α1-adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal...

17
a 1 -Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord Didier Morin, Agne Ás Bonnot, * Be  range Á re Ballion and Denise Viala Laboratoire de Neurobiologie des Re  seaux, UMR CNRS 5816, Universite  Bordeaux 1, avenue des Faculte  s, 33405 Talence Cedex, France Keywords: cranial and phrenic activities, in vitro study, phenylephrine, potassium channel, respiration Abstract Previous studies have reported that the a 1 -adrenergic system can activate spinal rhythm generators belonging to the central respiratory network. In order to analyse a 1 -adrenergic effects on both cranial and spinal motoneuronal activity, phenylephrine (1± 800 mM) was applied to in vitro preparations of neonatal rat brainstem±spinal cord. High concentration of phenylephrine superfusion exerted multiple effects on spinal cervical outputs (C2±C6), consisting of a lengthening of respiratory period and an increase in inspiratory burst duration. Furthermore, in 55% of cases a slow motor rhythm recorded from the same spinal outputs was superimposed on the inspiratory activity. However, this phenylephrine-induced slow motor rhythm generated at the spinal level was observed neither in inspiratory cranial nerves (glossopharyngeal, vagal and hypoglossal outputs) nor in phrenic nerves. Whole-cell patch-clamp recordings were carried out on cervical motoneurons (C4±C5), to determine ®rst which motoneurons were involved in this slow rhythm, and secondly the cellular events underlying direct phenylephrine effects on motoneurons. In all types of motoneurons (inspiratory and nonrespiratory) phenylephrine induced a prolonged depolarization with an increase in neuronal excitability. However, only nonrespiratory motoneurons showed additional rhythmic membrane depolarizations (with spiking) occurring in phase with the slow motor rhythm recorded from the ventral root. Furthermore the tonic depolarization produced in all motoneurons results from an inward current [which persists in the presence of tetrodotoxin (TTX)] associated with a decrease in neuron input conductance, with a reversal potential varying as a Nernstian function of extracellular K + concentration. Our results indicate that the a 1 -adrenoceptor activation: (i) affects both the central respiratory command (i.e. respiratory period and inspiratory burst duration) and spinal inspiratory outputs; (ii) induces slow spinal motor rhythmicity, which is unlikely to be related to the respiratory system; and (iii), increases motoneuronal excitability, probably through a decrease in postsynaptic leak K + conductance. Introduction Respiratory neuromodulatory processes have been extensively studied on isolated in vitro brainstem±spinal cord preparations as the removal of all possible peripheral targets yields an exclusively central action of neuromodulator application (for review see Onimaru, 1995). Murakoshi et al. (1985) were the ®rst to describe a depressant effect of noradrenaline on respiratory frequency. Thereafter, several pharmacological and electrophysiological studies have con®rmed and detailed the neuromodulatory role of central noradrenergic systems on the respiratory rhythm-generating and pattern-forming network, either on isolated brainstem±spinal cord or on medullary slice preparations from neonatal rat (Hilaire et al., 1989; Errchidi et al., 1990, 1991; Parkis et al., 1995; Al-Zubaidy et al., 1996; Johnson et al., 1996; Bayliss et al., 1997; Arata et al., 1998), newborn and juvenile mice (Funk et al., 1994; Funk et al., 1997; Selvaratnam et al., 1998) and adult turtle (Johnson et al., 1998). Although the global effect of adrenergic activation on central respiratory rhythm, and the mechanisms underlying the noradrenergic modulation of inspiratory activity in hypoglossal motoneurons (Funk et al., 1994; Parkis et al., 1995; Al-Zubaidy et al., 1996; Bayliss et al., 1997; Funk et al., 1997; Selvaratnam et al., 1998) are well documented, little is known about the cellular events underlying the changes in spinal inspiratory output induced by the application of adrenergic agonists. Several authors have reported that the activation of a 1 -adrenocep- tors could generate tonic motor discharges recorded from the cervical ventral roots of the spinal cord (Errchidi et al., 1991; Arata et al., 1998). Furthermore, the a 1 -agonist-induced tonic activity could be followed by sustained and periodic motor bursts, occurring synchronously on bilateral C2±C8 ventral spinal outputs (Dubayle & Viala, 1993). Moreover, a lesion approach consisting of rostro- caudal and caudo-rostral transections of the spinal cord localized the smallest piece of the cord capable of generating such slow motor discharges to three segments between C4 and C6 (Dubayle & Viala, 1996a), which closely correlated with the location of phrenic motoneurons (Kuzuhara & Chou, 1980). Finally, CO 2 and H + chemosensitivities of this rhythmic activity have been reported (Dubayle & Viala, 1998). From the ensemble of these results, the Correspondence: Dr D. Morin, as above. Email: [email protected] *Present address: NIH/NINDS/LNLC, Building 49, Room 3A50, 9000 Rockville Pike, Bethesda, MD 20892, USA Received 7 March 2000, revised 10 April 2000, accepted 19 April 2000 European Journal of Neuroscience, Vol. 12, pp. 2950±2966, 2000 Ó Federation of European Neuroscience Societies

Upload: didier-morin

Post on 06-Jul-2016

214 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

����������� ����� ������� �� � �������� �� �������� �� ����� � � ���� �� � �� ����� ��� ����� ��

���� � ��� ������ � �� ��� ����������� ���� � ��� ����� ������������� � ������ �� �� ������� ��� ���� ����� ������� ������� �� ���� �� ���� ���� !"� #� ������ �����

��������$ ����� ��� %&��� ������� ���� ����'� %&�' %&��� %������( �&��� � ��%�����

� �����

!��� �� ������ ���� ��� ���� ���� ��� ����������� ������ �� ������ ����� ������ ������� �� �� ���� � ��� ������������� �� ���� �"# $� ���� � ������� ����������� ������ � �� ����� ��� ����� � � ���� ��� ������ ������������ %�&'((��) ��� ������ � �� ����� �������� �� � �� ����� ��� �������&����� ��# *�� ������� � � ������������ �������� ��+����� ������� ������ � ����� ����� ������ %,-&,.)� ������ � � ���������� � ������� �� ��� � ��� �� ������ ������� �� ���� ����� �# /������� ��� � 001 � ���� � �� � � � � ������ �� ���� �� � ��� ���� ����� ������ ���������� ��� � ��� ������ �� �����# * ������ ��� ������������������ �� � � � � ������ ��������� �� ��� ����� ����� ��� ������ ������ � ������ �� ����� ������ %�� �� ����������� ����� ��� ��� �� ���� ������) � � � ����� ������# 2� ��������������� �� ����� ���� ����� �� � ����� � � ���� �� %,3&,0)� � �������� 4��� ��� � � ���� �� ���� �� ���� ���� �� � ������� ��� �� ���� ��� ������� ������ ��������� ���� ������������ ������ � � � ���� ��# $� ��� ����� �� � ���� �� %������ �� ��� � �������� ��) ������������ ����� � �� � ���� ��� ���5�� � ��� �� ������ � ���� ����+�� ���# * ������ ��� � �������� �� � � ���� �� �� ��� ���� ��� ������ ��� ���� ��� ���5�� �� %��� ��"��) ����� � ����� ��� ��� �� � � � � ������ �� ���� �� � ��� ������� � �# /������� �� ��� � � ��� ���5�� � �� ���� � ���� � ���� �� ������� �� � �� ����� ������ 6��� ������� � ��� ������� � ���� � � +� %778)9 ��� ���� ��� � ������� ����� � ���� �������� ��� � �������� � ������ ������ �� � :������� ���� � � �+���������� ;< ������� �# =�� ������������ ���� ��� �������� ��� � ����� �> %) ������ �� ��� ������ ������� �� ����� %#�# ������� �� ��� � ��� ������ �� ���� ����� �) ��� ����� ������ �� ������? %) ����� �� � ����� � � � ��������� ��� � ���"��� � � ������� � ���������� �� ������? ��� %)� ������� � � ���� ��� �+�� ���� �� � �� ��� ��� � ������� � � �������� ���" ;< �������#

$��� ��� �

��������� ���� ������ �������� ���� ���� ����������

������� � ������� �� ����� �������� ������� ��� ����������� ��

��� �� ��� � ��� ������� ���������� ������� ����� �� ����������

������� ����� � ���� ������ ���������� ��� ������ ���

��� ���� ����� !���"��� �� � ���#�� ���� ��� $��� � �������� �

���������� ������ � ������������ � ��������� ���%����

&���������� ������� ���� �������� ��� ���������������� �������

���� ��$� �� ��� �������� ��� ���� ������ ��� � �������

������������ ���� � � ��� ��������� ���� '���������� ���

�������'�� ��� �����"� ������ � ������� �������� ������� ��� �

� ������� ����� ����������� �� ������� ��� �(������ �� � � ��#�)

*������� �� � � ���+� ����) ,��"�� �� � � ����) -�'.����� �� � �

���/) 0���� �� � � ���/) 1����� �� � � ���2) -���� �� � � ���#��

������ ��� 3������� ��� �4��" �� � � ���5) 4��" �� � � ���2)

6��������� �� � � ���#� ��� ����� ������ �0���� �� � � ���#�

-������ ��� ����� ������ � ���������� ��������� � �������

��������� ���� � ��� ��� ������� � ��������� ��� ������������

������� � ��������� ������� �� �������� ������� �4��"

�� � � ���5) ,��"�� �� � � ����) -�'.����� �� � � ���/) 1����� �� � �

���2) 4��" �� � � ���2) 6��������� �� � � ���#� ��� ����

��� ������ ������ �� "��� ���� ��� �������� ������ ���������

��� ������� �� ������ ��������� ����� ������� � ��� ���������� �

���������� �������

6������ ������ ���� ������� ���� ��� ��������� � ��'��������'

��� ���� �������� ���� �� ���������� ������� �� ��� ��������

������� ��� � ��� ������ ��� �*������� �� � � ����) -���� �� � �

���#� 4������ ��� ��� ��'������'������� ���� ������� ���� ��

������ � ��������� ��� ������� �� ������� ��������

��������� � ��������� 78�7# ������� ������ ������ �9�����

: ;����� ���<� !������ � ����� ������� ��������� � ����'

������ ��� ����'������ ����������� � ��� ������ ��� �����=�� ���

� ������ ����� � ��� ��� ������� � ���������� ���� ��� ��

���������� � ����� ��� ���� ������� 75 ��� 7/ �9����� : ;�����

���/��� ����� ����� ��������� ���� ��� ������ � �������

������� �>�=����� : 7��� ��#+� 4������ 7�8 ��� (?

