1

[ xxxbbrriidgggeeee hhhhhhhplc columns ]]

eXtreme

flexibility

2

信頼の性能分析法の信頼性には再現性の高いカラム性能が不可

欠です。ウォーターズは製品の比類ない再現性を維

持するため、カラム製造の各ステップをモニターし

厳格にコントロールしています。原料の特性評価から

最終バッチ試験の各段階で行われるあらゆるテストに

より、XBridge™カラムは何年先でも、カラム間および

バッチ間で今日と変わらない性能を実現可能な製品を

提供します。

XBridge HPLC Columns

BEH C18

BEH C8

BEH Shield RP18

BEH Phenyl

BEH HILIC

BEH Amide

BEH130 C18

BEH300 C18

BEH300 C4

BEH C18

比類ない汎用性 XBridgeカラムは「生産性の最大化」を目的として

設計されています。

目標が品質管理における分析法の作成であっても

最先端LC/MS分析法の開発であっても、XBridgeカラム

では以下を実現します。

■ pH安定性の向上 – カラム寿命の延長

■ カラムの信頼性向上 – 分析の堅牢性

■ カラム効率の最大化 – 比類なきピーク形状とピークキャパシティー

4

比類ない作りこまれた品質

XBridgeカラムはLC分析法の堅牢性と寿命の新しい基準を打ちたてました。幅広いpH範囲（1-12）で卓越した耐久性をもち、高効率で

左右対称なピーク形状が得られるように設計されています。極めて高い厳密さが要求される分析においても、XBridgeカラムのケミストリー

（C18、C8、Phenyl、Shield RP18、HILIC、Amide）で一貫して正確な結果が得られます。

XBridgeカラムは幅広い粒子径ラインアップで汎用および特定のアプリケーションに向けた10種類の充てん剤から選択でき、他のどの

HPLCカラムファミリーでも対応できない非常に困難なクロマトグラフィー分離にも対応できます。頑健なHPLC分析法が必要な場合でも、

UPLCとのシームレスな分析法移管が必要な場合でも、製品単離のために分取カラムにスケーリングが必要な場合でも、汎用性の高い

XBridgeカラムであれば対応できます。

OSi

O

OO

SiO

O

OO

ou

OSi

O

O

OSi

CH Polar G

roup

3

CH3O

SiO

O

OSi

CH3

* 予期予期値または近似値

XBridge C18 C8 Shield RP18 Phenyl HILIC

官能基タイプ トリファンクショナル結合 C18 トリファンクショナル結合 C8モノファンクショナル結合

極性基内包型 トリファンクショナル結合 フェニルヘキシル

非結合BEH パーティクル

官能基密度* 3.1 μmol/m2 3.2 μmol/m2 3.3 μmol/m2 3.0 μmol/m2 n/a

カーボン化率* 18% 13% 17% 15% 非結合

エンドキャップ形式 独自 独自 TMS 独自 該当せず

USP分類 L1 L7 L1 L11 L3

pH範囲 1-12 1-12 2-11 1-12 1-9

低pH 温度上限 80 °C 60 °C 50 °C 80 °C 45 °C

高pH 温度上限 60 °C 60 °C 45 °C 60 °C 45 °C

ポアサイズ* 130 Å 130 Å 130 Å 130 Å 130 Å

表面積* 185 m2/g 185 m2/g 185 m2/g 185 m2/g 185 m2/g

粒子径 2.5, 3.5, 5, 10 μm 2.5, 3.5, 5, 10 μm 2.5, 3.5, 5, 10 μm 2.5, 3.5, 5 μm 2.5, 3.5, 5 μm

5

BEHテクノロジー

エチレン架橋型ハイブリッド [BEH] テクノロジーにより、過酷な操作条件下でも優れたカラム

性能と長いカラム寿命を実現するパーティクルができます。

このパーティクルは、高純度の2種類のモノマー－テトラエトキシシラン[TEOS]およびビス

（トリエトキシシリル）エタン[BT EE]－から合成され、非常に安定でpH耐久性が高く、また

機械的にも強度が高くなります。

BEHテクノロジーパーティクル合成

* US Patennts 6,686,035; 7,223,473; 7,250,214

O Si

O

O

O

NH2

Linker

OSi

O

OO

SiO

O OSi

O

OO

SiCH 3

CH3

OSi

CH 3

C4

C4

H 9

H 9

CH3

ポリエトキシシラン （BPEOS）

テトラエトキシシラン （T EOS）

ビス（トリエトキシシリル） エタン（BT EE）

+4

Si

Et O

EtO OEtEt O

Si

Et OEt O

EtO

Si

OEt

OEt

OEt

Si

Et O

O

CH2 CH2

CH2CH2

Si O Si

Et O

OE t

Si

O

O

OEt

Si

O

SiOO

Et

O

OO

Et

Et Et n

Amide BEH130 C18 BEH300 C18 BEH300 C4 BEH C18

Peptide Separation Technology

Peptide Separation Technology

Protein Separation Technology

Oligonucleotide Separation Technology

トリファンクショナル結合 アミド トリファンクショナル結合 C18 トリファンクショナル結合 C18 モノファンクショナル結合 C4 トリファンクショナル結合 C18

7.5 μmol/m2 3.1 μmol/m2 3.1 μmol/m2 2.4 μmol/m2 3.1 μmol/m2

12% 18% 12% 8% 18%

なし 独自 独自 なし 独自

- L1 L1 L26 L1

2-11 1-12 1-12 1-10 1-12

90 °C 80 °C 80 °C 80 °C 80 °C

90 °C 60 °C 60 °C 50 °C 60 °C

130 Å 130 Å 300 Å 300 Å 130 Å

185 m2/g 185 m2/g 90 m2/g 90 m2/g 185 m2/g

2.5, 3.5, 5 μm 3.5, 5, 10 μm 3.5, 5, 10 μm 3.5 μm 2.5 μm

カラム効率とカラム寿命が最大限に

BEHパーティクルの設計で非常に重要なパラメーターは、パーティクル基材のクロマトグラフィー性能を大幅に向上させることでした。

分離効率を低減するバンドの拡散はvan Deemterの式で説明されます。

van Deemterの式のc項は分析種の固定相と移動相における物質移動の合計を示します。最新のシリカベース固定相は優れた物質移動

性能を示しますが、狭いクロマトグラフィー条件の範囲に限られます。シリカと比較すると、BEHパーティクルは、幅広いクロマトグラフィー

条件で使用でき、かつ高いカラム効率を維持できるハイブリッド基材であることが示されます。

2

4

6

8

10

12

0 20 40 60 80

u [uidp/Dm]

h us

ing

N 1/2

Ht

化合物:Decanophenone

移動相: 70/30 アセトニトリル/水温度: 30 °C

還元 van Deemter プロット項a b c r2

XBridge C18 5 μm 1.04 8.7 0.044 0.998

Symmetry® C18 5 μm 0.76 10.6 0.045 0.999

SunFire™ C18 5 μm 0.95 11.6 0.040 0.997

還元理論段高さhは還元線速度v（どちらも粒子径で標準化）の関数で、a, b, cはそれぞれ多流路拡散, カラム軸方向での成分の分子拡散、および固定相と移動相における物質移動の合計の関与度を示す項です。

van Deemterプロットの比較

h = a + b/u + cu

BEHパーティクル合成に用いられるエチレン架橋は、クロマトグ

ラフィーのピーク形状向上において重要な役割を担っています。

エチレン架橋は隣接するシラノールと結合しますが、これにより

パーティクル強度が向上するだけでなく、残存シラノールが減少

しサンプルとの望ましくない相互作用を最小限に抑えることがで

きます。過剰にエンドキャッピングを行う（excessive end capping）

などのこれまでの方法では、効果がエンドキャップ剤とその作用

部位に結合した官能基の立体障害に限られるため、残存シラノール

が露出し、ブロードでテーリングしたクロマトグラフィーピークの

原因となります。エチレン架橋により遊離のシラノール数が減

少し、立体的に有利な官能基結合-エンドキャップ比にすることが

できます。この過程をコントロールすることで、XBridgeカラムで

は卓越したピーク形状の性能を得られます。

ピーク形状向上のための コントロールされた官能基結合

優れたピーク形状

10 20 30 40 50 60 70 80 90 min

A社フェニルカラム ブランドA

XBridge PhenylアミトリプチリンN USP = 9300TUSP = 1.20

アミトリプチリンN USP = 920TUSP = 6.59

フェニルヘキシル官能基のトリファンクショナル結合と独自のエンドキャッピング技術を組み合わせたXBridge Phenylカラムでは、業界随一の安定性と優れたピーク形状が得られます。

6

本比較試験結果は全てのアプケーションを代表するものとは限りません。

リン酸バッファーの使用領域を拡大

リン酸バッファーは独自の選択性、優れたUV透過性をも

ち、複数のpKaにおける高い緩衝能力を備えています。

しかし、活性の高いリン酸塩の性質から、従来のシリカ

ベースカラムではカラム寿命が大幅に短くなるケース

が多く見られます。BEHパーティクルテクノロジーの

高度な官能基結合およびエンドキャップ（酸安定性） と

化学的耐性 （アルカリ安定性） を活用したXBridgeカ

ラムでは、幅広いpH範囲でリン酸バッファーの効果が

発揮されます。

過酷なpH条件下での安定性

過酷な移動相への暴露時間（hour）

初期値に対する保持時間の変化率%

100

90

80

70

60

50

0 20 40 60 80

XBridge C18（50 mM TEA pH 10）

XSelect CSH C18（50 mM TEA pH 10）

XTerra MS C18（50 mM TEA pH 10）

シリカ C18 カラムブランドL（P社）（50 mM TEA pH 10）

コーティングシリカ C18 カラムブランドC（S社）（50 mM TEA pH 10）

シリカ C18 カラムブランドＹ（Y社）（50 mM TEA pH 10）

XBridge C18（10 mM 重炭酸アンモニウム pH 10）

XSelect CSH C18（10 mM 重炭酸アンモニウム pH 10）

シリカ C18 ブランドIS（G社）（10 mM 重炭酸アンモニウム pH 10）

ハイブリッド C18 ブランドY（Y社）（10 mM 重炭酸アンモニウム pH 10）

0 5 10 15 20 25 30 35

メチルパラベンによる保持低下率%

BEH C18 (Waters)

シリカC18ブランドZ (A社)

XSelect CSH C18 (Waters)

シリカ C18 ブランドIS (G社)

SunFire C18 (Waters)

コアシェルシリカ C18 ブランドP (A社)

コアシェルシリカ C18 ブランドA (T社)

シリカ C18 カラムブランドL (P社)

ハイブリッド C18 ブランドY (Y社)

コアシェルシリカ C18 ブランドK(P社)

コアシェルシリカ C18 ブランドH (B社)

ハイブリッドコーティング C18 ブランドGN (P社)

7

XBridge充てん剤には、特徴的な最新の官能基結合およびエンドキャップ 手法を採用することで、従来のカラムと比較して、酸性移動相条件下で より安定してカラムをご使用いただけます。

