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ABO血液型の

基礎と問題解決

2016年9月15日

株式会社イムコア

技術サポート部

2 All Content © 2016 Immucor, Inc.

ABO抗原

A型 B型 AB型 O型

A抗原 B抗原


ABO抗原

「ABO blood group diagram」 By InvictaHOG (Own work) [Public domain], via Wikimedia Commons

凡例赤血球

N-アセチルガラクトサミン

N-アセチルグルコサミンガラクトース

フコース

H抗原


ABO自然抗体

ヒトは環境中の細菌やウイルスなどのA型抗原および

B型抗原様因子に反応して抗Aまたは／および抗Bを自然に

産生する。


ABO血液型システム

Karl Landsteiner

ランドシュタイナーの法則：

赤血球にはA抗原または／およびB抗原が存在し、血清（血漿）中には赤血球に存在しない抗原に対する自然抗体が存在する。


ABO血液型

ランドシュタイナーの法則

血液型抗原

(赤血球表面)

抗体

(血漿)

A A 抗B

B B 抗A

AB A, B -

O - 抗A, 抗B

抗A,B


日本人のABO血液型頻度

A型

約40％

B型

約20％

O型

約30％

AB型

約10％


急性溶血性輸血副作用（AHTR）

大部分はABO不適合輸血が原因であるが、稀に補体結合性の不規則抗体で認められる(おもに血管内溶血)

遅発性輸血副作用（DHTR）

多くは二次免疫応答により増加した不規則抗体が原因であり、一次免疫応答によるものは極めて稀である(おもに血管外溶血)

溶血性輸血副作用

「輸血・移植検査技術教本」より, 一部改変


B型の患者にA型の血液製剤を輸血したら

A型血液

輸血溶血

抗体抗原反応

（イメージ図）

B抗原

抗A 副作用

A抗原


血型検査/ガイドライン

規則抗体の抗A, 抗B, 抗A,Bは、いかなる場合でも、

臨床的意義のある抗体である

(赤血球型検査(赤血球系検査)ガイドライン, 日本輸血・細胞治療学会)

ABO同型血液の輸血が原則


抗原抗体反応の検出

• 輸血検査では一般的に抗原抗体反応の

有無を赤血球凝集の有無で判断する

A

A

A

A

A

赤血球表面の抗原に抗体が結合

↓

そのままでは肉眼で判定できない

赤血球に結合した抗体を介した

赤血球間の橋渡し

↓

肉眼で確認できる集合体（凝集）

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A抗原

抗A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A

A 遠心


ABO血液型検査用製品

抗体試薬赤血球試薬

ABO血液型検査は血球凝集法を用いて室温で行われる


赤血球型検査－オモテ検査

抗Aおよび抗B試薬

赤血球検体の検査は、AおよびB抗原を直接検査する。

これを「オモテ検査」とよぶ。

赤血球


血漿検査－ウラ検査

A1およびB赤血球試薬

血漿検体の検査は、血漿中の抗Aおよび抗B抗体を検査する。

これを「ウラ検査」とよぶ。

血漿


抗Ａ抗Ｂ

抗A試薬、抗B試薬 1滴

3～5％患者赤血球浮遊液 1滴

混和

遠心

判定

ABO血液型検査手順（試験管法）

患者血清または血漿 2滴

A1赤血球、B赤血球 1滴

900～1,000G（3,400rpm）15秒

または100～125G（1,000rpm）1分

凝集や溶血の有無を観察

判定結果を記録

A1血球 B血球

オモテ検査ウラ検査


ABO血液型判定

オモテ検査ウラ検査総合判定

抗A 抗B 判定 A1血球 B血球判定

＋ 0 A型 0 + A型 A型

0 + B型 + 0 B型 B型

+ + AB型 0 0 AB型 AB型

0 0 O型 + + O型 O型


ABO血液型検査の判定

オモテ検査ウラ検査結果

抗A 抗B A1赤血球 B赤血球

+ - - + A



- + + - B



- - + + O




+ + - - AB



+ - + +

判定保留

ABO血液型検査の判定


○

○

ABO血液型はオモテ検査とウラ検査の結果が

一致してはじめて決定される

オモテ検査とウラ検査の結果が不一致の場合は

判定保留とし、原因を追及する

ABO血液型の判定


オモテ検査・ウラ検査不一致・異常反応の原因

オモテ検査側の要因

異常反応考えられる要因または病態

反応がない

弱い

亜型

疾患による一時的な抗原量の低下

型物質の異常増加による試薬の抗体中和

部分凝集

亜型

キメラ、モザイク

異型輸血後

異型造血幹細胞移植後

胎児母体間輸血症候群(FMT)