��� ������������� � ���� ���� �� ������� ���� ���� �������

�9����� : ;����� ���#� 4� ��� ���� ��� � ����� �������� ���

�������� ����@ 9� 9 !���� �� ���� * ���@ � ���A��� �'������� ��

�������� � ����@ BC(DBCB96DEBE7� 1������� 5�� � <-�+� �+++��"����� ,�"�� 1�������� !9 8+#�8� F6-

������� � ����� ����� ������ �� ���� ����� ������� �� ���� ����

�������� ������ �� ������������� �! ��� ��! ��"�#��$$� ���� � %� ������� �� �������� ������������ &��������

Page 2: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

������ ��������� ���� � ���� ��������� ��������� ����

�������� ��� ������� ������ ��� �������� ������ ��� ��� ���

���� �� � ����� � ��� ��������� ���� (������ �� �� ����

������� ������� ���� ���� ��������� ������� �� ���� ��

������� �� ��� ������ ��������� ��� ������� ��������������� �����

��� ��������� ��������� ������� "��� � �� �������� �������

�� ��������� ��������� ��������

&�� ��� ������ � ��� ������� ����� ���� � ����� ������� ��

����� ����������� � ������� ���� � ����� ��� ������� � �� ������

������� ������� � �� ���� ������� � ���� ��������� ���������

������ ����� ���� ���� �� ������ ���� ��� ��� �������

��������� � ��� 4������ �� ��� ��� � ��� ��� ��������

������ ��������� ��� ������� ������� �� ������ ���� �����������

������ ��� ��'���������� ������ ����� ���

�������� ��� ���� ��

$� ��� �������� ���� ���� � �������

*����� ���� ���� ����� �� � ������� �� ����� ����������� �

�������� ������� ��� �� ������ ���� �+�5'��'�� 6�������

9���� �� ��������� �������� &� �� �������� ���� ���� �������

�� �� �������� ������� �9����G ��� C��� 7���� 4������ -�� ���

���� ����� ����������=�� ���� ����� ��� ������������ 3��� �������

� ��� $��� ������� ������ - ���������� ��� ����� �� �� ��� �������

����� ��� ��� �"�� ��� ������ ���� ������ �� ��� ,����������

���� ���� ������ �� � 8� E �������� ��� ��� ��������� ����$����

������������ H��� ���� � ������ ����� ��������� �� 8� �7 &��

H� ���� ��� ��� �� ���� � ������ ��� ���� ��� ��� ��� � ������

� �� &�� ��������� ��� �������� ����� �������� ������ ��

4CI � !������� ������� � ������������ �,(*� � �������� ������� �� ������� �-� ��� �������������� ������� ������� �� � �������� ������� �� �7�� ������� �������� ��� ����� ,(* ���������� B�� ��� ��������� � � ��� ���� ��������� � ��� ������� �� ������ �1� (������ � � �� ����� �������� ������� ������ ����� ��� ������������ ����� ��� C���� ��������� ������� ;������� ����� ���) �������� ������ 6*! JJJ�K + +++�

,�����������'������� �������� �������� ���� ���� 8���

� 8+++ 4�������� � *������ B���������� 6�������� �������� ������ �� ������������� ��� 8��+�8�//

Page 3: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

���� � ����� ������ ��� �������� ����� ��� ��� �� ���� � �

������� ������������ ��� ��� �������� ���� � ��� ������ ��� ����

��� ����� ��� ������� ��� ����� �������� C� ������� �����������

����� ������ ��������� ���� ����� ��� ��� ��� � �������

��������� ������ ��������������� ����� ��� �������� �������

���� �� ����� �������� C� � � ������ ����� ��� ���� ���� � ���

4CI 8 7�������������� � ��� ��������� � ��� ������������ �,(*�'������� ��� �� ���� 4� ���� ������ ���������� ��� ��� ���������� ��� ���� �-�*����� � ����� ��������� ������������ � ,(* ������� �� ����� ��������� ������ ���� �1� *������ � ,(* ���������� ����� ���"��� � ��'����������� ����=��� �7� 7���� ������ ��� ����������� ������������ �� �������� � ��� ,(*'��"�� ��� ���� 7<� 75� �������� ������� ���) ���=���� ����� �+ �

8��8 9 !��� �� �

� 8+++ 4�������� � *������ B���������� 6�������� �������� ������ �� ������������� ��� 8��+�8�//

Page 4: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

������ ��� ��� ����� ���� ��� �������� �������� ������� ��

����������� ��� ��� ������� ��� � ��� ����� ���� ���� "��� ������

��� ����� &�� ����� ������� ����� ��� ���� ������ ��� ��� �� ���

�������� ����� � ���� �������� � ��������� ������� �� ���

������� ��� ��� 4������ ��� �������� ��� $��� � � 6����� �����

���" ���� ��� ������� ������� ������� ,���������� ���� ����������

4CI < 9����������� ������� � ������������ �,(*� ���������� � ������� ��� ������ �� ������ �-�7� 9������� �� ���� �������� ����� � ����� �� ���������� �������� ������� ��� ����������� B�� ���� ��� ,(*'������� ��� �� ���� ��� �� ������� �� �������� ������� ��� �78� 75 � 7�� CL�������������� �����) L� ����� �����) LCC� �������� �����

,�����������'������� �������� �������� ���� ���� 8��<

� 8+++ 4�������� � *������ B���������� 6�������� �������� ������ �� ������������� ��� 8��+�8�//

Page 5: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

��������� ���� �� ����$���� ������������ H��� �%���������� ����

��M �8D�M 7�8 ��( 2 5� ��� ��������� ��� !�@ B�7�� �8#) >7�� <)

B�(8,�5� + �) 7�7�8� � �) !�6�5� �) B�(7�<� 8� ��� 9'�������

<+

������������ ��������

1�� �������� ������� ��� ������� ��� ������ ����� ���������� ����

������� ����� ����� ������ ��������� 6������ ���� � ���$��

�� �+++�8+ +++� B����� 6��� � 9����� �� E��� *�������� ����'

4CI 5 6����� �����=���� � ��� ������������ �,(*�'������� ��� �� ���� �- ��� 1� 6� � ���� �� �� 4�� < ,(* ������� � ������� ��� ������ �������� ����� �-� ��� ����� �1� 7� ���������� �7� -�������� �8+ ������� � ���������� ����� ������� ����� ��� ����� ������ ���������� L� ����� �����) 7���������� ������� ��

8��5 9 !��� �� �

� 8+++ 4�������� � *������ B���������� 6�������� �������� ������ �� ������������� ��� 8��+�8�//

Page 6: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

����'$������ �+ 8�< "(=�� �����$��� ���������� �� N �++ �� ���

�������� � �� ��������� �(� ��� I�� ��� ��� ��������

����� �������� �I�������� -�"��� ��� 4������ ��������� ���� ���

����� � � ������� ���� ������� �1����� 9&�'�5+5� 1������

4������ �� ��'���� �������� �������

�������� ��������

C������������ ��������� ���� ��"�� �� ������ ������� �����

����� ����'���� �����'��� � �������� ������%��� �1����� �� � �

��#�� ,���� ��������� ����������� < ��� + !�� ���� ������ ��

���������� ����� �&O��+4'5� O,C� 4E� F6-� ���� � �������� ������

�,,'#<� B��������� 0����� ��� $���� ���� � ������ ��������� ���

!�@ >?'��������� �<+) 7�7�8� �) (*,*6� �+) -&, �!�8? ������ 8)

*I&-� �+ �� �( 2 < ��3����� ���� >�( C� ���� � ���������� ������

���������� � ��� ����� ��������� � ���� ���� � ��� ������� ������

� ��� ����� ����� ��� ����� ��������� ;������ �� ������� ���

����"�� ����� ��� ����� ���������� � �������� ������� �������� �

��� �������� ����� 6������ ���� � ���$�� �-������ �9� -��

C����� ����� 7-� F6-� ��� ������'$������ �� "(=� 1����� $�����

O���'���� ��������� ���� �� ������� ���� ���������� K � I� � �

������ ���������� P �� !� ����� ���� �������� ���� ��������� O���'

���� ����������� ��� ������ ���������� ���� �������� ����� ������'

