AISLAMIENTO DE POLIOVIRUS: TRATAMIENTO DE LA MUESTRAI. INTRODUCCINLos enterovirus pertenecen a la familia Picornaviridae, con ms de 100 serotipos y representan en muchos pases la causa principal de infecciones agudas del Sistema Nervioso Central cuyos porcentajes varan entre 24 y el 95% segn el rea geogrfica.La poliomielitis es la enfermedad infecto-contagiosa que afecta a nios menores de 5 aos y est causada por poliovirus (PV) 1, PV-2 o PV-3 (gnero Enterovirus C), de los cuales el tipo 1 es el que se asla con mayor frecuencia en los casos de paralticos siendo el hombre el nico reservorio conocido.El virus ingres a travs de la cavidad oral y la multiplicacin primaria tiene lugar en la bucofaringe o en el intestino, y posteriormente hace viremia corta y llega al sistema nervioso central.El diagnstico se confirma al aislar e identificar el poliovirus en muestras biolgicas como heces, LCR, etc., as como detectar anticuerpos en la sangre.Los poliovirus se aslan en cultivos de clulas renales de rin de mono (VERO) o fibroblastos a partir de muestras farngeas durante los primeros das de la enfermedad y de las heces por varias semanas.II. OBJETIVOSAdiestrar al estudiante en la toma de muestra de heces y tratamiento de la muestra para el aislamiento de poliovirus en cultivo celular y su identificacin.III. MATERIAL Y MTODOS3.1 MATERIAL Heces PBS 1x o Hanks 1x con antibiticos Frascos de vidrio de boca ancha 50 mL Cloroformo Perlas de vidrio Tubos con tapa rosca de 10x150 mm Tubos de centrfuga Pipetas de 5 y 10 mL Viales Bagueta Centrfuga Balanza3.2 PROCEDIMIENTO3.2.1 Toma de muestraRecolectar de 4 a 8 gramos de heces en recipiente con tapa hermtica, o hisopado rectal que se coloca en medio de transporte.Guardar a -20C hasta el momento de su procesamiento.3.2.2 Tratamiento de la materia fecalColocar 15 mL de PBS 1x o Hanks 1X con antibiticos al recipiente de boca ancha.Aadir al frasco las perlas de vidrio.Colocar aproximadamente 1 gramo de heces con ayuda de una bagueta de vidrio al frasco y disgregar las heces.Colocar el frasco con un vibrador durante 10 minutos.Transferir el contenido sin las perlas a un tubo de centrifuga.Centrifugar a 7000 o 10000 rpm durante 10 minutos.Separar el sobrenadante y distribuirlo en volmenes iguales en dos tubos con tapa rosca de 10 x 150 mm.A cada uno de los sobrenadantes, agregar igual volumen de cloroformo y agitar manualmente durante 2 a 3 minutos.Colocar los tubos con refrigeracin a -5C durante 15 horas.Centrifugar los tubos a 2000 rpm durante 30 a 40 minutos.Separar el sobrenadante y distribuirlo en viales estriles debidamente rotulados.Conservar a -4C hasta su aislamiento en lneas celulares.IV. RESULTADO15 mL de PBS + 1gr de hecesSobrenadante obtenido para prxima inoculacin

V. COMENTARIOEl aislamiento y la identificacin del poliovirus de las heces es uno de los mejores mtodos para confirmar un diagnstico de poliomielitis. Las muestras de heces de casos sospechosos de esta enfermedad deben conseguir tan pronto como sea posible, preferiblemente dentro de los 7 primeros das o al menos durante los primeros 14 das despus de la aparicin de la enfermedad.La colecta del sobrenadante estril de las muestras tratadas, segn el protocolo, se puede usar para inocular en tubos de cultivos celulares. Estos son revisados durante 5 das para observar una posible aparicin del virus bajo el aspecto citopatognico.VI. REFERENCIAS http://www.scielosp.org/pdf/resp/v87n5/03_colaboracion_especial2.pdf

DIAGNOSTICO DE RABIA: INOCULACIN EN RATONES LACTANTES

I. INTRODUCCINLa rabia es una zoonosis importante para la cual se han estandarizado internacionalmente las tcnicas de diagnstico. Como en la rabia no existen lesiones patognomnicas visibles, el diagnstico solo se puede hacer en el laboratorio. Las tcnicas de laboratorio se realizan preferiblemente con tejido del sistema nervioso central (SNC) extrado a travs del crneo. Se debe probar un conjunto de muestras del SNC, y el tallo cerebral es el componente ms importante de las muestras.La rabia est causada por un virus neurotrpico del gnero Lyssavirus de la familia Rhabdoviridae y se transmite a todos los mamferos. Como tambin se transmite a los humanos por inoculacin o por inhalacin del virus infeccioso, todo el material sospechoso de infeccin debe ser manejado bajo condiciones apropiadas de seguridad especificadas por la Organizacin Mundial de la Salud (OMS)II. OBJETIVOS2.1 Familiarizar al alumno con las tcnicas de aislamiento e identificacin del virus Rabia.III. MATERIAL Y MTODOS3.1 Materiales Asta de Ammon de perro que se presume con Rabia. Mortero SSF + antibiticos (100ppm de estreptomicina y 1000 UI/m L de penicilina). Tubo de ensayo. Ratones lactantes Centrfuga3.2 Mtodos Extraer el asta de Ammon de perro que se presume con rabia. Pesar 0,3 g de la muestra de asta de Ammon, colocarlo en un mortero y triturar. Agregar 1,2 m L de SSF + antibiticos (100ppm de estreptomicina y 1000 UI/m L de penicilina), homogenizar y obtener una suspensin. Transferir la suspensin a un tubo y dejar reposar en refrigeracin por 1 hora. Centrifugar a 2000rpm por 10 minutos. Separar el sobrenadante. Inocular por va intracerebral 0,03 m L el sobrenadante a cada ratn lactante.IV. COMENTARIOSEl virus de la rabia aparentemente se multiplica dentro delmsculo estriadodel sitio de inoculacin.Luego penetra alsistema nervioso perifricosen las uniones neuromusculares (las glicoproteinas G de la membrana se unen a los receptores nicotnicos de la acetilcolina) y se propaga a lo largo de los nervios hasta elsistema nervioso central. Ah se multiplica casi exclusivamente en lasustancia grisy puede entonces propagarse pornervios autonmicoshasta las glndulas salivales y otros tejidos como la piel, medula suprarrenal, hgado, msculo estriado, corazn y pulmn.V. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS http://www.oie.int/fileadmin/Home/esp/Publications_%26_Documentation/docs/pdf/2.2.05_Rabia.pdf http://publicaciones.ops.org.ar/publicaciones/publicaciones%20virtuales/cdmanualRabia/vigilancialaboratoriodiagnostico.html