aislamiento de un bacteriófago
DESCRIPTION
Aislamiento de un bacteriófago. Dr. Jesús Lee-Borges Dr. Liza Jiménez Dr. José M. Planas Rivera Dr. José A. Cardé-Serrano Universidad de Puerto Rico en Aguadilla. Objetivo. Utilizar dos métodos para aislar el bacteriófago de las placas preparadas en el laboratorio anterior. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/1.jpg)
Aislamiento de un bacteriófago
Dr. Jesús Lee-BorgesDr. Liza JiménezDr. José M. Planas RiveraDr. José A. Cardé-SerranoUniversidad de Puerto Rico en Aguadilla
![Page 2: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/2.jpg)
Objetivo
Utilizar dos métodos para aislar el bacteriófago de las placas preparadas en el laboratorio anterior.
![Page 3: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/3.jpg)
Bacteriófago M13
![Page 4: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/4.jpg)
Datos Básicos Filamentoso DNA circular hebra
sencilla 6400 pares de
bases de largo El genoma codifica
para un total de 10 genes (nombrados con los números romanos del I al X)
![Page 5: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/5.jpg)
![Page 6: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/6.jpg)
![Page 7: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/7.jpg)
Datos Básicos (cont.)
Gen VIII codifica para las principales proteinas estructurales de la particula del bacteriofago.
Gen III codifica para las proteinas (minor proteins) de la capsula.
![Page 8: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/8.jpg)
Objetivo
Contar las placas de bacteriófagos que son visibles en la placa de agar. Estos son los que visualizaremos como puntos claros en el área opaca de la placa de agar.
![Page 9: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/9.jpg)
Ensayo en placas PFU (Unidades de
formación de placas)
Placa – Región clara en el césped de bacterias Infección lítica Lisis de la bacteria
PFU = # de placas x factor de dilución 30 – 300
![Page 10: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/10.jpg)
Parte Práctica I
Utilizarán 2 placas (las que poseen las diluciones de 10-5 y 10-6) para extraer el bacteriófago utilizando “Tryptone broth” y centrifugación.
![Page 11: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/11.jpg)
Protocolo Tomar 5 ml de Tryptone broth y lavar la placa
de 10-5 por 5 minutos en el “orbital shaker” a temperatura ambiente.
Sacar los 5 ml de Tryptone broth de la placa de 10-5 y transferirlos a la placa de 10-6 y lavar por 5 minutos en el “orbital shaker” a temperatura ambiente.
Sacar los 5 ml y colocarlos en un tubo de ensayo esterilizado.
Centrifugar por 20 minutos en la centrifugadora clínica.
Pasar el sobrenandante a un tubo de ensayo estéril
Guardar a 4°C
![Page 12: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/12.jpg)
Orbital Shaker
![Page 13: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/13.jpg)
Centrífuga Clínica Nevera 4oC
![Page 14: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/14.jpg)
Parte Práctica II Utilizar la placa con
la dilución de 10-4, o la placa donde tengan “plugs”, para extraer una placa del bacteriófago.
Utilice la punta de una micropipeta y centrifugue.
![Page 15: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/15.jpg)
Protocolo II Sacar con una punta de una micropipeta una
placa de un tamaño grande. OJO UNA SOLA PLACA.
Colocar la placa en 5 ml de “Tryptone broth” y centrifugar por 20 minutos.
Pasar el sobrenadante a un tubo de ensayo estéril.
Guardar a 4°C. En el sobrenadante se encuentra el bacteriófago
en el pellet los residuos de bacteria muertas. El bacteriófago logró hacer lisis y matar la bacteria.
![Page 16: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/16.jpg)
OJO
Los tubos de ensayo con el “Tryptone broth” contienen 10ml.
Al finalizar el laboratorio usted debe tener dos tubos de ensayo, claramente rotulados, con aproximadamente 5 ml cada uno y el bacteriófago.
![Page 17: Aislamiento de un bacteriófago](https://reader036.vdocuments.net/reader036/viewer/2022081506/56813d45550346895da70410/html5/thumbnails/17.jpg)
¿Preguntas?