本比較試験結果は全てのアプケーションを代表するものとは限りません。

XBridgeカラムは高pH移動相条件下で、基材パーティクルの溶解耐性および官能基の加水分解耐性を示します。過酷な高pH条件下でXBridge HPLCカラムほど寿命の長いカラムファミリーは他にありません。

本比較試験結果は全てのアプケーションを代表するものとは限りません。

BEH テクノロジーの詳細についてはwww.waters.com にアクセスして720001159ENをご参照ください。

酸性（低pH）移動相でカラム寿命が短い主な原因は、結合相の酸加水分解です。XBridgeの充てん剤、官能基結合とエンドキャッピングに 最新の独自手法を組み込んで、低pHでの官能基安定性とクロマトグラフィー再現性を実現しました。耐酸性加速試験の結果から、XBridge C18 カラムは従来の基材を使用したカラムに比べて保持力低下やピーク形状劣化が非常に小さく、固定相の立体障害を用いることなく卓越したカラム寿命を示します。

TEA試験分析種 = アセナフテン重炭酸アンモニウム試験分析種 = ブチルパラベン

低pH条件下での性能向上

耐酸性加速試験

高pH耐久性

XBridgeカラムは幅広いpHで安定に、市販のクロマトグラフィー固定相で最高の性能を発揮するように設計されています。

特別な表面修飾により高いpH耐性を主張するアプローチでは、XBridge HPLCカラムの寿命に匹敵する製品はありません。BEHパーティクル合成プロセスに高度な官能基結合およびエンドキャップテクノロジーを組み合わせることで、業界随一を誇る安定性を獲得しました。

pH10での対アルカリ性加速試験条件下では、高pHでの安定性向上を謳う多くの汎用クロマトグラフィー固定相との直接比較で、XBridge C18カラムの寿命は、クロマトグラフィーの性能を損ねることなく、次点のカラム製品の寿命を1000%以上超えました。

対アルカリ性加速試験

8

分析法開発の柔軟性

HPLCカラムのユニバーサルファミリー

最適なカラムと分離条件の選択は容易ではありません。XBridge HPLCカラムは充てん剤選択から妥協を排除し、希望する分離を得るため

に必要などの移動相、温度、pH条件下でも有効に機能する柔軟さを発揮するよう設計されています。

シンプルで効果的な逆相分析法開発アプローチは、XBridgeカラム、2種類の移動相pH、2種類の有機溶媒で構成されます。

幅広いpHで使用できる頑健なカラムを使うことで、堅牢な分析法開発のための開始条件を迅速に決められます。最適化したアプローチに

より時間、労力、費用を節約できます。

カラムケミストリー、pH、有機溶媒を用いた推奨分析法スクリーニング

1110

2

3

1

95

4

6

7

8

16.68

1110

1,2

3

8,95

6

12

4 7

2

3

1

105 7,8

6

11

12

49

XBridge / 低pH / メタノール

C18

Shield RP18

Phenyl

C18

C18

Shield RP18

Phenyl

Phenyl

Shield RP18

C18

Phenyl

Shield RP18

XBridge / 高pH / メタノール

XBridge / 低pH / アセトニトリル XBridge / 高pH / アセトニトリル

11

62

1

3 12

8,1310

79

5

11

62

1

3 12

139,10

7 8

5

11

62

1

3 12

13

9

105

7

2

1

3

4,5119

86 7

1210

2

1

1110

5

4

86

79

123

2

1

3

119,10

5

4

86

7

12

116

2

4

1

3139

12

5

710

8

116

2

41

3139

12

5

710

8

11,12

62

4

1

3139

5 810

7

0 4 8 12 16 20 min

0 4 8 12 16 20 min

0 4 8 12 16 20 min

0 4 8 12 16 20 min

標準的な一連の条件を系統的に

スクリーニングすることで、分析

法を最適化する開始ポイントを

迅速に判断できます。この手法

を使用することで勘に頼ること

なく、分析法開発の生産性を向

上できます。

9

pH範囲拡大によるメリット－選択性の向上

LC/MSに理想的なカラム高い感度が要求される生体試料中成分の分離には、分析に求められる低い検出限界が得られる質量分析（MS） 装置が用い

られます。分析種の濃度が低いと、検出は官能基のブリードやパーティクルの剥離などMSのレスポンスを干渉するカラムか

らの悪影響を一層受けやすくなります。XBridgeカラムに採用されたBEHテクノロジーは、加水分解耐性とパーティクルの強

度を向上させることでLC/MSブリードをほぼ解消します。

次の例は、血漿サンプル中の神経伝達物質を分析したクロマトグラフィーの結果です。HILICと逆相の両条件で、MSシグナル

を抑制することなくシグナルの品質が維持されています。

0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 2.00 2.25 2.50 2.75 min

%

0

100

0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 2.00 2.25 2.50 2.75 min

%

0

100

1

3

2

1

3

2

XBridge C18 XP

XBridge Amide XP

1) Norepinephrine 2) Dopamine 3) Serotonin

HO

HO

NH2

OHHO

HONH2 HO

HN

NH2

分析条件（逆相分析）カラム: XBridge Amide XP, 2.1 x 75 mm, 2.5 μm製品番号: 186006090 移動相 A: 10 mM ギ酸アンモニウム、pH 3.0移動相 B: 95/5 アセトニトリル/水、with 10 mM ギ酸アンモニウム、pH 3.0 流速: 0.5 ml/minグラジエント: 時間 組成　 (min) %A %B Initial 0 100 2.5 30 70 2.6 0 100 4.0 0 100注入量: 5 μLカラム温度: 30 ˚C

分析条件（逆相分析）カラム: XBridge C18 XP, 2.1 x 75 mm, 2.5 μm製品番号: 186003085移動相 A: 0.1% ギ酸水溶液移動相 B: 0.1% ギ酸アセトニトリル溶液流速: 0.5 ml/minグラジエント: 時間 組成　　　　　　　　　 (min) %A %B Initial 100 0 0.5 100 70 2.0 70 30 2.1 100 0 3.0 100 0注入量: 5 μLサンプル希釈溶媒: 50/50 水/アセトニトリル with 0.1%ギ酸 カラム温度: 30 ˚C

pH 2

pH 7

pH 12

1

2 63 54

23

1

46 5

0 1 2 3 4 5 6 7 8 min

3 2

465

1

XBridgeカラムはこのような攻撃的な条件（pH１２にも）に耐える独自の能力があるため、シリカカラムの高いカラム効率を維持しながら分析法開発において十分な柔軟性が得られます。

カラム: XBridge C18, 4.6 x 100 mm, 3.5 μm移動相A: 30 mM リン酸カリウムバッファー (pH 2, 7, 12)移動相B: アセトリル流速: 1.4 mL/minグラジエント: 時間 組成 (min) %A %B 0.0 90 10 7.0 20 80 8.0 20 80 装置: Alliance® 2695 with 2996 PDA

化合物:1. Doxylamine2. Benzamide3. Hydroxyisophthalic acid4. Doxepine5. Flavone6. Fenoprofen

幅広い範囲の移動相pHを系統的に変更することで、分析種の保持

や選択性を容易にコントロールできます。保持を最大にするには、

イオン性分析種は分子型にしなければなりません。例えば、酸性化

合物は酸性移動相条件下で保持が最大になります。移動相pHが高

まるにつれ、酸性化合物の保持は低下します。塩基性化合物の場

合は逆で、保持は高pH移動相条件で最大になり、酸性移動相で最

小になります。中性化合物に移動相pHが与える影響はほとんどあ

りません。

10

XBridge HILIC

1 2 3 4 5 6 min0

32

1

2

3

1

XBridge C18 逆相

XBridge HILIC

化合物:1. 6-acetylmorphine2. Morphine3. Morphine-3-β-glucuronide

XBridge HILICカラムは逆相HPLCカラムと直交する選択性を示します。上に示すように、モルヒネの極性代謝物はHILIC条件下で（逆相分離と比べて）強く保持されます。

XBridge HILICカラムでは、従来の逆相分析法では保持が弱すぎた極性化合物も保持できます。

分析法開発のための相補的な選択性

効率的な分析法開発のアプローチでは、分析種の選択性と保持を

スクリーニングするためにXBridge HILICカラムとXBridge逆相カラ

ム両方を使用します本アプローチによって溶出順序が逆転したり

保持が向上したりすることが明らかになるケースもあり、極性分析

種分離の分析法開発に効果を発揮します。

極性塩基性分析種の保持を向上

HILICでは、分配、イオン交換、水素結合が組み合わさった複雑な保

持メカニズムにより極性分析種の保持が向上します。極性の固定

相にアセトニトリル比率80%以上の移動相を組み合わせることで

HILICの保持が生じます。

V0 = 0.35 min

V0 = 0.33 min

Choline

0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 min

HON+

XBridge C18 逆相保持係数 = 0

XBridge HILIC保持係数 = 1.8

MS感度を増強

HILICは近年急速に普及しています。これは主として極性分析種の

定量感度を向上させる必要性が高まっていることから、検出器とし

て質量分析計（MS）の採用が拡大しているためです。移動相の水

系溶媒比率を高めて極性化合物の保持を強める逆相分析法とは

異なり、HILIC分析法ではアセトニトリルが高比率の移動相を使用

します。有機溶媒が高比率の移動相は容易に脱溶媒されるため、

イオン化効率が向上しMS感度が高まります。1. Acetylcholine 2. Choline

3.0 x 107

2.0 x 107

1.0 x 107

Intensity

3.0 x 107

2.0 x 107

1.0 x 107

Intensity

0.2 1.0 2.0 min

ON+

O

HON+

XBridge C18 逆相

XBridge HILIC

レスポンス 10.5倍 レスポンス 8.6倍

2 1

1

2

XBridge HILICによりMS感度が高まり検出下限が低くなります。.親水性相互作用クロマトグラフィー（HILIC）の詳細についてはwww.waters.com から715002531をご参照ください。

11

XBridge Amide

化学的に安定なトリファンクショナル結合のアミド結合相を採

用したXBridge Amideカラムにより、HILIC分離においてさらな

る安定性と汎用性が広がりました。高極性化合物の保持向上に

加え、XBridge Amideカラムは糖類の分析にも適しています。

XBridge Amideカラムには次のような利点があります。

粒子径3.5 μmにより、複雑なサンプルマトリックス中の糖類分析においてクロマトグラフィー分離能を維持または向上させつつ高分離能、

高速分析が可能

還元糖をロスすることなくアノマーを1つのピークに溶出可能な高pH・高温条件下でも化学的な安定性が向上

BEHテクノロジーとトリファンクショナル結合アミド結合相を組み合わせることで、卓越したカラム寿命と分析法の頑健性を実現

（アミノ官能基のカラムとは異なり）XBridge Amideカラムではシッフ塩基が形成されないため定量精度が向上 AU

0.00

0.05

0.10

0.15

0.20

0.25

0.30

0.35

0.40

0.45

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24. 26 28 30 32 34 min

1

2

3

4 5

6

7

8

水溶性ビタミンの分離

化合物:1. Nicotinamide (25 μg/mL)2. Pyridoxal (50 μg/mL)3. Riboflavin (25 μg/mL)4. Nicotinic acid (50 μg/mL)5. Thiamine (50 μg/mL)6. Ascorbic acid (25 μg/mL)7. B12 (50 μg/mL)8. Folic acid (50 μg/mL)