��� � �������� � ����������� ������� ���������=��� �

�������=��� ������ ������ ����+ ;� � �� C� ������'��� � ���

�������������� �������� ���� �������� � ������� ����������

������ ������ ����������� ����� � ;� �++�8++ �� 8 (= ��

������ ��������� C� �������'��� � ��� � ������ � ������� ������

��� ���� $���� � ���� ��� �������������� ����������� ���������'

�=��� ��� �������=��� ����� �+ �-� �++ �� � (=� ��� ������ �

������ ���������� $���� ��������� �8++��++ �-� <++�5++ �� � (=�

1�� ��� ���� ���� ��� ��� ������� ���� ����� ���� ��� � �7�� � / +

������� �-�� C����� �����

C� ������������� ������ ����� �� �������@ ��� ������ �� ��

������� ������ ��� �++�5++� ���� ��� ������� ������� � ��� ���)

���� ������ ������ ������� � ����� ��������� � ��� ;) �����

������ ������ �� ����� ��������� �� ������� � � ������ �������

�� ��� ������ �+ ��8 ;� + 8�+ < ��) ��� ����� ���"� ��������

���� ������� 6��� ������ ������� ���� ������$�� �� ���������

����� �������� � ����� � ����� ��������� C�����$����� ���

���� �������� �� ��� ������� ������

���� � ��������

,����������� ���#++�!) �1C� !-� F6-� �������� �� �����

������ ��� ������ �������� �� ���� ������ ��� ,��� � ����

����������� � ����� ����� � 8+ �� �������� � �+ �� ��

������������� ������ ����� ��� �������� ��� ��� ����� ���� ����

����'������� ����� � ������ ���������� ���� ��� �� ����� ���

����� �� �� ���� ������ ��� &�� ���� ��� ������� ����� ������ �

���� � � ��� �� ���� ��� �������� ��� ������ � �������

� ������ &�������� �&&L� ��!) 6�� �� 4������ ��� �����'

����� ��������� � ���" ������� ����� ����� C� � � ������'

����� ��� ������������� ����������� � >? ��� ��������� �� � � !

�� ���� � ��� ��� >?'�������� ��������� ��� B�7� �����������

��� ���� ������� ��88 !� � �������� ��'� ����� &�� ����

����� ���� ���� ��� ��'���������� ������� ��������� ���=���

�+ � !) 6�� �� 4������� ��� ������ ������� ��������� ���������

�<+ �!) 6�� �� 4������ ��� ��� I-1-- ������� ���������

����������� �<+�!) 6�� �� 4������

������

C� ������������� ������ ����� ���� �� �� ������� ��� ���������'

�=�� �� ��� � � ���� �������� ��� ����� ���������� 4������ ���

��������� ���������� ��������� ������� ��+�8+ ������� ��������

������� �� ��������� ��������� �������� ����� ��� ����� ������'

����� ��������� -������ ��� ����� � ������� �-����� 8 +�

-�� C����� �����

C� ����'���� �����'��� � ���������� �������������� ������ ����

������� � ������� ������ � ������� ������� ��������� ������� �

������ ���� ����� ������' ��� �������'��� � ��� �����������

���� ��"�� ���� � ����� ��� ����� � ������ � ������� ��� �������

������ ������� � ����� ��������� ����� ���� ��3����� ���+ ;� �

��"� ��� ������ ��� ��%��� 3������ �������� 9��� ������ ���������

4CI � 1�������� �������� � ��� ������������ �,(*�'������� ��� ������ � ������ �������� �-� � ��������� �1� �7/ ��� �7/� ����� ��� ������������ ������� ���

,�����������'������� �������� �������� ���� ���� 8���

� 8+++ 4�������� � *������ B���������� 6�������� �������� ������ �� ������������� ��� 8��+�8�//

Page 7: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

8��/ 9 !��� �� �

� 8+++ 4�������� � *������ B���������� 6�������� �������� ������ �� ������������� ��� 8��+�8�//

Page 8: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

��� ���� ���� �� ��������'���� $����� ��� ����� ����� ����������

�IB� � ����� ����� ���������� ��B� ���� ���������� �� ��� ����

� ��� $���� ���� &�� ����'���� � ����� ����������� �7!� ���

�������� � ��� �����'��� � � ���$�� ��� ��� ����� �� � �������

��� ���������� �� ��� ������ � �B�7!

6���������� ������ ���� ��������� �� ����� 6*! 9����������

������� ���� ���� ������� ����� � ����������� ������� ���"���

�!������� ,-� F6-� ��� �������� � ��� 6������Q� �'���� 7������ ��

��� ������ �� ���� ���� ���� ���� ��"�� � �� �����$���� ��

�K + +�

@������

����� ���� ����� � ��� ����� ������ �� ���� ���������� ��� ��� �� ������� � ������� ��� ��

&�� ������� �������� ������� ��� �� ������� ��� ������� ���

������ � ������ ��������� ��� �������� ��������� �������

�4�� �-� ����� ������ ����� ��� �� ������� �� ��� ������ ���

������� ����� ������ �� ������� ���� C� ����� ������������

������������ ���� ��������� ������� �� ���������� � ������� �����

� �������� ��� ����� ��������� �� ��� ������� �� �������

� � ������� ������ R������������� �CL�� ����� �L� ��� ��������

�LCC�S ��� �������� ������� ��� �7��7/� �6 ��� �� � � ���+) !����

���<� & ��������� ��� ����� ������� � ��� ��'���������� ������

������������ � ������ �������� ����������� ������������ �+ <�

+ # !� ��� ������� � ���� ���������� � ��� ���� ����������

,����������� ��� ������� ������� � ������� �� ����� 4����� ���

������ ��������� ��� ��� ��������� ����� ��� �������� ��������

� � *������� �� � � ���+� ���� �������� ���� � ����� ��� ������� �

��� ��������� ������ �4�� �-� 6���������� ������� �4�� �1� ��������

���� ��� ��������� ����� ��� �����$����� ���������� ��

�< �� + / � ��N �<� � 8/ �� � 8 � �� N �/� ��� ��������� �����

������� ��� �����$����� ��������� �� + 2#� + +2 � �� N 85� �

� 5�� + +< � �� N 8�� 6������ �� ��������� ��� �� ����

������� �4�� �-�� �� � ���'��������� ����� �4�� 8- ��� 7��

��H������ ������ ������ � ������������ ���������� 7 ����� �

��� ��������� �������� ��� ������������'������� ��� ��

���� ��������� ����� �8/ �� � 8 � �� N �/� �� 28� � � ��N 5���

������������ ��� ����� ������� �� 5�� + +< � ��N 8�� �� 82� < �

�� N �+�� ������������ ���� ���� ��� �����$����� ����� ����

4�� �1� C� �� ������� ����� �� ��� � � ���������� ��� ��������

���������������� � �� ���� ��� ���� ��� ���� � ���� �����'

����� �� 5 � << ������ ���� !������ ��� ��������� ��� �������

� ���� ���� ��� �� ��� ���� ������� � ��� ��� � ��� �����������

R�������� �� �,� +��� �N �) ,��8� �N �) ,8�<� � N �<) ,<�5� �N 8�S

� ��� ����� � �������� ��� �78�7/�

,����������� �� "��� � ��� � ��� ��' ��� �8'����������

��������� ���� � ������� ���������� �� ��� ��'�������� & ����� ���

������ ��� � ��'���������� �������� �� �������� ��� ��� ��

���� � ������������ �#++�!� ��� ������� �� �������� � ��� ��'

���������� ������� ��������� ���=��� ��++�!� C� ��� ������ ����

��N #�� ������������ ���������� ������ � ������ ���� ��� ��

���� �4�� 81 ��� 7� (����� �� ���� �������� �������� ��

��������� ���%���� ��� ����� �������� ���������� ���� ����

������������ ������ ��� ������� ������ ��� ��������� � �8'

���������� ��������

& ����� ��� ������� ������������ ����� ��� ���� ������ ����

� ��� ���� � ��������� ��������� �������� ���� ������

��������� �� N �#� ���� ����� �� �� ��� ������� ��� ������

������ ������ ���� ���������� � ��� ������ -� �������� ���������

�� ����� ��������� ������� ��� ������ ������ ���� ������ ��

������ O��� ������������ ��� ����������� ��� ������� �

��������� ������� ��������� ���� ���� ��� ������� �� �������

������ -������ ������������ ����� ��� ���� ���� � � ��� ��

���� �� ������ ������� ���� ���������� ����� ������� ���� �������

�� L �� N �� 4�� <1� ��� LCC ����� ��������� ��N �+� 4�� <7�

7�������� CL ����� ������ ���� ������� ��� ������� �� �����

������� ����� �� ������ �� �������� ��������� �6 ��� �� � �

���+� B������������ �� �� ���� ������� ������� ������������

���������� ������ � ��"� ��� ��� �� ���� �� CL �����

��������� �� N <� 4�� <-� 4������ ����� ���� � �����$����

����������� ���� ������ � ��� ��� � ����������� �,+��� �N 2) ,��8�

� N <) ,8�<� �N 2) ,<�5� � N �� ��� ���� ��� �� ���� �� ����"��

� �� ������� � ��� ��������� ������� � ��� ����� ����� ������

�� ���� ����������� ��� ����� ������ � ���� ��������

C� ��� ���� ����� ����������� ���� ������� �� �� ���� � �����=� ���

������� ����� � ��� ��� ���� ������� � ��� ��'����������

������ ������������ ,����� ������������� ��������� ������ ���

&-1E* � !� ����� ��������� � ����������� ��� ��������� �������� �������

B���������� ������� ��N �+� C�������� ������� ��N ��

!����6*! !�� !�� !����6*! !�� !��

�!, � ;� �/� #� < � �2� ��� �// 5� � 5 �2+ �/8IB ��6� �+ #� � � � / �# � / <� + 8 � � / 2�B �!�� �+#� �5 ## �5� ��#� / �5# �/�7! ��4� 2 2� � 2 < � �# 2 +� + / � � #� � �� + 2<� + �5 + <� � /� � +/� + �/ + #� � <�;6TB � ;� � �� + �JJ + < �/ �� 8 2 �+ 88 �

