a1c-h_en

5/17/2018 A1C-H_en - slidepdf.com

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T i n a - q u a n t H e m o g l o b i n A 1 c G e n . 2

H e m o l y s a t e A p p l i c a t i o n - S t a n d a r d i z e d a c c o r d i n g t o I F C C t r a n s f e r a b l e t o D C C T / N G S P

O r d e r i n f o r m a t i o n

C O B A S I N T E G R A 1 5 0 T e s t s C a t . N o . 0 4 5 2 8 1 2 3 1 9 0 I n d i c a t e s a n a l y z e r ( s ) o n w h i c h c o b a s c p a c k c a n b e u s e d

T i n a - q u a n t H e m o g l o b i n A 1 c G e n . 2 S y s t e m - I D 0 7 6 8 5 0 2

C . f . a . s . H b A 1 c 3 × 2 m L C a t . N o . 0 4 5 2 8 4 1 7 1 9 0

S y s t e m - I D 0 7 6 8 5 2 9

H b A 1 c C o n t r o l N 4 × 0 . 5 m L C a t . N o . 2 0 7 6 4 8 3 3 3 2 2

S y s t e m - I D 0 7 6 4 8 3 3

H b A 1 c C o n t r o l P 4 × 0 . 5 m L C a t . N o . 2 0 7 6 4 8 4 1 3 2 2

S y s t e m - I D 0 7 6 4 8 4 1

P r e c i C o n t r o l H b A 1 c n o r m 4 × 1 m L C a t . N o . 0 5 4 7 9 2 0 7 1 9 0

S y s t e m - I D 0 7 7 4 7 7 4

P r e c i C o n t r o l H b A 1 c p a t h 4 × 1 m L C a t . N o . 0 5 9 1 2 5 0 4 1 9 0

S y s t e m - I D 0 7 7 4 7 8 2

H e m o l y z i n g R e a g e n t 1 0 0 0 m L C a t . N o . 1 1 4 8 8 4 5 7 1 2 2

f o r T i n a - q u a n t H b A 1 c

C O B A S I N T E G R A 6 × 1 0 m L C a t . N o . 0 4 5 2 8 3 2 8 1 9 0

H e m o l y z i n g R e a g e n t G e n . 2 S y s t e m - I D 0 7 6 8 5 1 0

S y s t e m i n f o r m a t i o n

C O B A S I N T E G R A T i n a - q u a n t H e m o g l o b i n A 1 c G e n . 2

( A 1 C - 2 ) H e m o l y s a t e a p p l i c a t i o n

M u l t i t e s t A 1 C H 2 , t e s t I D 0 - 0 4 7

T e s t H B - H 2 , t e s t I D 0 - 1 4 7 ; t e s t A 1 - H 2 , t e s t I D 0 - 2 4 7 R a t i o R H D 2 M , t e s t I D 0 - 5 4 8 ( a c c . t o D C C T / N G S P )

R a t i o R H I 2 M , t e s t I D 0 - 4 4 6 ( a c c . t o I F C C )

P r o f i l e P A 1 H 2 , t e s t I D 0 - 3 4 7 .

I n t e n d e d u s e

I n v i t r o t e s t f o r t h e q u a n t i t a t i v e d e t e r m i n a t i o n o f m m o l / m o l

h e m o g l o b i n A 1 c ( I F C C ) a n d % h e m o g l o b i n A 1 c ( D C C T / N G S P )

i n h e m o l y s a t e p r e p a r e d f r o m w h o l e b l o o d o n R o c h e c l i n i c a l

c h e m i s t r y a n a l y z e r s . H b A 1 c d e t e r m i n a t i o n s a r e u s e f u l f o r

m o n i t o r i n g o f l o n g - t e r m b l o o d g l u c o s e c o n t r o l i n i n d i v i d u a l s

w i t h d i a b e t e s m e l l i t u s . M o r e o v e r , t h i s t e s t i s t o b e u s e d a s

a n a i d i n d i a g n o s i s o f d i a b e t e s a n d i d e n t i f y i n g p a t i e n t s w h o

m a y b e a t r i s k f o r d e v e l o p i n g d i a b e t e s .

