สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

มDetermination of glucosamine in the golden apple snail

Chuensumon Yimthin

Saroj Yimthin

งบประมาณเงนกองทนสงเสรมงานวจย ประจาป 2555มหาวทยาลยเทคโนโลยราชมงคลสวรรณภม

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

สารบญ

หนา1. กตตกรรมประกาศ [1]2. บทคดยอ (ไทย) [2]3. บทคดยอ (องกฤษ) [3]4. บท 1 15. บท 2 36. บท 3 87. บท 4 108. บท 5 159. บรรณานกรม 1610. ภาคผนวก 18

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

สารบญรป

หนา2.1 52.2 ลกใตใบ 52.3 ลกใตใบ 64.1 134.2 แสดงปรมาณ 14

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

สารบญตาราง

หนา4.1 510 นาโนเมตร 104.2 แสดงปรมาณเอนไซมเปอรออกซเดส 124.4 124.4 แสดงคาการดดกลนแสงของการกาจดฟนอลโดยเอนไซมเปอรออกซเดสจากวชพช 124.5 เปอรเซนตการกาจดฟนอลโดยเอนไซมเปอรออกซเดสจากวชพช 13

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

มการหาปรมาณกลโคซามนในหอยเชอร

Determination of glucosamine in the golden apple snail

1. นางชนสมณ ยมถน หวหนาโครงการ สดสวน 60%2. นายสาโรจน ยมถน ผรวมโครงการ สดสวน 20%3. นายเกรยงศกด ศรวจตรกมล ผรวมโครงการ สดสวน 20%

งบประมาณเงนกองทนสงเสรมงานวจย ประจาป 2555มหาวทยาลยเทคโนโลยราชมงคลสวรรณภม

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

[2]

บทคดยอ (ไทย)

การหาปรมาณกลโคซามนในหอยเชอร

บทคดยอ

ในงานวจยนมงศกษาการหาปรมาณกลโคซามนทเปนสารสาคญของกระบวนการสรางกระดกออนโดยสกดจากหอยเชอรซงเปนหอยทมอยมาก และหาไดงาย การหาปรมาณกลโคซามนทาไดดวยการวดคาการดดกลนแสงของสเปกโทรสโกป โดยนาหอยเชอรไปทาการไฮโดรไลตดวยกรดไฮโดรคลอรกทอณหภม100 ๐C เปนเวลา 4 ชวโมง จากนนนาสารตวอยางไปเจอจางดวยแอซทลแอซโทนในโซเดยมคารบอเนต สารตวอยางจะถกนาไปทาปฏกรยากบสารละลาย Ehrlich แลวนาไปวดคาการดดกลนแสงทความยาวคลน 530 นาโนเมตร ผลการทดลองพบวาหอยเชอรมปรมาณกลโคซามนมากถง 168.33มลลกรมตอกรม

คาสาคญ : กลโคซามน หอยเชอร ไฮโดรไลต

บทคดยอ (องกฤษ)

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

[3]

Determination of glucosamine in the golden apple snail

Abstract

This research is aimed to study of measurement glucosamine which material usedprocess creating the cartilage. Glucosamine was extracted from the golden apple snailwhich is the shell existing and readily available. Determination of glucosamine has beendone by measuring the absorbance of spectrophotometer. The golden apple snail washydrolysed with hydrochloric acid at 100 0C for 4 hours. Then the sample was dilutedwith sodium carbonate in acetylacetone. The samples will be taken to react with Ehrlichreagent and then measure the absorbance at a wavelength of 530 nm. The resultsshowed that the shell of golden apple snail have glucosamine to 168.33 milligrams pergram.

Key word : glucosamine, golden apple snail

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

[1]

กตตกรรมประกาศ

งานวจยเรองการหาปรมาณกลโคซามนในหอยเชอรซงสาเรจลลวงดวยความเรยบรอยนนผวจยขอขอบคณสถาบนวจยและพฒนา มหาวทยาลยเทคโนโลยราชมงคลสวรรณภม ทใหการสนบสนนดานงบประมาณในงานวจยครงน นอกจากนผวจยตองขอขอบคณทางสาขาวชาเคม คณะวทยาศาสตรและเทคโนโลย มหาวทยาลยเทคโนโลยราชมงคลสวรรณภมทใหการสนบสนนดานสถานท และเครองมอในการดาเนนงานวจย