7!� ����'���� � ����� �����������) IB� ����� ����� ����������) �!,� ������� � ����� ��������) �B� ����� ����� ����������) �� ����� �� ��������) ;6TB� ��������� ������� ����� �������� JJ6����$���� ���������� ��K + +��

4CI / ,����������� �,(*� ������� � �������� ������� �� ��� ������� ����� ������� �-� ����� 9������ ���������� ������� ���������� ���� ������ ����������� ������� ����� �,��� ��� �������� ������� �� �7<� �-� ������ C��������� ��� ��� �� ������� ����� ,(* ����� ��� �1� -�������� ��< ������� � ����������������� ����� ������� �� ������� ���� ������ ,�� ��������� ���������� �������� ������� ��� �� ������ �� 7<� ��� �������� ����� ������ ,�� ������������������� �������� ������ ��� �� ������ �� 7<� � ,(*'������� ��� �� ���� �7� !��� ��������� ����� ��� 6*! ��������� ������ � �������������� ��N 8<� �� ������� ��� ��� ��� �� -� ��� �������� �8� ��� ��� �� -� � ��� ��� ���� �JJ� �����$���� ���������� �K + +�� 9��� �� ��� �� � ������ ����� �� - �9� ,(* ������� ����� ���"��� � ���������� ��� I-1-����� ��H������ 1C7� �����������) 9����� �������� ) 6&�� ��������� (��=���� ����� 8+ �

,�����������'������� �������� �������� ���� ���� 8��2

� 8+++ 4�������� � *������ B���������� 6�������� �������� ������ �� ������������� ��� 8��+�8�//

Page 9: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

�� ������� � ������� ������ �L � LCC� ��� �������� ������� ���

1���� ����������� ���������� � ������������ ��"�� ��� �������

������� ��������� ����� ��� ����������� ��� ��� �� ���� �

���������� �� ��� ������ ����� �4�� 5-� 4������ ������ ����������

�� ��� 7� ������ ��� ������� �������� �������� � ������� ���� ��

��������� ������� �� ������� ������ ��N �) 4�� 51� !������

��������� ��� ���������� ������� ����� ������� ����� ���� ��� ������

���������� ������ �4�� 57� ��� �� ������ ��� ������� � ��� �������

��������� ������ C� �������� ��� ������� ������ ��� � �����

�������� ��������� ������ ��� ��� ����� ���� � �������� ���

������������'������� ��� �� ���� �4�� 51�� ������ ������

�� ��'����� ��������� ������� �� #+M � ������ ���� �5 � �) 4�� �-�

�� ���� ���%����� �� � ��� �� ����������� ������� � ������� �4�� �1�

&������ ��������� ����� ������� �� ������� ���%������� ���

������ ����� � ��� ��� �� ����

�� ���� ����������� ��� ����� ������ �������� ������� ����������� ��������

-������ ��� ������������'��"�� ��� ���� ��� � ����"�� �

�� ������� �� ��������� �������� �� �� ������� �� �������� �������

��� ���������� 7<�7/� "��� � ������ ������� ������

���� �>�=����� : 7��� ��#+� ����������� ��� ��� ���������

������ ��� �������� & ����� ��� ��� ������� ������ ��� �

������� ������� �� ��� ��� �� ���� � �� �������� �

���������� ����� �� ���� � ��� ������ ��� ��� "��� ������ � ����

������� ����� �������� ������� ��� ���� ���� ��� ��������� �

����� ������� �� ��������� �� N �/) 4�� /-� C� �����

��������� ��� ������� ����� �������� �� ��������� ������� ����

��� �� � ��������������� ������ ��� ����� �������� �� ��� ��

������� �� � �������� ������� �� ����� �� ����� O��� �

������� ���� ��������� ������������ �#++�!) �N �8� ���

�������� ������� �� ��������� ����� ������� ��� �� ���������

����� �������� ��������� ���� ��"����� ������� �� ������� �����

��������� -������ ��� ������������'������� ��� �� ����

�������� �� ������������ �������� ������� ���� �� ��� ����� �������

�� ��� ������� ����� �4�� /-� -���� � ����������� ���� �������

���� ������ � ��� ��� � ����������� �,+��� � N 8) ,��8� � N 5) ,8�<�

� N 5) ,<�5� �N 8�

C� ���� � ���� ������� �� �������� ��H������ ���� ��"

�����$���� ��� ������������'������� ��� ���� � ������� �����

�������� ��� ��'���������� ������ �#++ �!� ��� ���� ������� �� ���

�������� � ��� ������ ������� ��������� ��������� �<+�!� ��� ���

I-1-- ������� ��������� ����������� �<+�!� C� ��� ������������

����������� �� N 5�� ������������'������� ��� �� ����

�������� �� �������� ������� ���� ��� ��� �� ������� �� ���

������� ����� �4�� /9� &�"�� �������� ����� ������� ��� ���%��'

����� ���� ��� ��� �� ���� ��H���� ������ �����������

�������� ����������

& ������ � ������� ���������� ������� ��� ������� ���������

���������� ��� ��� ���� ��������� ��"�� ��� ���� � �� �������

4CI 2 O���'���� �����'��� � ��������� � ��� �� ��� ����� � ������ ������� �-� 6��� ���� ������������� � ������ ����� ��������� -������ �������� ������ ������ ������ ��� ������ �6�� � � �������� ��������� ������� �� �75 � 7�� O���'���� �������� ������� ��� ����� �������� �� �������' �C � � ����� �������� � �� ������'��� � �� �; � � ����� ��������� �1� C�������� ������ �� ����� ��������� ����������� �������' � ������'��� � �� B�� ��� ������ ������� ��������Q� ������� ��� ���� � ��� 7� ������� �� ;�� ������ �������� �7�B���������� ������ �� ����� ��������

4CI # *������ � ������������ �,(*� ���������� � ����������� ������ ������� �-�� �� � ��� � 7��� � ����� �������� �; �� ���������� ��� ���������� � �������� ������� �� �75� �� ����� �������� C���� ���� ������ �� ��������� � ���������� ��� ������ ���� � ����������� ������� �� �1�� ,(*�������� ������ ��� ���� �� �������=����� �����" ������ ���� ���"��� ������ ���� � � ���������� � ����� �������=���� ������������� ����� ������������ ���� � ��� �� ���� �� ������� �� �������� 9���� ���� ��������� ��� ������� � ����� �������� �� ����� �������� �-8 ��� 18� 4����� ��������� � ��� �� � ��3����� ������� ������ �� ����� �-8� ��� ������ ���� ���������� �18� &�� � ����� �������� ������ ������������ ����� ��� ��� ���� ������� � ����� ������� � ����� �������� ������ ����� � ��3������ ������� ���������=��� ������� �7�� 7������������� ������������ �� ����� �������� ������ ����� ,(* ���������� ��� ;�� ������ ��������) C � ����'���� � ����� �������) IB� ����� ����� ���������� �78� 7������������� ������������ ������� ����� ������'��� � � ��� ,(*'������� ������ ������� �C,(*BTE*,(�CB* �� ,���� ��� ������� � ����������� ����� C�; ����� �� ���� ������ ���,(* ����� ��� B�� �������� �������� �� � ���� ;

8��# 9 !��� �� �

� 8+++ 4�������� � *������ B���������� 6�������� �������� ������ �� ������������� ��� 8��+�8�//

Page 10: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

,�����������'������� �������� �������� ���� ���� 8���

� 8+++ 4�������� � *������ B���������� 6�������� �������� ������ �� ������������� ��� 8��+�8�//

Page 11: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

� ��� ��������� ���� ��������� ��������� ������� ��������� ���

��������� ����� ��� ������� �� 4����� ��������� ���������� �������

����� ������� ����� ���� ��� ������� � ������� ��������� ������

��� �� �������� � ��� ��������� � ��� ��� �� ����

�4�� /1� 6������ ������ ������������'������� ��� ���� �����

��� ��������� ����� ���� �� ���"�� ��� �����$������ ���������

�4�� /- ��� 7�� ���������� � ������� ��������� ���" ���� �������

��������� �������

������������ � ���� ���������

O���'���� �����'��� � ��������� ���� ����� �� � ��������

������� �� N ��� � ����� ��� ����� ������� ���� �������

�� ��� ������������'������� ��� �� ���� � � ���� �������

������������ ���� ������������ ������ ����������� ����������

�� ��� � ����� �������� � ��������� �������� ��� �

����� ��� ��� �������� ������ ��������� ��� ������Q� ������� �

�������

-� ����������� �� 4�� 2-� � ������ �������� ��� ���� ��� �'