S u m m a r y 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9

H e m o g l o b i n ( H b ) c o n s i s t s o f f o u r p r o t e i n s u b u n i t s , e a c h c o n t a i n i n g a h e m e m o i e t y , a n d i s t h e r e d - p i g m e n t e d p r o t e i n

l o c a t e d i n t h e e r y t h r o c y t e s . I t s m a i n f u n c t i o n i s t o t r a n s p o r t o x y g e n

a n d c a r b o n d i o x i d e i n b l o o d . E a c h H b m o l e c u l e i s a b l e t o b i n d

f o u r o x y g e n m o l e c u l e s . H b c o n s i s t s o f a v a r i e t y o f s u b f r a c t i o n s

a n d d e r i v a t i v e s . A m o n g t h i s h e t e r o g e n e o u s g r o u p o f h e m o g l o b i n s

H b A 1 c i s o n e o f t h e g l y c a t e d h e m o g l o b i n s , a s u b f r a c t i o n f o r m e d

b y t h e a t t a c h m e n t o f v a r i o u s s u g a r s t o t h e H b m o l e c u l e . H b A 1 c i s

f o r m e d i n t w o s t e p s b y t h e n o n e n z y m a t i c r e a c t i o n o f g l u c o s e w i t h

t h e N - t e r m i n a l a m i n o g r o u p o f t h e β - c h a i n o f n o r m a l a d u l t H b

( H b A ) . T h e f i r s t s t e p i s r e v e r s i b l e a n d y i e l d s l a b i l e H b A 1 c . T h i s i s

r e a r r a n g e d t o f o r m s t a b l e H b A 1 c i n a s e c o n d r e a c t i o n s t e p .

I n t h e e r y t h r o c y t e s , t h e r e l a t i v e a m o u n t o f H b A c o n v e r t e d

t o s t a b l e H b A 1 c i n c r e a s e s w i t h t h e a v e r a g e c o n c e n t r a t i o n o f

g l u c o s e i n t h e b l o o d . T h e c o n v e r s i o n t o s t a b l e H b A 1 c i s l i m i t e d b y t h e e r y t h r o c y t e ’ s l i f e s p a n o f a p p r o x i m a t e l y 1 0 0 t o 1 2 0 d a y s .

A s a r e s u l t , H b A 1 c r e f l e c t s t h e a v e r a g e b l o o d g l u c o s e l e v e l

d u r i n g t h e p r e c e d i n g 2 t o 3 m o n t h s . H b A 1 c i s t h u s s u i t a b l e t o

m o n i t o r l o n g - t e r m b l o o d g l u c o s e c o n t r o l i n i n d i v i d u a l s w i t h

d i a b e t e s m e l l i t u s . G l u c o s e l e v e l s c l o s e r t o t h e t i m e o f t h e a s s a y

h a v e a g r e a t e r i n f l u e n c e o n t h e H b A 1 c l e v e l . 1

T h e a p p r o x i m a t e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n H b A 1 c a n d m e a n b l o o d

g l u c o s e v a l u e s d u r i n g t h e p r e c e d i n g 2 t o 3 m o n t h s w a s a n a l y z e d i n s e v e r a l s t u d i e s . A r e c e n t s t u d y o b t a i n e d t h e f o l l o w i n g c o r r e l a t i o n :

I F C C s t a n d a r d i z a t i o n ( r e c a l c u l a t e d a c c . t o r e f . 8 )

• E s t i m a t e d a v e r a g e g l u c o s e [ m m o l / L ] =

0 . 1 4 6 × H b A 1 c ( m m o l / m o l ) + 0 . 8 3 4

• E s t i m a t e d a v e r a g e g l u c o s e [ m g / d L ] =

2 . 6 4 × H b A 1 c ( m m o l / m o l ) + 1 5 . 0 3

S t a n d a r d i z a t i o n a c c . t o D C C T / N G S P 8

• E s t i m a t e d a v e r a g e g l u c o s e [ m m o l / L ] =

1 . 5 9 × H b A 1 c ( % ) - 2 . 5 9

• E s t i m a t e d a v e r a g e g l u c o s e [ m g / d L ] = 2 8 . 7 × H b A 1 c ( % ) - 4 6 . 7

