A caspase-dependent cleavage of CDC25A A caspase-dependent cleavage of CDC25A generates an active fragment activating generates an active fragment activating

cyclin-dependent kinase2 during apoptosiscyclin-dependent kinase2 during apoptosisA Mazars, A Fernandez-Vidal, O Mondesert, C Lorenzo, G Prévost, B Ducommun, B Payrastre,

C Racaud-Sultan and S Manenti

Cell Death and Differentiation (2008)

Famille Cdc25Contient 3phosphatases

CDC25A CDC25B CDC25C

Contrôlent la progression des cellules eucaryotes dans le cycle cellulaire

Activation séquentielle des complexes CDK/cycline

Déphosphorylation activatricePhosphorylations Inhibitrice

WeeMyt CAK

Double spécificité CDC25A

Double action dans le passage des Checkpoints du cycle cellulaire

Transition G1S Transition G2M

Dégradation de CDC25A

Dépendante du protéasome

CDC25A et Apoptose

Rôle anti-apoptotique dans l’apoptose induite par ASK1

Les rôles CDC25A dans l’apoptose sont encore peu connus

Role anti-apoptotique en

réponse à un retrait de sérum

Rôle pro-apoptotique dans l’apoptose induite

par C-myc

Rôle anti-apoptotique VS Rôle apoptotique

Quel est le rôle de CDC25A dans

l’apoptose des cellules leucémiques?

Comment réagit CDC25A à l’apoptose induite?

Induction de l’apoptose par inhibition du protéasome

Durant l’apoptose, CDC25A est clivéLibération d’un fragment C-ter de 33kDa

33kDa

Le clivage dépend-t-il du signal apoptotique?

Apoptose induite par Stau et MG

Produit du clivage plus abondant dans le cas de

l’apoptose induite par inhibition du protéasome

Hypothèse:Le clivage de CDC25A pourrait être

influencé par l’activité du protéasome

L’intensité du clivage est-elle influencée par l’activité du

protéasome?

L’activité du protéasome influencerait l’intensité du clivage de CDC25A

L’intensité du clivage semble augmenter lorsque le protéasome est inhibé

Cas d’une apoptose génotoxique

Etoposide= inhibiteur de la topoisomérase II

Le clivage de CDC25A n’a lieu qu’en apoptose non génotoxique

•Dérégulation de CDC25A•Pas de clivage

CDC25A est régulé de façon différente en conditions

génotoxiques et non génotoxiques

En conditions d’apoptose non génotoxique, CDC25A est-il dégradé

par le protéasome?

Etat d’activation de Chk1

L’apoptose génotoxique induite par

l’Etoposide est bien médiée par l’activité de Chk1

L’apoptose non-génotoxique

n’est pas médiée par l’activité de

Chk1

L’apoptose non génotoxique induit le clivage de CDC25A, indépendamment de la voie du protéasome

?

Le clivage dépendent-il des caspases?

Dans l’apoptose non genotoxique le clivage est caspase-dépendant

Z-VAD Z-DEVD

Inhibiteurs des caspases

Où les caspases clivent-elles CDC25A?

2 sites de clivage possibles:

La caspase 3 clive CDC25A dans la position D223 et génère ainsi le fragment C-terminal (33kDa)

?

CDC25A

Fragment C-ter (33kDa)

Quel est l’activité enzymatique du fragment C-ter généré?

Le fragment C-ter de CDC25A a une activité phosphatase Cette activité est plus importante que CDC25A entier

Test de l’activité phosphatase:

Dans quel compartiment se localise le fragment C-ter de CDC25A?

CDC25A est clivé dans le noyau

Le fragment C-ter se localise dans le noyau

CDC25A

Fragment C-ter

Quelle est la cible nucléaire du fragment C-ter?

Déphosphorylation activatrice

Le fragment C-ter régule l’état d’activation de CDK1 et CDK2

Y-a-t-il une association directe entre le fragment C-ter et CDK2?

Le fragment C-ter et CDK2 forment un complexe pendant l’apoptose

Quelle est le rôle de CDC25A pendant l’apoptose?

L’activité phosphatase est nécessaire à cette fonction

L’apoptose induite est due au clivage de CDC25ALe fragment C-ter induit l’apoptose de façon efficace

Quelle est le rôle de CDC25A pendant

l’apoptose?

L’activité du fragment C-ter est capable de réguler le clivage

Microscopie à immunofluorescence:

Conclusion• CDC25A est clivé en réponse à différents stimulus

apoptotique non génotoxiques

• Le clivage de CDC25A est caspase-dépendant et s’effectue au niveau du résidu D223.

• Il génère un fragment C-ter de 33kDa qui porte l’activité phosphatase.

• Ce fragment C-ter est destiné au noyau et a pour cible CDK2 dans les cellules apoptotiques

• L’activation de CDK2 par le fragment C-ter peut induire l’apoptose

• Le fragment C-ter régule le clivage de CDC25A

Conclusion

CDC25A

Clivage Caspase-dépendant

C-ter

APOPTOSE

Discussion• Le fragment pourrait être issu d’un

processus de maturation ou de dégradation

• CDC25A est un régulateur positif et négatif de l’apoptose.

??

CDC25A C-ter

Discussion

C-ter

-P

-PCDC25A

APOPTOSE

Prolifération cellulaire

Régulation de CDC25A par

régulation d’un substrat encore

inconnu

Mise en évidence d’une communication des

voies d’apoptose non génotoxique et des

voies de prolifération

?