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

สารบญ

หนา1. กตตกรรมประกาศ [1]2. บทคดยอ (ไทย) [2]3. บทคดยอ (องกฤษ) [3]4. บทท 1 15. บทท 2 46. บทท 3 107. บทท 4 148. บทท 5 169. บรรณานกรม 1710. ภาคผนวก 19

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

สารบญรป

หนารปท 2.1 Glucosamine 4รปท 2.2 หอยเชอร 5รปท 2.3 วงจรชวตของหอยเชอร 6รปท 4.1 แสดงคาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานกลโคซามน 13

สารบญตาราง

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

หนาตารางท 4.1 แสดงปรมาณการดดกลนแสงทเปลยนไปตอนาททความยาวคลน 510นาโนเมตร 10

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

บทท 1บทนา

1. หลกการและเหตผล

กลโคซามน (Glucosamine) คอ สารประกอบนาตาลกลโคสและกรดอะมโนกลตามน (Glutamineamono acid) (Apicella and Robinson, 1972) โดยรางกายสามารถสรางสารดงกลาวไดเอง แตการสรางสาร กลโคซามนจะลดลงเมออายเพมขน กลโคซามนเปนองคประกอบสาคญในกระบวนการสรางกระดกออนบรเวณขอตอ เลบ เอนยดกระดก เอนยดกลามเนอ ลนหวใจ และนาในไขขอ ซงมบทบาทสาคญในการเสรมสรางและซอมแซมมวลกระดกออนและนาในไขขอ ชวยบรรเทาอาการปวด ขด และบวมในผปวยโรคขอเสอม (Osteoarthritis) ชวยใหกระดกออนบรเวณขอตอมความแขงแรงและทนทานตอแรงกระแทกจากการออกกาลงกายหรอเลนกฬาไดมากขน บรรเทาอาการบาดเจบของขอตอและกลามเนอทเกดจากการฉกขาดระหวางออกกาลงกายหนก รปแบบของ กลโคซามนทรางกายดดซมไดดและใชกนอยางแพรหลาย เพอบรรเทาอาการโรคขอเสอม คอ กลโคซามนซลเฟต (Salvatore et al, 2000)

กลโคซามนเปนสารอาหารเสรมทกาลงเปนทนยมมากในปจจบนโดยเฉพาะในผสงอายทมภาวะขอและกระดกเสอม รวมทงผใชแรงงานและนกกฬาทตองแบกรบนาหนกตามขอตางๆ รางกายจะใชกลโคซามนสรางโปรตนคอลลาเจนซงเปนสวนประกอบของกระดกออนและเอน (Blumenthal and Roseman, 1957;Sietsma and Wessels, 1977; Exley, 1957) อาหารเสรมดงกลาวนมราคาคอนขางสง

กลโคซามนเปนสารทมสตรโครงสรางดงน

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

2

กลโคซามนเปนสารทอยในไคตนและกรดไฮยาลโรนก (ธาดา สบหลนวงศ, 2542)ไคตน เปนส วนประกอบ ทส า คญของผน ง เซลลของ เปลอก ก ง ป หอย และแมลง เป น

homopolysaccharides ของ N-acetyl-D-glucosamine ทตอกนดวยพนธะ 1, 4-glucosidic (อภสสรา,2537; Chon and Johnson, 1972)

การหาปรมาณกลโคซามนนนาวธของ Morgan-Elson (Morgan and Elson, 1934) มาใชโดยนามาทาปฏกรยากบ p-dimethyl aminobenzaldehyde แลวนาไปวดปรมาณโดยเครองสเปกโทรโฟรโตรมเตอรทความยาวคลน 585 นาโนเมตร (Good and Bessman, 1964; Subramanyam, 1987; Ueharaand Park, 2004)

โดยปกตกลโคซามนจะไดจากการนาไคตน ไคโตซานมายอยสลายเพอใหไดกลโคซามน และนากลโคซามนมาใชประโยชนอนๆ ตอไป

หอยเชอรเปนหอยทเปนศตรพชทสาคญในนาขาวอยางหนง มการขยายพนธอยางรวดเรว กอใหเกดความเสยหายตอนาขาวอยางมาก ผวจยจงมแนวคดทจะใชเปลอกหอยเชอรทเปนศตรพชมาสกดสารกลโคซามนซงเปนสารทมราคาสง และเปนสารทมการนาไปใชประโยชนอนๆ ดานการแพทยอกดวย