カラム: XBridge Amide, 4.6 x 250 mm, 3.5 μm製品番号: 186004870移動相A: 50/50 アセトニトリル/水 with 10 mM酢酸アンモニウム、pH 9.0 移動相B: 90/10 アセトニトリル/水 with 10 mM 酢酸アンモニウム、pH 9.0流速: 1.2 mL/minグラジエント: 時間 　組成 (min) %A %B 0.0 0.1 99.9 35.0 70 30 35.1 0.1 99.9 45.0 0.1 99.9

注入量: 60 μLサンプル希釈溶媒: 75/25 アセトニトリル/メタノール with 0.2% ギ酸 カラム温度: 30 °Cニードル洗浄: 95/5 アセトニトリル/水シール洗浄: 50/50 アセトニトリル/水検出: UV @ 265 nmサンプリング速度: 20点/sec時定数: 0.2装置: Alliance with 2998 PDA

糖分析

XBridge Amideのケミストリーに高pH移動相を使用することで、

エレクトロスプレーイオン化法のネガティブモード（ES-）を使った

糖類の分析が可能となり、ELSまたはRIでの検出に比べて感度を

2倍向上できます。金属添加、誘導体化、ポストカラムでの添加は

不要です。酸性pH条件下ではこのようなメリットは得られません。

LSU

0.0

1000.0

LSU

0.00

1000.00

LSU

0.0

1000.0

LSU

0.0

1000.0

LSU

0.0

1000.0

0 2 4 6 8 10 12 14 16 min

ラムカレー

食品糖スタンダード 1 mg/mL 1

2 3 4 5 6

2 3

4

2 3

5

2 3

5

2 3 6

4

精白パン

ホットクロスバンズ（レーズンパン）

ストロベリースムージー

化合物:1. p-Toluamide 2. Fructose 3. Glucose4. Sucrose 5. Maltose 6. Lactose

カラム: XBridge Amide、4.6 x 250 mm、3.5 μm製品番号: 186004870移動相 A: 80/20 アセトニトリル/水 with 0.2 % トリエチルアミン（TEA）移動相 B: 30/70 アセトニトリル/水 with 0.2 % トリエチルアミン（TEA）流速: 1.0 mL/minアイソクラティック組成: 90% A/10% B（75% アセトニトリル with 0.2% TEA）注入量: 15 μLサンプル濃度: 各1 mg/mLカラム温度: 35 °C装置: Alliance with 2424 ELSD

水溶性ビタミンのような高極性化合物は、XBridge Amide HPLCカラムで容易に保持・分離することができます。高pH移動相により酸性化合物が イオン化され、アミド官能基と分析種の相互作用を強めます。

2003年にウォーターズがHILICケミストリーの開発を始めた際、充

てん剤は非結合型パーティクルであるという共通の特性がありま

した。非結合型HILIC固定相の主な分離メカニズムは、弱イオン交

換と二次的な相互作用としての分配です。これは塩基性分析種

について保持を促進し適しています。しかしながら、酸性や中性、

または有意な正電荷をもたない高極性化合物の場合、非結合型

HILICカラムでは望む保持が得られないことがあります。HILIC分離

のための結合相がなかったことが、ウォーターズを酸性や中性化

合物の保持向上に向けたアミド結合相開発に駆り立てました。

12

0.00

0.01

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0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 min

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 min

AU

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AU

1 2

45

Gala

ntam

ine

1 2

4

5

Gala

ntam

ine

12

4

5

AU

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 min

Gala

ntam

ine

Peak 1 10.247 18.97 0.661

Peak 2 12.678 6.64 0.818

Galantamine 15.508 7.63

Peak 4 18.625 7.61 1.201

Peak 5 31.871 35.07 2.055

Peak 1 9.661 23.26 0.620

Peak 2 12.546 9.08 0.806

Galantamine 15.570 8.17

Peak 4 18.387 8.22 1.181

Peak 5 31.020 39.68 1.992

Peak 1 2.399 21.64 0.576

Peak 2 3.310 12.18 0.794

Galantamine 4.167 9.69

Peak 4 4.806 7.16 1.153

Peak 5 8.004 39.53 1.921

ACQUITY UPLC H-Class SystemでのUPLC分析ACQUITY UPLC BEH C18 カラム, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm流速: 0.644 mL/min注入量: 2.1 μmスケーリングした分析法

ACQUITY UPLC H-Class SystemでのHPLC分析XBridge C18 カラム, 4.6 x 100 mm, 3.5 μm流速: 1.5 mL/minそのまま移管した分析法

Alliance HPLC SystemでのHPLC分析XBridge C18 カラム, 4.6 x 100 mm, 3.5 μm流速: 1.5 mL/minガランタミンと類縁物質の分析

-

-

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名称 保持時間 USP分離度 相対保持比

名称 保持時間 USP分離度 相対保持比

名称 保持時間 USP分離度 相対保持比

スケーラビリティー UPLCテクノロジー

BEHテクノロジーはUPLC分離を実現する主要な要素の1つです。ACQUITY UPLC® BEH カラムとXBridge HPLCカラムは共通の基材パーテ

ィクルを採用し、シームレスに分析法移管できるように設計されています。BEH固定相の機械的強度とパーティクルの一貫性により、UPLC、

分析HPLC、分取HPLC分離間でシームレスに移管できるカラムプラットホームを提供します。クロマトグラフィー技術者は、幅広いサイズの

粒子径 （1.7, 2.5, 3.5, 5, 10 μm） を利用して分析法の有効性を維持できます。

XBridge HPLCとACQUITY UPLC BEHカラムを用いて、 HPLCからUPLCに分析法をシームレスに移管。

13

XBRIDGE X P 2.5 μmカラム

粒子径とカラムサイズが複数あることで、分離能を損ねることなくトータルサイクルタイムを最適化でき、分析法をHPLCからUPLCへ、

またUPLCからHPLCへと容易に移管できます。XBridge eX tended Performance [XP ] 2.5 μmカラムは、HPLC分析での優れた分離性能、

頑健性およびスループットを実現するとともに、HPLC、UHPLC、UPLCの全てのテクノロジープラットホームで活用いただけます。

比類ない選択性と柔軟性により、既存HPLCの生産性を2～4倍向上します。

1.7 μm ACQUITY UPLC BEHカラムとより大きい3.5/5 μm XBridge HPLC カラムにシームレスに移管可能

高耐圧に設計：9000 psi（4.6 mm ID） 、18,000 psi （2.1および3.0 mm ID）

分離度とスループットの適切なバランスからカラム長（30、50、75、100、150 mm）を選択

ハイスループット、低背圧、生産性向上

ACQUITY UPLC カラムカリキュレーターにより、HPLC分析法から UPLCへの移管がシームレスに

ACQUITY UPLC カラムカリキュレーターは 全てのACQUITY UPLCシステムで利用できます。グラジエント、カラムサイズ、粒子径に基づいて、 推測を排除した分析法移管が行えます。

www.waters.com/myuplc

12.2

65

14.6

10

16.9

16

3.10

6

3.69

7

4.27

5

1.31

9

1.58

2

1.84

2

0.00 0.87 1.74

XBridge C184.6 x 150 mm, 5 μmAlliance 2695 HPLC

XBridge C184.6 x 75 mm, 2.5 μm ACQUITY UPLC H-Class

ACQUITY UPLC BEH C182.1 x 50 mm, 1.7 μmACQUITY UPLC I -Class

40 min

10 min

4.5 min

0.00

0.05

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0.05

0.00

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XP

2.5 μm XPカラムで既存HPLCシステムの生産性を向上できます。

コアシェルカラムとは違い、2.5 μm eX tended Performanceカラムで開発した分析法は粒子径の大きい3.5または5 μm HPLCカラム、あるいは粒子径2 μm以下のUPLCカラムにスケーリングしシームレスに移管できるため、柔軟性とラボ間での分析法一貫性が得られます。

カラムの詳細については www.waters.comにアクセスして 720004195JAをご参照ください。

分取精製のためのパーティクル

XBridge HPLC分取カラムは、UPLCおよび分析HPLCサイズのカラムと同じ充てん剤を使用しているため、迅速にスクリーニングして

高ロードの分取分析法を開発するのに理想的なカラムファミリーです。X Bridge分取カラムは、低背圧で卓越したカラム寿命を

もたらす高いカラム効率でpH安定性の高いカラムのファーストチョイスとして分取精製を行う多くの研究者に信頼されています。

XBridge分取カラムの特徴は以下の通りです。

粒子径5/10 μm BEHパーティクルにより低背圧で高いローダビリティー

OBD™カラムの安定性により充てんベッドの崩壊を防いで卓越したカラム寿命を提供

物質移動の改善により1.7 μm分析から10 μm分取充てん剤までパーティクルのカラム効率を維持

分取精製におけるpH利用のメリット

高pH移動相により塩基化合物のカラムへの負荷量を増大できることが多くあります。この例で示すように、酸性移動相とイオン対試薬を使った従来の分析法は、同じ分析条件で高pH移動相を用いた場合と比べて、負荷量、保持、分離能で劣っています。

1

2

XBridge Prep C18 OBD, 19 x 50 mm塩基性移動相条件 (pH 10)負荷量: 102 mg

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 min0

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 min0

XBridge Prep C18 OBD, 19 x 50 mm酸性移動相条件 (pH 2.3)負荷量: 6.4 mg

1

2

Cl

Cl

N

O

N

Cl

Cl

Cl

N

O

N

Cl

Cl

1. Econazole 2. Miconazole

カラム: XBridge Prep C18 OBD、19 x 100 mm、5 μm移動相A: 低pH （0.1% TFA：pH 2.3） 高pH（10 mM 重炭酸アンモニウム：pH 10）移動相B: アセトニトリルグラジエント: 10分で5％－100％B検出: UV @ 260 nm

14

15

OBDテクノロジー 新たなレベルの分取カラムスケーラビリティーに到達

分取カラム充てんに関する長年の研究から、ウォーターズはカラム寿命や充てんベッドの安定性を効果

的に向上させるOptimum Bed Density（最適充てんベッド密度：OBDTM）分取カラム*を開発しました。OBD

では、高い安定性、効率性、再現性の分取カラムを実現して業界に革命をもたらしました。堅牢な

XBridge充てん剤とOBDカラムデザインの組み合わせにより分取カラムの性能を新しいレベルにまで高め、

シームレスなスケーラビリティー、最大のカラム効率、長いカラム寿命を実現しました。

ダイレクト・スケーラビリティー

XBridge OBD分取カラムを用いた分取分離のスケーリングと最適化例。 ラニチジン（API）から分解物を分離したこの例（分解物は青で示す）では、カラムの長さと粒子径の比（L/dp）を維持することによって、分離能を損なうことなく、カラムボリュームと粒子径に応じて分離をスケーリングして高い負荷量を実現することが可能です。

