616x247 hongos endofitos.pdf
TRANSCRIPT
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
1/68
2,6cm
HONGO
28ºC ± 2ºC por una semana
r 1
R1
r 2
R2
3,7cm
INDICE DE CONTENIDO!
ÍNDICE DE CONTENIDOS 1
RESUMEN 4
ABSTRACT 6
I. INTRODUCCIÓN 8
Objetiv! 14"un#a$ent Te%ric 1&1. '! (n)!
1&2. *n)! en#%+it!
183. Cu,tiv #e (n)!
--4. Anta)ni!$ $icrbian
-44.1. Mecani!$ #e acci%n -&
a. Antibi!i! -& b. C$.etencia -6c. Interacci%n #irecta cn
e, .at%)en -/d. In#ucci%n #e re!i!tencia -8
5. "er$entaci%n $icrbiana-0
5.1. Reueri$ient! +i!i,%)ic!#e, creci$ient $icrbian -0
5.2. Nutriente! reueri#! .ara e,creci$ient #e $icrr)ani!$! 2-
1
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
2/68
5.3. Eta.a! .ara ,a .r#ucci%n #eun .r#uct $icrbian 22
II. MATERIA'ES 3 MTODOS45
1. Cu,tiv #e (n)!45
2. Manteni$ient #e ce.a!45
3. Cu,tiv #b,e41
4. Obtenci%n #e $etab,it! biactiv!4&4.1. Activaci%n enriueci$ient
#e ca#a un #e ,!
$icrr)ani!$! 4&5. Eva,uaci%n #e ,a activi#a#
anti$icrbiana 4&5.1. 7re.araci%n #e ,a !u!.en!i%n
in%cu, 465.2. Sie$bra #e bacteria! 465.3. 7re.araci%n e incubaci%n #e
,a! caja! 7etri 4/5.4. Deter$inaci%n #e ,a activi#a#
anti+n)ica 4/
III. RESU'TADOS40
2
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
3/68
1. *n)! en!aa#! en ,a! .rueba!#e biactivi#a# 40
2. Anta)ni!$ in vitro entre (n)!en#%+it! Asperguillus niger .r e,$9t# #e cu,tiv #b,e &5
3. Anta)ni!$ in vitro entre (n)!en#%+it! Microsporum canis .r e,$9t# #e cu,tiv #b,e &-
4. Anta)ni!$ in vitro entre (n)!en#%+it! bacteria! .at%)ena! .r e,$9t# #e cu,tiv #b,e &4
5. Eva,uaci%n #e ,a activi#a#anti$icrbiana #e ,! e:tract! .r e,$9t# #e #i+u!i%n en caja 7etri &&
IV. DISCUSIÓN &6
V. CONC'USIONES 3RECOMENDACIONES 6-
VI. BIB'IO;RA"ÍA64
3
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
4/68
RE!#$EN
E, .re!ente trabaj cn!i!ti% en eva,uar ,aactivi#a# anti$icrbiana #e nueve ce.a! #e (n)!
en#%+it! Stilbacea> Phoma sp=>Nigrospora sp=> Alternaria sp= Alternaria sp= Micelia sterilia Micelia sterilia Miceliasterilia ai!,a#! #e cuatr .,anta! $e#icina,e! #an# c$re!u,ta# ue e, (n) en#%+it Nigrospora sp=
4
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
5/68
$!tr% e, $ar .rcentaje #e in(ibici%n +rente a,+it.at%)en Asperguillus niger @ $ientra! ue en ,!
re!u,ta#! bteni#! +rente a, .at%)enMicrosporun canis> t#a! ,a! ce.a! en#%+ita!en!aa#a! $!trarn activi#a# anta)%nica@ .r tr,a#> en ,a! .rueba! #iri)i#a! +rente a bacteria!.at%)ena! ,a ,eva#ura Candida albicans> !e .u#ntar ,a e:i!tencia #e in(ibici%n=
A !i $i!$ ,! en!a! !e #iri)iern a ,abtenci%n #e $etab,it! activ! #e ,a! nuevece.a! .r e, $9t# E:cavaci%n7,acaCu,tivre!.ectiva$ente +rente a ce.a! #e Klebsiella pneumoniae> Pseudomonasaeruginosa> Staphylococcus aureus Candidaalbicans?@ a .artir #e ,! e:tract! bteni#! !ee,abrarn antibi)ra$a! .r tri.,ica#> !e $i#i% e,
#i$etr #e ,! (a,! #e in(ibici%n +r$a#!= '!e:tract! #e ,! (n)! en#%+it! n $!trarnactivi#a# anti$icrbiana= 'a au!encia #e activi#a#anti+n)ica #e ,! e:tract! !e,eccina#!> !u)iere,a au!encia #e !u!tancia! biactiva!=
Pa%abras c%a&e' Activi#a# Anti$icrbiana@ *n)!En#%+it!@ Su!tancia! Biactiva!@ E:cavaci%n7,acaCu,tiv> En+renta$ient Dua,=
5
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
6/68
A!TRACT
T(e .re!ent r a! t eva,uate t(eanti$icrbia, activit + nine !train! + en#.(tic
+un)i Stilbacea> Phoma sp=>Nigrospora sp=> Alternaria sp= Alternaria sp= Micelia sterilia Micelia sterilia Miceliasterilia i!,ate# + +ur $e#icina, .,ant! Borreria laevis> Baccharis obtusifolia>Baccharis latifolia? in +rnt + !tu$.! + .at()en!$icrr)ani!$ cau!in) + $an i,,ne!!e! in (u$an=
It a! u!e# t(e tec(niue + #ua, cn+rntatint #eterr$ine t(e #e)ree + anta)ni!$ t eac( +t(e !train! .r#ucin) + anti$icrbia, !ub!tance!a)ain!t t(e .at()en! abve> )ivin) a! a re!u,ten#.(tic +un)i Nigrospora sp= !(e# a bi))erin(ibitin .ercenta)e in +rnt + t(e +it.(at)en Asperguillus niger @ (i,e t(e re!u,t! a)ain!t t(e
6
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
7/68
.at()en Microsporun canis> a,, t(e en#.(tic!train! inve!ti)ate# !(e# anta)nic activit@ an#
t(e t(er (an#> t(e evi#ence ,e# a)ain!t +.at()en! bacteria an# t(e ea!t Candida albicans>t(ere a! in(ibitin=
Si$i,ar, a!!a! ere cn#ucte# t btainactive $etab,ite! + t(e nine !train! an# b t(e$et(# E:cavatin7,ateCu,tivatin a)ain!t !train!+ !tu$.! + Klebsiella pneumoniae> Pseudomonas aeruginosa>Staphylococcus aureus an# Candida albicans?@be)innin) it( t(e e:tract! btaine# a! .re.are#in tri.,icate antibi)ra$!> t(e #ia$eter + t(e (a,!+r$e# in(ibitin a! $ea!ure#= T(e e:tract! + t(een#.(tic +un)i #i# nt !( anti$icrbia, activit=T(e ab!ence + anti$icrbia, activit + t(e !e,ecte#
e:tract!> !u))e!t! t(e ab!ence + !ub!tance!biactiva!=
(e)*or+s' Anti$icrbia, Activit@ En#.(tic "un)i@Biactive Sub!tance!@ E:cavatin7,ateCu,tivatin>Dua, Cn+rntatin=
7
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
8/68
I. INTROD#CCIÓN
Nue!tr .a! .!ee una riueFa en
bi#iver!i#a# nica en e, $un#> cnvirti9n#, enuna re)i%n cn )ran#e! .!ibi,i#a#e! .ara e,#e!arr,, #e ,a inve!ti)aci%n ,a tran!+erencia #ecnci$ient a.,ica# en e, ca$. #e ,abitecn,)a=
'! $icrr)ani!$! en e!.ecia, ,! (n)!cn!tituen #entr #e ,a! +uente! #e .r#uct!
natura,e! una #e ,a! $en! e!tu#ia#a! ue !ine$bar) +rece )ran#e! .!ibi,i#a#e! .ara ,abtenci%n #e nueva! e!tructura! in)eni!a! activi#a#e! bi,%)ica! .tente!