2. วตถประสงคของโครงการ1. เพอศกษาการสกดกลโคซามนจากหอยเชอร2. เพอหาปรมาณกลโคซามนจากหอยเชอร

3. ขอบเขตของโครงการวจย1. สกดกลโคซามนจากหอยเชอร2. หาปรมาณกลโคซามนจากหอยเชอร

4. ประโยชนทคาดวาจะไดรบ1. ไดวธการสกดกลโคซามนจากหอยเชอร

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

3

2. ไดกลโคซามนจากหอยเชอร

5. ระยะเวลาและแผนดาเนนโครงการวจยระยะเวลาเวลาเรมตน ตลาคม 2554 เวลาสนสดโครงการ กนยายน 2555

แผนดาเนนโครงการวจย

งานทปฏบต 2554 255510 11 12 1 2 3 4 5 6 7 8 9

1. ศกษาขอมล และเอกสารตาง ๆ2. จดเตรยมวตถดบ และสารเคมทใช3. สกดกลโคซามนจากหอยเชอร4. หาปรมาณกลโคซามนจากหอยเชอร

5. วเคราะหผลและทารายงานฉบบสมบรณ

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

บทท 2ทฤษฎ และงานวจยทเกยวของ

ในหาการปรมาณของกลโคซามนในหอยเชอรน ไดมการศกษาทฤษฎและงานวจยทเกยวของดงตอไปน

1. ทฤษฎทเกยวกบงานวจยน1.1 กลโคซามน1.2 หอยเชอร

2. งานวจยทเกยวของ

1. ทฤษฎทเกยวของ1.1. กลโคซามน (Glucosamine)กลโคซามน (Glucosamine) คอ สารประกอบนาตาลกลโคสและกรดอะมโนกลตามน

(Glutamine amono acid) โดยรางกายสามารถสรางสารดงกลาวไดเอง แตการสรางจะลดลงเมออายเพมขน มสตรโมเลกล คอ C6H13NO5 (Apicella and Robinson, 1972)

กลโคซามน เปนองคประกอบสาคญในกระบวนการสรางกระดกออนบรเวณขอตอ เลบ เอนยดกระดก เอนยดกลามเนอ ลนหวใจ และนาในไขขอ มบทบาทสาคญในการเสรมสรางและซอมแซมมวลกระดกออนและนาในไขขอ ชวยบรรเทาอาการปวด ขด และบวมในผปวยโรคขอเสอม (Osteoarthritis)ชวยใหกระดกออนบรเวณขอตอมความแขงแรงและทนทานตอแรงกระแทกจากการออกกาลงกายหรอเลนกฬาไดมากขน บรรเทาอาการบาดเจบของขอตอและกลามเนอทเกดจากการฉกขาดระหวางออกกาลงกายหนก รปแบบของกลโคซามนทรางกายดดซมไดดและใชกนอยางแพรหลาย เพอบรรเทาอาการโรคขอเสอมคอ กลโคซามน ซลเฟต

รปท 2.1 Glucosamine

http://www.Glucosamine - Wikipedia, the free encyclopedia.

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

5

1.2. หอยเชอร (golden apple snail)หอยเชอร

รปท 2.2 หอยเชอร(www.budmgt.com/agri/agri01/golden-apple-snail-control.html=3347)

ชอทองถน: หอยเชอรชอสามญ: Golden Apple Snailชอวทยาศาสตร: Pomacea canaliculataชอวงศ: Ampullariidaeประเภทสตว: สตวนาลกษณะสตว: เปนหอยนาจดจาพวกหอยฝาเดยว สามารถแบงหอยเชอรได 2 ชนด คอ ชนด

แรกจะมเปลอกสเหลองปนนาตาล เนอและหนวดสเหลอง และชนดท 2 มเปลอกสเขยวเขมปนดา และมสดาจาง ๆ พาดตามความยาว เนอและหนวดสนาตาลออน เปนหอยนาจดจาพวกหอยฝาเดยว(http://www.bedo.or.th/lcdb/biodiversity/view2.aspx?id=7387)

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

6

วงจรชวตของหอยเชอร

รปท 2.3 วงจรชวตของหอยเชอร (www.fisheries.go.th)