OBDテクノロジーの詳細についてはwww.waters.comにアクセスして720001939ENをご参照ください。

0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 min

0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 44.12 min

*

*

分析スクリーニング結果ACQUITY UPLC BEH C18 2.1 x 50 mm, 1.7 μm

分離能を維持してスケーリングした分取分析法XBridge Prep C18 OBD 19 x 150 mm, 5 μm

OBDカラムデザイン

OBD分取カラムは、特別に設計されたディストリビュータと化学的に不活性なシールを併用するデザインで、高圧使用でも漏れを防ぎます。

カラム: ACQUITY UPLC BEH C18、2.1 x 50 mm、1.7 μm (製品番号186002350) XBridge Prep OBD C18、19 x 150 mm、5 μm (製品番号186002977) 移動相A: 10 mM 重炭酸アンモニウム、pH 10移動相B: アセトニトリルグラジエント: クロマトグラムに記載のとおりサンプル濃度: 2.0 mg/mL 分解サンプル検出: UV @ 235 nm装置: ACQUITY UPLC with ACQUITY UPLC PDA AutoPurification™ with 2996 PDA and ZQ™

UPLC 分析法グラジエント: 時間 　組成 0.0 95 51.0 85 15 5.0 60 40 6.0 10 90 6.5 95 5 10.0 95 5 流速: 0.8 mL/min注入量: 5 μL

L/dpを基に移管した分種分析法 グラジエント: 時間 　組成 0.0 95 50.92 95 5 9.74 85 15 44.12 60 40 52.94 10 90 57.35 95 5 88.23 95 5 流速: 22.3 mL/min注入量: 1227 μL

OBD™分取 カラムハードウェアの分解図

*UK Patent # GB2408469, US Patent # 7,399,410

16

Peptide Separation Tec hnology

ウォーターズのPeptide Separation Technology（PST）カラムは、ペプチドマップでQCテストを行っているため、プロテオミクス、タンパク質

のキャラクタリゼーション、合成ペプチドなどで扱われる多様なサンプルの予測される性質やペプチド分離分析法の安定性が確かなもの

となります。ポアサイズは130Åと300Å、粒子径は1.7 μmから10 μmまでをラインアップしています。XBridge PSTカラムには次のような

特徴があります。

シャープで左右対称なピークによる高い分離度の実現

幅広い性質のペプチドを良好に分離

ギ酸・トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）移動相どちらでも良好なピーク形状と保持を実現

粒子径2 μm以下のUPLCテクノロジーから10 μm分取HPLC分離へのシームレスな分析法移管

高分離能ペプチドマッピング

保持時間と分析法の再現性は、ペプチドマッピングに適したカラムを選択する際に不可欠な検討事項です。ウシシトクロームcのトリプトシン消化物によるQCサンプルを使って、すべてのXBridge PST C18カラムを厳格に検査しています。これにより幅広い疎水性、等電点のペプチドの分離に適したカラムをご提供できます。

T1

T13T

14 T

14

T4

T9T1

0T1

0

T19C

T15

T8

T5

T19

T12T

13

T12

AU

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0.05

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0.35

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0.45

0.50

0.55

0.60

8 12 16 20 24 28 32 36 40 min

バイオセパレーションカラムの詳細については www.waters.comにアクセスして720002148ENを ご参照ください。

カラム: XBridge BEH130 C18 4.6 x 150 mm、3.5 μm移動相A: 0.045%TFA水溶液移動相B: 0.045%TFAアセトニトリル溶液グラジエント: 9分で0％－15％Ｂ 30分で15％Ｂ－36％Ｂ流速: 0.96 mL/minカラム温度: 35 ˚C検出: UV @ 214 nm

化合物:T1 N-AcGDVEKT13-T14 KYIPGTKT14 YIPGTKT4 IFVQKT9-T10 KTGQAPGFSYTDANKT10 TGQAPGFSYTDANKT19C EDLIAYT8 TGPNLHGLFGRT15 MIFAGIKT5 CAQCHTVEK (heme attached)T19 EDLIAYLKT12-T13 GITWGEETLMEYLENPKKT12 GITWGEETLMEYLENPK

17

Oligonucleotide Separation Tec hnology

Oligonucleotide Separation Technology（OST） カラムは1.7 μm UPLCおよび2.5 μm HPLCパーティクルフォーマットをラインアップし、優

れた分離能とカラム寿命に加え、幅広い分離および分析ニーズに応える柔軟性を備えています。XBridge OSTカラムには次のような特徴が

あります。

PAGE-CGEやイオン交換HPLC分析法と同等以上の分離効率

粒子径3 μm以下のパーティクルにより分離能が向上し、高分子のオリゴヌクレオチドシークエンスの分離が可能

分析用からラボスケールの分取・精製用カラムまでラインアップ

分析1回あたりのコストを削減する優れたカラム寿命.

0 6 12 18 24 30 min 0 6 12 18 24 30 min

カラム: XBridge OST C18、2.1 x 50 mm、2.5 μm製品番号: 186003952移動相 A: 10% メタノール/90%（385 mM HFIP + 14.3 mM TEA）移動相 B: 25% メタノール/75%（385 mM HFIP + 14.3 mM TEA）TEAカラム温度: 60 °Cグラジエント: 30分で0% -100%B、（10-25%メタノール）流速: 1.0 mL/min検出: UV @ 260 nm、毎秒5スキャン装置: Alliance HPLC Bioseparations e2796 with PDA

注入4回目 注入1001回目

5-25 mer 脱トリチル化デオキシチミジンラダーの分析

Protein Separation Technologyタンパク質サンプルの分析および特性化には、大きな分子のわず

かな化学的変化の検出が要求されます。タンパク質分析では、タン

パク質の異なる特性にそれぞれ感度の高い逆相クロマトグラフィー

やサイズ排除クロマトグラフィー（SEC）などの一連のクロマトグラ

フィー技術を用います。

XBridge BEH300 C4カラムの特徴は以下の通りです。

サイズ、疎水性、等電点によるタンパク質の分離

HPLC用の3.5 μm充てん剤とUPLC分析法用の1.7 μm充てん剤を

ラインアップ

タンパク質のキャリーオーバを著しく低減

既知のタンパク質混合物によるQCバッチ試験

タンパク質同定のためのESI-MSに適合

AU

0.00

0.05

0.10

0.15

6 12 18 min

1

2

3

4

5

6

カラム: XBridge BEH300 C4、2.1 x 50 mm、3.5 μm製品番号: 186004498移動相A: 0.1%TFA水溶液移動相B: 0.075%TFA　71.4%アセトニトリル水溶液流速: 0.2 mL/minグラジエント: 25分で28%-100%Bカラム温度: 40 °C注入量: 5 μL検出: UV @ 220 nm

サンプル:MassPREP タンパク質スタンダード（製品番号 186004900） 0.1%TFA5%アセトニトリル水溶液1. Ribonuclease A (0.04 mg/mL) 2. Cytochrome c (0.06 mg/mL) 3. Bovine serum albumin (0.20 mg/mL) 4. Myoglobin (0.13 mg/mL) 5. Enolase (0.22 mg/mL) 6. Phosphorylase b (0.59 mg/mL)

XBridge BEH 300C4カラムは、幅広い特性のタンパク質にご使用できます。 幅広い等電点、分子量、疎水性を代表するものとしてこのタンパク質 ミックスを選択しました。

タンパク質クロマトグラフィー用に開発された 300Å C4カラム

XBridge OSTカラムの優れたカラム寿命

18

オーダーインフォメーション

XBridge 分析カラムカラムサイズ カラムタイプ 粒子径 本数 C18 C8 Shield RP18 Phenyl HILIC Amide

1.0 x 50 mm カラム 2.5 μm 1本入 186003118 186003164 186003136 186003306 — —

2.1 x 10 mm ガード 2.5 μm 1本入 1860030561 1860030741 1860030651 1860033591 1860044551 —

2.1 x 20 mm IS™ カラム 2.5 μm 1本入 186003201 186003167 186003139 186003307 — —

2.1 x 30 mm カラム 2.5 μm 1本入 186003084 186003099 186003091 186003308 186004456 —

2.1 x 30 mm XP カラム 2.5 �m 1本入 186006028 186006040 186006052 186006064 186006076 186006088

2.1 x 30 mm XP カラム 2.5 �m 3本入 176002546 176002554 176002562 176002570 176002578 176002586

2.1 x 50 mm カラム 2.5 μm 1本入 186003085 186003101 186003092 186003309 186004457 —

2.1 x 50 mm XP カラム 2.5 μm 1本入 186006029 186006041 186006053 186006065 186006077 186006089

2.1 x 50 mm XP カラム 2.5 μm 3本入 176002547 176002555 176002563 176002571 176002579 176002587

2.1 x 75 mm カラム 2.5 μm 1本入 186005626 186005627 186005628 186005629 — —

2.1 x 75 mm XP カラム 2.5 μm 1本入 186006030 186006042 186006054 186006066 186006078 186006090

2.1 x 75 mm XP カラム 2.5 μm 3本入 176002548 176002556 176002564 176002572 176002580 176002588

2.1 x 100 mm XP カラム 2.5 μm 1本入 186006031 186006043 186006055 186006067 186006079 176002589

2.1 x 100 mm XP カラム 2.5 μm 3本入 176002549 176002557 176002565 176002573 176002581 186006092

3.0 x 20 mm ガード 2.5 μm 1本入 1860030572 1860030752 1860030662 1860033602 — —

3.0 x 20 mm IS カラム 2.5 μm 1本入 186003087 186003168 186003140 186003310 — —

3.0 x 30 mm カラム 2.5 μm 1本入 186003121 186003169 186003141 186003311 — —

3.0 x 30 mm XP カラム 2.5 μm 1本入 186006032 186006044 186006056 186006068 186006080 186006092

3.0 x 30 mm XP カラム 2.5 μm 3本入 176002550 176002558 176002566 176002574 176002582 176002590

3.0 x 50 mm カラム 2.5 μm 1本入 186003122 186003170 186003142 186003312 186004458 —

3.0 x 50 mm XP カラム 2.5 μm 1本入 186006033 186006045 186006057 186006069 186006081 186006093

3.0 x 50 mm XP カラム 2.5 μm 3本入 176002551 176002559 176002567 176002575 176002583 176002591

3.0 x 75 mm カラム 2.5 μm 1本入 186005630 186005631 186005632 186005633 — —

3.0 x 75 mm XP カラム 2.5 μm 1本入 186006034 186006046 186006058 186006070 186006082 186006094

3.0 x 75 mm XP カラム 2.5 μm 3本入 176002552 176002560 176002568 176002576 176002584 176002592

3.0 x 100 mm XP カラム 2.5 μm 1本入 186006035 186006047 186006059 186006071 186006083 186006095

3.0 x 100 mm XP カラム 2.5 μm 3本入 176002553 176002561 176002569 176002577 176002585 176002593