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
9/68
#e /5 aG!= *a!ta a(ra $! #e 4555 $etab,it!+n)ic! !e (an #e!cubiert a,re#e#r #e &555 a
/555 e!.ecie! ta:n%$ica! !e (an e!tu#ia##e!#e e, .unt #e vi!ta #e !u #iver!i#a# u$ica=En 100&> *a!rt( e!ti$% e, n$era.r:i$a# #e (n)! e:i!tente! en 1>& $i,,ne!>cn !, /1555 #e!crit! (a!ta e, $$ent ,! (n)! en#%+it! !e venc$ una e:ce,ente +uente #e .r#uct! natura,e!biactiv!> ue in(iben $atan una a$.,iavarie#a# #e $icrr)ani!$!> c$ ,a! bacteria!>(n)!> viru!> .rtFari! ue a+ectan (u$an! ani$a,e! $a$+er! e in!ect! (erbvr!> .at%)en!
bacterian! +n)ic!@ .r.rcinn#,ecaracter!tica! +avrab,e! .ara !u .rtecci%n>creci$ient> $anteni$ient a#a.taci%n !e encuentran en ,a!(ja! ,! ta,,!= En a,)un! ca!!> ,! (n)!en#%+it! cn+ieren bene+ici! a ,a .,anta ue.ue#en re!u,tar $utu!J uti,iFan ,! nutriente! ue!intetiFa ,a .,anta 9!ta !e bene+icia #e ,!
9
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
10/68
$etab,it! biactiv! ue e,,! .r#ucen a! c$ $uc(! #e ,!$etab,it! .r#uci#! .r 9!t!> re.re!enta#!cn +recuencia .r #iver!a! c,a!e! #e c$.ue!t!ue van #e!#e ,a! t:ina! i$.rtante!antitu$ra,e! antivira,e! a)ente!ne$atici#a! ue
abarcan un a$.,i e!.ectr #e activi#a#e!+uncina,e!> ue (an #a# un re!u,ta# .r$ete#ren e, trata$ient c,nic #e una !erie #e .at,)a!a nive, (u$an ani$a,@ e inc,u! +recien# ,a.!ibi,i#a# #e a.,icacine! a)rc,a! .tencia,e!=
A, i)ua, ue ,a! .,anta!> ,a varie#a# #ee!.ecie! +n)ica! va au$entan# a $e#i#a uen! acerca$! a ,a! Fna! tr.ica,e!= '! e!tu#i!ue !e (an rea,iFa# acerca #e e!te rein en e,Ecua#r> !n e!ca!!> !i !e tiene en cuenta ,abi#iver!i#a# e:i!tente= En e, !itihttp://www.mycokey.com/Ecuador.html e!.!ib,e encntrar in+r$aci%n actua,iFa#a !bree!.ecie! +n)ica! en Ecua#r=
10
http://www.mycokey.com/Ecuador.htmlhttp://www.mycokey.com/Ecuador.html
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
11/68
A#e$!> e, au$ent #e ,a +recuencia
)rave#a# #e ,a! $ic!i! !i!t9$ica!> ,a a.arici%n#e in+eccine! +n)ica!@ (a !i# una ten#enciac,ara en ,a! ,ti$a! #9ca#a! #e, !i), = E!te.a.e, ca#a veF $! i$.rtante #e ,! (n)! en ,a.at,)a (u$ana> (a !u.ue!t un incre$ent en e,e$.,e #e ,! anti+n)ic! !i!t9$ic! (a ejerci#una i$.rtante .re!i%n !bre ,a nece!ariainve!ti)aci%n .ara ,a btenci%n #e!arr,, #enueva! $,9cu,a!= A! $i!$> ,! .rb,e$a! #e!e)uri#a# t:ici#a# #e ,! +r$ac! anti+n)ic! #e a.arici%n #e re!i!tencia! $icrbi,%)ica!(acen i$.re!cin#ib,e e, #e!arr,, #e nuev! $ejre! antibi%tic! anti$ic%tic! ue a.rtenuna! ventaja! a.reciab,e! re!.ect a ,! e:i!tente! e, au$ent #e re!i!tencia .r .arte#e bacteria! .at%)ena! a ,a tera.9utica bacterianatra#icina, (a b,i)a# a ,a i$.,e$entaci%n #e ,atera.9utica c$bina#a> en ,a ue $! #e unantibacterian e! e$.,ea# .ara ,)rar !u bjetiv>au$entan# #e e!ta $anera ,! .rb,e$a! #et:ici#a# ac$.aGante! #e, trata$ient@ !ituaci%nue !e a)rava a, $$ent #e !er a#$ini!tra# a un.aciente cua! #e+en!a! !e encuentran#i!$inui#a! c$ e! e, ca! #e .er!na!in$un!u.ri$i#a!= A#e$!> ,a tera.ia cnantibi%tic! !int9tic! n !ie$.re e! .!ib,e #ebi#a !u a,t c!t
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
12/68
antibi%tic!> !u !nte!i! r)nica en $uc(! ca!!e! $u c!t!a> .r , ue aun en nue!tr! #a! !e
reuiere #e +uente! natura,e! .ara !u .r#ucci%n #e!arr,,= Sin #u#a> e!te ti. #e .rinci.i! activ!cu.an un ,u)ar i$.rtante #entr #e ,! recur!!tera.9utic!@ a! $i!$ e!ta! !u!tancia! !e uti,iFana$.,ia$ente .ara tratar en+er$e#a#e! bacteriana!en .,anta! ani$a,e! ,a )ente u!a .re.aracine!bteni#a! #e .,anta! !i)uien# $9t#!tra#icina,e! en !u! .a!e! .er !in nin)n !.rtecient+ic ue #e acuer# a e!ta .reva,enciaen ,a .b,aci%n (u$ana ,a a.arici%n #e nueva!en+er$e#a#e!> , ue !e .reten#e rea,iFar cn e!tee!tu#i #e inve!ti)aci%n #e, .tencia, biactiv #e
,! (n)! en#%+it! ai!,a#! #e .,anta!$e#icina,e!> e! bu!car e:.,rar ,!$icrr)ani!$! c$ +uente! #e c$.ue!t!tera.9utica$ente ti,e!> e+icace!> +i#e#i)n! #i!$inuen# ,! c!t! #e ,a! $e#icina!e:i!tente!@ e! a!> ue ,a e:i!tencia #e una in$en!abi#iver!i#a# #e $etab,it! $icrbian! biactiv!a.arecen c$ una +uente ina)tab,e #ee!tructura! .ara ,a! nueva! #r)a! natura,e! cn#i+erente! +uncina,i#a#e!> ta,e! c$Janti$icrbiana!> antivira,e!> antitu$ra,e!> en)enera, a)ente! a)rc,a!> in#u!tria,e! +ar$ac,%)ic!=
12
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
13/68
7r ta, raF%n> ,a b!ue#a #e nuev!c$.ue!t! ai!,a#! #e .r#uct! natura,e! cn
$arca#a activi#a# bi,%)ica> !e cn!titue en unaa,ternativa v,i#a .ara e, ca$. #e ,a $e#icinatra#icina,> c$ .ara ,a in#u!tria +ar$ac9utica= E!a! ue en un e!tu#i reciente ,,eva# a cab ennue!tr ,abratri> $ue!tra ue e, .tencia,biactiv #e ,! (n)! ai!,a#! e! .r$ete#r> ,a$ara $ue!tran .r.ie#a# anta)ni!ta .!itivatant cn bacteria! .at%)ena! c$ ta$bi9n cn Asperguillus niger !erea,iF% e, .re!ente e:.eri$ent cn ,! !i)uiente!bjetiv!J
13
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
14/68
O,ETI-O!
a. Ob.e/0&o Genera%'
Screenin) #e (n)! en#%+it! ai!,a#! #e.,anta! $e#icina,e! .ara ,a inve!ti)aci%n #ece.a! cn activi#a# bi,%)ica=
b. Ob.e/0&os Espec0cos'
Cu,tivar ,! (n)! en#%+it! #e ,a! cuatr#i+erente! e!.ecie! #e 7,anta! Me#icina,e!en un $e#i #e cu,tiv a#ecua#=
Me#ir e, .rcentaje #e in(ibici%n #e ,!(n)! en#%+it! en e!tu#i! #e cu,tiv#b,e> cn .rueba! anta)ni!ta! #einteraccine! entre (n)! en#%+it!
14
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
15/68
(n)! .at%)en! (n)! en#%+it!bacteria!=
Rea,iFar +er$entacine! +n)ica! .ara ,abtenci%n #e !u! re!.ectiv! $etab,it!=
Eva,uar ,a activi#a# anti$icrbiana ,aactivi#a# anti+n)ica #e ,! e:tract! #e(n)! en#%+it! $e#iante en!a! #ebiactivi#a#=
F#NDA$ENTO TEÓRICO
1. 3O! HONGO!