การขยายพนธของหอยเชอร

หอยเชอรมการเจรญเตบโตและขยายพนธไดอยางรวดเรว ลกหอยอายเพยง 2 – 3 เดอน สามารถจบคผสมพนธไดตลอดเวลา หลงจากผสมพนธได 1 – 2 วน ตวเมยจะวางไขในเวลากลางคน โดยคลานไปวางไขตามทแหงเหนอนา เชน ตามกงไม ตนหญารมนา โคนตนไมรมนา ขาง ๆ คนนา และตามตนขาวในนา ไขมสชมพเกาะตดกนเปนกลมยาว 2 – 3 นว แตละกลมประกอบดวยไขเปนฟองเลก ๆ เรยงตวเปนระเบยบสวยงาม ประมาณ 388 – 3,000 ฟอง ไขจะฟกออกเปนตวหอยภายใน 7 – 12 วน หลงวางไข

หอยเชอร เดมเปนหอยนาจดทอาศยอยในแหลงนาทวปอเมรกาใต ในประเทศไทยนาเขามาครงแรกจากประเทศญปนและไตหวน ในฐานะของหอยทกาจดตะไครนาและเศษอาหารในตปลา ซงนยมเลยงกนอยางแพรหลายราวกอนป พ.ศ. 2530 ตอมาไดมผคดจะเลยงเพาะขยายพนธเปนสตวเศรษฐกจเพอการบรโภค แตทวาไมไดรบความนยมจงปลอยลงแหลงนาธรรมชาต จนกลายเปนปญหาชนดพนธตางถนในปจจบน

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

7

ประโยชน

เนอหอยเชอรมโปรตนสงประมาณ 34 - 53 เปอรเซนต ไขมน 1.66 เปอรเซนต ใชประกอบอาหารไดหลายอยาง หรอทานาปลาจากเนอหอยเชอร ใชทาเปนอาหารสตวเลยง เชน เปด ไก สกร เปนตนเปลอกสามารถปรบสภาพความเปนกรดเปนดางของดนได ตวหอยทงเปลอกถานาไปฝงบรเวณทรงพมไมผล เมอเนาเปอยจะเปนปยทาใหตนไมเจรญเตบโตเรว และไดผลผลตด แตไมควรบรโภคเนอหอยเชอรในบรเวณทอยใกลโรงงานอตสาหกรรมทปลอยนาเสย หรอบรเวณพนททมการใชสารเคมกาจดศตรพช

โทษ

หอยเชอรกนพชทมลกษณะนมไดเกอบทกชนด เชน สาหราย ผกบง ผกกระเฉด แหน ตนกลาขาว ซากพชนา และซากสตวทเนาเปอยในนา โดยเฉพาะตนขาวในระยะกลาและทปกดาใหมๆ ไปจนถงระยะแตกกอ หอยเชอร จะชอบกนตนขาวในระยะกลาทมอาย ประมาณ 10 วน มากทสด โดยเรมกดสวนโคนตนทอยใตนาเหนอจากพนดน 1 – 1.5 นว จากนนกนสวนใบทลอยนาจนหมด ใชเวลากนทงตนทงใบนานประมาณ 1-2 นาท

การปองกนและการกาจด

วธกล

การจดเกบทาลาย เมอพบตวหอยและไข ใหเกบทาลายทนท การดกและกน ตามทางนาผาน ใหใชสงกดขวางตาขาย เฝอก ภาชนะดกปลา ดกจบหอยเชอรลก

หอยทฟกใหม ๆ สามารถลอยนาได ควรใชตาขายถ ๆ กนขณะสบนาเขานาขาว หรอกนบรเวณทางนาไหล

การใชไมหลกปกในนาขาว การลอใหหอยมาวางไข โดยใชหลกปกในทลมหรอทางทหอยผาน เมอหอยเขามาวางไขตามหลกทปกไว ทาใหงายตอการเกบไขหอยไปทาลาย

การใชเหยอลอ พชทกชนด ใชเปนเหยอลอหอยเชอรได หอยจะเขามากนและหลบซอนตว พชทหอยชอบกน เชน ใบผก ใบมนเทศ ใบมนสาปะหลง ใบมะละกอ หรอพชอน ๆ ทมยางขาวคลายนานม