����� ������ �� ������� �������� ������� �� ������� � ��

������ �� ��� ������ � ������ ������� &�� ����� ��������

��� ������ �� ��� ����� � ��� �������������� ������ �� ���

����'���� ��������� ���� ������� �� 75 ��� 7� ������ ��� ����

���� ����� ���� �� ������������� ���� �� ������������ ���� ���

������� �����=���� � ������� ������� !������� ����

��������� ��������� ����� ��� ��� ��������� � U�������Q

������ �� ������ �� ��������� ��� ����� �� �� �������

��� ��� �� �� ������� ������� ���� ��� ����������

��������� ���� �� � ����� �������=����� ��������� ���� �

������� ����� �������� � �� ;� ���� ��������� ���"��� �� � ������

�������� �� ������ ���� ��������� �������� ������� ��

������� �4�� 21 ��� 4�� �-�) � N �� O��� ��� ��� ��� ���

������� ���� ������$�� �� ����������� ������� �4��� 27

��� #-�) �N �+� 9������ � ������� � ����� ��������� ���

��������� ��������������� � ��� �������� ����� ��� ����� ��

&���� �

����� ���� ����� �� ����������� � �������� ������� ���������

C� �������'��� � ��� ����� ���� ���������� � �������������

�������� �������� ����������� ������� �4�� #-�� ������'

�=�� ������ � �/ +� 8 8 ; ��N 2� ��� ����� � ������� ���

�������� �4�� #1�� ���� �� �������� �� ������� ���� &��� ��������

�� � ������ �������=���� ������ � ;� ���� �������� �����'

� ���� � � ���� �������=���� ������ �+ ;) ��� 4�� #1�� &��

��� $���� ���� �������� ������ ������������'������� �������=�'

��� ��� < <� + < (= �������� �� + � � �+ < (=� &���� ����'����

�������� ����� ���� ���� ���� ������� �� �������� �������

��� �4�� #1��� ������ ��$� ��� ��� ���� �������� ����

����������� ������� ������ � ������������'������� ���

����

9������=��� ������� ������ ���� ��� ��3����� � ���� ��������

����������� C� ����� ��������� ������� ������ ���� $��� ��3����� �

��"� �� ����� �������� �4�� #-8� 9����� ������������'�������

�������=����� ��3����� � � ������� �������� ������� ��� ����

������� �� � ������ ��� � ����� �������� � ��� ����� �������

�������� ����� ������ ���� �� 4�� #1� ��� 18� C� ���� �������� ���

�� � ��3����� ������� ������� ������ �� ����� �� ������� ����������

$���� �4�� #18�� �� ����� ��� ���� �� �������� �� ���� �����������

C� ������'��� � ��� ������������ ���������� ������� ��

������ ������� � �/ 8� 8� + �- ��N 5� �� ����������� �����'

�� ���� ��� ������ �������� ��� ���� � ��� ������� � �����

�������� &�� ������������'������� ������ ������� ��� ��� ��'

���� � � �5 #� � 8M �������� �� ����� ����� ���������� ��

���� � � ������ ��� �������������� ������������ �4�� #7��

4������ ��� ������������'������� ������ ������� �� �����������

������� ����� � �������� �������� � ���5 +� 5 � ; �� N 5)

4�� #78�

� �� � ���� ���� �� �� ����������� � ���� �� ����������������

C� �������'��� � ��� ���� ���������� � ������������ ������'

����� ������� � ���� �������=���� � ��������� ������� �

�� 5� � 5 ; �� N <) ����� ���� �� 4�� �1�� !������ � ����� �

����� �4�� �-��� ������������ �����$����� ���������� ��� ����'

��� � ��� ������� ��������� ����� �������� ��� + �2� + +� � �

� 2�� + +# �) � K + ++�� �N �<� ��� ��������� ��� �� ��� � ���"���

����������� � ��� �������� �� ��������� ����� ������� ������� ��

������� �� ��������� �4�� �1�� (������ ������� ��� ���� �'

�������� ������� ��� �� ���� ��� ������� �� ��

��������� ���� ����� �� 4�� �1��� ������� ��������� ��������

������� �� ����������� ���������� �� � ����� �������� ����

������� �� ��������� ������� 4������ ��� �����������'

����� �������� � ��������� ������� �� ��������� ����

�������� ������� ������� ����� ������� ��� �� ����� ��������

��� ����� ������������ ���������� ���� 4�� /�� ��� ��$� �� ����

��� ��� �� ���� ��H���� ����������� �������

-� ������ ��������� ����� �������=��� ������� ������ ����

��3����� ������ ��� ������ �������� ����� � ��� ��� ��� �������� ��

�������� ����������� F���"� ������� ������ ��� � ������ ��

����� �������� �� ����� �������� �4�� �-8�� ��������� ������ �����

������������ ����� ��� ��� �� ��� �� � � ����� �������� ��"��

�� �������� �� ��� �� ��� � ���"�� �4�� �18�

C� ������'��� � ��� ��� � ����� �������� � ���������

������� ��� ��� ��� ������ ��� ������ �������� �����

� � ����� �������� C N + �-� C� ����� ��������� ����� ��������

� ���� �� ������ ������� ��++��++ �-� �� ����� ���� ���������

������� �� ������� ���� 4�� 21� &�� ���������� � ������������

������� � �������� ������ ������� ������� �� �+ � �+ �- &��

��������� � ���� ���������� ������ ������� ��������� ���� ���� ���

������������'������� ������� �������=���� ��������� ����

!������ �������������� ����������� ����� ��� ����� ���������'

��� ���������� �������� � �+ <� � +M �������� �� ����� �����

���������� �4�� �7�� 4������ ��� ������������'������� ������

�������� ������� � ����������� ��� ����� ����� �� ���

������������ �� �4�� �78�� ��������� ���� ���������=���

��������� ��� ����� � �������� �������� � ���2 �� 8 � ;

��N 8� &�� �������� �� ����� ����� ���������� ��� ��������

�������� ������� �� ��������� ������� ���� �� �����$�����

��������� �� ����� ���� ���� �� ����������� �������

������ ��� ������ ��� ���� ������� ��������� �� ���� ����������� ����� �� ����������� �����������

& ����������� ��� ������� ������ ��� � ���������� >?

����������� �� ��� ��������� � ��� ������������ ��������

������'��� � ��������� �� ������ ������� ��N <� 4�� �+-�

������ ���� ������� �� �� ��� �������� � &&L ��� ������� ����

���� �� �� �< !� ��� ��$�� �� !� R>?S �4�� ��� C� � �� ��

������ ���� &&L� ������������ ����� ��� ������� � ����������

������ ������� �4�� �+1� ���� � �������� �� ����� �����

���������� ��� � �������� �������� ��������� � ���� ���� ��������

�4�� ��- ��� 7� 6����%������ ����� � ������� ���� ���� � !

>? ��� � � ������� ������ ������� �5/� � 2 �-) 4�� ��1� C� ����

�������� ������������ ���������� ��������� � 8� +� 8 � �-

8�/+ 9 !��� �� �

� 8+++ 4�������� � *������ B���������� 6�������� �������� ������ �� ������������� ��� 8��+�8�//

Page 12: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

������ ������� ������ � �������� �������� � ��+� �� ; ��N 8�

4�� ��1 ��� 7� &�� ��������� ����� ������ 8� ;� �� ��������

�������� � ��� ������������'������� ������ ������� ��� �� ���

�� � ����� �� ���� �� 8# ;� ������� ��� �� ���� ���� *>? ������

R��"��� ��� ������ ��� �( ��3��� ��� � ������������� ������ ����

>�( �*>?

�< !� N ��+8 ; ��� *>?

�� !� N �25 ;�S &���� �������

������ ������� ���� ������������ ������� �������=���� � ������

������� � �������� ���������� >? �����������

4CI � *������ � ������������ �,(*� ���������� � ��������� ������ ������� �-�� C� ����� ��������� ��� �����Q� � ����� �������� �; ��������=�� ���� ����� �� ����� ���� ��������� ������� ������� �� � �������� ������� �� �75� C���� ���� ������ �� ���������) ��� ��� ��������� � ���������� ��� ��� ���"� �E���"�� ��#�� �-8 ��� 18� 4����� ��"�� �� ������� � ��3����� ������� ����� �� ����� �-8� ��� ����� ,(* ���������� �18� 6� ������ �� �� 4�� #-8 ��� 18 � ���� �������� �� ���� ����������� �1�� ,(* ������ ���������� ������� �������=���� ������ ������ �� ������� � ��� ��������� �� ��� �� ���� ���� �� ������� �� �������� ������� ���� ������ 9���� ���� ���������� ������� � ����� �������� �� ����� �������� �7�� 7������������� ������������ �� ����� �������� ��� ��� ����� ������������ ���������� ��� ;�� ������ ��������) C � ����'���� � ����� �������) IB� ����� ��������������� �78� 7������������� ������������ ������� ����� ������'��� � � ��� ,(*'������� ������ ������� �C,(*BTE*,(�CB* �� 6� � �������� �� ��4�� #78