Cn!tituen un )ru. $u nu$er! #er)ani!$! ue .re!entan una a$.,ia #i!tribuci%nen ,a natura,eFa> cntribuen# a ,a#e!c$.!ici%n #e ,a $ateria r)nica .artici.an# en ,! cic,! bi,%)ic!= Un .eueGn$er !n .at%)en! #e ani$a,e! .,anta!=
Sn r)ani!$! eucarita! t.ic! .!eenun nc,e ue cntiene vari! cr$!$a!#e,i$ita# .r una $e$brana nuc,ear> cn nuc,9,ric en ARN r)nu,! cit.,!$ic! c$J$itcn#ria!> vacu,a!> retcu, en#.,!$ic>
15
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
16/68
a.arat #e ;,)i rib!$a! 85S= E, cit.,a!$a !eencuentra ,i$ita# .r ,a $e$brana cit.,!$ica>
ue e! una #b,e ca.a #e ,.i#! ue cntiene.rtena! e!ter,e! ue cntr,a ,a.er$eabi,i#a# ce,u,ar .artici.a en ,a !nte!i! #e ,a.are# ce,u,ar=
'! (n)! .re!entan b!ica$ente #! ti.!#e $r+,)a!J una $u,tice,u,ar #en$ina#a+i,a$ent!a tra unice,u,ar #en$ina#a,eva#uri+r$e= '! (n)! +i,a$ent!! re.re!entan e, creci$ient $! t.ic #e,! (n)! $icr!c%.ic! .ara , ue #i!.nen #e .tente!e:enFi$a! ue en a,)un! ca!! .ue#en !ervir,e!c$ +actre! #e viru,encia en e, (!.e#a#r
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
17/68
'a $ara #e ,! (n)! .re!entanre.r#ucci%n !e:ua, a!e:ua,= E, e!ta# !e:ua, !e
#en$ina te,e$r+ $ei!.%ric e, a!e:ua,ana$r+ $it!.%ric= E! re,ativa$ente c$nue un $i!$ (n) ten)a #! n$bre!> e, #e,e!ta# ana$r+ e, #e, e!ta# te,e$r+> a ue!ue,en (aber!e #e!cubiert n$bra# #e +r$ain#e.en#iente= En un )ru. i$.rtante #e (n)!!,a$ente !e cnce ,a re.r#ucci%n a!e:ua,>.rue n !e cncen ,a! cn#icine! a#ecua#a!.ara ue !e #e!arr,,e ,a +r$a !e:ua, .rue9!ta !e (a .er#i# a , ,ar) #e ,a ev,uci%n= 'are.r#ucci%n a!e:ua, .ue#e ,)rar!e .r+ra)$entaci%n #e ,a! (i+a!> a ue ca#a +ra)$ent.ue#e .r#ucir una nueva c,nia= '! (n)!.r#ucen $i,,ne! #e e!.ra!> ca#a una cn ,aca.aci#a# .ara #e!arr,,ar una nueva c,nia= 'a!
e!.ra! !e:ua,e! !e .r#ucen tra! ,a +u!i%n #e ,!nc,e! #e #! (i+a! !e:ua,$ente c$.atib,e! #e#! ,eva#ura! .!terir $ei!i!= 'a $r+,)a #e,a! e!.ra! !e:ua,e! e! $u varia#a tiene )raninter9! .ara ,a i#enti+icaci%n +n)ica> a ue.re!entan #i+erencia! caracter!tica!= '! (n)!#e, Phylum Basidiomycota .r#ucen ba!i#i!.ra!en e, e:terir #e una e!tructura #en$ina#aba!i#i> ,! Ascomycota .r#ucen a!c!.ra! en e,interir #e una e!tructura en +r$a #e !ac#en$ina#a a!c ,! !ygomycota .r#ucenFi)!.ra!
'a! e!.ra! a!e:ua,e! )enera,$ente !e.r#ucen en (i+a! e!.ecia,iFa#a! !e #en$inan
17
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
18/68
#e #i+erente +r$a !e)n !u $r+,)a= '!!ygomycota .r#ucen e!.ran)i!.ra! en e,
interir #e una e!tructura en +r$a #e !ac#en$ina#a e!.ran)i= '! Ascomycota en$enr )ra# ,! Basidiomycota> .r#ucen e!.ra!a!e:ua,e! #en$ina#a! cni#i! ue !e#e!arr,,an a .artir #e una e!tructura #en$ina#acni#i%+r= Se)n !u ta$aG !e #i+erencian en$acrcni#i! $icrcni#i! ,! (n)! crecen+ci,$ente en ,a $ara #e ,! $e#i! #e cu,tiv>nece!itan# una +uente #e carbn r)nica eine! a$ni nitrat c$ +uente! #e nitr%)en=E!ta +aci,i#a# .ara crecer en cua,uier $e#i #ecu,tiv ,a .re!encia #e cni#i! en e, aire (aceue !ean cnta$inante! (abitua,e! en e,
,abratri= '! (n)! +i,a$ent!! !n aerbi! ,! ,eva#uri+r$e!> anaerbi! +acu,tativ!= Su!reueri$ient! #e te$.eratura #e .* !n .ce:i)ente! ,a $ara crecen en un ran) #e .*#e - a 0 a te$.eratura! entre 15 45PC
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
19/68
#i+erencia#a !e)n e!t9n +r$a#a! .r ,eva#ura! u(n)! +i,a$ent!! !e encuentran en,a! (ja! en ,! ta,,! #e $uc(a! .,anta!= Sn!i$binte!> n .r#ucen !nt$a! #e en+er$e#a#en ,a .,anta> aunue a,)una! vece! .ue#en.re!entar un )ra# #e .at)enici#a# ,eve e!tan#re,acina#! ta:n%$ica$ente cn ,! (n)!+it.at%)en!= Liven en ,! e!.aci! interce,u,are! a,)una! vece! intrace,u,ar$ente en (ja!> ta,,! +,re!> ab!rbien# nutriente! #e ,a .,anta= Ena,)un! ca!!> ,! (n)! en#%+it! cn+ieren
19
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
20/68
bene+ici! a ,a .,anta ue .ue#en re!u,tar $utu!Juti,iFan ,! nutriente! ue !intetiFa ,a .,anta 9!ta
!e bene+icia #e ,! $etab,it! biactiv! ue e,,!.r#ucen ,a c,niFaci%n #e en#%+it! en a,)a! $arina!>$u!)! (e,ec(! ta$bi9n (a !i# re)i!tra#= Enrea,i#a#> ,! en#%+it! !n c$.nente!i$.rtante! #e ,a bi#iver!i#a# $icrbiana=
C$n$ente> ,! vari! #e cient! #ee!.ecie! #e en#%+it! .ue#en !er ai!,a#! #e una.,anta !,a> entre tr!> a, $en! una e!.eciee:(ibe e!.eci+ici#a# .r e, (u9!.e#= 'a!
cn#icine! a$bienta,e! baj ,a! ue e, (u9!.e#e!t crecien# ta$bi9n a+ectan a ,a .b,aci%n #een#%+it! e, .er+i, #e, en#%+it .ue#e !er $!#iver!i+ica# en rea! tr.ica,e!=
Arn,# et al =
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
21/68
A,)una! e!.ecie! #e (n)! en#%+it! (an!i# i#enti+ica#a! c$ +uente! #e c$.nente!
anticancer)en!> anti#iab9tic!> in!ectici#a! ein$un!u.re!re!= A#e$!> ,! (n)! en#%+it!ta$bi9n .ue#en .r#ucir $etab,it! cn +unci%nter$.rtectiva $ejran ,a ca.aci#a# #ea#a.taci%n ec,%)ica #e, (u9!.e# au$entan# !ut,erancia e!tr9! ca.ace! #e.r#ucir c$.ue!t! u$ic! )ru.! cian !i#er%+r!