ชววธ

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

8

ใชศตรธรรมชาตชวยกาจด เชนฝงเปดเกบกนลกหอยโดยปกตในธรรมชาตมศตรหอยเชอรอยหลายชนดทควรอนรกษ เชน นกกระปด นกปากหาง และสตวปาบางชนดซงสตวเหลานนอกจากจะชวยทาลายหอยเชอรแลวยงทาใหธรรมชาตสวยงามอกดวย

วธใชสารเคม

การใชสารเคม สารคอปเปอรซลเฟต (จนส) ชนดผงสฟา เปนสารทใชปองกนและกาจดหอยเชอรไดเปนอยางด มประสทธภาพสง ราคาถกและไมเปนอนตรายตอสงแวดลอม

(http:// th.wikipedia.org/wiki/หอยเชอร)

2. งานวจยทเกยวของในการสกดสารกลโคซามนจากเปลอกหอยเชอรนน มงานวจยทเกยวของหลายงานวจยดงนมการศกษาเพอหาปรมาณของไคตน โดยวดปรมาณไคตนในรปของสารกลโคซามน โดยใชเครอง

สเปกโทรสโกป จากผนงเซลล 13 ชนด ของเชอราทไดจากไม โดยวธ Colorimetric ของ Chen andJohnson (1972)

หรอการหาปรมาณสารกลโคซามน เพอใชหาปรมาณของไคตน และไคโตซาน จาก Serratiamarcescens และ Neurospora crassa ของ Subramanyam and Rao (1987)

มงคล สขวฒนาสนทธ รฐ พชญางกร เอกกมล คลายเกด สญญา กดน และ วาสน ประกอบกจ(2008) ศกษาการยอยไคตนและไคโตซานจากวสดเหลอทง เชน เปลอกกง กระดองป และแกนหมก ดวยเอนไซมเพอผลตเอน-อะซทล-ด-กลโคซามน และเอน,เอน-ไคอะซทล ไคโทไบโอส

ดนวต เพงอน ณชมน ธรรมรกษและ พฒน กสกรรมยนยง (2552) ศกษาการผลตไคตน – ไคโตซานจากศตรในนาขาว เพอใชประโยชนในทางการเกษตรและสงแวดลอม โดยทาการสกดไคตน – ไคโตซานจากสตวเปลอกแขงทไมมกระดกสนหลง เชน หอยเชอร หอยขม หอยโขง และ พวกกง จากการทดลองพบวาจากกระบวนการผลตไคตน และไคโตซานจากเปลอกแขงของหอยเชอร สามารถสกดไคตนและไคโตซานจากเปลอกหอยเชอรได โดยสามารถสกดไคตน และไคโตซานได เทากบ รอยละ 40.2 และ41.7 ตามลาดบ

จากงานวจยทกลาวมานน พบวามการสกดไคตน ไคตาซานจากเปลอกหอยเชอร ซงกลโคซามนนนเปนสารทไดจากการยอยสลายทงไคตน ไคโตซาน ซงกลโคซามนเปนสารทใชในทางการแพทย มประโยชนมาก เพราะกลโคซามนเปนองคประกอบสาคญในกระบวนการสรางกระดกออน

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

9

สวนหอยเชอรนนเปนหอยทเปนศตรพชทสาคญในนาขาวอยางหนง มการขยายพนธอยางรวดเรวกอใหเกดความเสยหายตอนาขาวอยางมาก และจากงานวจยทกลาวมานน ในเปลอกหอยเชอรมไคตน ไคตาซาน ผวจยจงมแนวคดทจะใชเปลอกหอยเชอรทเปนศตรพชมาสกดสารกลโคซามนซงเปนสารทมราคาสง และเปนสารทมการนาไปใชประโยชนอนๆ ดานการแพทยอกดวย

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

บทท 3วธดาเนนการทดลอง

ในการดาเนนการทดลองของงานวจยนมขนตอนในการดาเนนงานวจยดงตอไปน1. การเตรยมอปกรณ และสารเคม2. การสกดและหาปรมาณสารกลโคซามน3. การเตรยมสารละลายมาตรฐาน4. การคานวณผลการทดลอง

1. การเตรยมอปกรณ และสารเคม1.1 อปกรณอปกรณทใชในงานวจยนมดงตอไปน

1.1.1 เครองระเหยสารสญญากาศ1.1.2 เครองกรองสญญากาศ1.1.3 เครองยว-วสเบล1.1.4 ชดรฟลกซ1.1.5 อางนาควบคมอณหภม1.1.6 ตอบลมรอน1.1.7 ตดดความชน