,�����������'������� �������� �������� ���� ���� 8�/�

� 8+++ 4�������� � *������ B���������� 6�������� �������� ������ �� ������������� ��� 8��+�8�//

Page 13: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

����� �

C� ���� ���� �� ��� ���� ��'���������� ������ ������� � ���� ��

�� ���������� ��������� � ��������� ��� ����������� ��������

������� ��� ������� �������� ���� ������������ ���������� � �

���� �������� ������� ��� ���������� ������� ���������

������� � ���������� ��� ��� ����� ��� ��� ��������� �����

������� 6������ ������������ ����� ��� ��� ������ � ��� ��

���� ���������� ������� �� �������� ������� ������ ��� �����

������� �� ������� ��������������� ����� ��� ��������� ���

������� ������ !������ �� ����������� ������� �����'

���� ������������'������� ���� �� �������=����� �� ����� ����

��� ��� �� ���� ������� � ��� ���� ������� �� 4������ �

�������� �� ���������� ���" >? ����������� ��� � � �������� ���

�������� �� �������� ����������� ������� ����� ������������

���������� 4����� �8 ���������� � ���� ���� ������ � ��

������������� � ��� ������� � ��������� ������������ �������

!��� ������������ � ���� ���� ����� � ��� �����������

1������ ��������� ���� ���� �P �+�!) ��� 4�� 8� � ������������

���� �������� �� �� ���� �� ���� � ������ ���� ��� ��

���� � ��� ������ ��� � ���� ������� ������� ��� � ���� ����

������ ����������� ����� �� �������� (������ ��� �� ������ �

��� �������� ������� �� ������ ��������� ��� �����������

������� � ���� ��"�� � ������������ �� ������ �O����

�� � � ����) *���� : O������ ���8) O��� �� � � ���2� ���

�������� �,��"�� �� � � ����) 4��" �� � � ���2� �������

����� ������ � ��� ������ ��� � ��'�����������

�������� ���������� � ������ � ������� ��������

&�� ��������� � ����������� ��������� ��� ��������� ���%����

��� ��������� ��� ��������� ����� ������� &���� �������� ���

�� ���� � ���� ������� � ���� �� ���� � ����� ������������

���������� �� � ������������ ������� �� �� ������� �

���������� ��� ���� ���%���� ��� ���������� ��� ������� �� �����

�������) >���� �� � � ������ ���� ������ ������� �� ��������� ��

������� ��� ������ ������ "��� � �� ������� �� ���������

������� &��� ��������� �� ����� ��"�� � �� �������� � �������

��������� ������� ���������� �� ��� �� ��� ��� ���������� � ���

������� ��������� ����� - ���������� ����� � ���������� ���� �

� ��� ��������� ���%���� ��� ���� �������� ������� � �������

����������� �� ������ � ��� �!���"��� �� � � ��#�� C�

������ ����� ������� ���� �������� ������� ���� �������� ���� ����

���������� ������ � ��� ��������� ���� �� ������� � ��� �8'

����������� �(������ �� � � ��#�) *������� �� � � ���+� ����) -�'

.����� �� � � ���/) 0���� �� � � ���/) -���� �� � � ���#� ���

���� �������� �� ��� -� ������������ ������ �(������ �� � �

��#�) *������� �� � � ���+� C� �� ������ ����� ������������

���������� ����� ����� ��� ��� ��������� ���%���� �� ���

�������� � ���=���� � �����$� ��'���������� ��������� &���

�������� ���� ��� ��������� ������ �� ������ ������� � ���

��������� � �8'����������� B������������ ��'����������� ����

��� ����������� �� ��� �������� ���������� ������� �� ��

4CI �+ ,��������� ����� � ������������ �,(*� ���������� �-� 7��� � ����� �������� ������ �� �����) ; � � ������� ������� C �� ��� ���������� � ����������� ��� ��� ���� ������ ������� � �������� ������� �� �75� �� ����� ������� �1� ����� ��������� �&&L� ���������� ���� ��� ������������� � ��������� ����������� ���� ���� ,(* �������� ���� ������ �������) ����� ���� ��������� C N + �-�� ��� $���� ������ 6��� ���� � ����������� ������ ���������� �� ��������� �� ��� ������

8�/8 9 !��� �� �

� 8+++ 4�������� � *������ B���������� 6�������� �������� ������ �� ������������� ��� 8��+�8�//

Page 14: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

������������ � ������������ ���!� ��������� ��� ���������

���%����� ��� ��� ���������� � ���=��� ���� ��� ���� � ��������

��� ��������� ���� ���� 4�� 81�

&�� ������� ������ � ��� ��������� ���� ��� � ����� ���� ��

�������� �� ��������� ����� ������� &��� ������ ��������� ���� ���

������� ���������� ���� ���� ��� ������ ��� �������

��������� ��������� ����� ��� ������ C� ��� ������� ���������

�����"� >? ����������� ��������� � ��� ��� ������ � �����

������� �������� �� � � ���<� �� ������� � ������� ��������� ��� �

������ ��� 1������ �� � � ����� O� �������� �� ������ ������� ��

���� ������� ���� �� �����"� �O��� : !�7� ��"� ���<�� ����

��� ������������'������� �������� �� ��������� ����� �������

���� �� ��� � � �������� � �����$� >? ����������� �� ���

��������� ������ ������� �� ��� ���������� � ��� �������

��������� �����

4������ �� ������� �������� ���� ���������� ���� � �������

� ���� ������� � ��� ��������� �������� ��������� �������� ��

��������� ���%������ �������� �� ��������� ����� �������� ���

������������ ������� �� �������� ������������ ��� ����� &����

������� ������� �� ������ ���� ���� ���� ������ ���� �

������������ !��� �� � � ����� ���8) E����� : 4��� ��� ���<)

��������� 9�� : 4��� ��� ����) ��������� ����� ��������

9�� �� � � ���/�� ���� ���� ������ ��3��� ��� � ��� ���������

����� �� ������� � ������ �������� ��� �������

"������ ��������� ���� ���� �� ������������� ��������

,����������� ���������� ������ � � ����� �������=���� ����

4�� �8� ���� �������=����� ��������� ���� �� �������� �� �����'

������ ��� � �������� � ����� ����������� �� ��� ��������� ���

����������� ������� !������ ��� ������������'�������

������ �������� ����� �������� ����� &&L� ��� �����$�� �� �

� ����� �������� ����� 8� < + ;) �N /� ��"��� ��� ������ ���

���� � �������� �� ��� ������� � ��� ���� ���� >? �%��������

4CI �� C����� ��� � � ���������� ���" >? ���������� �� ������������ �,(*) �++�!� ������� �-� ��� ������ � � ����� ������� �������� � � ������ �� ��� ������ ����� �� ����� ��� ����� ������������ ����� ��� ���� � ������� ���� ��������� ��������� �&&L� ��� < ! >? 9���� ����� ������������� ������� ����� �C N + �-� �� ����� �������� 6� � ������� ���� �� �� 4�� #-� ��� -8 �1� 6� � ������ ����� ��������� �� �� �-� ���� � ������� ���� ��������� &&L ��� � ! >? �7� 7������������� ������������ �� ��� ,(*'������� ������ ������� ���� � R> ? S�F& ������ �� < ! ������ � � !

� ������ C'; ���� � ��� ����� ���� � ����� �� ��� �������� �������� �������� � ��� ������������� >? ����������� ��� � ��������� �������� �� �� 4�� #78�

,�����������'������� �������� �������� ���� ���� 8�/<

� 8+++ 4�������� � *������ B���������� 6�������� �������� ������ �� ������������� ��� 8��+�8�//

Page 15: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

�������� �*>? N ��+8 ;� &���� ������� ������� ���� � �������� ��

���������� ���" >? ���������� ���� ��������� � ��� ����'

�������� ������� �4�� �8� 7�������� ���� ����� � ������ ��

������������� >? ����������� ��$�� ��� �������� �������� � ���

������������ ������� �� ��� �� � �������� �� *>? 4����� �����

$������ �������� ���� ���� ��� ���� ��������� � ���������� $����

�� ��� ������ ������� ��� �� ��� �������� ����� � ������� ��� �&���"�

�� � � ���/�� ��� ��� ������������ �����=���� � ��'�����������

������ �������� ����� ������ �� � � ���<� 6������ ��� ���

�� ���� ����� ��� ���� ������� ������� �� ������ � ��������

������� C������ ��������� � ��'����������� ������ �

� ����� �������=���� � ������� ��� ������ ������� �*����

: O������ ���8� ��� �� �������� �� ���� ����������� �� ����� ���

������� �O��� �� � � ���2� 4������ ��� �� ��� ������

�������� ������������� ���������� � ������������ ��'

����� ��� � � ����� �������=���� ��� �� �������� �� �����������

� ��� ������ ��������� ���� � �������� �� � ����� �����������

������� � >? ����������) O���� �� � � ����� !�����

������������� ������ ��������� � ��'������������ ����������

��������� ������� � ��� �������� ������� � ����������

����� ����� ���������� �4��" �� � � ���2� C� ������ �� ���

�������� � � 3������� ����� ��'���������� ��������� ������ �

�������� �� �������� ������ ����������� ��� �� ������

������� ���� �� �����$�� �� � � ����� �������� ���� � ��� >?

