FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE.MICROBIOLOGIA SI DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL ESCHERICHIOZELOR I AL DIZENTERIEI BACTERIENEFAMILIA ENTEROBACTERIACEAEPeste 30 genuri cu peste 150 speciiHabitat: intestinul omului, animalelor. Pot fi intalnite pe sol, plante, in apa, etc Martori de contaminare fecal a mediuluiMajoritatea fac parte din microflora normal (comensal) intestinal

CLASIFICAREAN FUNCIE DE PATOGENITATE:Enterobacterii patogene: genurile Shigella, Salmonella, Yersinia, unele variante ale speciei Escherichia coli;Enterobacterii condiionat patogene: genurile Citrobacter, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Providencia, Serratia, Edwardsiella, etc.

TESTE-CHEIE ALE FAMILIEI Bacterii (bastonae) gramnegativeNesporogeneMobile-peritriche sau imobileFacultativ-anaerobeFermenteaz glucoza pn la acid (A) sau acid i gaz (AG)Catalaza-pozitiveOxidaza-negativeReduc nitraii n nitriiTESTE PRIMARE (identificarea genurilor)Utilizarea citratului de Na (mediul Simmons)Utilizarea malonatului de NaHidroliza ureei (testul Preus)Decarboxilarea lizinei (LDC)Dezaminarea fenilalaninei (FAD)Producere de H2S n mediul multitest (ex.: Kligler)Fermentarea glucozei pn la acizi (testul MR)Fermentarea glucozei pn la acetoin (testul VP)Mobilitatea (n geloz semilichid)TESTE SECUNDARE (identificarea speciilor/variantelor)Teste biochimice (fermentarea glucidelor, decarboxilarea aminoacizilor (arginin, ornitin), producerea indolului, etc)Fagoidentificarea i lizotipiaColicinogenotipiaSeroidentificarea Antibiograma

CARACTERE MORFOBIOLOGICECaractere morfologice: bastonae G-, 1 - 6 m x 0,3 - 1 m, mobile peritriche (Shigella, Klebsiella, Yersinia pestis imobile), nesporogene, formeaz microcapsule (Klebsiella capsulat), posed fimbrii.

Caractere de cultur: Anaerobe facultativTemperatura optim 37 grade C (limite 18 45 grade) Nepretenioase nutritivColonii S, apar dup 18-24 h de incubare, 2 - 3 mm (dup repicri pot apare colonii R), Klebsiella colonii M (mucoide), Proteus invadeaz suprafaa mediului

MEDII DE CULTURDe transport: glicerin 30%, soluie salin 3%, soluie tampon-fosfatDe mbogire a bacteriilor patogene: Kauffmann, Muller, bulion selenit, etcDiferenial-diagnostice:De izolare a culturii pure- ENDO, LEVIN, PLOSKIREVComponena: baz nutritiv, lactoz, indicatorColoniile L+ : colorate Coloniile L- : incolore (frecvent flora patogen)- Mediul Wilson-Blair cu sulfit de Bi (Salmonella reduce sulfitul n sulfur de Bi colonii negre pe mediul verde)

II. De acumulare i identificare preliminar (medii multitest)Russel, Kligler (glucoz, lactoz, sruri de Fe, indicator)Olkeniki (glucoz, lactoz, zaharoz, uree, sruri de Fe, indicator)III. De identificare final (medii cu citrat, malonat, irul Hiss, medii cu aminoacizi, gelatina, etc)

CARACTERE ANTIGENICEAg O, de perete, LPZ, termostabil i rezistent la alcool, sensibil la formol, specificitate de gen, specie, grup. Stimuleaza producerea Ig M.Ag H, flagelar, proteic, termolabil i inactivat de alcool, rezistent la formol, specificitate de tip (variant). Stimuleaza producerea Ig G. Ag K, superficial, capsular, termovariabil, specificitate de specie, tip. Mascheaz Ag O, inaglutinabilitate cu seruri anti-O. Variante L, A, B la E.coli, Vi la Salmonella i CitrobacterAg F, fimbrial, termolabil, nespecific ECA (Enterobacterial Common Antigen) antigen comun fam. Enterobacteriaceae (interes taxonomic) Ag Kunin

Genul Escherichia. Diagnosticul de laborator al escherichiozelorGenul Escherichia Spp.: E.coli, E.blattae, E.fergusonii, E.vulneris, E.hermaniiHabitat: intestinul omului i animalelor (80% din flora aerob intestinal), 107-109 bacterii/gram fecale. Contamineaz solul i apele de suprafa. Prezena E.coli - indicator de contaminare fecal

