akciğer adenokarsinomlarında egfr mutasyon ve eml4-alk translokasyon analizi
DESCRIPTION
Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi. B. Öz, Ş. Batur, T. Öztürk, Ö. Aydın, K. Kaynak, A.Turna , A. Demirkaya, S. Erdamar Çetin, N. Mandel İÜ Cerrahpaşa T F PatolojiAD İÜ Cerrahpaşa T F Göğüs Cerrahisi AD VKV Amerikan Has., Medikal Onkoloji. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/1.jpg)
Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon
Analizi
B. Öz, Ş. Batur, T. Öztürk, Ö. Aydın, K. Kaynak, A.Turna, A. Demirkaya, S. Erdamar Çetin, N. MandelİÜ Cerrahpaşa T F PatolojiADİÜ Cerrahpaşa T F Göğüs Cerrahisi ADVKV Amerikan Has., Medikal Onkoloji
![Page 2: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/2.jpg)
Akciğer kanserlerinde kişiye özgü tedavi seçimi
Bir çok kanser türlerinde «Tek tip tedavi » dönemi geride kaldı.
Akciğer kanseri , özellikle de adenokarsinom, «kişiye özgü tedavi» için bir model oluşturmuştur.
Bugünkü uygulamalar yanı sıra yakın gelecek için de büyük umutlar vardır.
![Page 3: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/3.jpg)
???
?%45-49??
K-Ra
s %
30
ALK %
4BRAF % 3PDGFR
MET %1
EGFR %10-15
PI3KCA
HER2 %
3
Erlotinip
gefitinip
Glee
vec
crizotinibPLX4032GSK2118436
BKM 120
Transtzumab
NeratinibBIBV 2992
Docetaksel +/+_AZD6244
BEZ235 +
Ner
atini
bAf
atini
b,
Tiva
ntini
p
Akciğer Adenokarsinomlarında yönlendirici mutasyonlar
![Page 4: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/4.jpg)
bilinmeyen
KRAS
EGFR
ALKBRAF
HER2
PIK3CAAkt
Akciğer Adenokarsinomlarında hedefe yönelik tedavi
Klinik uygulama
Yakın gelecekte uygulamaya girecekler
![Page 5: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/5.jpg)
EGFR Sinyal Yolağı
Epitelyal farklılaşma ve fonksiyonunda rol oynayan transmembran tirozin kinaz reseptörlerinden
EGF ya da diğer ligandların bağlanması
TK aktivasyonu ilePI3K/Akt yolağı
Ras/Raf/MAPK yolağı aktiflenir.
![Page 6: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/6.jpg)
EGFR Gen Mutasyonu: TK bölgesinde aktivasyon -2004
![Page 7: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/7.jpg)
Nat Rev Cancer. 2007; 7: 169-81.
Akc Adenokarsinomlarında EGFR-TKI duyarlığı ile ilişkili EGFR Mutasyonları
![Page 8: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/8.jpg)
Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR araştırılması
EGFR mutasyonuEGFR protein ekspresyonu
EGFR gene copy sayısı
Flöresan in-situ hibridizasyon (FISH)
DNA ekstraksiyonu,
RT-PCR sequencing
pyrosequencing
İmmunohistokimya (IHK)
![Page 9: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/9.jpg)
ALK mutasyonu
=Anaplastik large cell lenfoma kinaz
ALK somatik hücrelerde (nöral hücre hariç)
%3-7 Adeno/KHDAKGenç, hasta sigara içmemişEGFR «-» hastalarSolid büyüme paterni, taşlı yüzük hücreli ve müsinöz ADenoKa
![Page 10: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/10.jpg)
ALK 2p23’da , EML4 2p21’ da
İnsersiyon yada translokasyon
ALK mutasyonu
Nature 448:561, 2007
yada
Insersiyon
Translokasyon
![Page 11: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/11.jpg)
EML-4/ALK mutasyonu
Yöntem;İHK
FİSH
RT-PCR
![Page 12: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/12.jpg)
Akc Adenokarsinomlarında prediktif belirleyicilerin saptanmasında önerilen algoritma
Adenokarsinom, KHDAK, AC fenotipi
( IHK)
EGFR mutasyon analizi,KRAS (isteğe bağlı) mutasyon
analizi
İleri evre/Tüm evrelerde
Negatif
ALK FISH
ALK IHK (???)