21
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
22/68
ue,atante! #e (ierr (r$na! re)u,a#ra! #ecreci$ient> ta,e! c$J au:ina!> cituinina!>
ci# )iber9,ic> ci# ab!cic eti,en> entre tr! !n !u$a$ente abun#ante! !n a$enu# $u #iver!! vita$ina!> ,i)e,e$ent!> etc?= E, .* (a#e !er ,i)era$ente ci# .ara +aci,itar e, creci$ient
22
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
23/68
#e ,! (n)! e in(ibir a, $i!$ tie$. e,#e!arr,, #e tr! $icrr)ani!$! !e caracteriFan .r e!tar.re.ara#! .r c$.ue!t! #e ri)ennatura, !u c$.!ici%n n e! e:acta> c$.e#aF! in+u!ine! #e +ruta!> ve)eta,e!>)ran! #e cerea,e! teji#! ani$a,e!= E!t!$e#i! varan $uc( en !u c$.!ici%n> n!n +ci,$ente re.r#ucib,e!> ni #e a$.,iu!=
2. Medios semisint$ticos> e!tn cn+r$a#!
.r c$.ue!t! #e ri)en natura, u$ic>e!t! $e#i! #e cu,tiv e!tn .re.ara#!cn .e.tna!> e:tract! #e .,anta!> a)ar tr! c$.ue!t! #e .rce#encia#e!cnci#a variab,e=
3. Medios sint$ticos> .re!entan c$.!ici%nu$ica #e+ini#a cuantitativa cnci#a= 'a$ara #e ,a! +%r$u,a! #e ,! $e#i! #ecu,tiv uti,iFa#! .ara (n)! cntienen.e.tna> a,)n carb(i#rat a)ar
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
24/68
+uente #e carbn r)nic> )enera,$ente enaFcar #e nitr%)en !ue,en !er ,! e,e$ent!
!u+iciente! .ara btener un buen creci$ient= unta e,,!> un !.rte !%,i#> e, a)ar> .er$ite a ,!(n)! +i,a$ent!! e, #e!arr,, #e, $ice,i a9re>#n#e !e ,ca,iFan ,a! e!tructura! re.r#uctra! e, #e!arr,, #e c,nia! en e, ca! #e ,a!,eva#ura!= E, $e#i #e cu,tiv $! uti,iFa# .ara,! (n)! e! e, $e#i ),uc!a# #e Saburau#>ue rene e!ta! caracter!tica! un .* #e &=6 ue#i+icu,ta e, creci$ient bacterian !e incuban en aerbi!i! ,a te$.eratura %.ti$a!ue,e !er -&25C .ara ,! a)ente! #e $ic!i!!u.er+icia,e! ,! .rtuni!ta! #e 2&2/C .ara,! ue .r#ucen in+eccine! .r+un#a!= '!(n)! ,eva#uri+r$e! #an ,u)ar en -448 (ra! ac,nia! #e a!.ect $r+,)a !i$i,ar a ,a!bacteriana!= E, #e!arr,, #e ,a! c,nia! #e ,!(n)! +i,a$ent!! e! $uc( $! variab,e@a,)un! crecen $u ,enta$ente> .er !u! c,nia!!n $u caracter!tica! en )enera, !e #i+erencian+ci,$ente #e ,a! ,eva#ura!=
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
25/68
4. ANTAGONI!$O $ICROIANO
E:i!te un )ru. i$.rtante #e (n)! bacteria! ue .re!entan e+ect! anta)%nic! cntr! $icrr)ani!$! e!ta acci%n .ue#e !era.rvec(a#a c$ una +r$a #e cntr, bi,%)ic#e .at%)en! ve)eta,e!=
En e, $un# bi,%)ic e:i!te una interacci%ncntinua entre ,! .at%)en! .tencia,e! !u!anta)ni!ta!> #e +r$a ta, ue e!t! ,ti$!cntribuen a ue en ,a $ara #e ,! ca!! n !e#e!arr,,e ,a en+er$e#a#= En cn#icine! natura,e!,! $icrr)ani!$! e!tn en un eui,ibri#in$ic en ,a !u.er+icie #e ,a! .,anta!
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
26/68
Se (an #e!crit vari! $ecani!$! #eacci%n #e ,! anta)ni!ta! .ara cntr,ar e,
#e!arr,, #e .at%)en!= A,)un! #e e!t! !nantibi!i!> c$.etencia .r e!.aci .rnutriente!> interaccine! #irecta! cn e, .at%)en ,i!i! enFi$tica?> e in#ucci%n #ere!i!tencia
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
27/68
nutriente!> :)en e!.aci ce,u,a!a!>12),ucana!a! .rtea!a! ue r$.en ,a!e!tructura! #e ,! (n)! .ara!ita#!
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
28/68
$! cnci#! citan ,a .re!encia #e a$eba! en!ue,! !u.re!re! #e en+er$e#a#e! ,a! cua,e! !e
a,i$entan #e ,a! (i+a! #e (n)! .at%)en! entretra! +uente! #e a,i$ent c$.ue!t!natura,e! #e ,a! .,anta! c$ uit!an
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
29/68
5. FER$ENTACION $ICROIANA
Un .rce! #e +er$entaci%n !e ,,eva a caben un +er$enta#r birreactr> $e#iante e, cua,#eter$ina#! !u!trat! ue c$.nen e, $e#i #ecu,tiv !n tran!+r$a#! .r acci%n $icrbiana en$etab,it! bi$a!a= E, $icrr)ani!$ vaau$entan# en !u cncentraci%n en e, tran!cur!#e, .rce! a, $i!$ tie$. ue e, $e#i !e va$#i+ican# !e +r$an .r#uct! nuev! c$cn!ecuencia #e ,a! activi#a#e! catab%,ica! anab%,ica!= '! #! +en%$en! creci$ient +r$aci%n #e .r#uct tienen ,u)ar #urante e,#e!arr,, #e, .rce! !i$u,tnea$ente n !e)n,! ca!!=
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
30/68
creci$ient e! .!ib,e .#e$! #i!tin)uir$icrr)ani!$! !icr%+i,! $e!%+i,!
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
31/68
Escherichia coli Saccharomyces cerevisiae> entretr!? re!.ectiva$ente e, $icrr)ani!$ reuerir#e una +uente #e carbn #e ,a cua, e:traer ,a
31
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
32/68
ener)a nece!aria .ara !u $etab,i!$= 'a!+uente! #e carbn $! c$une! !n ,! (i#rat!
#e carbn> ta,e! c$ a,$i#%n aFcare!=
En ,a b!ue#a #e nueva! +uente! #ecarbn !e e!t e!tu#ian# #e!#e (ace .c ,auti,iFaci%n #e recur!! ,i)nce,u,%!ic! rb,e! !u! re!i#u!> etc=?> .rinci.a,+uente #e bi$a!a renvab,e .r eje$.,J e, a,$i#%n> ue #ebe !ercci# e (i#r,iFa# (a!ta ),uc!a ante! #e !ertra!+r$a# en etan, .r ,! $icrr)ani!$! uerea,iFan e!ta tran!+r$aci%n= E! ta$bi9n e, ca! #e,a ce,u,!a #e ,! !ub!trat! ,i)nce,u,%!ic! en
)enera,> ,! cua,e! nece!itan #r!tic! trata$ient!+!ic! Q u$ic! ante! #e !er uti,iFab,e! cne!te +in=
Otr! nutriente! ue !n nece!ari! encanti#a#e! i$.rtante! .ara e, creci$ient$icrbian !n e, nitr%)en> e, +%!+r e, aFu+re=E!t! e,e$ent! !n incr.ra#! en ,a! $,9cu,a!e!tructura,e! +uncina,e! #e ,a c9,u,a= E,nitr%)en> en .articu,ar> #ebe !er .rvi!t en.r.rcine! variab,e! baj ,a +r$a #e nitr%)en.rteic bteni#! a .artir #e !ub.r#uct! #e ,ain#u!tria #e, $aF> e:tract #e ,eva#ura u tr! n.rteic urea> etc=?= '! tr! #!e,e$ent! !n entre)a#! c$ !a,e! #e +!+at !u,+at> re!.ectiva$ente= 7r ,ti$> una !erie #e
32
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
33/68
$icrnutriente! (ierr> cba,t> cbre>Finc> etc=?> #eben !er !u$ini!tra#! a, $e#i
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
34/68
Una uni%n $! e!trec(a e!tab,e .ue#ere!u,tar #e ,a +r$aci%n #e un en,ace u$ic>
cva,ente> entre e, cata,iFa#r e, !.rte= E!te,ti$ .ue#e !er #e ce,u,!a> .er,a! #e vi#ri>.,!tic! .,$er! !int9tic!= En e!t! #! ti.!#e in$vi,iFaci%n> e, !.rte !e encuentra baj ,a+r$a #e .artcu,a! #e .eueG ta$aG , ue.er$ite una )ran !u.er+icie #e cntact entre e,!u!trat e, cata,iFa#r !,ica u tr!=
Otr ti. #e atra.a$ient e! ,a$icrenca.!u,aci%n= E!ta cn!i!te en encerrar e,bicata,iFa#r en una c.!u,a #e un #i$etr $u.eueG> #e, r#en #e ,! 155 $icrne!= 'ac.!u,a +uncina c$ una $e$brana !e$i
.er$eab,eJ #eja .a!ar ,a! .eueGa! $,9cu,a! #e!u!trat .r#uct ,ibre$ente> .er retiene ,a! $!)ran#e! aju!te #e .* e! nece!arie!teri,iFar, $antener cn#icine! a!9.tica!#urante ,a +er$entaci%n a#ici%n#e nutriente! e!t9ri,e!> etc=?= E!t !e #ebe a ue ,a$ara #e ,! .r#uct! bi,%)ic! bteni#!(a!ta ( !n .r#uci#! en cu,tiv .ur> e! #ecir>.r un !, $icrr)ani!$= 'a cnta$inaci%n #e
34
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
35/68
e!te cu,tiv .r tr! $icrr)ani!$! .ue#ere!u,tar en ,a #e!trucci%n #e, cata,iFa#r> en !u
in(ibici%n en ,a #e!trucci%n #e, .r#uct= 7r,ti$> .ue#en intr#ucir!e !u!tancia! t%:ica!#i+ci,e! #e !e.arar #e, .r#uct ue n! intere!a e, tie$. #e+er$entaci%n e! ,i$ita# e, .r#uct e!recu.era# nte)ra$ente a, +ina, #e ,a +er$entaci%n.r vacia# #e ,a cuba #e, +er$enta#r= E!te
$9t# e! actua,$ente e, $! uti,iFa# .ara ,!.r#uct! ue nece!itan cn#icine! #e e!teri,i#a#$u e!tricta! en ca$bi> e,a.rte #e nutriente! e! renva# re)u,ar$ente e,.r#uct e! re$vi# a, $i!$ tie$.= E!te ti. #e.rce!! .re!enta varia! ventaja! cn re!.ect a,! .rce!! #i!cntinu!= A!> .r eje$.,> ,!v,$ene! #e .r#ucci%n .r uni#a# in!ta,a#a !n$u !u.erire! en un !i!te$a cntinu= 7r tra.arte> e, cata,iFa#r n e! e,i$ina# en e!te ti. #e.rce!> , cua, .er$ite ecn$a! !u!tancia,e!>a ue !e cn!i#era ue e, .reci #e, bicata,iFa#re!> .r , $en!> i)ua, a, #e ,! nutriente!e$.,ea#! en !u creci$ient= 7r ,ti$ !bre
35
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
36/68
t#> e!te ti. #e cu,tiv abiert .er$ite unaver!ati,i#a# in(erente #e .eraci%n> en e, cua, t#!