異常な凝集

汎凝集反応

後天性B (acquired B)

寒冷凝集素による感作

「輸血・移植検査技術教本」より抜粋


オモテ検査・ウラ検査不一致・異常反応の原因

ウラ検査側の要因

異常反応考えられる要因または病態

反応がない

弱い

新生児, 高齢者

低・無ガンマグロブリン血症

異型輸血後

異型造血幹細胞移植後

異常な凝集

亜型

冷式不規則抗体

寒冷凝集素症

連銭形成

高分子製剤輸注後

試薬に含まれる添加物に反応する抗体

(IAT)

新生児の母親由来IgG型抗A,または抗B

免疫グロブリン製剤由来IgG型抗Aまたは抗B

異型造血移植後のPLS 「輸血・移植検査技術教本」より抜粋


オモテ・ウラ不一致のときの対応

1. 手技, 試薬の確認

2. 再検査

3. 患者情報の収集

• 年齢, 性別, 疾患名, 輸血歴, 妊娠歴, 異型輸血, 異型造血幹細胞移植の有無, 臨床検査データ, 家族歴など

4. 異常反応の原因を推測し、精査

「輸血・移植検査技術教本」より抜粋


ウラ検査の偽陽性が疑われるケース


ウラ血球の反応性について (偽陽性)


抗A 抗B A1血球 B血球

4+ 0 2+ 4+


ウラ血球の反応性について(偽陽性)

考えられる原因

冷式不規則抗体の保有

寒冷凝集素価(寒冷自己抗体）高値

連銭形成

亜型等



4+ 0 2+ 4+



患者情報の確認

連銭形成の可能性

生理食塩液法による不規則抗体スクリーニング

抗Lea, 抗P1, 抗M 等

自己対照の陽性の場合、寒冷自己抗体が疑われる

抗Hレクチン、抗A1レクチン、A2血球との反応性

亜型

試薬成分による非特異反応

試薬とは陽性、自己対照陰性


連銭形成が疑われる場合

顕微鏡で観察することで、連銭形成が確認できる

生理食塩液の滴下で凝集が消失することがある

生理食塩液置換法で確認可能

1. ウラ検査用の試験管を遠心

2. 患者血漿または血清を除去する

3. 生理食塩液を2滴滴下する

4. セルボタンを再浮遊させ、凝集の有無を確認



生理食塩液法による不規則抗体スクリーニングの実施

抗Lea, 抗P1, 抗M 等が検出


P1抗原について

個人差があるため、同定では注意が必要



生理食塩液法による不規則抗体スクリーニングの実施


予備加温によるウラ検査の実施

型物質による吸収

Lewis型物質, P1型物質

酵素試薬によるM抗原の破壊


ガンマ P1型物質

• 鳥類由来の可溶性P1血液型物質

• 抗P1の確認が可能

• P1－血球を選択せずに抗P1と共存する他の抗体の検査が可能


使用方法

1. 1検体につき2本の試験管を用意し、被検血清を必要量（例えば、10滴、1mL など）添加する。

2. 一方の試験管には血清量の1/10容（例えば、1滴、0.1mL など）のガンマ P1型物質を、もう一方の試験管には血清量の1/10容の生理食塩水を添加する。注意：型物質は管壁に沿って添加せず、直接血清中に滴下する。

3. 充分に混和して、室温（23±3℃）で少なくとも5分間放置する。

4. 再度混和し、それぞれの試験管の内容物について検査を行う。


・

・

・

P1

型物質

・

・

・

・

・

・

・

・

・

P1 生食

P1 生食

P1 生食


注意点

• 強い抗P1は血清：型物質の比が10：1では部分的にしか中和されない場合がある

• 非常に弱い抗体は10：1の割合で型物質を添加した場合に希釈されて反応が検出できなくなることがある

• 抗P1以外に抗Pkも中和する Tj(a-)の人が保有する抗P+P1+Pk（抗Tja）のうち、抗P1と抗Pkは中和されるが、抗Pは中和されない



ガンマ Lewis型物質

• ヒト由来の可溶性LeaおよびLeb血液型物質

• Lewis抗体の確認が可能

• 血球のLewis表現型を選択せずにLewis抗体と共存する他の抗体の

検査が可能


使用方法

1. 1検体につき2本の試験管を用意し、被検血清を必要量（例えば、10滴、1mL など）添加する。

2. 一方の試験管には血清量の1/10容（例えば、1滴、0.1mL など）のガンマ Lewis型物質を、もう一方の試験管には血清量の1/10容の生理食塩水を添加する。注意：型物質は管壁に沿って添加せず、直接血清中に滴下する。