T h e r i s k o f d i a b e t i c c o m p l i c a t i o n s , s u c h a s d i a b e t i c n e p h r o p a t h y

a n d r e t i n o p a t h y , i n c r e a s e s w i t h p o o r m e t a b o l i c c o n t r o l . I n

a c c o r d a n c e w i t h i t s f u n c t i o n a s a n i n d i c a t o r f o r t h e m e a n

b l o o d g l u c o s e l e v e l , H b A 1 c p r e d i c t s t h e d e v e l o p m e n t o f

d i a b e t i c c o m p l i c a t i o n s i n d i a b e t e s p a t i e n t s . 4 , 5

F o r m o n i t o r i n g o f l o n g t e r m g l y c e m i c c o n t r o l , t e s t i n g e v e r y

3 t o 4 m o n t h s i s g e n e r a l l y s u f f i c i e n t . I n c e r t a i n c l i n i c a l s i t u a t i o n s ,

s u c h a s g e s t a t i o n a l d i a b e t e s , o r a f t e r a m a j o r c h a n g e i n t h e r a p y ,

i t m a y b e u s e f u l t o m e a s u r e H b A 1 c i n 2 t o 4 w e e k i n t e r v a l s . 7

T e s t p r i n c i p l e 1 0 , 1 1 , 1 2

T h i s m e t h o d u s e s T T A B * a s t h e d e t e r g e n t i n t h e h e m o l y z i n g

r e a g e n t t o e l i m i n a t e i n t e r f e r e n c e f r o m l e u k o c y t e s ( T T A B

d o e s n o t l y s e l e u k o c y t e s ) . S a m p l e p r e t r e a t m e n t t o r e m o v e

l a b i l e H b A 1 c i s n o t n e c e s s a r y .

A l l h e m o g l o b i n v a r i a n t s w h i c h a r e g l y c a t e d a t t h e β - c h a i n N - t e r m i n u s a n d w h i c h h a v e a n t i b o d y - r e c o g n i z a b l e r e g i o n s

i d e n t i c a l t o t h a t o f H b A 1 c a r e d e t e r m i n e d b y t h i s a s s a y .

C o n s e q u e n t l y , t h e m e t a b o l i c s t a t e o f d i a b e t i c p a t i e n t s h a v i n g

2 0 1 1 - 1 0 , V 9 E N 1 / 6 A 1 C - H

S p e c i f i c P r o t e i n s 4 0 0 / 8 0 0u r e m i a o r t h e m o s t f r e q u e n t h e m o g l o b i n o p a t h i e s ( H b A S ,

H b A C , H b A E ) c a n b e d e t e r m i n e d b y t h i s a s s a y . 1 3 , 1 4

* T T A B = T e t r a d e c y l t r i m e t h y l a m m o n i u m b r o m i d e

H e m o g l o b i n A 1 c

T h e H b A 1 c d e t e r m i n a t i o n i s b a s e d o n t h e t u r b i d i m e t r i c i n h i b i t i o n

i m m u n o a s s a y ( T I N I A ) f o r h e m o l y z e d w h o l e b l o o d . • S a m p l e a n d a d d i t i o n o f R 1 ( b u f f e r / a n t i b o d y ) :

G l y c o h e m o g l o b i n ( H b A 1 c ) i n t h e s a m p l e r e a c t s w i t h

a n t i - H b A 1 c a n t i b o d y t o f o r m s o l u b l e a n t i g e n - a n t i b o d y

c o m p l e x e s . S i n c e t h e s p e c i f i c H b A 1 c a n t i b o d y s i t e i s

p r e s e n t o n l y o n c e o n t h e H b A 1 c m o l e c u l e , c o m p l e x

f o r m a t i o n d o e s n o t t a k e p l a c e .

• A d d i t i o n o f R 2 ( b u f f e r / p o l y h a p t e n ) a n d s t a r t o f r e a c t i o n :

T h e p o l y h a p t e n s r e a c t w i t h e x c e s s a n t i - H b A 1 c a n t i b o d i e s

t o f o r m a n i n s o l u b l e a n t i b o d y - p o l y h a p t e n c o m p l e x w h i c h

c a n b e d e t e r m i n e d t u r b i d i m e t r i c a l l y .

