8/19/2019 Acetil trigliceridos y Colesterol, Quinoneimina

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TRIGLICÉRIDOSEnzimático AA

MÉTODO ENZIMÁTICO COLORIMÉTRICO PARA LA DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOSSÉRICOS EMPLEANDO TÉCNICA MANUAL O AUTOMATIZADA

SIGNIFICACIÓN CLÍNICA: La determinación de triglicéridos permite, junto aotras como la de colesterol, HDL-colesterol,apolipoproteinas y el lipidograma electroforético,una exacta clasificación de las dislipidemias, hechoesencial para poder administrar el tratamiento máscoveniente.

FUNDAMENTOS DEL MÉTODO: Los triglicéridos se hidrolizan enzimáticamente englicerol y acidos grasos libres, por medio de unacombinación especial de lipasas. El indicador esuna quinoneimina formada a partir de peróxido dehidrógeno, 4-aminoantipirina y 4-clorofenol , con laacción catalítica de una peroxidasa.

LPL 

trigliceridos glicerol + ac.grasos

GK glicerol +ATP glicerol 3-P + ADP

GPO

glicerol 3-P + O2 dihidroxiacetona-fosfato + H2O2

POD H2O2 + 4 AA+ 4-CF quinoneimina + HCL + 4 H2O2 

REACTIVOS PROVISTOS: Estos reactivos son para USO IN VITRO: •Reactivo Buffer :Solución buffer de pipes pH=7.5,para una concentración final de 50 mmol/l y 4 -cloro-fenol 5 mmol/l.•Reactivo Enzimas: Polvo conteniendo enzimas,4-AA y ATP, para las siguientes concentraciones finales: Lipoproteinlipasa (15000 U/l), Glicerolquinasa(1000 U/l), Glicerol 3-P oxidasa (2500 u/l), Peroxida-sa (440 U/l), 4-AA 0.7 mmol/l, ATP 0.18 mmol/l.•Standard : Solución patrón equivalente a 2.00 g/l o2.26 mmol/l de trioleína.

ESTABILIDAD: Estos reactivos son estables hasta la fecha devencimiento indicada en la caja, cuando seconserva en heladera (2-10 ºC).No someter a temperaturas elevadas durantetiempos prolongados.

PRESENTACION: Este equipo permite realizar 100 DET.con la técnicamanual. Se presenta conteniendo:#  Reactivo Buffer: 2 x 50 ml

#  Reactivo Enzimas: 2 unidades#  5 ml de standard.

PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE TRABAJO: Disolver el contenido de un envase conteniendo elReactivo Enzimas en un envase conteniendo elReactivo Buffer. El reactivo de trabajo así preparadoes estable durante 4 semanas en heladera(2-10 °C).

MUESTRA: Suero o plasma heparinizado o plasma EDTA. Laestabilidad de los trigliceridos en la muestra es de3 días a 2-8 °C.

TÉCNICA OPERATORIA MANUAL:

Pipetear en tubos de ensayo:Blanco Standard Muestra

Muestra --- --- 10 µlStandard --- 10 µl ---Rvo. trabajo 1 ml 1 ml 1 mlMezclar e incubar a 37 °C durante 5 minutos o 10 minutosa 25 ºC.

Leer a 520 nm (500-530) en espectrofotómetro llevandoa cero con agua destilada.

*La estabilidad del color es de 30 minutos.

CÁLCULO DE RESULTADOS : Trigliceridos (g/l) = 2.00 A Muestra 

 A Standard

Trigliceridos(mmol/l)= 2.26 A Muestra A Standard

VALORES DE REFERENCIA : Hombres : 0,60 a 1.65 g/lMujeres : 0,40 a 1.40 g/l

8/19/2019 Acetil trigliceridos y Colesterol, Quinoneimina

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ESPECIFICACIONES ANALITICAS DE APLICACIONPARA AA:

PRINCIPIO DE LA REACCIÓN: TrinderTIPO DE REACCIÓN: Punto final únicoDIRECCIÓN DE LA REACCIÓN: PositivaLONGITUD DE ONDA PRIMARIA : 505-520LONGITUD DE ONDA SECUNDARIA : 600-700UNIDADES: g/lTIEMPO DE INCUBACION REACTIVOS (seg): 300TIEMPO DE LECTURA  (seg): 5-20LINEALIDAD (conc): 10

 ABSORBANCIA LÍMITE DEL BLANCO (Abs): 0.300LÍMITE DE ABSORBANCIA (Abs): 2.000RELACIÓN MUESTRA /REACTIVO: 1:100

CALIBRACIÓN: emplear calibradores nivel I y IICONTROL DE CALIDAD: emplear sueros control nivel Iy II. 

OBSERVACIONES : * Se debe tener cuidado con la contaminación del

reactivo de trabajo, ya que los oxidantes colorean el

mismo aumentando los blancos, los reductoresdisminuyen la respuesta de color y los detergentes,metales pesados y cianuros son inhibidoresenzimáticos.* Valores de bilirrubina inferiores a 20 mg/dl y dehemoglobina de hasta 150 mg/dl.

RENDIMIENTO ANALÍTICO PARA LA TECNICAMANUAL: * Linealidad : La reacción de color sigue la ley deBeer al menos hasta 10 g/l. Para valoressuperiores diluir la muestra al medio con soluciónsalina , repetir la determinación y multiplicar elresultado por 2.

BIBLIOGRAFÍA : • Trinder, P. Ann.Clin.Biochem. - 6 (1969) 24.•  Fossati, P .Clin. Chem. -28 (1982) 2077.