pozitif
![Page 13: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/13.jpg)
Amaç:
Akciğer adenokarsinomlarında moleküler belirteçlerin Türk hastalardaki fenotipik özelliklerini belirlemek ve dünya literatür bilgileri ile karşılaştırmak,
Moleküler çalışmanın materyal tiplerinin uygulanabilirliklerini araştırmak,
Adenokarsinom histopatolojik alt tipleri ile EGFR mutasyonu ilişkisini incelemek,
ALK mutasyonu araştırma yöntemini belirlemek FİSH
İmmunhistokimya
![Page 14: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/14.jpg)
Materyal-Metod 1
Aralık 2010- Ocak 2012
İ.Ü. CTF Patoloji AD’ nda veya dış merkezde tanı almış primer ya da metastatik akciğer adenokarsinomlu olgulardan EGFR mutasyon analizi istenen 100 olgu
EML4-ALK translokasyonu floresan in situ hibridizasyon (FISH) analizi istenen 29 olgu
K-ras istenen 24 olgu
![Page 15: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/15.jpg)
Materyal-Metod 2
H+Eosin boyalı lamlardan % 50-75 tümör alanı içeren doku seçilerek mevcut parafin bloklardan ependonf tüpe 8-10 m kalınlığında 5-6 kesit alınmıştır.
EGFR ve K- ras mutasyon analizi için: Kesitlerden elde edilen total genomik DNA, EGFR geninin exon18 exon19 exon20 ve exon21 bölgelerini içeren kısmının ve K-ras için ex12,13 ve 61 bölgelerini içeren kısmının PCR ile amplifikasyonunda kullanılmıştır.
Amplifikasyon ürünleri konvansiyonel (dNTP) dizi analizi incelemesine alınmıştır. (Direkt sekanslama ve kapalı sistem mikro array)
![Page 16: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/16.jpg)
Materyal-Metod 3
H+Eosin boyalı lamlardan % 50-75 tümör alanı içeren doku seçilerek mevcut parafin bloklardan ependonf tüpe 8-10 mikronmetre kalınlığında 5-6 kesit
EML4-ALK değerlendirilmesinde mevcut parafin bloklardan
İmmunhistokimyasal inceleme (Abcam 5A4) primer antikoru
FISH analizi WYSIS-ABBOTT break apart probu
![Page 17: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/17.jpg)
Akc Adenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Patoloji deneyimi
Aralık 2010-ocak 2012
EGFR mutasyonu:100 Adenokarsinom
%40/ %60
yaş 22-88(24-88/ 22-78)
median 59,6(58,9/60,1)
![Page 18: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/18.jpg)
Akc Adenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Moleküler Patoloji deneyimi
Aralık 2010- ocak 2012
%32 metastatik odaktan
%68 Primer odaktan
Materyalin çoğunluğu rezeksiyon materyali (lobektomi,pnömonektomi)
Tüm materyal tiplerinden (sitoloji-küçük bx) yeterli DNA
elde edilebildi !
23%
14%
12%11%
5%
3%
32%
Lobektomi Bronş bxİİAB Wedge Pnö-monek-tomi Tru cut bxMetastaz
3%
6%
1%
1%
![Page 19: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/19.jpg)
Akc Adenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Patoloji deneyimi
Aralık 2010-Ocak 2012
11/100 pozitif %11
10 / 1
9 Ex 19 ve 2 Ex 21’de
8 (%72,8) sigara öyküsü yok
![Page 20: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/20.jpg)
Akc Adenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Patoloji deneyimi
Aralık 2010- Ocak 2012
Olgu Yaş Cins Sigara Organ Alınma Şekli Histolojik tip- patern EGFR
1 51 K 20y 120p-y AC Wedge rezeksiyon Lepidik patern baskın mikst Exon19
2 77 K Yok AC Lobektomi Lepidik patern baskın mikst Exon19
3 46 E Yok AC Lobektomi Lepidik patern baskın mikst Exon19
4 55 K 4 y 36p-y AC Lobektomi Asiner patern baskın mikst Exon19
5 62 K Yok Kemik-vertebra Eksizyon Adenokarsinom metastazı Exon19
6 60 K Yok AC Lobektomi Asiner patern baskın mikst Exon19
7 84 K Yok AC Bronkoskopik biopsi Adenokarsinom Exon19
8 45 K 20yıl Kemik-vertebra Tru-cut Adenokarsinom metastazı Exon21
9 39 K Yok AC İnce iğne aspirasyon biopsi
Küçük hücre dışı karsinom Exon19
10 78 K Yok AC Wedge rezeksiyon Adenokarsinom mikst Exon19
11 60 K Yok Beyin-oksipital Eksizyon Adenokarsinom metastazı Exon21
![Page 21: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/21.jpg)
Nat Rev Cancer. 2007; 7: 169-81.