H e m o g l o b i n

L i b e r a t e d h e m o g l o b i n i n t h e h e m o l y z e d s a m p l e i s c o n v e r t e d

t o a d e r i v a t i v e h a v i n g a c h a r a c t e r i s t i c a b s o r p t i o n s p e c t r u m

w h i c h i s m e a s u r e d b i c h r o m a t i c a l l y d u r i n g t h e p r e i n c u b a t i o n

p h a s e ( s a m p l e + R 1 ) o f t h e a b o v e i m m u n o l o g i c a l r e a c t i o n . A

s e p a r a t e H b r e a g e n t i s c o n s e q u e n t l y n o t n e c e s s a r y .

T h e f i n a l r e s u l t i s e x p r e s s e d a s m m o l / m o l H b A 1 c o r % H b A 1 c

a n d i s c a l c u l a t e d f r o m t h e H b A 1 c / H b r a t i o a s f o l l o w s :

P r o t o c o l 1 ( m m o l / m o l H b A 1 c a c c . t o I F C C ) :

H b A 1 c ( m m o l / m o l ) = ( H b A 1 c / H b ) × 1 0 0 0

P r o t o c o l 2 ( % H b A 1 c a c c . t o D C C T / N G S P ) :

H b A 1 c ( % ) = ( H b A 1 c / H b ) × 9 1 . 5 + 2 . 1 5

R e a g e n t s - w o r k i n g s o l u t i o n s

R 1 A n t i b o d y r e a g e n t

M E S * * b u f f e r : 0 . 0 2 5 m o l / L ; T R I S * * * b u f f e r : 0 . 0 1 5 m o l / L ,

p H 6 . 2 ; H b A 1 c a n t i b o d y ( o v i n e s e r u m ) : ≥ 0 . 5 m g / m L ;

s t a b i l i z e r s ; p r e s e r v a t i v e s ( l i q u i d )

R 2 = S R P o l y h a p t e n r e a g e n t M E S b u f f e r : 0 . 0 2 5 m o l / L ; T R I S b u f f e r : 0 . 0 1 5 m o l / L ,

p H 6 . 2 ; H b A 1 c p o l y h a p t e n : ≥ 8 µ g / m L ; s t a b i l i z e r s ;

p r e s e r v a t i v e s ( l i q u i d )

* * M E S = 2 - m o r p h o l i n o e t h a n e s u l f o n i c a c i d

* * * T R I S = T r i s ( h y d r o x y m e t h y l ) - a m i n o m e t h a n e

P r e c a u t i o n s a n d w a r n i n g s

P a y a t t e n t i o n t o a l l p r e c a u t i o n s a n d w a r n i n g s l i s t e d i n

S e c t i o n 1 / I n t r o d u c t i o n o f t h i s M e t h o d M a n u a l .

R e a g e n t h a n d l i n g

R e a d y f o r u s e .

S t o r a g e a n d s t a b i l i t y

R e a g e n t

S h e l f l i f e a t 2 t o 8 ° C S e e e x p i r a t i o n d a t e o n

c o b a s c p a c k l a b e l

C O B A S I N T E G R A 4 0 0 / 4 0 0 p l u s s y s t e m s

O n - b o a r d i n u s e a t 1 0 - 1 5 ° C 4 w e e k s

C O B A S I N T E G R A 8 0 0 s y s t e m

O n - b o a r d i n u s e a t 8 ° C 4 w e e k s

H e m o l y z i n g r e a g e n t

S h e l f l i f e a t 2 t o 8 ° C S e e e x p i r a t i o n d a t e o n

b o t t l e l a b e l

C O B A S I N T E G R A 4 0 0 / 4 0 0 p l u s / 8 0 0 s y s t e m s

O n - b o a r d i n u s e , I S E r a c k ,

c l o s e d b o t t l e s

4 w e e k s

O n - b o a r d i n u s e , m u l t i r a c k ,

o p e n b o t t l e s

2 d a y s

C O B A S I N T E G R A 8 0 0 C T S s y s t e m

O n - b o a r d i n u s e , I S E r a c k ,

o p e n b o t t l e s

2 d a y s

W h e n s t o r i n g a t t e m p e r a t u r e s u n d e r 3 ° C , t h e r e a g e n t m a y

b e c o m e c l o u d y . T h i s h a s n o e f f e c t o n t h e f u n c t i o n o f t h e

r e a g e n t a n d i s r e v e r s i b l e a t h i g h e r t e m p e r a t u r e s . I t i s t h e r e f o r e r e c o m m e n d e d t o e q u i l i b r a t e t h e r e a g e n t a t r o o m t e m p e r a t u r e f o r

a p p r o x i m a t e l y 1 0 m i n u t e s a n d m i x t h o r o u g h l y b e f o r e u s e .