4.6 x 20 mm ガード 2.5 μm 1本入 1860030582 1860030762 1860030672 1860033612 1860044592 —

4.6 x 20 mm IS カラム 2.5 μm 1本入 186003088 186003172 186003144 186003313 — —

4.6 x 30 mm カラム 2.5 μm 1本入 186003089 186003173 186003145 186003314 — —

4.6 x 30 mm XP カラム 2.5 μm 1本入 186006036 186006048 186006060 186006072 186006084 186006096

4.6 x 50 mm カラム 2.5 μm 1本入 186003090 186003174 186003096 186003315 186004460 —

4.6 x 50 mm XP カラム 2.5 μm 1本入 186006037 186006049 186006061 186006073 186006085 186006097

4.6 x 75 mm カラム 2.5 μm 1本入 186003124 186003175 186003146 186003316 186004461 —

4.6 x 75 mm XP カラム 2.5 μm 1本入 186006038 186006050 186006062 186006074 186006086 186006098

4.6 x 100 mm XP カラム 2.5 μm 1本入 186006039 186006051 186006063 186006075 186006087 186006099

1.0 x 50 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003126 186003177 186003148 186003317 186004429 186004871

1.0 x 100 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003127 186003178 186003149 186003318 — —

1.0 x 150 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003128 186003179 186003150 186003319 — —

2.1 x 10 mm ガード 3.5 μm 1本入 1860030591 1860030771 1860030681 1860033621 1860044301 1860048571

2.1 x 20 mm IS カラム 3.5 μm 1本入 186003019 186003180 186003151 186003320 — —

2.1 x 30 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003020 186003046 186003035 186003321 186004431 186004858

2.1 x 50 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003021 186003047 186003036 186003322 186004432 186004859

2.1 x 100 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003022 186003048 186003037 186003323 186004433 186004860

2.1 x 150 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003023 186003049 186003038 186003324 186004434 186004861

3.0 x 20 mm ガード 3.5 μm 1本入 1860030602 1860030782 1860030692 1860033632 — —

3.0 x 20 mm IS カラム 3.5 μm 1本入 186003024 186003181 186003152 186003325 — —

3.0 x 30 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003025 186003182 186003153 186003326 — 186004862

3.0 x 50 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003026 186003050 186003039 186003327 186004435 186004863

3.0 x 100 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003027 186003051 186003040 186003328 186004436 186004864

3.0 x 150 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003028 186003052 186003041 186003329 — —

4.6 x 20 mm ガード 3.5 μm 1本入 1860030612 1860030792 1860030702 1860033642 1860044372 1860048652

4.6 x 20 mm IS カラム 3.5 μm 1本入 186003029 186003183 186003154 186003330 — —

4.6 x 30 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003030 186003184 186003155 186003331 186004438 186004866

4.6 x 50 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003031 186003053 186003042 186003332 186004439 186004867

4.6 x 75 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003032 186003185 186003043 186003333 — —

4.6 x 100 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003033 186003054 186003044 186003334 186004440 186004868

4.6 x 150 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003034 186003055 186003045 186003335 186004441 186004869

4.6 x 250 mm カラム 3.5 μm 1本入 186003943 186003963 186003964 186003965 — 186004870

2.1 x 10 mm ガード 5 μm 1本入 1860030621 1860030801 1860030711 1860033661 1860044421 —

2.1 x 20 mm IS カラム 5 μm 1本入 186003107 186003186 186003156 186003336 — —

1 2.1x10mm用ガードホルダー（製品番号WAT097958）が必要です。2 3.0x20mm/4.6x20mm用ガードホルダー（製品番号WAT046910）が必要です。

XBridge 分析カラムカラムサイズ カラムタイプ 粒子径 本数 C18 C8 Shield RP18 Phenyl HILIC Amide

2.1 x 30 mm カラム 5 μm 1本入 186003129 186003187 186003157 186003337 186004443 —

2.1 x 50 mm カラム 5 μm 1本入 186003108 186003011 186002999 186003338 186004444 —

2.1 x 100 mm カラム 5 μm 1本入 186003109 186003012 186003002 186003339 186004445 —

2.1 x 150 mm カラム 5 μm 1本入 186003110 186003013 186003003 186003340 186004446 —

3.0 x 20 mm ガード 5 μm 1本入 1860030632 1860030812 1860030722 1860033672 — —

3.0 x 20 mm IS カラム 5 μm 1本入 186003130 186003188 186003158 186003341 — —

3.0 x 30 mm カラム 5 μm 1本入 186003111 186003189 186003159 186003342 — —

3.0 x 50 mm カラム 5 μm 1本入 186003131 186003190 186003160 186003343 186004447 —

3.0 x 100 mm カラム 5 μm 1本入 186003132 186003191 186003004 186003344 186004448 —

3.0 x 150 mm カラム 5 μm 1本入 186003112 186003014 186003005 186003345 — —

3.0 x 250 mm カラム 5 μm 1本入 186003133 186003192 186003161 186003346 — —

4.6 x 20 mm ガード 5 μm 1本入 1860030642 1860030822 1860030732 1860033682 1860044492 —

4.6 x 20 mm IS カラム 5 μm 1本入 186003134 186003193 186003162 186003347 — —

4.6 x 30 mm カラム 5 μm 1本入 186003135 186003194 186003163 186003348 186004450 —

4.6 x 50 mm カラム 5 μm 1本入 186003113 186003015 186003006 186003349 186004451 —

4.6 x 75 mm カラム 5 μm 1本入 186003114 186003195 186003007 186003350 — —

4.6 x 100 mm カラム 5 μm 1本入 186003115 186003016 186003008 186003351 186004452 —

4.6 x 150 mm カラム 5 μm 1本入 186003116 186003017 186003009 186003352 186004453 —

4.6 x 250 mm カラム 5 μm 1本入 186003117 186003018 186003010 186003353 186004454 —

1 2.1x10mm用ガードホルダー（製品番号WAT097958）が必要です。2 3.0x20mm/4.6x20mm用ガードホルダー（製品番号WAT046910）が必要です。

XBridge 分取カラムカラムサイズ カラムタイプ 粒子径 C18 C8 Shield RP18 Phenyl HILIC

10 x 10 mm ガード 5 μm 1860029723 1860029913 1860029833 1860033543 1860047203

10 x 50 mm カラム 5 μm 186002973 186003264 186003257 186003271 186004721

10 x 100 mm カラム 5 μm 186003255 186003265 186003258 186003272 186004722

10 x 150 mm カラム 5 μm 186002974 186003266 186003259 186003273 —

10 x 250 mm カラム 5 μm 186003256 186003267 186003260 186003274 —

19 x 10 mm ガード 5 μm 1860029754 1860029924 1860029844 1860033554 1860047234

OBD 19 x 50 mm カラム 5 μm 186002977 186002993 186002985 186003356 186004724

OBD 19 x 100 mm カラム 5 μm 186002978 186002994 186002986 186003357 186004725

OBD 19 x 150 mm カラム 5 μm 186002979 186002995 186002987 186003358 186004726

OBD 19 x 250 mm カラム 5 μm 186004021 186004023 186004022 186004024 186004730

OBD 30 x 50 mm カラム 5 μm 186002980 186002996 186002988 186003277 186004727

OBD 30 x 75 mm カラム 5 μm 186002981 186003269 186003262 186003278 —

OBD 30 x 100 mm カラム 5 μm 186002982 186002997 186002989 186003279 186004728

OBD 30 x 150 mm カラム 5 μm 186003284 186003083 186002990 186003276 186004729

OBD 30 x 250 mm カラム 5 μm 186004025 — — — 186004731

OBD 50 x 50 mm カラム 5 μm 186003933 186003934 186003935 186003936 186004732

OBD 50 x 100 mm カラム 5 μm 186003937 186003938 186003939 186003940 186004733

OBD 50 x 150 mm カラム 5 μm 186003929 — — — 186004734

OBD 50 x 250 mm カラム 5 μm 186004107 — — — 186004735

10 x 10 mm ガード 10 μm 1860038893 1860040033 1860039883 — —

10 x 150 mm カラム 10 μm 186003890 186004004 186003989 — —

10 x 250 mm カラム 10 μm 186003891 186004005 186003990 — —

19 x 10 mm ガード 10 μm 1860038924 1860040064 1860039914 — —

OBD 19 x 50 mm カラム 10 μm 186003893 186004007 186003992 — —

OBD 19 x 100 mm カラム 10 μm 186003901 186004008 186003993 — —

OBD 19 x 150 mm カラム 10 μm 186003894 186004009 186003994 — —

OBD 19 x 250 mm カラム 10 μm 186003895 186004010 186003995 — —

OBD 30 x 75 mm カラム 10 μm 186004711 — — — —

OBD 30 x 100 mm カラム 10 μm 186003930 — — — —

OBD 30 x 150 mm カラム 10 μm 186003896 186004011 186003996 — —

OBD 30 x 250 mm カラム 10 μm 186003897 186004012 186003997 — —

OBD 50 x 50 mm カラム 10 μm 186003898 186004013 186003998 — —

OBD 50 x 100 mm カラム 10 μm 186003902 186004014 186003999 — —

OBD 50 x 150 mm カラム 10 μm 186003899 186004015 186004001 — —

OBD 50 x 250 mm カラム 10 μm 186003900 186004016 186004002 — —

3 10x10mm用ガードホルダー（製品番号289000779）が必要です。 4 19x10mm用ガードホルダー（製品番号186000709）が必要です。

XBridge カラムメソッドバリデーションキット 異なる3バッチ由来の3本のカラムで構成された分析法バリデーションのための再現性試験用キット

カラムサイズ 粒子径 C18 C8 Shield RP18 Phenyl

2.1 x 100 mm 3.5 μm 186003766 186003777 186003788 186003799

3.0 x 100 mm 3.5 μm 186003767 186003778 186003789 186003800

3.0 x 150 mm 3.5 μm 186003768 186003779 186003790 186003801

4.6 x 100 mm 3.5 μm 186003769 186003780 186003791 186003802

4.6 x 150 mm 3.5 μm 186003770 186003781 186003792 186003803

2.1 x 150 mm 5 μm 186003771 186003782 186003793 186003804

3.0 x 100 mm 5 μm 186003772 186003783 186003794 186003805

3.0 x 150 mm 5 μm 186003773 186003784 186003795 186003806

4.6 x 100 mm 5 μm 186003774 186003785 186003796 186003807

4.6 x 150 mm 5 μm 186003775 186003786 186003797 186003808

4.6 x 250 mm 5 μm 186003776 186003787 186003798 186003809

名称 製品番号

Analytical Columns Wall Chart 720002241EN

A Review of Waters’ Bonded Phase Shield Technology and its Use in High Performance Liquid Chromatography (HPLC) White Paper 720000207EN

A Review of Waters Hybrid Particle Technology. Part 2. Ethylene-Bridged [BEH Technology] Hybrids and Their Use in Liquid Chromatography White Paper 720001159EN

Beginner’s Guide to Liquid Chromatography 715001531

Bioseparations and Analyses Brochure 720002148EN

HILIC 総論 715002531

Optimum Bed Density (OBD) Columns: Enabling Technology for Laboratory-Scale Isolation and Purification White Paper 720001939EN

Preparative OBD Columns Wall Chart 720002117EN

Optimum Bed Density（OBD）分取カラムカタログ 720002336EN

XPカラムカタログ 720004195JA

参考資料

[ XP columns ]

eXtended

performance

Optimum Bed Density (OBD) Preparative Columns

Bridging the Performance Gap from Analytical to Prep

OptimumOptimumpt BBed Density (nsitynsity (OBD) PrBD) PrOBD) Preparatieparative Columns

Bridging tBridging the Pehe Performform pance Gap fance Gap fncnce Gap rom Anarom Analytyrom Analytical to Prical to Pricalal epep

a

Featuring BEH Technology

Featuring CSH TechnologyHSS Technology

LC COLUMNS DESIGNED FOR SUCCESSFUL METHOD DEVELOPMENT AND METHOD TRANSFER.Waters complete family of UPLC® and HPLC columns offer scientists the most diverse range of chromatographicselectivity and particle sizes providing exceptional scalability between UPLC, HPLC and preparative formats.