3. 充分に混和して、室温（23±3℃）で少なくとも5分間放置する。

4. 再度混和し、それぞれの試験管の内容物について検査を行う。


・

・

・

Lewis

型物質

・

・

・

・

・

・

・

・

・

Lewis 生食

Lewis 生食

Lewis 生食


注意点

• 強いLewis抗体は血清：型物質の比が

10：1では部分的にしか中和されない

場合がある

• 非常に弱い抗体は10：1の割合で

型物質を添加した場合に希釈されて

反応が検出できなくなることがある

• Lewis抗体以外に抗Hも中和する




生理食塩液法の不規則抗体スクリーニング


予備加温によるウラ検査の実施

型物質による吸収

Lewis型物質, P1型物質

酵素試薬によるM抗原の破壊


寒冷自己抗体が強い場合

自己吸収が有効な場合がある

ZZAP試薬を用いる場合

ZZAP処理前に37℃生理食塩液での赤血球洗浄は有用

IgM, IgG, 補体が除去される

酵素処理で吸収効率が上昇する

1. 自己血球 1ml + ZZAP試薬 2mlを混合

2. 自己血球をZZAP試薬で処理 (37℃ 30分)

3. 3回洗浄、遠心、上清を除去

4. ZZAP処理した自己血球 + 自己血清 (4℃ 30分)

5. 遠心、血清を別に試験管に移す

AABB Technical manual 18thより抜粋, 一部改変

ウラ検査の実施








抗Hレクチン、抗A1レクチン、A2血球との反応性

亜型




抗A1レクチン, 抗Hレクチンの反応性

抗A1レクチン

A1血球と反応し、A2血球とは反応しない


抗A 抗B A1血球 B血球抗A1レクチン

4+ 0 2+ 4+ 0



抗A1レクチン

A1血球と反応し、A2血球とは反応しない


抗A 抗B A1血球 B血球抗A1レクチン

4+ 0 2+ 4+ 0

A亜型, 抗A1の疑い



ガンマ抗Hレクチンの反応性

O血球 A2血球 A2B血球 B血球 A1血球 A1B血球

4+ 3+ 2+~1+ 2+~1+ W+~0 0

(社内データ)

抗Hレクチン

O>A2>B>A1>A1Bの順で反応する



抗Hレクチン

O>A2>B>A1>A1Bの順で反応する


抗A 抗B A1血球 B血球抗A1

レクチン

抗H

レクチン

4+ 0 2+ 4+ 0 3+

A亜型, 抗A1の疑い








抗Hレクチン、抗A1レクチン、A2赤血球との反応性

亜型




試薬成分による非特異

ウラ血球を洗浄が有効



4+ 0 2+ 4+



4+ 0 0 4+

洗浄後


ウラ検査の偽陰性が疑われるケース


ウラ血球の反応性について (偽陰性)



4+ 0 0 0


ウラ血球の反応性について (偽陰性)



4+ 0 0 0

考えられる原因

低・無ガンマグロブリン血症

新生児/高齢者

異型輸血後

造血幹細胞移植後

(亜型)


日本人の抗体価の減少

Mazda T. et al: Immunohematology 23(1):38-41,2007


ウラ血球の反応性について(偽陰性)


年齢

病歴

グロブリン値

輸血歴

移植歴

使用薬剤

等


ウラ血球の反応性について(偽陰性)

血漿量の増量

→ 3～4滴下

インキュベーション時間の増加

→ 室温で10分

低温インキュベーション

→4℃で5分

• 寒冷凝集素の影響を検出するためにO型赤血球を対照に立てる

「輸血・移植検査技術教本」より, 一部改変


抗A 抗B A1血球 B血球 O血球

4+ 0 0 2+ 0


移植例

AB型患者にA型ドナー移植例

患者ドナー

オモテウラ検査


AB A + 0 0 0

「Medical Technology, 2011年, Vol.39, No.13

今日から役立つ輸血検査業務ハンドブック」

より抜粋, 一部改変


ABm例



4+ 0 0 0

日本で最も検出される亜型はBmと言われている

332,002人中, Bm:39例 (1/8,500人), ABm15例(1/22,000人)

(東北地域)*

抗Bによる吸着解離試験でB抗原が検出されることでAB亜型と判明

*(ABO血液型, D抗原判定上の問題点,菊地正輝,

第34回日本血液事業学会総会, 2011, ワークショップ, )より

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