S p e c i m e n c o l l e c t i o n a n d p r e p a r a t i o n

F o r s p e c i m e n c o l l e c t i o n a n d p r e p a r a t i o n , o n l y u s e s u i t a b l e

t u b e s o r c o l l e c t i o n c o n t a i n e r s .

O n l y t h e s p e c i m e n s l i s t e d b e l o w w e r e t e s t e d a n d f o u n d a c c e p t a b l e .

A n t i c o a g u l a t e d v e n o u s o r c a p i l l a r y b l o o d . T h e o n l y a c c e p t a b l e

a n t i c o a g u l a n t s a r e L i - h e p a r i n , K 2 - E D T A , K 3 - E D T A a n d

p o t a s s i u m f l u o r i d e / N a 2 - E D T A .

S t a b i l i t y : 1 5 3 d a y s a t 1 5 - 2 5 ° C

7 d a y s a t 2 - 8 ° C

6 m o n t h s a t ( - 1 5 ) - ( - 2 5 ) ° C

F r e e z e o n l y o n c e . M i x s p e c i m e n t h o r o u g h l y a f t e r t h a w i n g .

H e m o l y s a t e p r e p a r a t i o n

1 . A l l o w b l o o d s p e c i m e n a n d H e m o l y z i n g R e a g e n t

f o r T i n a - q u a n t H b A 1 c t o e q u i l i b r a t e a t r o o m

t e m p e r a t u r e b e f o r e u s e .

2 . M o d e r a t e l y m i x t h e s a m p l e i m m e d i a t e l y p r i o r t o p i p e t t i n g ,

t o e n s u r e h o m o g e n e o u s m i x t u r e o f e r y t h r o c y t e s . T a k e

c a r e t o a v o i d t h e f o r m a t i o n o f f o a m .

3 . D i l u t e t h e s a m p l e w i t h H e m o l y z i n g R e a g e n t f o r

T i n a - q u a n t H b A 1 c ( C a t . N o . 1 1 4 8 8 4 5 7 1 2 2 ) i n t h e r a t i o 1 : 1 0 1

( 1 + 1 0 0 ) u s i n g o n e o f t h e f o l l o w i n g p i p e t t i n g s c h e m e s .

P i p e t t e i n t o t u b e s :

H e m o l y z i n g R e a g e n t 5 0 0 µ L 1 0 0 0 µ L 2 0 0 0 µ L f o r T i n a - q u a n t H b A 1 c

S p e c i m e n ( p a t i e n t o r c o n t r o l ) 5 µ L 1 0 µ L 2 0 µ L

4 . M i x u s i n g a v i b r a t i o n m i x e r o r b y g e n t l e s w i r l i n g .

5 . T h e h e m o l y s a t e c a n b e u s e d a f t e r t h e s o l u t i o n h a s c h a n g e d

c o l o r f r o m r e d t o b r o w n i s h - g r e e n ( a p p r o x . 1 - 2 m i n ) .

S t a b i l i t y o f t h e h e m o l y s a t e : 1 5 4 h o u r s a t 1 5 - 2 5 ° C

2 4 h o u r s a t 2 - 8 ° C

6 m o n t h s a t ( - 1 5 ) - ( - 2 5 ) ° C

M a t e r i a l s p r o v i d e d

S e e “ R e a g e n t s - w o r k i n g s o l u t i o n s ” s e c t i o n f o r r e a g e n t s .

M a t e r i a l s r e q u i r e d ( b u t n o t p r o v i d e d )

1 . H e m o l y z i n g R e a g e n t f o r T i n a - q u a n t H b A 1 c ,

C a t . N o . 1 1 4 8 8 4 5 7 1 2 2 . U s e t h i s r e a g e n t t o p r e p a r e

h e m o l y s a t e w h e n n o t o n - b o a r d t h e a n a l y z e r . S e e a b o v e

f o r s a m p l e p r e t r e a t m e n t p r o c e d u r e .