Rolul E.coli n fiziologia uman1. Manifest activitate antagonist fa de alte bacterii, inclusiv cele patogene2. Stimuleaz dezvoltarea esutului limfoid prin intermediul Ag sale3. Particip la procesele de digestie, inclusiv n metabolismul colesterolului i acizilor biliari4. Asigur organismul cu vitamine, sintetiznd vitamine B, K, acid nicotinic, acid folic, etc.CARACTERE MORFOBIOLOGICEE.coli enterobacterie tipic, mobil, lactoza+ (colonii colorate pe medii DD), fermenteaz glucoza cu formare de AG (teste primare: MR +, mobilitate +, LDC+, celelalte teste sunt negative)Structura antigenicAg O 180 tipuri (O1, O2, O3,......O180)Ag H 60 tipuri (H1, H2, etc)Ag K 100 tipuriDin combinaii rezult serovariante: ex.: O55:H2:K1

FACTORI DE PATOGENITATECapsula (antifagocitar, Ag K1 camuflaj imunologic datorit epitopilor comuni cu polisialozil-glicopeptide cerebrale la nou-nscui)Proteine din ME i LPZ (anti-complement, protecie de factorii bactericizi ai sngelui, adeziune, invazie)Fimbrii: pili manozo-sensibili/rezistenti, pili CFA, pili P (adeziune la mucoasa intestinala si alte substrate)Toxine (endotoxina, enterotoxine termostabile - ST i termolabile LT (codificate plasmidic), citotoxine Shiga-like toxine (SLT-1, SLT-2), codificate bacteriofagic Hemolizina Siderofori (sisteme de captare a Fe)

ROLUL E. COLI N PATOLOGIA UMANFENOTIPURI DIAREIGENETulpini enteropatogene: EPEC (O26, O55, O111, O125, O142, etc). Responsabile de gastro-enterite infantile (infecii salmoneliforme). Ader la mucoasa intestinului subire printr-o protein din membrana extern fr a penetra intracelular, distrug microvilozitatile, perturba procesele de secretie si absorbtie intestinala. Tulpini enteroinvazive: EIEC (O28, O124, O143, etc). Responsabile de sindrom dizenteric (infectie dizenteriforma) cu invazia mucoasei colonului, penetrare intracelular, ulceraii. Factori de patogenitate: adezine, citotoxine (SLT).

Tulpini enterotoxigene: ETEC (O6, O8, O20, O25, O115, etc). Responsabile de diareea cltorului, sindrom holeriform. Adeziunea la enterocitele intestinului subire este asigurat de pili (CFA colonization factor antigen sau CSF coli surface factors). Elaboreaz toxine enterotoxine ST i/sau LT. Activeaz adenilat- respectiv guanilat ciclaza enterocitelor cu acumulare de AMPc intracelular sau GMPc, provocnd o secreie sporit a ionilor de Cl- i inhibiia absorbiei ionilor de Na+, antrennd o pierdere hidric important.

Tulpini enterohemoragice: EHEC (O157:H7; O26, O111). Responsabile de colite hemoragice cu sindrom uremic-hemolitic (anemie hemolitic + trombocitopenie+insuficien renal). Posed factori de adeziune i produc citotoxine capabile de difuzie n organism (Shiga-like toxine SLT 1 i SLT 2). Produc frecvent hemolizin. Tulpini enteroagregative: EAggEC (O111:H12). Posed adezine, hemolizine i SLT. Provoac diaree persistent (peste 14 zile) la copii si adulti cu imunosupresie (HIV). Ader agregativ la suprafaa culturilor de celule.Tulpini enteroadezive: EAEC. Ader difuz la celulele intestinale i culturile de celule. Provoac sindroame diareice.

FENOTIPURI UROPATOGENE (O1, O2, O4, O6) Posed afinitate pentru mucoasa uro-genital (fimbrii tipul P sau 1, Ag O i K specifice, hemolizine, etc )

FENOTIPURI BACTERIEMICE

Alte forme clinice provocate de E.coli:oc endotoxinicMeningite la nou-nscui (preponderent tulpini cu Ag K1)Infecii ale plgilor (frecvent de origine nosocomial)Colecistite, peritonite, salpingite, etc.Toxiinfecii alimentareDIAGNOSTIC DE LABORATORPrelevate n funcie de forma clinic: materii fecale, urin, snge, LCR, puroi, etcMetode de diagnosticExamenul microscopic de orientare (frotiu Gram n infecii extra-intestinale, RIF)Examenul bacteriologic (de baz, cantitativ) detalii in Ghid !!!!!Examenul serologic (retrospectiv, de confirmare) - RA cu autotulpini (titru diagnostic 1:200)