,! .ar$etr! ve,ci#a# #e creci$ient> cncentraci%n #e!u!trat! .r#uct!? .ue#en !er cntr,a#!in#e+ini#a$ente
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
37/68
creci$ient 9!te !e e:.re!a= A!> .r eje$.,> en e,ca! #e un $etab,it !ecun#ari> $uc(a! vece!
cnven#r uti,iFar un !i!te$a #b,e #e+er$entaci%n= En e, .ri$er reci.iente> !e (arcrecer e, $icrr)ani!$ en cn#icine! %.ti$a! a+in #e btener e, $:i$ #e bi$a!a $icrbiana='ue)> e!ta bi$a!a !e tra!,a#ar a, !e)un#reci.iente #n#e ,a ,i$itaci%n #e un nutriente.articu,ar .er$itir ,a !nte!i! #e, $etab,it= E!te!i!te$a .er$ite ta$bi9n e, %.ti$a.rvec(a$ient #e ,a $ateria .ri$a uti,iFa#a> ,acua, !era #e tra $anera en )ran .arte#e!.er#icia#a a$inci#! tr!
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
38/68
ue cncentrar ,a! bacteria! .r $e#i #e +i,traci%n centri+u)aci%n=
7ara btener e, .r#uct> (a ue r$.er ,a!bacteria!> ue#an# 9!te $eFc,a# cn t#! ,!cn!tituente! ce,u,are!= 7ara !e.arar, !e uti,iFan#iver!! $9t#!> ta,e! c$J .reci.itaci%n cn!a,e! a,c(, Q t9cnica! cr$at)r+ica!> car)ae,9ctrica .r !u a+ini#a# .r a,)n reactivu$ic? (a ue a#a.tar ,a! #iver!a!a,terativa! #e .uri+icaci%n e:tracci%n= Dentr #ee!t! .rce!!> e!.ecia,$ente .ara ,! .r#uct!#e a,t va,r c$ercia,> ,! anticuer.!$nc,na,e! e!tn c$enFan# a !er #e )ranuti,i#a#= ;racia! a !u tre$en#a e!.eci+ici#a# !en!ibi,i#a#= Sin e$bar)> .ara#%jica$ente> e!ta
,ti$a .r.ie#a# trae .rb,e$a! en e, ca! #e.r#uct! ,bi,e!> a ue ,a !e.araci%n +ina, #e,c$.,ej ant)enanticuer. e! #i+ci, #e r$.er reuiere #e trata$ient! #r!tic! $uc(a! vece!#e!naturante!
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
39/68
me+0c0na%es per/enec0en/es a %a pro&0nc0a +e3o.a: es/as mues/ras ueron /oma+as +e%
cepar0o +e 7on5os +e% Cen/ro +e 0o%o5aCe%u%ar ) $o%ecu%ar;
A+em/o+os +e a0s%am0en/o= propa5ac04n ?n50ca=ap%0cac04n +e />cn0cas para %a conser&ac04n +em0croor5an0smos= an/a5on0smo m0crob0ano )ensa)os +e sens0b0%0+a+ m0crob0ana;
1. C#3TI-O DE HONGO!
7ara e, e!tu#i #e ,a activi#a# bi,%)ica #e ,a!ce.a! +n)ica!> !e inici% cu,tivan# ,a! ce.a!ai!,a#a! en un $e#i #e cu,tiv a#ecua# c$
7tat De:tr!a A)ar
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
40/68
E, $ice,i bteni# +ue re!e$bra# en tub!
cn $e#i #e cu,tiv en bi!e, e incuba#! a ,a!$i!$a! cn#icine! #e te$.eratura tie$.> cn!erva#a! i)ua, a 4C= 'a! re!ie$bra! !ee+ectan ca#a 65 #a! t#a! a ,a! $i!$a! cn#icine!=
'a b!ervaci%n in vitr #e ,a! .r.ie#a#e!
anta)ni!ta! #e ,! $icrr)ani!$! !e .ue#erea,iFar $e#iante #! .rueba!
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
41/68
F05; Nº 1Cu,tiv Db,e T9cnica #e En+renta$ient Dua,entre En#%+it! (n)! 7at%)en!=
E,abra#J Autr
A B
41
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
42/68
F05; Nº 2C,cu, #e, .rcentaje #e in(ibici%n .r e, $9t##e cu,tiv #ua, .r $e#ici%n #e, creci$ient ra#ia,#e ca#a (n)=
E,abra#J Autr
*+lculos:
F4rmu%a 1;
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
43/68
Agar P(A
F05; Nº @Cu,tiv Db,e T9cnica #e En+renta$ient Dua,entre En#%+it! bacteria! .at%)ena! inc,ui# ,a,eva#ura Candida albicans=
E,abra#J Autr
T#a! ,a! .rueba! !e rea,iFarn .r #u.,ica# ,a!caja! !e cn!ervarn a -5C !e b!ervarn #e+r$a re)u,ar !e$ana,$ente #urante un $e!=
43
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
44/68
4. OTENCIÓN DE $ETAO3ITO!IOACTI-O!
3a separac04n +e me/abo%0/os secun+ar0oses un m>/o+o es/ab%ec0+o para 0+en/00carnue&as mo%>cu%as b0o%450camen/e ac/0&as; 3apreparac04n para una separac04n b0o%450cas0mp%e +e e/rac/os en ermen/ac04n m0crob0a%re6u0ere pr0meramen/e con+0c0ones +e
crec0m0en/o= es/o promue&e %a sn/es0s +eme/abo%0/os secun+ar0os BH055s 2""1;
4.1. Acti%ación y enriuecimientode cada uno de losmicrooranismos
'a activaci%n #e ca#a un #e ,!