2 . C O B A S I N T E G R A H e m o l y z i n g R e a g e n t G e n . 2 f o r

T i n a - q u a n t H b A 1 C G e n . 2 , C a t . N o . 0 4 5 2 8 3 2 8 1 9 0 ,

s y s t e m - I D 0 7 6 8 5 1 0 . U s e t h i s r e a g e n t f o r a u t o m a t e d

o n - b o a r d d i l u t i o n o f t h e c a l i b r a t o r .

A s s a y

F o r o p t i m u m p e r f o r m a n c e o f t h e a s s a y , f o l l o w t h e

d i r e c t i o n s g i v e n i n t h i s d o c u m e n t f o r t h e a n a l y z e r

c o n c e r n e d . R e f e r t o t h e a p p r o p r i a t e o p e r a t o r ’ s m a n u a l f o r

a n a l y z e r - s p e c i f i c a s s a y i n s t r u c t i o n s .

A 1 C - H 2 / 6 2 0 1 1 - 1 0 , V 9 E N

S p e c i f i c P r o t e i n s 4 0 0 / 8 0 0A p p l i c a t i o n s f o r H b a n d H b A 1 c

C O B A S I N T E G R A 4 0 0 / 4 0 0 p l u s t e s t d e f i n i t i o n H b

A b b r e v i a t e d t e s t n a m e H B - H 2

M e a s u r i n g m o d e A b s o r b a n c e

A b s . c a l c u l a t i o n m o d e E n d p o i n t

R e a c t i o n m o d e R 1 - S

R e a c t i o n d i r e c t i o n I n c r e a s e

W a v e l e n g t h A / B 3 7 8 / 6 5 9 n m

C a l c . f i r s t / l a s t 1 7 / 3 3

U n i t g / d L

P i p e t t i n g p a r a m e t e r s

H b D i l u e n t ( H 2 O )

R 1 1 2 0 µ L

S a m p l e 6 µ L 0 µ L

T o t a l v o l u m e 1 2 6 µ L

C O B A S I N T E G R A 4 0 0 / 4 0 0 p l u s t e s t d e f i n i t i o n H b A 1 c

A b b r e v i a t e d t e s t n a m e A 1 - H 2

R e a c t i o n m o d e R 1 - S - S R

W a v e l e n g t h A / B 3 4 0 / 6 5 9 n m

C a l c . f i r s t / l a s t 3 3 / 5 7

U n i t g / d L

H b A 1 c D i l u e n t ( H 2 O )

R 1 1 2 0 µ L

S R 2 4 µ L 0 µ L

C O B A S I N T E G R A 8 0 0 t e s t d e f i n i t i o n H b

A b b r e v i a t e d t e s t n a m e H B - H 2

R e a c t i o n m o d e R 1 - S

W a v e l e n g t h A / B 3 7 8 / 6 5 9 n m

C a l c . f i r s t / l a s t 1 7 / 4 4

U n i t g / d L

H b D i l u e n t ( H 2 O )

R 1 1 2 0 µ L

C O B A S I N T E G R A 8 0 0 t e s t d e f i n i t i o n H b A 1 c

A b b r e v i a t e d t e s t n a m e A 1 - H 2

R e a c t i o n m o d e R 1 - S - S R

W a v e l e n g t h A / B 3 4 0 / 6 5 9 n m

C a l c . f i r s t / l a s t 4 4 / 9 6

U n i t g / d L

H b A 1 c D i l u e n t ( H 2 O )

R 1 1 2 0 µ L

S R 2 4 µ L 0 µ L T o t a l v o l u m e 1 5 0 µ L

R a t i o d e f i n i t i o n f o r m m o l / m o l H b A 1 c a n d % H b A 1 c

c a l c u l a t i o n

P r o t o c o l 1 ( m m o l / m o l H b A 1 c a c c . t o I F C C ) :

A b b r e v i a t e d r a t i o n a m e R H I 2 M ( 0 - 4 4 6 )

E q u a t i o n ( A 1 - H 2 / H B - H 2 ) × 1 0 0 0

U n i t m M / M

P r o t o c o l 2 ( % H b A 1 c a c c . t o D C C T / N G S P ) :

A b b r e v i a t e d r a t i o n a m e R H D 2 M ( 0 - 5 4 8 )

E q u a t i o n ( A 1 - H 2 / H B - H 2 ) × 9 1 . 5 + 2 . 1 5

U n i t %

U s e t h e p r e d e f i n e d p r o f i l e ( P A 1 H 2 , 0 - 3 4 7 ) f o r s i m u l t a n e o u s o r d e r e n t r y o f H b ( H B - H 2 ) a n d H b A 1 c ( A 1 - H 2 ) t e s t s

f r o m t h e s a m e h e m o l y s a t e .