Akc adenokarsinomlarında EGFR-TKI duyarlığı ile ilişkili EGFR Mutasyonları
2 olgu9 olgu
![Page 22: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/22.jpg)
Mutasyon analizi yapılan olgularda histopatolojik paternler
Asiner ve lepidik paternde yüksek oranda EGFR pozitifliği
%37 Asiner ve lepidik patern;
Pozitiflerin %63,6sı asiner ve lepidik pattende
Lepidik tek başına
bakıldığında %30,7
24
13
13222
19
16
9
ASİNER
SOLİD
LEPİDİK
PAPİLLER
MİKROPAPİLLER
MÜSİNÖZ
SİTO
BX KÜÇÜK
?
3
4
1
1
2
![Page 23: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/23.jpg)
Akc Adenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Patoloji deneyimi
Aralık 2010- Ocak 2012
Kras mutasyonu:
24 olguda araştırıldı.(EGFR ile eş zamanlı veya ardından)
5olgu pozitif (% 20,83)
bu olgular EGFR ve ALK negatif
3’ü Müsinöz, 1’ i asiner
![Page 24: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/24.jpg)
Akc Adenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Patoloji
deneyimi Mart 2011- ocak 2012
ALK rearajmanı:29 KHDAK olgusu %96AdenokarsinomFİSH yöntemi (Break-apart –Wysis Abbott moleküler) 26 olgu IHKALK reaarangementi %100 negatif, 1 olguda amp : polizomi ALK+ kabul edilemez
~250 kb ~300 kb
t(2;5) ALK genebreakpoint region
2p23 regionTelomere Centromere
3’ 5’
~250 kb ~300 kb
t(2;5) ALK genebreakpoint region
2p23 regionTelomere Centromere
3’ 5’
![Page 25: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/25.jpg)
ALK mutasyonu (FİSH)
yaş aralığı: 22-78, ort :58
%62.1 %37.9 29 olgudan %86.2’ sinde değerlendirilen hücrelerde 2p23 (ALK) bölgesinde ilişkin translokasyon gözlenmemiştir. %13.8’ hücre yetersizliği nedeniyle sonuç -
![Page 26: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/26.jpg)
Sonuçlar: 1 Çalışmamız ülkemizde akciğer adenokarsinomlarında hedefe yönelik tedavi için genetik analiz sonuçlarını veren ilk geniş seridir.
%11 oranında EGFR mutasyon pozitifliği Batı kökenli toplumlarla uyumlu;
Tüm dünyadaki gibi ve sigara içmeyenlerde (%90)
EGFR (+) hastalarla araştırılan grupla yaş farkı yok.
Hem rezeksiyon hem de metastatik odaktan çalışılabildi, sitolojik materyal ve hücre bloklarında da sonuç alınabildi.
![Page 27: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/27.jpg)
Sonuçlar: 2
Tüm EGFR pozitiflikleri TKI’ne duyarlılığı + etkileyen mutasyondu (% 81 Ex 19)
En sık Lepidik patendeki olgularda EGFR mutasyonu + (%30.7)
ALK mutasyon değerlendirmesinde FİSH yöntemi
ALK «+» olgu saptanmadı. Kras + olguların hiç biri (EGFR ve ALK pozitif değil
Kras + olguların %60’ı sigara içici
![Page 28: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/28.jpg)
Sonuçlar: 3
Her türlü rezeksiyon yada hücre bloğu olan materyal çalışılabildi.
Dokunun büyüklüğü, tümör miktarı, tümörün özellikleri yanı sıra, uygun DNA elde edebilmek yada FİSH yöntemini uygulayabilmek için uygun fiksasyon ve doku takibi çok önemlidir.
![Page 29: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/29.jpg)
Cerrahpaşa Tıp Fakültesi – Patoloji Anabilim Dalı-Moleküler Patoloji
![Page 30: Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi](https://reader035.vdocuments.net/reader035/viewer/2022082205/56814aa2550346895db7b3c7/html5/thumbnails/30.jpg)
Teşekkür ederim.