Agardiffusion

• Metode standardiseret af Swedish Reference Group for Antibiotics (SRGA)

• Antibiotikadiscs fra Oxoid

• Isosensitest medium A,B og C fra Oxoid

• Tilsåning med 1/100 McF 0,5.

• Medium og antibiotika udvalg er tilpasset bakteriefund.

Agardiffusion

Faktorer af betydning for resultatet:

• Substratet

• Bakterielle faktorer

• Antibiotika relaterede faktorer

• Apparatur

• Menneskelige faktorer

Substratet

• Standardiseret medie

• Næringsmængde understøtter god vækst

• Agartykkelsen. OBS korrekt opbevaring.

• pH påvirker bakterievækst og har ofte stærk indflydelse på antibiotikaeffekt.

• Testet med ATCC stammer overfor en række antibiotika

Agartykkelsens betydning

Bakterielle faktorer

• Bakteriens følsomhed, medfødt/erhvervet resistens

• Lagfasens længde

• Bakteriestammens væksthastighed, hurtig vækst => lille hæmningszone

Antibiotika

• Antibiotikadepot; OBS opbevaring, minus fugt, holdbarhed

• Antal disc i forhold til næringsmængde.

• Evne til at diffundere ud i agar (stort molekyle => lille zone)

• QC-certifikat.

• Afpasses bakteriefund

Inkubation

• Korrekt temperatur og evt. atmosfære (OBS inkubator).

• Undgå for høje stakke af plader. (temperatur).

• Tid fra tilsåning til antibiotika lægges på.

• Tid fra pålægning til inkubation.

• Inkubation 16 – 20 timer.

5

10

15

20

Antibiotikakonc.i agaren

Disk kant (Penicillin)

Hæmningszonediameter i mm 30 mm

Efter 2 t

Efter 4 t

Efter 6 t

Efter 8 t

Zonedannelse og tid

Menneskelige faktorer

• Populationer? (tag fra 5 kolonier)• Tilsåningskvalitet• Standardisering af inokulum • Aflæsning (hvordan og hvor aflæses

zonediameteren/radius)• Kendskab til resistensmekanismer• Løbende oplæring/videreuddannelse• Kvalitetskontrol

Semikonfluerende vækst

Aflæsning agardiffusion

• Zonestørrelser aflæses i mm med skydelære

• OBS: Bakterieslægt/-art

• OBS: Strandbred/klippekant

• OBS: Indikatorantibiotika

• Zonestørrelse relateres til SRGA’s breakpoints

• Oversættes til S, I eller R

80 % hæmning

Zonestørrelse?

Klippekant

Svar på en urindyrkning