$icrr)ani!$! !e rea,iFa #e acuer# a, ti. #e$icrr)ani!$@ en e, ca! #e ,! (n)! en#%+it!.r !er (n)! #e +ci, re.r#ucci%n !e uti,iFa e,$e#i 7DA ue e! un $e#i e!.ec+ic .ara(n)! un enriueci$ient en e, $e#i Ca,#7a.a
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
45/68
E, !brena#ante ue cntiene ,! $etab,it!biactiv! bteni#! #e ,! $e#i! .ara ca#a
$icrr)ani!$> !n en+renta#! cn ,!$icrr)ani!$! en .rueba !i)uien# ,a t9cnicaE:cavaci%n7,acaCu,tiv> ue e! una $#i+icaci%n#e ,a .rueba #e Bauerirb rec$en#a# .r ,aNCC'
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
46/68
Tab%a 1= Micrr)ani!$! a .rbar en ,a .rueba #e#i+u!i%n=
ACTERIA TIPO
Escherichia coli )Ec* ;ra$ ne)ativaPseudomonas aeruginosa )Pa* ;ra$ ne)ativa
Proteus vulgaris )Pv* ;ra$ ne)ativaKlebsiella pneumoniae )Kp* ;ra$ ne)ativaStaphylococcus aureus )Sa* ;ra$ .!itiva
Candida albicans )Ca* 'eva#ura
5.3. Preparación e incu!ación delas caas Petri
*acer / .F! en ,a caja 7etri cn!acabca#! #e &$$ #e #i$etr@ en e, .Fcentra, c,car -&X, #e cntr, #e antibi%tic
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
47/68
De!.u9! #e ,a! -4 (ra! #e incubaci%n> !e,ee e, #i$etr #e, (a, #e in(ibici%n #e, cntr,
.!itiv $i#ien# cn una re),a ,! (a,! #ein(ibici%n +r$a#! en ca#a .F ue cntienen ,!e:tract!= 'a au!encia #e (a, !i)ni+ica ue e,e:tract n tiene activi#a# cntra ,a bacteria ene!tu#i
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
48/68
III. RE!#3TADO!
TA3A @;1; *n)! en!aa#! en ,a! .rueba! #ebiactivi#a#=
*ON;O 7'ANTAN$bre cient+ic
Epicoccum sp. Piper !ar!atum&til!acea -orreria lae%isPhoma sp. -orreria lae%is2irospora sp. -orreria lae%is
Alternaria sp. "3$ -orreria lae%is Alternaria sp. "4$ -orreria lae%isMicelia sterilia 3 -accharis lati'oliaMicelia sterilia 4 -orreria lae%isMicelia sterilia 5 -accharis o!tusi'olia
'a tab,a 2=1= $ue!tra ,! (n)! en#%+it! !u
.,anta (u9!.e# #e ,a ue (an !i# ai!,a#!=
TA3A @;2; Inten!i#a# #e Anta)ni!$ in vitroentre (n)! en#%+it! Asperguillus niger .r e,$9t# #e cu,tiv #b,e=
48
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
49/68
*ON;O 7ORCENTAE DE IN*IBICIÓNAn/a5on0s/a Pa/45enoEpicoccum sp. -->6- 21>85&til!acea -2>81 -4>64Phoma sp. -0>/6 11>&02irospora sp. 20>-0 15>8/
Alternaria sp."3$ 16>6/ 21>88 Alternaria sp."4$ -8>&/ 21>88
Micelia sterilia 3 10>5& -8>08Micelia sterilia 4 1/>86 &8>/5Micelia sterilia 5 10>5& 21>88
'a tab,a 2=-= $ue!tra ,! va,re! e:.re!a#! en.rcentaje #e ca#a en+renta$ient> #n#e !e#eter$ina en +r$a #e!cri.tiva ,a inten!i#a# #eanta)ni!$ .r ca#a (n) en#%+it +rente a un+it.at%)en c$ e! Asperguillus niger =
Gr
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
50/68
TA3A @;@; Inten!i#a# #e Anta)ni!$ in vitroentre (n)! en#%+it! Microsporum canis .r e,
$9t# #e cu,tiv #b,e=
*ON;O 7ORCENTAE DE IN*IBICIÓNAn/a5on0s/a Pa/45eno
Epicoccum sp. &2>6- 11>01&til!acea 42>48 1&>18
Phoma sp. 20 16>01
Micelia sterilia
3
&2>26 2>&/
Micelia sterilia
4
2&>8/ 11>61
Micelia sterilia
5
4/>82 -1>42
B W In(ibici%n c$.,eta> e, en#%+it cubre tta,$entea, .at%)en=
B W Au!encia #e in(ibici%n> e, .at%)en e! cubierttta,$ente .r e, en#%+it=
'a tab,a 2=2= $ue!tra ,a inten!i#a# #e anta)ni!$e:.re!a#a en .rcentaje .r ca#a (n) en#%+it+rente a, .at%)en Microsporum canis=
50
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
51/68
Gr
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
52/68
$icrr)ani!$ +rente a $icrr)ani!$!.at%)en!=
TA3A @;; Eva,uaci%n #e ,! $etab,it! activ!.r e, $9t# #e #i+u!i%n en caja! 7etri=
*ON;O 7ATÓ;ENOSEc 6p Pa &a *a
Epicoccum sp. &til!acea Phoma sp. 2irospora sp.
Alternaria sp."3$ Alternaria sp."4$ Micelia sterilia 3 Micelia sterilia 4 Micelia sterilia 5
W Au!encia #e (a,! #e in(ibici%n
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
53/68
En e, .re!ente trabaj !e rea,iF% unaeva,uaci%n #e ,a activi#a# bi,%)ica #e nuevee!.ecie! #e (n)! en#%+it! ai!,a#! #e cuatr.,anta! $e#icina,e! ue crecen a, !ur #e, Ecua#r>cn e, +in #e #etectar a ,a! e!.ecie! cn .tencia,biactiv= 'a! e!.ecie! eva,ua#a! !e !e,eccinarnen ba!e a ,a! .r.ie#a#e! +ar$ac,%)ica! #e !u!.,anta! (u9!.e#=
'! (n)! en#%+it! ai!,a#! +uern!e$bra#! en $e#i #e cu,tiv 7tat De:tr!e
A)ar
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
54/68
.r ,a! caracter!tica! ue .re!enta #ic(en+renta$ient cn ca#a un #e ,!
$icrr)ani!$! anterir$ente cita#!=
Se .u# b!ervar> .r tant> ue ,!anta)%nic! !e)n ca#a trata$ient En#%+it7at%)en en t#! ,! ca!! #etiene e, creci$ient#e, .at%)en cn #i+erente! inten!i#a#e!= Se)n ,atab,a 2=-= #e acuer# a ,! e!tu#i! rea,iFa#! .r
A,i.i Mnac 1005 in vitro #e#ucen ue e,anta)ni!$ en .,aca e! una .rueba inicia, $ui$.rtante> n! #a una a.r:i$aci%n .ara e!tu#i!!ub!i)uiente! #e !i!te$a! bi,%)ic! #e cntr, #een+er$e#a#e!=
Le$! a ,a veF ue ,! re!u,ta#! e:.re!a#!en .rcentaje n! #an una i#ea $uc( $!