Tratamentul escherichiozelorAntibiotice (conform antibiogramei)Eubiotice (colibacterin, lactobacterin, bifidumbacterin, bificol, etc)

Profilaxia escherichiozelor - nespecific

GENUL SHIGELLA. DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL DIZENTERIEIShigelele strict umane. Cauzeaz infecii intestinale - igeloze, cea mai grav formdizenteria bacterian.Clasificarea genului Shigella (biochimic i antigenic):A Shigella dysenteriae (12 s/v, 12 b/v) Manitol -B Shigella flexneri (6 s/v, 14 ss/v, 23 b/v)C Shigella boydii (18 s/v)D Shigella sonnei (7 b/v)Subgrupele B, C, D manitol +CARACTERE MORFOBIOLOGICE Enterobacteriaceea tipice, imobile, lactoza-negative (colonii incolore pe medii DD), scindeaz glucoza pana la acizi (testul MR+), celelalte teste primare sunt negative.Factori de patogenitate:Factori de adeziune la mucoasa colonului (fimbrii, LPZ)Microcapsula (antifagocitar)Factori de penetrare i multiplicare intracelularToxine:Toxina Shiga, de origine cromosomial. Inhiba sinteza proteinelor in celula gazda. Manifesta activitate neurotoxic, enterotoxic, citotoxic elaborat de S.dysenteriae 1. 2. Citotoxine (Shiga-like toxine (SLT), verotoxine), codificate de bacteriofagi. Efect similar cu cel al toxinei Shiga.Endotoxina

Structura antigenic: Ag O i K cu specificitate de gen, specie, subspecie, variant

Rezistena n mediul extern:S.dysenteriae - foarte sensibil (1-2 ore)S.flexneri persist 1-3 sptmni n ap, 2 luni n lactateS.sonnei persist i se multiplic n lactatePATOGENEZA DIZENTERIEI BACTERIENESursa de infecie: bolnav, reconvalescent, purttorTransmiterea fecal-oral: Contact direct (mini murdare)Alimentar (alimente, ap)Doza infectant: 10-102 bacteriiBacteriile patrund n intestin, colonizeaz epiteliul colonului i macrofagele din foliculii limfoizi, penetreaz intracelular (prin macropinocitoz dirijat). Bacteriile se propag intra- i intercelular graie polimerizrii actinei la un pol al celulei (caracter determinat plasmidic).

Urmeaz multiplicarea local intracelular cu invazia celulelor vecine provocnd moartea lor. Aceasta duce la inflamaie fibrinoas intens a colonului, micro-abcese i ulceraii, cu apariia mucusului, puroiului i sngelui n materiile fecale.Perioada de incubaie 2 - 4 zileSemne clinice febr, dureri abdominale, tenesme (spasme rectale), scaune lichide muco-sanguinolente frecvente. Vindecarea n 2-5 zile (clinic, apoi microbiologic)Forme cronice sau portaj sunt posibile DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL DIZENTERIEIPrelevate: probe de scaun (elementele muco-sanguinolente), apa, alimente, lavaje de pe suprafeeMetode de diagnosticExamenul microscopic RIFExamenul bacteriologicI. Izolarea culturii pure pe medii DD (Endo, Levin, Ploskirev) sau mbogirea ighelelor n bulion selenit

II. Coloniile L- sunt repicate pe mediile Olkeniki, Kligler pentru acumularea culturii pure i identificare preliminar(lactoza/zaharoza -, glucoza A, ureea -, H2S -)III. Identificarea definitiv a culturii pure - Caractere morfotinctorialeCaractere de cultur Caractere biochimice (teste primare, secundare)Caractere antigenice (seroidentificarea prin RA pe lam cu seruri imune anti-Shigella poli- i monovalente)FagoidentificareaVirulena (testul Sereny la cobai)AntibiogramaIV. Analiza rezultatelor i formularea rspunsului

3. Diagnosticul serologic (din a 5-7 zi de boal)- RA, RHAI (aduli 1:400 (S.flexneri) 1:200 (S.sonnei) copii 1:100 coproanticorpi (Ig A 1:80) ELISARIFIImunitate: specific de tip, 1-2 ani, umoral (IgA)Profilaxie: vaccinuri ribosomale, inactivate, atenuate (imunitate de scurt durat) Tratament: antibiotice (trimetoprim, sulfamide, tetraciclin, ampicilina, etc), eubiotice, bacteriofagi, vaccin inactivat (dizenteria cronic)