©2011 Waters Corporation. Waters, XBridge, Atlantis, SunFire, BEH Technology, XSelect, CSH, ACQUITY UPLC, UPLC, and The Science of What’s Possible are trademarks of Waters Corporation. iPad is a registered trademark of Apple. October 2011 720002241EN KK-PDF

BEH C18 BEH C18 O SiO

O

L1 1-12 Low pH = 80 ˚CHigh pH = 60 ˚C 18%UPLC HPLC

1.7 μm 2.5, 3.5, 5, 10 μmSelectivity Features: General purpose column ideally suited for method development due to extreme pH stability and applicability to the broadest range of compound classes.Bonding: Trifunctional C18, fully endcapped, bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate.

BEH C8 BEH C8 O SiO

O

L7 1-12 Low pH = 60 ˚CHigh pH = 60 ˚C 13%UPLC HPLC

1.7 μm 2.5, 3.5, 5, 10 μmSelectivity Features: General purpose column ideally suited for method development due to extreme pH stability and applicability to the broadest range of compound classes.Bonding: Trifunctional C18, fully endcapped, bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate.

BEH Shield RP18 BEH Shield RP18 O SiCH

Polar Group

3

CH 3

L1 2-11 Low pH = 50 ˚CHigh pH = 45 ˚C 17%UPLC HPLC

1.7 μm 2.5, 3.5, 5, 10 μmSelectivity Features: Alternate selectivity as compared to straight chain C18, particularly with phenolic analytes. Compatible with 100% aqueous-phase composition.Bonding: Monofunctional embedded polar C18, fully endcapped, bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate.

BEH Phenyl BEH Phenyl

L11 1-12 Low pH = 80 ˚CHigh pH = 60 ˚C 15%UPLC HPLC

1.7 μm 2.5, 3.5, 5 μmSelectivity Features: Excellent method development column for alternate selectivity, particularly in regard to polyaromatic compounds. Unique level of pH stability for a Phenyl bonded phase.

Bonding: Trifunctional C6 Phenyl, fully endcapped, bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate.

BEH HILIC BEH HILIC

L3 1-9 Low pH = 45 ˚CHigh pH = 45 ˚C unbondedUPLC HPLC

1.7 μm 2.5, 3.5, 5 μmSelectivity Features: Excellent for retention of very polar, basic, water soluble analytes. Specifically designed and tested for HILIC separations using mobile phases containing high concentrations of organic solvent. Bonding: Unbonded Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate.

BEH Amide BEH Amide O SiO O

O NH 2

Linker

- 2-11 Low pH = 90 ˚CHigh pH = 90 ˚C 12%UPLC HPLC

1.7 μm 2.5, 3.5 μmSelectivity Features: Rugged HILIC stationary phase designed to separate a wide range of very polar compounds. Especially good at separating carbohydrates (saccharides) using high concentrations of organic modifier, elevated temperature and high pH. Compatible with all modern detectors including MS, ELSD, UV and Fluorescence.

Bonding: Trifunctional amide bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate.

BEH130 C18(Peptide Separation

Technology)

BEH130 C18(Peptide Separation

Technology)

O SiO

O

L1 1-12 Low pH = 80 ˚CHigh pH = 60 ˚C 18%UPLC HPLC

1.7 μm 3.5, 5, 10 μmSelectivity Features: pH and temperature stable, small pore (130Å), C18 LC column for peptides. Specifically QC tested with peptide map.Bonding: Trifunctional C18, fully endcapped, bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate.

BEH300 C18(Peptide Separation

Technology)

BEH300 C18(Peptide Separation

Technology)

O SiO

O

L1 1-12 Low pH = 80 ˚CHigh pH = 60 ˚C 12%UPLC HPLC

1.7 μm 3.5, 5, 10 μmSelectivity Features: pH and temperature stable, wide pore (300Å), C18 LC column for peptides. Specifically QC tested with peptide map.Bonding: Trifunctional C18, fully endcapped, bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate.

BEH300 C4(Protein Separation

Technology)

BEH300 C4(Protein Separation

Technology)

O Si

CH3

C4 H9

CH3

L26 1-10 Low pH = 80 ˚CHigh pH = 50 ˚C 8%UPLC HPLC

1.7 μm 3.5 μmSelectivity Features: pH and temperature stable, wide pore (300Å), C4 LC column for proteins. Specifically QC tested with protein mixture.Bonding: Proprietary monofunctional C4 bonding to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate.

BEH200 SEC (Protein Separation

Technology)— O OSi

O

O OH

OH

L33 1-8 Low pH = 60 ˚CHigh pH = 60 ˚C 12%UPLC

1.7 μmSelectivity Features: A UPLC SEC column (200Å pore size) for proteins from 10,000 to 450,000 daltons. Specifically QC tested with protein standards.Bonding: Diol bonded to a high pore volume Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate.

BEH100 SEC (Protein Separation

Technology)—

L33 1-8 Low pH = 60 ˚CHigh pH = 60 ˚C 15%UPLC

1.7 μmSelectivity Features: A UPLC SEC column (120Å pore size) for proteins from 1,000 to 80,000 daltons. Specifically QC tested with protein standards.Bonding: Diol bonded to a high pore volume Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate.

BEH C18(Oligonucleotide

Separation Technology)

BEH C18(Oligonucleotide

Separation Technology)

O SiO

O

L1 1-12 Low pH = 80 ˚CHigh pH = 60 ˚C 18%UPLC HPLC

1.7 μm 2.5 μmSelectivity Features: pH and temperature stable, small pore (130Å), C18 LC column for synthetic DNA and RNA. Specifically QC tested with synthetic DNA ladder.

Bonding: Trifunctional C18, fully endcapped, bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate.

BEH Glycan(Glycan Separation

Technology)— O Si

O O

O NH 2

Linker

- 2-11 Low pH = 90 ˚CHigh pH = 90 ˚C 12%UPLC

1.7 μmSelectivity Features: A HILIC UPLC column (130Å pore size) for the LC and LC/MS analysis of fluorescently labeled glycans. Specifically QC tested with 2-AB labeled human mAb IgG derived glycans.Bonding: Trifunctional amide bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate.

CSH C18 CSH C18 O SiO

O

L1 1-11 Low pH = 80 ˚CHigh pH = 45 ˚C 15%UPLC HPLC

1.7 μm 2.5, 3.5, 5 μmSelectivity Features: General purpose reversed-phase column that offers excellent pH stability and rapid mobile-phase re-equilibration for method development. Charged Surface Hybrid (CSH) technology enables superior peak shape and increased loading capacity for basic compounds.

Bonding: Trifunctional C18 ligand, fully end-capped, bonded to a CSH particle substrate.

CSH Phenyl-Hexyl CSH Phenyl-Hexyl O SiO

O

L11 1-11 Low pH = 80 ˚CHigh pH = 45 ˚C 14%UPLC HPLC

1.7 μm 2.5, 3.5, 5 μmSelectivity Features: General purpose alternative selectivity ligand that provides pi-pi interactions with polyaromatic compounds, while maintaining excellent reproducibility at pH extremes. Charged Surface Hybrid (CSH) technology enables superior peak shape and increased loading capacity for basic compounds.Bonding: Trifunctional C6 Phenyl ligand, fully end-capped, bonded to a CSH particle substrate.

CSH Fluoro-Phenyl CSH Fluoro-Phenyl O Si FFF

FF

O

O

L43 1-8 Low pH = 60 ˚CHigh pH = 45 ˚C 10%UPLC HPLC

1.7 μm 2.5, 3.5, 5 μmSelectivity Features: General purpose column that provides a very high degree of analyte selectivity, especially when using low-pH mobile phases. Charged Surface Hybrid (CSH) technology enables superior peak shape and increased loading capacity for basic compounds.

Bonding: Trifunctional propyl fluorophenyl ligand, non-endcapped, bonded to a CSH particle substrate.

HSS C18 HSS C18 O SiO

O

L1 1-8 Low pH = 45 ˚CHigh pH = 45 ˚C 15%UPLC HPLC

1.8 μm 2.5, 3.5, 5 μmSelectivity Features: Ultra performance C18 chemistry, increased retention, superior peak shape, resists acid hydrolysis at low pH. Designed for UPLC separations where silica-based C18 selectivities are desired. Bonding: High coverage trifunctional C18, fully endcapped, bonded to High Strength Silica (HSS) particle substrate.

HSS C18 SB HSS C18 SB O SiO

O

L1 2-8 Low pH = 45 ˚CHigh pH = 45 ˚C 8%UPLC HPLC

1.8 μm 2.5, 3.5, 5 μmSelectivity Features: Unique, non-endcapped C18 chemistry designed specifically for method development scientists. Offers unique Selectivity for Bases (SB) when operating under low pH conditions.

Bonding: Intermediate coverage trifunctionally bonded C18, no endcapping, bonded to High Strength Silica (HSS) particle substrate.

HSS T3 HSS T3 O SiO

O

L1 2-8 Low pH = 45 ˚CHigh pH = 45 ˚C 11%UPLC HPLC

1.8 μm 2.5, 3.5, 5 μmSelectivity Features: Aqueous mobile-phase compatible column designed for exceptional polar compound retention.Bonding: T3 (C18) bonding and endcapping, bonded to High Strength Silica (HSS) particle substrate.

HSS PFP HSS PFP O Si FFF

FF

O

O

L43 2-8 Low pH = 45 ˚CHigh pH = 45 ˚C 7%UPLC HPLC

1.8 μm 2.5, 3.5, 5 μmSelectivity Features: A general purpose column designed to maximize selectivity differences for Lewis bases through pi-pi interactions. T he rigid aromatic ring provides additional selectivity based on shape, dipole moment and hydrogen bonding interactions.Bonding: Trifunctional pentafluorophenyl ligand, non-endcapped, bonded to High Strength Silica (HSS) substrate.