T h e r a t i o f o r H b A 1 c ( m m o l / m o l H b A 1 c a c c . t o I F C C

a n d % H b A 1 c a c c . t o D C C T / N G S P ) w i l l b e a u t o m a t i c a l l y

c a l c u l a t e d a f t e r r e s u l t o u t p u t o f b o t h t e s t s .

F o r d u a l r e p o r t i n g o f b o t h m m o l / m o l H b A 1 c ( I F C C ) u n i t s a s w e l l

a s % H b A 1 c ( D C C T / N G S P ) u n i t s p l e a s e e n s u r e t h a t b o t h r a t i o t e s t s

0 - 4 4 6 ( a c c . t o I F C C ) a n d 0 - 5 4 8 ( a c c . t o D C C T / N G S P ) a r e a c t i v a t e d .

C a l i b r a t i o n

C a l i b r a t o r C . f . a . s . H b A 1 c

H b A 1 c

C a l i b r a t o r C . f . a . s . H b A 1 c

C a l i b r a t i o n d i l u t i o n r a t i o 1 : 1 , 1 : 1 . 6 7 , 1 : 2 , 1 : 5 , 1 : 2 5 , 0 , p e r f o r m e d

a u t o m a t i c a l l y b y t h e i n s t r u m e n t

C a l i b r a t o r d i l u e n t C O B A S I N T E G R A H e m o l y z i n g

R e a g e n t G e n . 2 , C a t . N o . 0 4 5 2 8 3 2 8 1 9 0

C a l i b r a t i o n m o d e L o g i t / l o g 5

C a l i b r a t i o n r e p l i c a t e D u p l i c a t e r e c o m m e n d e d

C a l i b r a t i o n i n t e r v a l E a c h l o t , e v e r y 2 9 d a y s , a n d a s r e q u i r e d

f o l l o w i n g q u a l i t y c o n t r o l p r o c e d u r e s

T r a c e a b i l i t y : T h i s m e t h o d h a s b e e n s t a n d a r d i z e d a g a i n s t t h e

a p p r o v e d I F C C r e f e r e n c e m e t h o d f o r t h e m e a s u r e m e n t o f

H b A 1 c i n h u m a n b l o o d

1 6 , 1 7

a n d c a n b e t r a n s f e r r e d t o r e s u l t s t r a c e a b l e t o D C C T / N G S P b y c a l c u l a t i o n .

N o t e

E n t e r t h e a s s i g n e d l o t - s p e c i f i c a n d a p p l i c a t i o n - s p e c i f i c v a l u e o f

t h e c a l i b r a t o r . U s e t h e a p p r o p r i a t e C . f . a . s . H b A 1 c c a l i b r a t o r o n l y .

C O B A S I N T E G R A H e m o l y z i n g R e a g e n t G e n . 2 , 6 × 1 1 m L , C a t .

N o . 0 4 5 2 8 3 2 8 1 9 0 , s y s t e m - I D 0 7 6 8 5 1 0 , n e e d s t o b e a v a i l a b l e o n

t h e a n a l y z e r . O t h e r w i s e t h e c a l i b r a t i o n c a n n o t b e c a r r i e d o u t .

Q u a l i t y c o n t r o l

Q u a l i t y c o n t r o l H b A 1 c C o n t r o l N o r

P r e c i C o n t r o l H b A 1 c n o r m

H b A 1 c C o n t r o l P o r

P r e c i C o n t r o l H b A 1 c p a t h

C o n t r o l i n t e r v a l 2 4 h o u r s r e c o m m e n d e d

C o n t r o l s e q u e n c e U s e r d e f i n e d

C o n t r o l a f t e r c a l i b r a t i o n R e c o m m e n d e d

2 0 1 1 - 1 0 , V 9 E N 3 / 6 A 1 C - H

S p e c i f i c P r o t e i n s 4 0 0 / 8 0 0F o r q u a l i t y c o n t r o l , u s e c o n t r o l m a t e r i a l s a s l i s t e d i n t h e

O r d e r i n f o r m a t i o n s e c t i o n . I n a d d i t i o n , o t h e r s u i t a b l e

c o n t r o l m a t e r i a l c a n b e u s e d .

