避免甲烯白重新氧化变蓝。免甲烯白重新氧化变蓝。

实验结束后一定实验结束后一定洗净试管内的液体石蜡洗净试管内的液体石蜡。。

开始！开始！