)enera,> cn!i#eran# c$ e, 155[ #e in(ibici%ne, creci$ient #e (n) .at%)en> , cua,#e$ue!tra ue .ara ,! trata$ient! Nigrosporasp + Asperguillus niger .re!enta un .rcentaje #ein(ibici%n #e ca!i cercana a, 45[= Se)n A,i.i Mnac 1005> e! i$.rtante #e!tacar ue e!t!re!u,ta#! in vitro !n $u i$.rtante! .ara unaeva,uaci%n ue !era i$.rtante e:tra.,ar e!t!re!u,ta#! rea,iFn#, en cn#icine! #einverna#er ca$. re!.ectiva$ente=
'! re!u,ta#! #e ,a interacci%n anta)%nica #ea,)una! #e ,a! ce.a! #e (n)! ai!,a#! ue$!trarn $ar activi#a# +rente a bacteria!.at%)ena!> !e .re!entan en ,a Tab,a 2=4= 'a
54
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
55/68
$ara #e ,a! ce.a! +n)ica! ana,iFa#a!>$ue!tran activi#a# anti$icrbiana> en cntra #e
Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae,Pseudomonas aeruginosa Staphylococcusaureus> ,a ,eva#ura Candida albicans= E!t!re!u,ta#! cncuer#an cn ,! rea,iFa#! .r en e, cua, ,a $ara #ece.a! +n)ica! ana,iFa#a!> $ue!tran activi#a#anta)%nica en cntra #e e!t! $icrr)ani!$!.at%)en!=
En !u trabaj M9n#eF H Mn#in
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
56/68
e!.ecie! #e (n)! en#%+it! !e b!erv% ue ennin)un #e ,! trata$ient! En#%+it7at%)en>
tuv e+ectivi#a# a,)una !bre ,a in(ibici%n #e e!t!$icrr)ani!$! .at%)en!=
'! (n)! en#%+it! crecen #entr #e !u!.,anta! (u9!.e# !in cau!ar a.arente! !nt$a! #een+er$e#a#e! Ki,!n 100&? crecenen e!te (bitat inv,ucran# cntinua!interaccine! $etab%,ica! entre e, (n) !u(u9!.e# .er e!te )ru. #e (n)! n (a !i#e:ten!a$ente e!tu#ia#= E! a!> ue ,! (n)!en#%+it! !e (an recnci# c$ buena! +uente!#e $etab,it! !ecun#ari! a!cia#! cn !u
re!.ectiv bit. (u9!.e# e! .!ib,e ue a,)un! #ee!t! en#%+it! .ue#an .r#ucir !u!tancia! ue.ue#an .revenir in+eccine! $icrbiana!e!ti$u,an# #irecta$ente a, (u9!.e#
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
57/68
'a !nte!i! c$binatria .r#uce a, aFar$etab,it! !ecun#ari! #e+ini#! c$
c$.nente! #e baj .e! $,ecu,ar ue nreuieren crecer en cu,tiv .ur> e!t! !n.r#uci#! c$ una a#a.taci%n .ara +uncine!e!.eci+ica! en ,a natura,eFa -552?=
Tan u -551> creen ue ,a raF%n .r u9a,)un! en#%+it! .r#ucen ciert! +itu$ic!ri)ina,$ente caracter!tic #e, (u9!.e# .#rae!tar re,acina#a cn una rec$binaci%n )en9tica#e ,! en#%+it! cn e, (u9!.e# ue curre entie$. ev,utiv=
Ra#u H 3e e:tract!+n)ic! en#+tic! ue in#icaban baja activi#a#
anti$icrbiana .#ran tener c$.ue!t! activ!.er .rbab,e$ente en ,a! canti#a#e! $!.eueGa! ,! e:tract! cru#! !$eti#! arevi!i%n .#ran .r#ucir c$.ue!t! $! .tente!en cuant (ubieran .a!a# .r un .c #e.uri+icaci%n= Ta$bi9n e:tract! ue n in#icabanactivi#a# anti$icrbiana en e, bien!a .ue#ene!tar activ! cntra tr! $icrbi! ue n +uerneva,ua#!=
A#e$!> ta$bi9n (a ,a .!ibi,i#a# ue ,a!!u!tancia! .re!ente! en e, e:tract .ue#ene!ti$u,ar e, creci$ient #e ,! $icrr)ani!$!>c$ +ue evi#ente en vari! ai!,a$ient! uee:(iban buen creci$ient bacterian .r , tant
57
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
58/68
cntrarre!tan# e, e+ect #e !u!tancia! in(ibitria!c$ !e re.rta e, trabaj rea,iFa# .r Ra#u H
3e -55-=
Entnce!> ,a .re!encia .r#ucci%n #e$etab,it! !ecun#ari! .#ra e!tar re,acina##irecta$ente cn e, (bitat ,a interacci%n #irectacn !u (u9!.e#@ ue ,a! activi#a#e! +uncina,e!#e e!t! (n)! e!tn re,acina# cn tr ti. #e.r.ie#a#e! bi,%)ica! varia#a! c$ !e $ue!traen inve!ti)acine! !eGa,a#a! en e!te trabaj> .rta, $tiv n !e #e!carta ,a .!ibi,i#a# #e uee!t! $icrr)ani!$! .ue#an tener a,)n ti. #eactivi#a# bi,%)ica #i+erente a ,a in#a)a#a en e!tainve!ti)aci%n=
58
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
59/68
V. CONC3#!IONE! RECO$ENDACIONE!
En ,a .re!ente inve!ti)aci%n> #e ,! nueve$icrr)ani!$! en#%+it! uti,iFa#! +rente a,+it.at%)en Asperguillus niger !e b!erv% ue e,(n) Nigrospora sp= evi#enci% e, $ar .rcentaje#e in(ibici%n@ $ientra!> ue +rente a, #er$at+itMicrosporum canis> en e!te ca! t#!.re!entaban un buen )ra# #e anta)ni!$cercan .r%:i$ a, &5[=
7ara ,a .rueba #e anta)ni!$ +rente a ,a!bacteria! .at%)ena! Candida albicans> !eevi#enci% ue t#a! ,a! $ue!tra! #e (n)!en#%+it! .re!entaba activi#a# in(ibitria=
N !e .u# #eter$inar ,a activi#a#anti$icrbiana> .r ,a t9cnica E:cavaci%n7,acaCu,tiv en nin)un #e ,! e:tract! acu!!> .ercn!i#eran# ,! re!u,ta#! #e ,a activi#a#anta)%nica> e! $u .rbab,e ue .u#ieran e!tar.r#ucien# $etab,it! en tr! $e#i! #e cu,tivn en!aa#!=
E, $9t# #e .r#ucci%n #e $etab,it!bi,%)ica$ente activ! nece!ita !er e!tan#ariFa#a ue en e!ta inve!ti)aci%n n !e evi#enci% nin)ne+ect in(ibitri #e a,)n ti. #e !u!tancia cna,)n e+ect anti$icrbian@ , i#ea, !era en!aarcn una ce.a cnci#a #e ,a cua, !e cnFca ,aactivi#a# bi,%)ica> , cua, n! .er$itira $ejrar
59
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
60/68
c$.rbar ,a .r#ucci%n #e !u! $etab,it!> a!c$ ,a e!tan#ariFaci%n #e, $9t# $e#i #e
.r#ucci%n #e $etab,it!=
E!te ti. #e en#%+it! +n)ic! en nue!trare)i%n !n un )ru. #e r)ani!$! cn unainve!ti)aci%n .bre ue re.re!entan una +uenteabun#ante cn+iab,e #e c$.ue!t! biactiv! u$ica$ente nuev! cn e, .tencia, .ara ,ae:.,taci%n en una )ran varie#a# #e rea!$e#ica!> a)rc,a! e in#u!tria,e!=
60
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
61/68
VI.I3IOGRAFA
A,i..i *> Mnac C> 1005= Anta)ni!$ #e (n)!+it.at%)en! !a.rbi! en !ue,! (rtc,a!=Revi!ta Ar)entina #e Micrbi,)a --J 0502=
Arn,# E> Meja '> ,, D> Rja! E> Manar# >Rbbin! N> A,,en> A> -552= "un)a, en#.(te! ,i$it.at()en #a$a)e in a tr.ica, tree= A= urna, 'i!tJ7rc Nat, Aca# Sci U S AJ v=155 7rter > Crre# K7> 'e!,ie "> 1006=7r#uctin + "u!aric Aci# b usarium Species=
A..,ie# an# Envirn$enta, Micrbi,) 6-> 45204542=
BriFue,a MA> ;arca '> 79reF '> Man!ur M> 1008=Ba!i#i$icet!J nueva +uente #e $etab,it!!ecun#ari!= Ibera$ Mic, 1&> 60/4=
Brc T> Ma#i)an M> 1002= Micrbi,)a= Se:tae#ici%n> E#itria, 7rentice *a,,> M9:ic=
Cabe,, MA> 7,ata! ;> C,,a# > DeF T> Martin I>Licente "> MeinF M> Oni!(i C> Du),a! C>
