7-uvvis.pdf spekrofotometrija instrumentalne metode analiza hemija prirodnih organskih...
Post on 01-Jan-2016
170 Views
Preview:
DESCRIPTION
TRANSCRIPT
Načelo metode
ULTRALJUBIČASTA I VIDLJIVA (UV-Vis) SPEKTROFOTOMETRIJA
� molekulska apsorpcijska spektroskopija
� mjerenje količine apsorbirane svjetlosti u UV (190-380 nm)
i vidljivom području (380-800 nm)
� apsorpcija UV i Vis zračenja u organskim molekulama
prijelaz e- iz osnovnog u jednu od vibracijskih i rotacijskih razina pobuđenog elektronskog energijskog stanja
� valna duljina pri kojoj molekula apsorbira ovisi o jakosti kojom su vezani njezini e-
� kromofori - nezasićene organske funkcionalne skupine
� auksokromi - grupe s jednim ili više nesparenih elektronskih parova
� batokromni i hiperkromni pomak
Čimbenici koji utječu na apsorpciju u UV/Vis području
Lambert-Beerov zakon
A = - log T = log Io / I = k × c × l
k = ε = molarna apsorptivnost
A = ε × c × l
UV-Vis-spektrofotometar
• izvor zračenja: vodikova ili živina lampa, volframova lampa
• monokromator: prizma ili rešetka s ulaznom i izlaznom pukotinom
• nosač uzorka
• detektor zračenja
UV-Vis-spektrofotometar
‘Diode array’ instrument
� skala valnih duljina
• otopina holmijeva perklorata• dozvoljeno odstupanje ±1nm (UV) i ± 3 nm (Vis)
Kalibracija instrumenta
UV spektar otopine holmijeva perklorata
� mjerna skala
• otopina kalijeva dikromata• dozvoljeno odstupanje
apsorbancije ± 0.01
UV spektar otopine kalijeva dikromata
� rezolucija (za kvalitativnu analizu)
• kontrolirana širinom pukotine • otopina toluena u heksanu,• omjer maksimuma (269 nm) i minimuma (266 nm)
1.kvalitativna ispitivanja
� potvrda identiteta lijekova: Ph. Eur.- Second identification
� u monografiji je definirana valna duljina maksimuma (± 2 nm) i specifična apsorbancija ili omjer apsorbancija na različitim valnim duljinama
specifična apsorbancija
1%
Primjena UV/Vis spektrofotometrije u analitici lijekova
A1cm = 10εεεε/Mr
apsorbancija otopine koja u 100 ml sadrži 1 g ispitivane tvari, debljina sloja 1cm
MERCAPTOPURINE
Mercaptopurinum
IDENTIFICATION
A. Dissolve 20 mg in 5 ml of dimethyl sulphoxide R
and dilute to 100 ml with 0.1 M hydrochloric acid.
Dilute 5 ml of the solution to 200 ml with 0.1 M
hydrochloric acid. Examined between 230 nm and
350 nm (2.2.25), the solution shows only one
absorption maximum, at 325 nm.
Primjeri u Ph. Eur.
MORPHINE HYDROCHLORIDE
Morphini hydrochloridum
IDENTIFICATION
A. Dissolve 10 mg in water R and dilute to 100.0
ml with the same solvent. Examined between 250
nm and 350 nm (2.2.25), the solution shows a
single absorption maximum, at 285 nm. The
specific absorbance at the maximum is about 41.
IBUPROFEN
Ibuprofenum
IDENTIFICATION
B. Dissolve 50.0 mg in a 4 g/l solution of sodium hydroxide
R and dilute to 100.0 ml with the same alkaline solution.