1.2 สารเคมสารเคมทใชในงานวจยนมดงตอไปน

1.2.1 สารละลาย 6 N ของกรดไฮโดรคลอรก1.2.2 สารละลายเขมขนของกรดไฮโดรคลอรก1.2.3 สารละลายมาตรฐานของกลโคซามน1.2.4 สารละลาย 1.25 N ของโซเดยมคารบอเนต1.2.5 สารละลาย 4% ของแอซทลแอซโทน

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

11

1.2.6 สารละลาย 95% ของเอทานอล1.2.7 เอน-เอน-ไดเมทล-พารา-แอมโนเบนโซซอลดไฮด

2. การสกดและหาปรมาณสารกลโคซามนการสกดและหาปรมาณมขนตอนในการดาเนนงานวจยดงตอไปน1.1 นาเปลอกหอยเชอรมาทาความสะอาด อบใหแหงแลวนามาบดใหละเอยด1.2 นาตวอยางมา 10 กรม เตม 6 N ของกรดไฮโดรคลอรก ปรมาตร 100 มลลลตร นาไป

รฟลกซทอณหภม 100 องศาเซลเซยส เปนเวลา 4 ชวโมง1.3 ทงไวใหเยน แลวนาไปกรอง1.4 นาไปทาการระเหย โดยใชเครองระเหยสญญากาศ ทอณหภม 40 องศาเซลเซยส1.5 นาตวอยางไปเจอจางดวยนากลน ซงมปรมาตรรวม 20 มลลลตร1.6 นาสารตวอยาง ปรมาตร 1.0 มลลลตรไปเตม 0.25 มลลลตร ของ 4% แอซทลแอซโทน

(4% ของแอซทลแอซโทน ในสารละลาย 1.25 N ของโซเดยมคารบอเนต)1.7 ไปทาใหรอนขนทอณหภม 90 องศาเซลเซยส เปนเวลา 1 ชวโมง1.8 หลงจากนนทาใหเยนท แลวเตม 2 มลลลตร ของสารละลาย 95% ของเอทานอล เขยาให

ตะกอนละลายใหหมด1.9 จากนนนาไปทาปฏกรยากบ 0.25 มลลลตร ของสารละลาย Ehrlich (1.6 กรม ของเอน-

เอน-ไดเมทล-พารา-แอมโนเบนโซซอลดไฮด ใน 30:30 ของสารละลายผสมระหวาง 95%ของเอทานอลกบสารละลายเขมขนของกรดไฮโดรคลอรก ปรมาตร 60 มลลลตร) จากนนนาไปวดคาการดดกลนแสงท ความยาวคลน 530 นาโนเมตร

3. การเตรยมสารละลายมาตรฐานเตรยมสารละลายมาตรฐานของกลโคซามนทความเขมขนตางดงตอไปน คอ 0, 10, 20, 50,100 และ 200 มลลกรมตอลตร3.1 เตรยมสารละลายมาตรฐานของกลโคซามนทความเขมขนคอ 0, 10, 20, 50, 100 และ

200 มลลกรมตอลตร3.1.1 สารละลายมาตรฐานกลโคซามนทความเขมขน 0 มลลกรมตอลตร จะใชนา

กลนเพยงอยางเดยว โดยไมมสารกลโคซามน ซงจะใชเปนแบลงค

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

12

3.1.2 สารละลายมาตรฐานกลโคซามนทความเขมขน 200 มลลกรมตอลตร เตรยมไดจากการนาสารกลโคซามนไปชง 20 มลลกรม นาไปละลายในนากลน แลวปรบปรมาตรใหได 100 มลลลตร

3.1.3 สารละลายมาตรฐานกลโคซามนทความเขมขน 10, 20, 50, 100 และ200มลลกรมตอลตร เตรยมไดจากการใชสารละลายมาตรฐานกลโคซามนทความเขมขน 200 มลลกรมตอลตร มาเจอจางดวยนากลน

3.2 นาสารละลายของกลโคซามนทความเขมขนตางๆ ปรมาตร 1 มลลลตร ไปเตม 0.25มลลลตร ของ 4% แอซทลแอซโทน (4% ของแอซทลแอซโทน ในสารละลาย 1.25 Nของโซเดยมคารบอเนต)