�%�������� �������� �,��"�� �� � � �����

4����� �� ������� ���� ��������� ���� ������ ���� � ����

���� ���� � ��� � ��� ����������� � ������� ��� � � �

������� � �� ������� �O��� : 9��� ���+) *����� : O������

���8�� ��������'��������� �� �� �4����� : B������ ���<��

��������� , �,��" �� � 8+++�� ����� ��� ���� ��������� ���������

9�� �� � � ���/�� ��"� ��'���������� ������� �������� ����

����������� � ��� ���"��� � � >? ����������

# ���� � ������� ������ �������$ � �� �� ���%

,������ ������� ���� ������ ������� �� ������� ����������� �

������� ���� ���� ������������ ����� ��� ���� ������ � ���

�� ���� �� �������� ������� ��� �9����� : ;����� ���<�

�� ��� ����� � ��� ������ �����=���� � ���� ���� �� �������

�9����� : ;����� ���/��� ��� ����������� ���� ��������� ��

���������� �9����� : ;����� ���/�� ��� ��� ��� ����������

�9����� : ;����� ���#�� �� ��� ���� ��������� ���� ����

���� ��������� ������� ��� ���� ���� �� ��������� � �

������ ��������� ���� �������� &�� ������� ���� ���

�������� ����� �� �� �� ���� �� � ������ ��� �������� �

4CI �8 6��� ���� ������������� � ������� ������� ��� �������� ������� � ��������� ��'���������� ��������� �� ��� �������� ������� ��� � ������� ��� ��� ��'�����������) �!,� ������� � ����� ��������) ������ !�� ����������� ������) ���� !�� ��������� ������

8�/5 9 !��� �� �

� 8+++ 4�������� � *������ B���������� 6�������� �������� ������ �� ������������� ��� 8��+�8�//

Page 16: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

������ ��������� ������� �� ������� �� �� ���� ����� �����������

� ��� ������ ��� 4� ��� ���� �� ��� ������� 7�8'��� �����'

���� ���'������� ������� ������ ������ ����� ����� ���'9�,-

��������� �� 78�7< ������ ����������� �;���� : 4����� ��#<)

;����� ��#/� &���� �� �������� �� ��� ������ ��� � ���� �

������ ��������� �������� �� ��� ������� � @ � �� ��'

��������� ������� �;����� ���2� *������� �� ���������

��������� ���� ������� ������� �� 7��78 ������ ������ ���

��� ���� ������� �� ��� �-"� �� � � ��#+�� ������� ����� �

����� 7��78 ����������� ������ � ��������� "����� ����

��3����� �� ����������� ���� ��� �� ������ ��� ��������

���������� ��� ��� ���� ����� ���������� �!����� : T�����

���<� C� �� ����� ��� ��� �3������ ��� � ����� ��� �� ���

������ ��� ������� � �� ������ ��������� ������� � ��

���� ������� � ���� ��������� ��������� ����� ���� ���������

�� � ������ ��������� ���� ��������� ��� ����� ��

������ ���� ��� ��� ������� ��������� � ��� ���

������� ������ ��� ���� ������������ ���������� ������ �

������ ���� � ��� ���� �� ������� ������ &��� ���� ��

��������� � � ������� ��������� � ��� �������� ��������

������� �� ������� ����� ���� ������ ���� ���� ���� ���

�� ���������� ���� ���� �� �������� ������ �� �����������

�������� �� �������� ��H������ �9������ ���2� ��� �����

������� �������� ���� ����� ��� �� ���������� ��� �� �������

�� ��������� ������� 4����� ��� ������������'�������

������� ��� ����� ������� �� ������� ����� ���������� ����

�� ��� �������� � ��������� ��� ����������� 6������ �

����������� ���������� �� � ����� �������� ��������� ����

���� ������� ���� ������� �� ��������� ������� &������

������� ������ ���� ����� ����� ������ ������ ��������� �

�� ������� ���� ���� �� ������� O� �������� ������� ����� ��

������ ��� �� ������ ����� �� � �������� �� ��� ��������� � ����

������ ��������� ���� ��������

(������ ��� ��������� ��� � ���� ��� �� ���� ��

����������� ������� �� ���� ������� -� ���� �� ��

������������� ������ ����� ������������ �������=�� �����������

������� � ����������� ������� ���� �� ��� �������� � &&L

!������ ������������� �� ���������� ��������� ���� ��

�������� �� ������� ����� ������ ��������� �� � ��� �����'

��� ����� �4�� �8�� ��� �������� � ������������ ����������

9�������� ������ ���� �������� ������� ��� ������� ���������

� ������� ������� ��������� ������� �� ��� ������� � ���� ��

�� ���� �� ��� �������� ����� � ��� ��� - �� ��������

������ ���� �� ��� ��� ������� ��� ���� ������� �� ���

����� �� �� ������ ����� ���� ������ ���� �7�=����� �� � �

���+� !����� $����� �� �� ������� ��� ���� �������

�� ����� � ������ �� �� ����� ������� �������� ������� ���

����������� �� ��� ��������� ������ �(� ���2� � ��

�������� ������� ������ �� ������� ���� �,����G�� : ;����� ���5�

B����������� �� ������ ���� ��� ������� � �������� �� ��'��"�

������� ������ ������� ��������� ��������������� �� ��� � � ����

��� ����� ������� �6 ��� : 4��� ��� ��#2) 6 ��� �� � � ��##�

�� ��� ������������'������� ��� �� ������ 4������ ���

��� ������ ������� �������� ������� � � ��������� ��'����� �������

���� ��� � ����"�� �������� � �� ������� � ��� �� ��

������� E����� ��� ��� �� ���� ���� �� ������� � ���

���������� �������� �� ������� ���� ����� ����������

���� �� ����� �� �� �7"� : 1������ ���/� ��� �� ����� ���

�9� ,��%���� �� � � ���8) I���� �� � � ���8� ������ ���� ���

����� ���� � ������� ��� �� ������� �������� C� ��� ������

���� ��� �����$����� � ���� ��� �� ���� �� ���� �� ���

%������� ��� ������� ������ ���� ��� ��%����� � ������� ���

������� � �������� ����������� ������� ����� ���

������ � ���� ���������� ���� �� ������� ��� �� ����� ����

� ����� ��

7!� ����'���� � ����� �����������) IB� ����� ����� ����������) ������� �� � �������) ,(*� ������������) ,� �������� ��) �!,� ������� � ����� ��������) �B� ����� ����� ����������) &&L� ���������) ;6TB���������� ������� ����� ��������

�"� �����������

&�� ������ ��� �������� � 9�� I�G���� (������� ,����� !����� ��� 0��6� ��� �� ����� �������� � ���� � ��� ��������� ��� �� *������������� &�� ��� ��"������� ��� �"����� ���������� � -����G� 1���� ���-���� ;����� &��� ��" ��� �������� � ��� 7B�6� F���������G 1������ ���� ��� !������V�� �� �Q*������� ��� 6���G����� �� �� �� ��������� �-77'6;5����� ��+5�<+�

@��������

-�'.������ . - � *���"��� � E : I����� 0 0 ����/� 6��������� ��������������� ������� � ��������� ������ ��������� �� ��� ������� ��������������� � ������� ���� �'�(! ����! ���! �! ��)�!� ���� �58��5�

-"�� ! � !��� 6 � >�������� > � O�������� ( : *����� B ���#+�I�������� � ��������� ��������� ���� �� ���� ������ ���� *�������!� ���� ���/<

-����� - � ��� ���� ( : ( �� C ����#� &�� ���������� ������� �$����� � ��������� ���� '���������� ������ �� ������'������ ������������� �� ������ ��� �+�! *���� ���!� ���� <���5+#

1������ 9 - � ;����� 4 � &����� * ! : 1������ - 0 ����2� B��� �������� �������� �������@ �������� ��� ������ ����� ������� � ������! ��)���!� ���� �<����+

1������� - E � 9������'6�����G� ! : 7�� ������� 0 ������ 7������ ����� ���������� �� � ���@ ������� ��������� � ����� ���������� ������������ ������ ��)���! ���!� ��� ��5�

1������ ! I � E����� 0 0 : >���������� - � ���#�� O��� ���� ���������� ������ �� ������ � ��������� ��� � ����� �������� ����� �!��������! ����!� ��� 8+<�8�+

7�=������ 0 � � !������ C � 7��G ����� 0 : 7������ 4 ����+� ;��������� �� ��������������� � � ����� �� ���� �@ �� ������ ������� ���� ���� ��� �� ��� ������ ��� *����! *���� ���!� ��� 8���88�

7"�� C � 7 : 1������ , 0 ����/� 9����� ��� � �������� � ������� ���������� � ����� �� � ���� �� �������� �! �����,��!� ��� <#��<�/

9� ,��%����� * � !������ � : (������� I ����8� C� ���� ���� � ����������������'��"� ������� � ��� ����� ��� �+�! *���� ���!� �� 5���5/5

9��� L O : 4��� ��� 0 E ������ !������� � ��������� ����� �������� ������� � ���������� �������� -� �������� �! ��������!���� <5�#�<5/2

9��� L O � !���� 9 : 4��� ��� 0 E ����/� !������� ������ � �6�<�'-7,9 �� �������� �������� ������� ����� ����� � ��������������� ������� �! ��������!� �� 5�2��5�#8

9������ 9 ����2� *���� �� ���� ��� ��G��G������� ������� �� �� �������������= �� ��� ������'��G ,�9 &������ F���������G 1������

9������ 9 : ;����� 9 ����<� ,������ ������ ��������� ������� �� ��� ������ �������� ������ ��� ���������� � ��� ������ ��� ���������������=�� ���� ������ ����� !�! ��� ! &��! ---. ��� ��� �5�#��5/8