T($.!n > urtF MB> Sc(artF RE> Bi,,! ;">;iacbbe RA> AbruFF ;> ",aterr AM> n) '>7e,eF "> -551= Arun#in+un)in> a nve, anti+un)a,c$.un# .r#uce# b +un)iJ bi,)ica, activit an#ta:n$ + t(e .r#ucin) r)ani!$!= Int Micrbi,4> 0215-=Ca$.re!e A=> Ba,ic M> Arvi) R> E!.!it R;>Mr!e,,in N> De Si$na "> an# TubaF A> -552=
61
http://www.pubmedcentral.gov/front-page/fp.fcgihttp://www.pubmedcentral.gov/tocrender.fcgi?journal=2&action=archivehttp://www.pubmedcentral.gov/tocrender.fcgi?iid=9008http://www.pubmedcentral.gov/front-page/fp.fcgihttp://www.pubmedcentral.gov/tocrender.fcgi?journal=2&action=archivehttp://www.pubmedcentral.gov/tocrender.fcgi?iid=9008
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
62/68
Screenin) + antibacteria, activit + $e#icina,.,ant! +r$ Be,iFe -552= 8/> 15215/=
Carri,,MuGF A> Bri% S> \uin#%! ;> -551= Unanueva )eneraci%n #e +r$ac! anti+n)ic!=Ibera$ Mic, 18> -&=
Ca!ti,, U"> Strbe, ;A> "r# E> *e!! KM> 7rter*> en!en B> A,bert *> Rbi!n R> Cn#rn M>Te., DB> Steven! D> 3aver D> -55-=Munu$bicin!> i#e!.ectru$ antibitic! .r#uce#b Streptomyces NRR' 25&6-> en#.(tic nKennedia nigriscans= Micrbi,) 148> -6/&-68&=
Dna#i S> Mnciar#ini 7> A,#uina R> MaFFa 7>C(icc(ini C> Cava,etti '> S!i M> 7u),ia AM>
-55-= Micrbia, tec(n,)ie! +r t(e #i!cver +nve, biactive $etab,ite!= urna, +Bitec(n,) 00> 18/108=
EFra D> Ca!ti,, U"> Strbe, ;A> *e!! KM> 7rter*> en!en B> Cn#rn MA> Te., DB> Sear! >Maranta M> *unter M> Keber B> 3aver D> -554a=Crna$cin!> .e.ti#e antibitic! .r#uce# b avertici,,ate Streptomyces sp= /8&/02=
EFra D> *e!! KM> Strbe, ;A> -554b= Neen#.(tic i!,ate! + Muscodor albus> a v,ati,e
62
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
63/68
antibitic.r#ucin) +un)u!= Micrbi,) 14/>-04210&5=
"ernn#eF'arrea O> -551= Micrr)ani!$!anta)ni!ta! .ara e, cntr, +it!anitari= ManejInte)ra# #e 7,a)a! (en) > Su K> -551= Antitu$r an# anti+un)a, activitie! in en#.(tic
+un)i i!,ate# +r$ .(ar$aceutica, .,ant! -a.usmairei > Cephalata.us fortunei an# -orreya grandis="EMS I$$un,) an# Me#ica, Micrbi,) 21>16216/=
u$ar DS> 'au CS> Kan M> 3an) D> -55&=I$$un$#u,atr c$.un#! +r$ Pestalotiopsisleucoth/s> an en#.(tic +un)u! +r$ -ripterygium0ilfordii = 'i+e Science! /8> 14/1&6=
'i 3> *ar.er > ;rant DM> T$be BO> Ba!(a, B>*e!! KM> Strbe, ;A> -551= A$buic aci#> a (i)(,+unctina,iFae# cc,(e:anne it( anti+un)a,activit +r$ Pestalotiopsis spp= an# Monochaetiasp= 7(tc(e$e!tr &6> 462468=
63
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
64/68
'renFi E> 'ran# E> 7icc AM> -556= Micr+un)(i
en#+itici e# e.i+itici #i 7icea abie! Mn#in 7> 1000= CONTRO'BIO'O;ICO 7OSTCOSEC*A EN URU;UA3=*rticu,tura Internacina,= Nvie$bre #e 1000> AG/> n -6=
64
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
65/68
MVnceber) "> 1088= 'a Rev,uci%n #e ,aBiin)eniera> E#itria, Me#iterrne?
O!ter(a)e C> -551= I!,atin> StructureDeter$inatin an# Bi,)ica, Activit A!!e!!$ent +Secn#ar Metab,ite! +r$ Marine#erive# "un)i=
7icc AM> R#,+i M> -554= En#.(ti!$ in )ra!!e!it( re+erence t an e:.erience in nrt(ern Ita,= In^En#.(ti!$ in +re!t tree_= A= Ra)aFFi> S=Mricca> I= De,,ava,,e Ita,J -5&-10
7(n).aic(it S> Ni$ > Run)jin#a$ai N>Saaarj > *uta#i,Tatana N> Ruac(ai!iriu,L> irtiara > -55/= Bi,)ica, activitie! + e:tract!+r$ en#.(tic +un)i i!,ate# +r$ ;arcinia .,ant!="EMS I$$un, Me# Micrbi, &1J &1/&-&=
Ra#u S> 3e C> -55-= 7RE'IMINAR3SCREENIN; O" ENDO7*3TIC "UN;I "ROMMEDICINA' 7'ANTS IN MA'A3SIA "OR
ANTIMICROBIA' AND ANTITUMOR ACTILIT3=Malaysian 1ournal of Medical Sciences, 2ol 3, No&, )&4544*
Ra$reF > De,)a# E> R#,+i M> S,vei) T> -556= ACTILIDAD ANTA;ONICA DE *ON;OSENDO"ITOS DE 7'ANTAS MEDICINA'ES DE'ECUADOR SOBRE BACTERIAS 7ATO;ENAS=B,etn Mic,%)ic L,= -1J 40 &2=
65
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
66/68
R#r)ueF L> -55-= E+ect Anta)%nic 3Bicntr,a#r De A,)un! Micrr)ani!$!
Sa.r+tic! Cntra R(iFctnia S,ani Un"it.at%)en Cau!ante De, Cerer MC> -55&= Ai!,a$ient #e(n)! en#%+it! en r!a C,$bia= Rev Ibera$ Mic, --> 00151=Sc(arF M> V.ce B> Keber R> Sterner O> Ane*> -554= 2*#r:.r.inic aci# a! a ne$atici#a,.rinci.,e in en#.(tic +un)i= 7(tc(e$i!tr 6&>--20--4&=
S=E=I=M=C= 7rce#i$ient! en Micrbi,)a C,nica=Rec$en#acine! #e ,a Scie#a# E!.aG,a #eEn+er$e#a#e! In+ecci!a! Micrbi,)a C,nica=
7rtc,! C,nic! S=E=I=M=C `eb!ite `cite# -556-&Q5/Q56@ Avai,ab,e +r$J(tt.JQQ=!ei$c=r)Q.rtc,!Q$icrbi,)iaQca.1=.#+ =
Sie)e, MR> Bu!( '7> 100/= T:in .r#uctin in)ra!!Qen#.(te a!!ciatin!= In ^T(e Mcta= L,=L 7,ant Re,atin!(i.! 7art=A_= ;C Carr, an# 7Tu#Fn!i S.rin)er> *ei#e,ber)> ;er$anJ18&-5/=
S(rab *> -55&= I!,atin an# Structure E,uci#atin+ Secn#ar Metab,ite! +r$ En#.(tic "un)ian# t(e 7,ant Prismatomeris tetrandra an#Snt(e!i! +
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
67/68
Stin!n M> EFra D> *e!! KM> Sear! > Strbe, ;>
-552= An en#.(tic 7liocladium sp= + Eucryphiacordifolia .r#ucin)!e,ective v,ati,e anti$icrbia,c$.un#!= 7,ant Science 16&> 0120--=
Strbe, ;> -55-= Micrbia, )i+t! +r$ rain +re!t!=Can= = 7,ant 7at(,= -4J 14-5=
Strbe, ;> Dai! B> -552= Bi.r!.ectin) +rMicrbia, En#.(te! an# T(eir Natura, 7r#uct!=MICROBIO'O;3 AND MO'ECU'AR BIO'O;3RELIEKS> .= 401&5- L,= 6/> N= 4=
Sua I> A!en!i "> Ba!i,i A> Cabe,, MA> DeF MT>;arca B> ;nFa,e! #e, La, A> ;rrc(ate)ui >*ernn#eF 7> 7e,a9F "> Licente M"> -555=
Screenin) + ba!i#i$cete! +r anti$icrbia,activitie!= Antine van 'eeuen(e> /8J .= 1-0120=
Tan R> u K> -551= En#.(te!J a ric( !urce+ +unctina, $etab,ite!= T(e Ra, Sciet +C(e$i!tr 18> 4484&0=
Tri)! A> Men#Fa ;> 'una M> *ere#ia ;> Aria!R> -55&= Eva,uaci%n antibacteriana #e (n)!$icr!c%.ic! #e, !ue, re!t! ve)eta,e!= Revi!taMe:icana #e Mic,)a -5=
Licente M"> Cabe,, A> 7,ata! ;> Ba!i,i A> DeF MT>Dreirn S> ;iacbbe RA> Oni!(i C> MeinF M>
67
-
8/18/2019 616X247 hongos endofitos.PDF
68/68
urtF MB> R!enbac( M> T($.!n > AbruFF ;>",atterA> n) '> T!i.ura! A> Ki,!n E> 7e,eF
"> -551= Anti$icrbia, activit + er)nin A +r$-richoderma longibrachiatum= urna, + A..,ie#Micrbi,) 06> 856=
Kan) *> ne! C> Ciacciane,,a > *,t T> ;i,c(ri!tD;> Dic$an MB> 1006= "u$ni!in! an# A,ternariaa,ternata ,c.er!ici t:in!J S.(in)anine ana,)$ct:in! in#uce a..t!i! in $ne i#nece,,!= Bic(e$i!tr 02> 2461246&=