HSS CN HSS CN O Si CN

L10 2-8 Low pH = 45 ˚CHigh pH = 45 ˚C 5%UPLC HPLC

1.8 μm 2.5, 3.5, 5 μmSelectivity Features: A general purpose column that shows contrasting analyte selectivity when compared to C18 phases. T his column can be used for both reversed-phase and normal-phase separations.Bonding: Sterically hindered, mono-functional cyano-propyl ligand, non-endcapped, bonded to High Strength Silica (HSS) substrate.

T3 O SiO

O

L1 2-8 Low pH = 45 ˚CHigh pH = 45 ˚C 14%HPLC

3, 5, 10 μmSelectivity Features: Retention of polar compounds, compatible with 100% aqueous mobile phases, superior stability under low pH conditions. Specifically designed for enhanced retention of polar analytes. Bonding: T3 (C18) bonding and endcapping, bonded to high purity silica substrate.

HILIC

L3 1-5 Low pH = 45 ˚CHigh pH = 45 ˚C unbondedHPLC

3, 5 μmSelectivity Features: Excellent for retention of very polar, basic, water soluble analytes. Specifically designed and tested for HILIC separations using mobile phases containing high concentrations of organic solvent.Bonding: Unbonded high purity silica substrate.

C18 SiO

O

L1 3-7 Low pH = 45 ˚CHigh pH = 45 ˚C 12%HPLC

3, 5, 10 μmSelectivity Features: Retention of polar compounds. Designed for compatibility with 100% aqueous mobile phases.Bonding: Difunctional C18 bonding, fully endcapped, bonded to high purity silica substrate.

C18 SiO

O

L1 2-8 Low pH = 50 ˚CHigh pH = 40 ˚C 16%HPLC

2.5, 3.5, 5, 10 μmSelectivity Features: General purpose method development column. Very high loading capacity, particularly for basic analytes in low pH mobile phases. Ideally suited for purification and impurity profile assays. Bonding: Difunctional C18, fully endcapped, bonded to high purity silica substrate.

C8 SiO

O

L7 2-8 Low pH = 40 ˚CHigh pH = 40 ˚C 12%HPLC

2.5, 3.5, 5, 10 μmSelectivity Features: General purpose method development column. Very high loading capacity, particularly for basic analytes in low pH mobile phases. Less hydrophobic, therefore, less retentive than C18 for most analytes.Bonding: Difunctional C8, fully endcapped, bonded to high purity silica substrate.

Waters Corporation has been awarded the following registrations and certifications: - US Food and Drug Administration registered: cGMP’s & Class 1 medical devices

- ISO 9001:2008

- ISO 13485:2003

Waters owns and controls every step of the process, from raw materials to final product (few suppliers are capable of doing this). Understanding and controlling

our processes makes the difference in product performance in your laboratory.

Primary Manufacturer ofChromatographic Media

Column selection made easy with Waters iPad® App.

O SiO

O

O OO

O OH

OH

ParticleUSP

Class No.pH Range

(Room Temp.)Temperature

LimitsCarbon Load

Particle Size (Spherical)

ParticleUSP

Class No.pH Range

(Room Temp.)Temperature

LimitsCarbon Load

Particle Size (Spherical)

ParticleUSP

Class No.pH Range

(Room Temp.)Temperature

LimitsCarbon Load

Particle Size (Spherical)

ParticleUSP

Class No.pH Range

(Room Temp.)Temperature

LimitsCarbon Load

Particle Size (Spherical)

ACQUITY UPLC Columns

XBridge HPLC Columns

ACQUITY UPLC Columns

XSelect HPLC Columns

Atlantis HPLC Columns

©20 p11 Waters Corporation. Waters, XBridge, Atlantis, SunFire, BEH Technology, XSelect, CSH, ACQUITY UPLCH, ACQUITY UPLC, UPLC, and The Science of What’s Possible are trademarks of Waters Corporationof Waters Corporationp g pp. iPa. iPad is a registered trademark of Apple. Octo October 2011 007200022241EN KK-PDFPDF

T3T3T3 O SO SiiO

OOO

L1L1 2-82 8 Low pH = 45 C45 CHigh pH = 45 ˚Ch pH = 45 ˚C 14%%

HPLC

3, 5, 10 μmSelectivitySelectivittySelectiectivit FeaaturesF : Retention of polar com patible with pounds, compatib 100% aqueous mobile phases, supeperior stability uerior stability under d low pH conditions. l H dSpecifically designed fod fSpecificallSpecifiS f h d fr enhanced retention of polar analytes. l lBonding: T3 (C( 18) bonding and endcapping) bonding and endcapping) b d , bonded to high purity , bonded to high purity silica substrate.ili b

HILICLIC

L3L3L3 1-5 Low pH = 45 ˚Cow pH = 45 ˚CLoHigh pH = 45 ˚CHigh pH = 45 ˚C unbondedb d d

HPLC

3 5 μm5 μm3, 5 μSelectivitySelectivity FeaturesaturesFea : Excellent for retentioor retention of very polar, basic, of very polar, basic, n of water soluble analytes. t l bl l Specifically designed and tested for ed for HILIC separations Husing mobile phasees conti bil h th aining high concentratining high concentratioi i h ns of organic solvent.solveBonding: Unbonded high purity sh it ilica substrate.ilica substraili b

CC1818 SiOO

O

L1 3-7 Low pH = 45 ˚CHigh pH = 45 ˚C 12%

HPLCLC

3, 5, 10 μmSelectivity Features: Retention of polar compounds. Designed for compatibility with 100% aqueous mobile phases.BondingBon : Difunctional C18 bonding, fully endcapped, bonded to high purity silica substrate.

C18 SiSiO

O

L1 2-82 8 Lowow pHH 50 ˚CLow pHow pH = 50 ˚CLowHigh pH = 40 ˚CHi 16%

HPHPHPHPLCLCLLC

2.5, 3.5, 5, 10 μmySelelectivity Feaatures: General purpose methodp: General development column. Ver devel y high loading capacity,ng particulart arly for basic analytes in low pH mobily p e

phases. Ideally suited for purification and ation and impurity profile assays.Bonding: Difunctional Cctional C1818, fully endcapped, bondedcapped, , d to high purity silica to high purity silica urity silica substrate.substrate.substrate

CC88 SiSiO

O

L7L7 2-82 82-8 Low pH = 40 ˚CLow pH = 40 CLow pH = 40 ˚CLow pHHigh pH = 40 ˚CH 12%

HPLC

2.5, 3.5, 5, 10 μmSelectivityySele FeaturesFea : General purpose method: Ge: GeGene l development column. Very high loading capacity, particularly for basic ba analytes in low pH mobile phases. Less hydrophobicphasphasses. Less hydropL h d , therefore, less retentive than C18 for most analytes.Bonding: Difunctional C88, fully endcapped, bonde, fully endcapped, bonded to high purity silica yd to high purity sil substrate.

Waters Corporation haters Corporation has been awarded the folloween awarded the following registrations and cing registrations and certifications:ertifications:

- US Food and Drug AdmiAdmi- U nistration registered: cGMP’s & Class 1 medicaGMP’s & C l devices

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Column selection Cmade easy with Waters iPad® App..

ParticleUSP

Class No.opH Range

(Room Temp.)Temperatumperature perature

LimitsmitsLCarbon CaarboLoad

Particle Size (Spherical))

Many factors affect the mass capacity of preparative columns. The listed capacities represent an “average” estimate.

Capacity is: Higher for strongly retained material Higher for simple mixtures Lower where higher resolution is required Very strongly dependent on loading conditions

- Limited by loading volume - Limited by diluent solvent strength

Reasonable flow rates are based on column diameter. Systems will be limited by increasing backpressure with increasing length and decreasing particle size.

Reasonable injection volumes are based on column diameter at a length of 50 mm with relatively strong solvents. Increased length is compatible with larger injection, but not proportionately so. Weaker solvents significantly increase injection volume.

Mass loading capacities for peptide purifications depend strongly on the sequence and may be estimated at 5-20% of listed values.

OPTIMUM BED DENSITYPREPARATIVE COLUMNS

Bridging the Performance Gap from Analytical to Prep

Peptide Separation Technology

Mobile Phase Chemical pKa* Buffer Range Formula Buffering Equilibrium10 mM Concentration

Mobile Phase Preparation**pH Adjustment (Acid or Base)

Ammonium Acetate pKa 1 4.76 3.8-5.8 CH3COONH4 CH3COOH CH3COO- 0.77 g CH3COOH or NH4OH

Ammonium Acetate pKa 2 9.2 8.2-10.2 CH3COONH4 NH4+ NH3 0.77 g CH3COOH or NH4OH

Ammonium Bicarbonate pKa 1 6.35 5.4-7.4 NH4HCO3 H2CO3 HCO3- 0.79 g HCOOH or NH4OH

Ammonium Bicarbonate pKa 2 9.2 7.2-9.2 NH4HCO3 NH4+ NH3 0.79 g HCOOH or NH4OH

Ammonium Bicarbonate pKa 3 10.3 9.3-11.3 NH4HCO3 HCO3- CO3-2 0.79 g HCOOH or NH4OH

Ammonium Formate pKa 1 3.8 2.8-4.8 NH4COOH HCOOH HCOO- 0.64 g HCOOH or NH4OH

Ammonium Formate pKa 2 9.2 8.2-10.2 NH4COOH NH4+ NH3 0.64 g HCOOH or NH4OH

Triethylammonium Acetate (TEAA) pKa 1 4.76 3.8-5.8 (CH3CH2)3N:CH3COONH4 (1:2) CH3COOH CH3COO-0.70 mL TEA (99% conc.)

TEA or CH3COOH0.57 mL Acetic Acid (100% conc.)

Triethylammonium Acetate (TEAA) pKa 2 11.01 10.0-12.0 (CH3CH2)3N:CH3COONH4 (2:1) (CH3CH2)3NH+ (CH3CH2)3N1.41 mL TEA (99% conc.)

TEA or CH3COOH0.29 mL Acetic Acid (100% conc.)

Triethylammonium Formate (TEAF) pKa 1 3.75 2.8-4.8 (CH3CH2)3N:NH4COOH (1:2) HCOOH HCOO-0.70 mL TEA (99% conc.)

TEA or HCOOH0.41 mL Formic Acid (88% conc.)

Triethylammonium Formate (TEAF) pKa 2 11.01 10.0-12.0 (CH3CH2)3N:NH4COOH (2:1) (CH3CH2)3NH+ (CH3CH2)3N1.41 mL TEA (99% conc.)

TEA or HCOOH0.20 mL Formic Acid (88% conc.)