Examined between 240 nm and 300 nm (2.2.25), using a
spectrophotometer with a band width of 1.0 nm and a scan
speed of not more than 50 nm/min, the solution shows a
shoulder at 258 nm and two absorption maxima, at 264
nm and 272 nm. The ratio of the absorbance measured at
the maximum at 264 nm to that measured at the shoulder at
258 nm is 1.20 to 1.30. The ratio of the absorbance measured
at the maximum at 272 nm to that measured at the shoulder
at 258 nm is 1.00 to 1.10.
UV spektar hidrokortizona i betametazona
λλλλmax = 240 nmA1cm
435
390
1%
2. ispitivanje čistoće lijekova
OXYTETRACYCLINE
Oxytetracyclinum
TESTS
Absorbance (2.2.25). Dissolve 20.0 mg in buffer solution pH 2.0
R and dilute to 100.0 ml with the same buffer solution. Dilute
10.0 ml of the solution to 100.0 ml with buffer solution pH 2.0 R.
The specific absorbance determined at 353 nm is 290 to 310,
calculated with reference to the anhydrous substance.
a) specifična apsorbancija ( )
� ispitivano onečišćenje i ljekovita tvar imaju apsorpcijski maksimum na različitim valnim duljinama ili različitu specifičnu apsorbanciju na istoj valnoj duljini
A1cm1%
b) apsorbancija (A)
• ne smije prijeći određenu vrijednost
• ne smije biti veća od apsorbancije poredbene otopine koja sadrži gornju dozvoljenu količinu onečišćenja
ADRENALINE TARTRATE
Adrenalini tartras
TESTS
Adrenalone. Dissolve 50.0 mg in
0.01 M hydrochloric acid and dilute
to 25.0 ml with the same acid. The
absorbance (2.2.25) of the
solution measured at 310 nm is
not greater than 0.10.
RESERPINE
Reserpinum
TESTS
Oxidation products. Dissolve 20
mg in glacial acetic acid R and
dilute to 100.0 ml with the same
acid. The absorbance (2.2.25)
measured immediately at 388 nm
is not greater than 0.10.
TESTS
Absorbance (2.2.25). The absorbance of solution S
measured at 440 nm is not more than 0.10. (This limit
corresponds to 0.035 per cent of omeprazole
impurity F or omeprazole impurity G).
IMPURITIES
OMEPRAZOLE
Omeprazolum
F. R = OCH3, R′ = H: 1,3-dimethyl-8-methoxy-12- thioxopyrido
[1′,2′:3,4]imidazo[1,2-a]benzimidazol-2(12H)-one,
G. R = H, R′ = OCH3 : 1,3-dimethyl-9-methoxy-12-
thioxopyrido[1′,2′:3,4]imidazo[1,2-a]benzimidazol-2(12H)-one.
c) omjer apsorbancija (A1/A2) na dvije različite valne duljine (ispitivana tvar, onečišćenje)
BACITRACIN
Bacitracinum
TESTS
Bacitracin F and related substances. Dissolve 0.15 g in
0.05 M sulphuric acid and dilute to 100.0 ml with the same
acid. Dilute 2.0 ml of this solution to 10.0 ml with 0.05 M
sulphuric acid. The ratio of the absorbance (2.2.25) at
290 nm to that at 252 nm is not greater than 0.20.
• Kvantitativna analiza lijekova
� određivanje pomoću specifične apsorbancije
lA
Ac
cm ×=
11%
� određivanje pomoću poredbene otopine
� određivanje pomoću kalibracijske krivulje
• kalibracijska krivulja priređena pomoću poredbenih otopina
• linearan odnos apsorbancije i koncentracije
• sadržaj ispitivane tvari odredi se interpolacijom
Kalibracijska krivulja
CHLORAMPHENICOL
Chloramphenicolum
ASSAY
Dissolve 0.100 g in water R and dilute to 500.0 ml
with the same solvent. Dilute 10.0 ml of this solution
to 100.0 ml with water R. Measure the absorbance
(2.2.25) at the maximum at 278 nm.
Calculate the content of C11H12Cl2N2O5 taking the
specific absorbance to be 297.