3.3 ไปทาใหรอนขนทอณหภม 90 องศาเซลเซยส เปนเวลา 1 ชวโมง3.4 หลงจากนนทาใหเยนท แลวเตม 2 มลลลตร ของสารละลาย 95% ของเอทานอล เขยาให

ตะกอนละลายใหหมด3.5 จากนนนาไปทาปฏกรยากบ 0.25 มลลลตร ของสารละลาย Ehrlich (1.6 กรม ของเอน-

เอน-ไดเมทล-พารา-แอมโนเบนโซซอลดไฮด ใน 30:30 ของสารละลายผสมระหวาง 95%ของเอทานอลกบสารละลายเขมขนของกรดไฮโดรคลอรก ปรมาตร 60 มลลลตร) จากนนนาไปวดคาการดดกลนแสงท ความยาวคลน 530 นาโนเมตร

4. การคานวณผลการทดลองในการคานวณผลการทดลองนน คานวณไดจากการสรางกราฟคาการดดกลนแสงของ

สารละลายมาตรฐาน โดยมขนตอนดงตอไปน4.1 วดคาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานของกลโคซามนทความเขมขนคอ 0, 10, 20,

50, 100 และ 200 มลลกรมตอลตร โดยเครองยว-วสเบล ทความยาวคลน 530 นาโนเมตร

4.2 จากนนนาคาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานของกลโคซามนทความเขมขนคอ 0,10, 20, 50, 100 และ 200 มลลกรมตอลตร มาสรางกราฟ โดยแกน y เปนคาการดดกลนแสง สวนแกน x เปนคาความเขมขนของสารละลายมาตรฐานของกลโคซามน ซงจะได

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

13

สมการเสนตรงของกราฟมาตรฐาน ทสามารถนามาคานวณหาปรมาณของกลโคซามนจากเปลอกหอยเชอร

4.3 นาคาการดดกลนแสงของสารละลายตวอยางทสกดได

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

บทท 4ผลการทดลอง

จากการทดลองหาปรมาณสารกลโคซามนในหอยเชอรนน ไดผลการทดลองดงตอไปน

1. การวดคาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานของกลโคซามน และสารตวอยางจากการนาสารละลายมาตรฐานของกลโคซามนทความเขมขนตางๆ คอ 0, 10, 20, 50, 100

และ 200 มลลกรมตอลตรไปทาปฏกรยากบสารละลาย Ehrlich แลวนาไปวดคาการดดกลนแสงทความยาวคลน 530 นาโนเมตร นน ใหผลการทดลองตามรปท 4.1

รปท 4.1 แสดงคาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานกลโคซามน

จากกราฟการทดลองในรปท 1 แสดงใหเหนคาการดดกลนแสงทเปนเสนตรง โดยใหคาสมการเสนตรงเทากบ y = 0.003x โดยมคา R2 = 0.998 แลวทาใหสามารถวเคราะหหาสารตวอยางได

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

15

2. การวเคราะหหาปรมาณสารกลโคซามนในหอยเชอรจากการนาสารตวอยางไปวดคาการดดกลนแสงทความยาวคลน 530 นาโนเมตร นน ใหผลการ

ทดลองตามตารางท 4.1

ตารางท 4.1 แสดงปรมาณการดดกลนแสงทเปลยนไปตอนาท ทความยาวคลน 510 นาโนเมตร

การทดลองครงท 1 2 3 คาเฉลยปรมาณกลโคซามน (มลลกรมตอกรม) 168.4 166.67 170.93 168.33

จากตารางท 4.1 พบวาในการทดลองสกดกลโคซามนจากเปลอกหอยเชอรนนสามารถสกดกลโคซามนไดถง 168.33 มลลกรมตอกรม

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

บทท 5สรปผล การทดลอง

จากการทดลองหาปรมาณของกลโคซามนจากเปลอกหอยเชอร โดยการนามาไฮโดรไลตโดยใชกรดไฮโดรคลอรก เขมขน 6 N นาไปทาปฏกรยากบ 4% แอซทลแอซโทน (4% ของแอซทลแอซโทน ในสารละลาย 1.25 N ของโซเดยมคารบอเนต) แลวทาปฏกรยาตอกบสารละลาย Ehrlich (1.6 กรม ของเอน-เอน-ไดเมทล-พารา-แอมโนเบนโซซอลดไฮด ใน 30:30 ของสารละลายผสมระหวาง 95% ของเอทานอลกบสารละลายเขมขนของกรดไฮโดรคลอรก ปรมาตร 60 มลลลตร) จากนนนาไปวดคาการดดกลนแสงท ความยาวคลน 530 นาโนเมตร