9������ 9 : ;����� 9 ����/�� E����=���� � ��� ������ ��������� ���� �������� � �� �� ���� ���������������� ������� ������������ ����2����#+

9������ 9 : ;����� 9 ����/�� C���������� ������� ������� ��� ��������������� ���� ��������� �� ��� �� ���� �������� ������ ������������� �� ������ ���� �+�! *���� ���!� ���� ��#

9������ 9 : ;����� 9 ����#� *������ � 7�8 �� �( � ��� ������ ������������� �������� �� ���� *���� ���! *�!� ��� #<�#2

*������ , : O������ 9 C ����8� 6������ ��� E'������������� �� �������� ������� ����������� �� ������� ��� ������� ������� �� ����� ������������� ��� �<<��55

*�������� 6 � (������� I : !������ � ����+� ,�� ����� ������� ������������� ������� ��������� ���%���� �� ��� ������ ���@ �� ������ ���� �! ��)���! /0�� !1� ���� 5�2���+

*�������� 6 � !������ � : (������� I ������ B����������� ������� �

,�����������'������� �������� �������� ���� ���� 8�/�

� 8+++ 4�������� � *������ B���������� 6�������� �������� ������ �� ������������� ��� 8��+�8�//

Page 17: α1-Adrenergic receptor-induced slow rhythmicity in nonrespiratory cervical motoneurons of neonatal rat spinal cord

��� ������� ��������� ���� �������� �� ��� ������ ���@ �� �� �������� �! ��)���! /0�� !1� ���� 522�5�#

4������ B 9 : B������ - ����<� - ���� � ��� ����� '��������� ���'����������� � ������ � ��� ����� � ��������'��������� �� �� ��� ��� ������� � ��� ��� ������� ������ ��� ���! �! ��������!� ���</+��</�

4��"� I 9 � ,��"��� ! - � 6��������� � 6 � : O����� 7 ����2�9����� ����� ������� � ����� ������� ��������� ����� ��������� ������� ������! ��)���!� ���� �8���<2

4��"� I 9 � 6 ���� 0 7 : 4��� ��� 0 E ����5� 9����� ��� � ��������'��������� �� �� ��� ������������� ���������� � ���������'��������������� ������ ��������� �� ������� ��� 3������� ��� �� ���� �!�������)���!� ��� 8�<#�8�5�

I����� 0 0 � 6 ���� 0 7 : 4��� ��� 0 E ����8� ������� ������ �� ������������ �� �� �������� ��������� �� ��� ����� ��� ����� ��� '������ ��� ������ �! �������)���!� �� ��/����

(������� I � !������ � : *�������� 6 ���#�� ,������ ������� � ��� ������� ��������� ���� �������� � ��� ������������ -� ����@ �� ������ ���� �� ��� ������ ��� *���� ���!� ��� <8��<<8

(� 6 ! ����2� ���� �� �� ������� ��� ������� � �'�������� �� ������������ ���� ��� � � ������ ��������� ��(����� �! ��)���!/0�� !1� ���� /8<�/</

0����� � - � 0����� 6 ! : !�������� I 6 ����#� 7������� ������� ������� � ��������� ���� �� �� �� ���� ������ ����� ��� ���������� �! ���! ��)���!� �� �+����5

0����� 6 ! � 6 ���� 0 7 : 4��� ��� 0 E ����/� !������� � ������������� �� ����@ ��� � I�D ������' ������� ������� � �! ���!��)���!� �� 8�8+�8�<<

>����� � � 6������ > & � >3�������� � : !�9��� ��� 0 � ������ *������ ������������� � �� �� ���� '���������� �����"� �� ��� �������������� ��� ������ ��� �! �������)���!� �� 25��25/

>�=������ 6 : 7��� 6 ! ���#+� E����=���� � ��� ������� ������� �� ������@ � (�, ���� ��������! 0���!� �� ��/��85

E������ - 9 : 4��� ��� 0 E ����<� !������� � ��������� ������� �������� ��� ������� �������� � ������� �! ��)���! /0�� !1� ���8�<�8<<

E���"�� 0 ���#�� -����� �� ��������� � ������� �� �� ������� �� �� ������� � ��� ������� ������ ���� �! ��������! ����!� �� ��<8

!������ - 9 : T����� 1 0 ����<� *�������� � ��� � ����� ����������������� ������ �� ����������� � ���� ��� ���� *���� ���!� �� �5<��52

!���� 9 ����<� 7 ����� ������� � ������� � ��� ��������� ������� ��������������� ������ �������� ��� �������� ������� �� ���������� ����� ��� '������ ��� ����������� ��������! 0���!� ��� /��/5

!���� 9 � !������ � : (������� I ������ �'(�������� ��� �������������� ��������� ������� �� ��� ������ ���@ �� �� ���� ���� ���! �!����2���!� ���� #����

!���� 9 � !������ � : (������� I ����8� 7 ����� ������� � ������� ��������� ��� �������� ��������� ����������@ �� �� ���� ���� �� ��������� ��� �! ��)���! /0�� !1� ���� /+��/8�

!���"���� & � 6�=��� & : &� ��� 6 ���#�� - ���� �������� ���� ���������� ���� �� ��� ������� �������� '������ ��� ���������� � ��������� ��� *�! �! ����2���!� � ����+5

��� ���� ( ������ 6������ � ��� ��������� ������ ����� ������� �������� '������ ��� ����������� ��������! ���!� ��� �#<���+

,��"��� ! - � 1������ 9 - : 1������ - 0 ������ -����� � �������������� ��� �������� ������� �! �������)���!� ��� ���������

,����G��� E : ;����� 9 ����5� 7�������������� � ��� �������� ����������������� �� �������� ������� ��� �� ��� �� ����� �������� '������ ������������� � ��� ������� ��� &�2�������! ���! ���!� ��� �2�/5

,��"� > � >����� ! � 9� ,��%����� * � &���� 4 � (������� I : !������ � �8+++� 7������� ��� ������� ������ � ��������� , �� ������� ������� ������� ���! �! ��������!� ��� �8/��<#

�������� 9 O � 7�� ������� 0 � 0��%���� & : 1����"�� � ����<� 7����� �������� ��� ������ '��������� ������� �������� �� � ����� ������� ��������� ������� �! ��)���! /0�� !1� ���� 8<�<<

������ 7 � 6������� ! : 4���������� 7 ����<� B� �� ����������� � �����'�'����������� �� ��� ��� ������ ��� ��� ��� ��$����� ����������������� ����������@ � %����������� �������������� ���� �!��������! ���!� ��� 55��<

6��������� � 6 � � ,��"��� ! - : 4��"� I 9 ����#� 9����� ����� ������� � ��� �������� ����� ��������� ����� �� ���� ������������� ������� ������� *���� ���!� ��� �+5����

6 ���� 0 7 : 4��� ��� 0 E ���#2� C� ���� �������� '������ ��� ������������� ���� � �� ���� � �� � ����� ���������� ��� �� ��� �!��������! ����!� ��� <8��<<<

6 ���� 0 7 � 4��� ��� 0 E : 6�� ���� 1 0 ���##� B����� ������� ����������� �� ��� ������� �� � ����� ����� ��� ������� ��� ������ %�&�*� �� 88#<�88##

6 ���� 0 7 � I����� 0 0 � E��� I : 4��� ��� 0 E ����+� B����� ������� ����������� ��������� ������� �� � ����� ����� ��� '������ ��� �� ���� C 6������ ���� �������� � �� ��� ������� ����� ������� �!�������)���!� �� ��5����/�

&���"�� ( � &�"������� 6 � !�� �� - � �"�� 0 � 7�� > : �"��� - ����/�9����� ����� ������� �� ��� ������������ ����������� � ������ ������� �� ������� ���� �� ����! �����!� ��� 8��82

;����� 9 ���#/� *������� �� ������ ��������� ����������� ������� ���������� ���� ��������� �� ������ U���������Q ��� �� �� ���������� ����� ������ �+�! *���� ���!� �� 88��8<8

;����� 9 ����2� 7�������� � �� ��� ��� ���������� C�@ !������ - 9 �1������� - E : 1����� 1 , ������ ����� �����! �� ��� ����������)������ 7�7 ,����� 4������ �� 8#��8�/

;����� 9 : 4����� * ���#<� *������� �� ��������� ��� �� �� ���������������� �� ��� ������ ������'������� ��� ��� ����� ����������� �+�!*���� ���!� ��� 852�8�/

O���� & � (�������� T : ��� ( ����2� 7���������=���� � ������'���������� ������� �� ����������� � ��� ������ ������ ������� ���!�! ����2���!� ���� 5���8

O���� ! T : 9��� B 0 ����+� �'(�������� ��� �������� �� ��������� �������� �� ����� �! ��)���! /0�� !1� ���� #2��+<

O���� . : !�7� ��"� 9 - ����<� 7���� � $���� �� � �������������� ����������� ���� ; �����'���������� ������ � �������������������������� ��� �6�<�'-7,9 �! ��������!� ��� 8����88�/

O����� 6 � � 4���� 6 0 : 1������ 7 9 ������ B������������ ������� ������� ������� ���(! *���� ���!� � <5<�<�+

8�// 9 !��� �� �

� 8+++ 4�������� � *������ B���������� 6�������� �������� ������ �� ������������� ��� 8��+�8�//