Acetic Acid (glacial) 4.8 – CH3COOH CH3COOH CH3COO- 0.57 mL (100% conc.) –

Ammonium Hydroxide 9.2 – NH4OH NH4+ NH3 0.65 mL (29% as NH3 conc.) –

Formic Acid 3.8 – HCOOH HCOOH HCOO- 0.41 mL (88% conc.) –

N-Methylpyrrolidine 10.3 – C5H11N C5H11NH+ C5H11N 1.04 mL (97% conc.) –

Pyrrolidine 11.3 – C4H9N C4H9NH+ C4H9N 0.84 mL (99.5% conc.) –

Triethylamine (TEA) 11.01 – (CH3CH2)3N (CH3CH2)3NH+ (CH3CH2)3N 1.41 mL (99% conc.) –

Trifluoroacetic acid (TFA) 0.3 – CF3COOH CF3COOH CF3COO- 0.74 mL (100% conc.) –

Scale-up can be carried out using the equations shown above Convenient scale-up tools on the Waters Prep Calculator provide:

- Mass load scaling - Gradient scaling with appropriate flow rate scale-up and predicting volume consumption - Calculations for split flow ratios for those using mass spectrometer driven chromatography

To downlaod, go to www.waters.com/prepcalculator

Mass Load

Proportional to column volume

Limited by solubility in mobile phase

Injection Volume

Approximately proportional to column volume

Approximately proportional to both length and cross-sectional area

Most strongly dependent on sample solvent

Flow Rate

Proportional to cross-sectional area for constant linear velocity

Increased linear velocity gives shorter runs

Ultimately restricted by flow and pressure limits of system

Gradient Duration

Slope is % change/column volume, not time

Resolution is constant with the same number of column volumes from initial to final conditions

Must include initial hold to mimic the system delay, expressed as number of column volumes, observed on small-scale separation

System Volume

System volume is important in scaling separations because it creates an isocratic hold at the start of every run. This hold is often several column volumes on a small scale, but a fraction of the volume of a prep column. Compensation for this volume must be included in planning a scaling experiment to avoid distorting the chromatography.

M2 = M1 x L2 d22

L1 d12 x

F2 = F1 x d22

d12 t2 = t1 x

L2 d22 F1

L1 d12 F2x x

High pH for basic analytes results in the best loadability

Low pH for acidic analytes results in the highest loadability

Non-ionic loading of ionizable compound can improve peak shape and increase loading

pH 2.3

pH 7

pH 10

Bases1. Nordoxepin2. Doxepin3. Amitriptyline

2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00-0

100

%

-0

100

%

-1

%

0.61

0.67

1,2 3

321

321

Adjusted gradient to keep the same k’ values

1X

3X

23X

Minutes

pH 2.3

pH 7

pH 10

Adjusted gradient to keep the same k’ values

Acids1. Oxacillin2. Cloxacillin3. Dicloxacillin

2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00-2

100

%

-1

100

%

-0

100

% 3X

1.7X

1X

12 3

1 2 3

1

2 3

Minutes

Mobile Phase: pH 11

0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 2.00 2.25 2.50 2.75 3.00 3.25 3.50 3.75 4.00 4.25 4.50 4.75-0

100

%

-0

100

%

Econazole @ 200 mg/mL

Sample Diluent: DMSO

DMSO + 50 mM NH4OH

Minutes

Mobile Phase: pH 2

Sample Diluent: DMSO

DMSO + 50 mM FA

0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 2.00 2.25 2.50 2.75 3.00 3.25 3.50 3.75 4.00 4.25 4.50 4.75 5.00 5.25

-1

100

%

-1

100

%

Dicloxacillin @ 250 mg/mL

2.3X higher loading

Minutes

Non-ionic loading of ionizable compound can improve peak shape and increase loading

Approximate Mass Loading Capacity (mg) for Prep OBD™ Columns (Gradient Mode)

* pKa and Buffer Range determined in aqueous solution. Addition of organic modifiers may change the apparent pKa value.**Addition of volume or mass per 1 Liter. Silica-based columns (SunFire™ Prep and Atlantis® Prep) should not be operated at high pH. Please refer to reverse side.

Bases

Acids

Recommended Method for Measurement

1. Remove column.

2. Use Acetonitrile as mobile phase A, and Acetonitrile with 0.05 mg/mL uracil as mobile phase B (eliminates non-additive mixing and viscosity problems).

3. Set UV detector at 254 nm.

4. Use the flow rate in the original method and the intended flow rate on the target instrument.

5. Collect 100% A baseline for 5 minutes.

6. Program a step change at 5 minutes to 100% B, and collect data for an additional 5 minutes.

7. Measure absorbance difference between 100% A and 100% B.

8. Measure time at 50% of that absorbance difference.

9. Calculate time difference between start of step and 50% point.

10. Multiply time difference by flow rate.

5.69 minutes- 5.00 minutes 0.69 minutes

50% Time = 5.69 minutes

0.00

0.05

0.10

0.15

0.20

0.25

0.30

0.35

0.40

0.45

0.50

0.55

0.60

0.65

0.70

Minutes

0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00

Programmed time = 5.00 minutes

System Volume:0.69 min. x 1.5 mL/min. = 1.04 mL

Flow Rate = 1.5 mL/min

AU

= Mass on Column 1

= Mass on Column 2

= Length of Column 1

= Length of Column 2

= Diameter of Column 1

= Diameter of Column 2

= Gradient Duration for Column 1

= Gradient Duration for Column 2

= Flow Rate for Column 1

= Flow Rate for Column 2Key

Diameter (mm)

Length (mm) 4.6 10 19 30 50

30 – 8 27 – –

50 3 15 45 110 310

75 – – – 165 –

100 5 25 90 225 620

150 8 40 135 335 930

250 13 60 225 560 1550

Reasonable Flow Rate (ml/min)

1.4 6.6 24 60 164

Reasonable Injection Volume (μl)

20 100 350 880 2450

l i

Scale-up can be cS l b arried out using thusing the equations shown ae equations shown abovebove Convenient scale-up tools on the Waters Prep Calculatorp Calculator provide:provid

- Mass load scaling- Gradient scaling with appropriate flow rate scale-up and predicting volume consumptionumption- CCalculations for splalculations for split flow ratios for it flow ratios for those using mass spthose using mass spng mass spectrometer driven cectrometer driven cectrometer driven hromatographyhromatography

To downlaod, go to To downlaod, go to wnlaod, go to www.waters.com/prepwww.waters.com/prepcalculatorcalculator

System Volume System Volume

System volume is important in scaling separations because it creates an isocratic hold at the start rt of eof every run. This hold is often several column volumes on a small umes on a small umes on a smalll sca e, buscale, but a fractiscale, but on of the volume of a prep column. Compensation ti for fthis volume must be included in planning a scaling experiment to avoid distorting the chromatography.

F2 F1 x d1

2 t2 t1 x L1 d1

2 F2

Recommended Method for Measuremeod for Measurement n

1. Remove column.ove column.

2. Usee Acetonitrile2. Use Acetonitrile as mobile phase A,as mobile phasse A, and Acetonitrilecetonitrile wand Aceetonitrile with 0.05 mg/mL uracil a0.05 mg/mL uracil a0.05 mg/mL uracil a p (s mobile phase B (es mobile phase B (eliminates non-additliminates non-additive mixing and viscositxing and vvis y problems).

3. Set UV detector etec at 254 nm.

4. Use the flow ratat4 Use the e in the original me ethod and the intennd the intended flow ded flowrate onrate on the target instrument.

5. Collect 100% A bllect 100% aseline for 5 minutes.

6 Program a step change at 5 minutes to 100% B and collect data6. Program a step change at 5 minutes g to 100% B, and colland collect data ect datafor an additional 55 minutes.

7. Measure absorbanM b ce difference between 100% A and 100% 00% A and 100% B.B

8. Measure time at 50% of that absorbance difference.ce.

9. Calculate time dulate time 9. Calculate time difference between sff tart of step and 50f step and 50% point.%

10. Multiply time d10. Multiply time difference by flow ifference by flow rate.

5.69 minutes- 5.00 minuuteses

0.69 minuuteses

50% Time = 5.69 minutes.69 min

0.00

0.05

0.10

0.15

0.20

0.25

0.30

0.3500

00.40

0.45

0.50

0.55

0.600 60

0.65

0.70

MinuteMinutess

0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 8.01 0 20.00

Programmed time = 5.005.00 minutes

System Volume:System0.69 min. x 1.5 mL/min. = 1.04 mL0.69 min. x 1.5 m

Flow Rate = 1.5 mL/minFlow Rate = 1 5 mL/min

AU

l i

VanGuard™ プレカラム 3 個入(ガードカラム)

ケミストリー 粒子径 カラムサイズ 製品番号 3個入

XBridge BEH C18 2.5 μm 2.1 x 5 mm 186006291

XBridge BEH Shield RP18 2.5 μm 2.1 x 5 mm 186006293

XBridge BEH C8 2.5 μm 2.1 x 5 mm 186006292

XBridge BEH Phenyl 2.5 μm 2.1 x 5 mm 186006294

XBridge BEH HILIC 2.5 μm 2.1 x 5 mm 186006295

XBridge BEH Amide 2.5 μm 2.1 x 5 mm 186006296

電子ツール

ウォーターズ逆相カラム選択性チャート

www.waters.com/selectivitychart

iPad ®用ウォーターズ部品セレクター&選択性チャート

www.waters.com/apps

ウォーターズカラムアドバイザー

www.waters.com/columnadvisor

www.waters.com/xbridge

世界のウォーターズ

Austria 43 1 877 18 07

Australia 61 2 9933 1777

Belgium and Luxembourg 32 2 726 1000

Brazil 55 11 4134 3788

Canada 1 800 252 4752

China 86 21 6156 2666

Czech Republic 420 2 617 11384

Denmark 45 46 59 8080

Finland 358 9 5659 6288

France 33 1 30 48 72 00

Germany 49 6196 400 600

Hong Kong 852 2964 1800

Hungary 36 1 350 5086

India 91 80 2837 1900

Ireland 353 1 448 1500

Italy 39 02 265 0983

Japan 81 3 3471 7191

Korea 82 2 6300 4800

Mexico 52 55 52 00 1860

The Netherlands 31 76 508 7200

Norway 47 6 384 6050

Poland 48 22 101 5900

Puerto Rico 1 787 747 8445

Russia/CIS 7 495 727 4490 / 290 9737

Singapore 65 6593 7100

Spain 34 93 600 9300

Sweden 46 8 555 115 00

Switzerland 41 56 676 7000

Taiwan 886 2 2501 9928

UK 44 208 238 6100

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この ISO9001認証登録ロゴは、Waters Corporationのものです。 ©2012 Waters Corporation. Printed in Japan. 2012年9月720001255JA 09A(H)

適用規格：JISQ9001:2008登録番号：JMAQA-331 登録日：1999年05月31日審査登録範囲：理科学機器（液体クロマトグラフ・質量分析装置・データ管理システム等）の輸入・販売から保守業務までのトータルサポート及び保守プランの設計・開発

Waters、UPLC、XTerra、Symmetry、Alliance および ACQUIT Y UPLCは Waters Corporationの登録商標です。XBridge、SunFire、BEH Technology、 OBD、AutoPurification、ZQ、ISおよび T he Science of W hat’s Possibleは Waters Corporationの商標です。その他