ผลการทดลองพบวาสามารถสกดสารกลโคซามนจากเปลอกหอยเชอรไดปรมาณถง 168.33มลลกรมตอกรม

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

17

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

บรรณานกรม

ดนวต เพงอน ณชมน ธรรมรกษและ พฒน กสกรรมยนยง. (2552) การผลตไคตน – ไคโตซานจากศตรในนาขาว เพอใชประโยชนในทางการเกษตรและสงแวดลอม.www.nnr.nstda.or.th/rde_conf_2554/food/.../RT-RD-2552-01.pdf

ธาดา สบหลนวงศ และนวลทพย กมลวารนทร (2542) ชวเคมทางการแพทย พมพครงท4,จฬาลงกรณมหาวทยาลย

มงคล สขวฒนาสนทธ รฐ พชญางกร เอกกมล คลายเกด สญญา กดน และ วาสน ประกอบกจ (2008)การยอยไคตนดวยเอนไซมเพอผลตเอน-อะซทล-ด-กลโคซามน และเอน,เอน-ไคอะซทลไคโทไบโอส. จฬาลงกรณมหาวทยาลย.

อาภสสรา ชมดท (2537) ชวเคม พมพครงท 2 ภาควชาสรรวทยา คณะสตวศาสตร มหาวทยาลยเกษตศาสตร

Apicella, M.A. and Robinson, J.A. (1972) Physicachemical properties of Neissriameningitides group X polysaccharide antigen. American Society forMicrobiology. 6:773-778

Blumenthal, H. J., and S. Roseman. (1957). Quantitative estimation of chitin in fungi.J. Bacteriol. 74:222-224.

Chen, G.C. and Johnson, B.R. (1972) Improved colorimetric determination of cellwall chitin in wood decay fungi. Applied and Environmental Microbiology.46:13-16

Exley, D. (1957) The determination of 10-100 ug quantities of hexosamine. Biochem.J. 67:52-60

Good, F. A. and Bessman, S. P. (1964) Determination of glucosamine andgalactosamine using borate buffers for modification of the Elson-Morganand Morgan-Elson reactions. Anal. Biochem. 9:253-262.

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

18

Kaensombath, L. (2003) Evaluation of the nutritive value of ensiled and freshGolden Apple snails (Pomacea spp) for growing pig.www.mekarn.org/msc2003-05/theses05/.../lamplr.pdf

Morgan, W. T. J. and Elson, L. A. (1934) A colorimetric method for thedetermination of N-acetylglucosamine and N-acetylchondrosamine.Biochem. J. 28:988-995.

Salvatore, S., Heusechkel, R., Tomlin, S.,Davis, S.E., Edwords, S., Walker-Smith, J.A.,French, I. and Murch, S.H. (2000) Aliment Pharmacol. Ther. 14:1567-1579.

Sietsma, J. H., and J. G. H. Wessels. (1977) Chemical analysis of the hyphal wall ofSchizophyllum commune. Biochim. Biophys. Acta 496:225-239.

Subramanyam, C. and Rao, S.L.N., (1987) An enzymic method for the determinationof chitin and chitosan in fungal cell walls, J. Biosci. 12:125-129.

Uehara,T. and Park, J.T. (2004) The N-Acetyl-D-glucosamine kinase of Escherchia coliand its role in Murein recycling. Journal of Bacteriology. 186:7273-7279

http://www.budmgt.com/agri/agri01/golden-apple-snail-control.html=3347http://www.bedo.or.th/lcdb/biodiversity/view2.aspx?id=7387http://www.fisheries.go.thhttp:// th.wikipedia.org/wiki/

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

ภาคผนวก

เครองยววสเบล

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

20

คาการดดกลนแสง

คาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานของกลโคซามนทความเขมขนตางๆ ดงตอไปน คอ0, 10, 20, 50, 100 และ 200 มลลกรมตอลตร ซงวดโดยใชเครองยว-วสเบลสเกปโทรสโกปทความยาวคลน 530 นาโนเมตร

ความเขมขนของกลโคซามน(มลลกรมตอลตร)

คาการดดกลนแสง

0102050100200

0.00000.01680.06790.16780.31040.6178