AMONIACO (NH3) Método Enzimático - UV MANUAL PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Amoníaco en plasma. Este producto es adecuado para su utilización en Manual. No. Cat. AM 1054 R1a. Reactivo 20 x 3 ml 20 x 3 ml R1b. Tampón 70 ml R2. GLDH 1,0 ml CAL. Patrón 5,5 ml RELEVANCIA CLÍNICA La mayor fuente de amoniaco en circulación es el tracto gastrointestinal. En condiciones normales, el amoniaco se metaboliza a la urea por las enzimas hepáticas. Muchas enfermedades, tanto heredadas como adquiridas, causan un incremento en los niveles de amoniaco (hiperamonemia). Las deficiencias heredadas de las enzimas del ciclo de la urea son la mayor causa de hiperamonemia en niños. La hiperamonemia adquirida está provocadas por una enfermedad hepática, insuficiencia renal o el síndrome de Reye. Un nivel de amoniaco elevado resulta tóxico para el sistema nervioso central. PRINCIPIO(1) GLDH αααα-oxoglutarato + NH3 + NADH glutamato + NAD+ El amoníaco se combina con α-oxoglutarato y NADH en presencia de glutamato deshidrogenasa (GLDH) para formar glutamato y NAD+. La correspondiente disminución de la absorbancia a 340 nm es proporcional a la concentración de amoníaco en plasma.(1) MUESTRA(2) Plasma heparinizado o EDTA plasma. Se obtiene sangre venosa sin estancar y se conserva en un baño de hielo. El plasma se separa dentro de 30 min. El ensayo de amoníaco debería llevarse a cabo inmediatamente. El plasma puede conservarse durante 2 horas a +4°°°°C. COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes Concentración inicial de las soluciones R1a. Reactivo NADH 0,16 mmol/l αααα-oxoglutarato 2 mmol/l R1b. Tampón Trietanolamina 0,15 mol/l, pH 8,6 R2. GLDH 1200 U/ml CAL. Patrón See lot specific insert

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. Las soluciones R1b, R2 y CAL contienen azida sódica. Evitar su ingestión o contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y el plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se desheche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Por favor, desechar todos los materials Biológicos y Químicos de acuerdo a las pautas locales. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Reactivo Reconstituir el contenido de un vial de Reactivo R1a con

3 ml de Tampón R1b. Es estable 24 horas entre +15 y +25°°°°C ó 2 días entre +2 y +8°°°°C.

R1b. Tampón

Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad especificada cuando se conserva entre +2 y +8°°°°C.

R2. GLDH

Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad especificada cuando se conserva entre +2 y +8°°°°C.

CAL. Patrón

Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad especificada cuando se conserva entre +2 y +8°°°°C.

R1 = Reactivo/Tampón R2 = GLDH MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo Tampón GLDH Patrón MATERIALES REQUERIDOS PERO NO PROPORCIONADOS Controles Randox de Amonio Etanol: NIvel 1 (Cat. No. EA 1366) Nivel 2 (Cat. No. EA 1367) Nivel 3 (Cat. No. EA 1368)

MANUAL - AMONIACO - AM 1054 PAGINA 2 DE 2

PROCEDIMIENTO Longitud de onda: 340 nm Cubeta: 1 cm de espesor Temperatura: 25/30/37°°°°C Medición: Frente al aire Procedimiento Macro Pipetear en la cubeta: Blanco de Patrón Muestra Reactivo Muestra --- --- 0,2 ml Agua destilada 0,2 ml --- --- Patrón --- 0,2 ml --- Reactivo (R1) 3,0 ml 3,0 ml 3,0 ml Mezclar, dejar reposar durante 5 min. Leer la absorbancia inicial de la muestra y del blanco (A1). GLDH (R2) 0,02 ml 0,02 ml 0,02 ml Mezclar e incubar durante 5 min. Leer la absorbancia final de la muestra y del blanco (A2). Procedimiento Semi Micro Pipetear en la cubeta: Blanco de Patrón Muestra Reactivo Muestra --- --- 0,1 ml Agua destilada 0,1 ml --- --- Patrón --- 0,1 ml --- Reactivo (R1) 1,5 ml 1,5 ml 1,5 ml Mezclar, y dejar reposar durante 5 min. Leer la absorbancia inicial de la muestra y del blanco (A1). GLDH (R2) 0,01 ml 0,01 ml 0,01 ml Mezclar e incubar durante 5 min. Leer la absorbancia final de la muestra y del blanco (A2). CONTROL DE CALIDAD Los controles Randox de Amonio Etanol Nivel 1, Nivel 2 y Nivel 3 se recomiendan para el control diario de calidad Deberían utilizarse como mínimo dos niveles de controles una vez al día. Los valores obtenidos deberían entrar dentro de un rango determinado. Si estos valores se salen de ese rango aun habiéndolo repetido, se deben seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar los ajustes del instrumento y el foco de luz. 2. Comprobar la limpieza de todo el equipo. 3. Comprobar el agua y la presencia del algún posible agente

contaminante que pueda interferir en los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción. 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y los componentes del

mismo. 6. Contactar con el Servicio Técnico de Laboratorios Randox. Irlanda del Norte (028) 94422413.

CÁLCULOS Ablanco = Blanco A1 - Blanco A2 Amuestra = Muestra A1 - Muestra A2 Utilizando un patrón: Amuestra - Ablanco Conc. de x Patrón de conc. Amoníaco = Apatrón - Ablanco INTERFERENCIA La hemólisis interfiere con el análisis. En muestras normales se observa un pequeño cambio de absorbancia. Esto puede ser aumentado añadiendo 0,3 ml de muestra en vez de 0,2 ml. para el procedimiento macro y 0,15 ml de muestra en vez de 0,1 ml para el procedimiento semi micro. Para utilizar un método completamente automatizado de amoníaco recomendamos No. Cat. AM 1015. VALORES NORMALES (2) Amoníaco en plasma: 10 - 47 mol/l 0,17 -0,80 g/ml Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. LINEALIDAD El método es lineal hasta 1180 µmol/l (20 µg/ml). REFERENCIAS 1. Dewan J.G., Biochem J., 1938; 32: 1378. 2. Mondzac A., Ehrlich G.E., Seegmiller J.E., J Lab Clin. Med.,

1965; 66: 526. Revisado el 26 Abril 2010 bm

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