Primjer u Ph. Eur.
DIENESTROL
Dienestrolum
ASSAY
Dissolve 25.0 mg in ethanol R and dilute to 100.0 ml with
the same solvent. To 5.0 ml of this solution add 10 ml
of ethanol R and dilute to 250.0 ml with 0.1 M sodium
hydroxide. Prepare a reference solution in the same
manner using 25.0 mg of dienestrol CRS. Measure the
absorbance (2.2.25) of the solutions at the maximum at
245 nm.
Calculate the content of C18H18O2 from the measured
absorbances and the concentrations of the solutions.
Određivanje sadržaja levonorgestrela; USP 30
� derivatizacija analita prije određivanja
• analiza adrenalina u prisutnosti lokalnih anestetika
Povećanje selektivnosti i osjetljivosti u kvantitativnoj analizi
Primjer
apsorpcijski maksimumi u istom UV području
Fe λλλλmax = 540 nm
kompleks adrenalina s Fe2+
� derivatizacija onečišćenja prije kvantitativne analize
CARBASALATE CALCIUM
Carbasalatum calcicum
TESTS
Salicylic acid. In a 100 ml volumetric flask, dissolve 0.200 g in 80
ml of water R and add 10 ml of a 10 g/l solution of ferric nitrate R
in a 80 g/l solution of dilute nitric acid R. Dilute to 100.0 ml with
water R. Immediately after preparation, measure the absorbance
(2.2.25) of the solution at the maximum of 525 nm using water R
as the compensation liquid. The absorbance is not greater than
0.115 (0.5 per cent, expressed as salicylic acid).
Primjer
� pomak apsorpcijskog maksimuma podešavanjem pH vrijednosti otopine analita
λλλλmax = 299 nm
Primjer
• analiza acetilsalicilne kiseline u prisutnosti kofeina i dekstropropoksifena
• značajan utjecaj kod širokih apsorpcijskih maksimuma slabog nagiba
� derivativni spektri
Apsorpcijski spektri cefotaksim natrija (A) i cefadroksil monohidrata (B)
cefotaksim natrij
cefadroksil monohidrat
Prva derivacija Druga derivacijaapsorpcijskih spektara
cefotaksim natrija (A) i cefadroksil monohidrata (B)
4. određivanje fizikalno-kemijskih svojstava lijekova(pretformulacijska i formulacijska istraživanja)
a) određivanje topljivosti lijeka
• otapanje lijeka u vodi ili puferu i mjerenje apsorbancijenakon uspostavljanja ravnoteže
• prevođenje lijeka u neionizirani oblik i mjerenje zamućenja
b) određivanje koeficijenta raspodjele lijeka
c) ispitivanje stabilnosti lijeka
• razgradni produkti imaju različit apsorpcijski maksimum od ishodne ispitivane tvari
• praćenje kinetike razgradnje lijeka
d) određivanje pKa vrijednosti
• pH ovisan UV pomak ionizirane i neionizirane grupe
AuA
AAipHpKa
−
−+= log
UV spektar fenilefrina u kiselom i lužnatom mediju
A - apsorbancija u puferu poznate pH vrijednosti
Ai - apsorbancija potpuno ionizirane vrste
Au- apsorbancija potpuno neionizirane vrste
e) određivanje oslobađanja lijeka iz formulacije
(dissolution testing)
• rutinska metoda za praćenje oslobađanja aktivne tvari
Oslobađanje pseudoefedrina iz dozirnog oblika
Posebnosti metode
Ograničenja metode
� jednostavna, jeftina, izdržljiva i precizna metoda za određivanje lijekova
� rutinska metoda za određivanje fizikalno-kemijskih svojstava lijekova
� uporaba derivativnih spektara rješava probleme osnovne metode
� umjereno selektivna; selektivnost ovisi o kromoforupojedinog lijeka
� slabo primjenjiva u analizi smjesa
top related