T h e c o n t r o l i n t e r v a l s a n d l i m i t s s h o u l d b e a d a p t e d t o

e a c h l a b o r a t o r y ’ s i n d i v i d u a l r e q u i r e m e n t s . V a l u e s o b t a i n e d

s h o u l d f a l l w i t h i n t h e d e f i n e d l i m i t s . E a c h l a b o r a t o r y s h o u l d e s t a b l i s h c o r r e c t i v e m e a s u r e s t o b e

t a k e n i f v a l u e s f a l l o u t s i d e t h e d e f i n e d l i m i t s .

F o l l o w t h e a p p l i c a b l e g o v e r n m e n t r e g u l a t i o n s a n d l o c a l

g u i d e l i n e s f o r q u a l i t y c o n t r o l .

N o t e

P r e t r e a t c o n t r o l s i n t h e s a m e w a y a s s a m p l e s .

H b A 1 c c o n t r o l s c a r r y a d e c l a r a t i o n f o r m m o l / m o l H b A 1 c ( I F C C )

a n d % H b A 1 c ( D C C T / N G S P ) o n l y . N o d e c l a r a t i o n s f o r H b a n d

H b A 1 c c o n c e n t r a t i o n s a r e p r o v i d e d . A s a c o n s e q u e n c e , H b A 1 c

c o n t r o l s a r e h a n d l e d l i k e s a m p l e s a n d c a n n o t b e i n c l u d e d i n t h e

C O B A S I N T E G R A s y s t e m s Q u a l i t y C o n t r o l P r o g r a m .

C a l c u l a t i o n

C O B A S I N T E G R A s y s t e m s a u t o m a t i c a l l y c a l c u l a t e t h e

H b c o n c e n t r a t i o n o f e a c h s a m p l e . F o r m o r e d e t a i l s ,

p l e a s e r e f e r t o D a t a A n a l y s i s i n t h e O n l i n e H e l p

( C O B A S I N T E G R A 4 0 0 / 4 0 0 p l u s / 8 0 0 a n a l y z e r s ) .

H b A 1 c

C O B A S I N T E G R A s y s t e m s a u t o m a t i c a l l y c a l c u l a t e

t h e H b A 1 c c o n c e n t r a t i o n o f e a c h s a m p l e . F o r m o r e

d e t a i l s , p l e a s e r e f e r t o D a t a A n a l y s i s i n t h e O n l i n e H e l p

( C O B A S I N T E G R A 4 0 0 / 4 0 0 p l u s / 8 0 0 a n a l y z e r s ) .

H b A 1 c r a t i o c a l c u l a t i o n

F o r c a l c u l a t i o n o f t h e m m o l / m o l H b A 1 c v a l u e ( I F C C ) a n d t h e

% H b A 1 c v a l u e ( D C C T / N G S P ) , r e f e r t o t h e T e s t p r i n c i p l e

a n d R a t i o d e f i n i t i o n f o r m m o l / m o l H b A 1 c a n d % H b A 1 c

c a l c u l a t i o n s e c t i o n s i n t h i s m e t h o d s h e e t .

L i m i t a t i o n s - i n t e r f e r e n c e 1 3 , 1 4 , 1 8 , 1 9 , 2 0 , 2 1 , 2 2

1 . F o r d i a g n o s t i c p u r p o s e s , m m o l / m o l H b A 1 c v a l u e s ( I F C C )

a n d % H b A 1 c v a l u e s ( D C C T / N G S P ) s h o u l d b e u s e d

i n c o n j u n c t i o n w i t h i n f o r m a t i o n f r o m o t h e r d i a g n o s t i c

p r o c e d u r e s a n d c l i n i c a l e v a l u a t i o n s .

2 . T h e t e s t i s d e s i g n e d o n l y f o r a c c u r a t e a n d p r e c i s e

m e a s u r e m e n t o f m m o l / m o l H b A 1 c ( I F C C ) a n d % H b A 1 c

( D C C T / N G S P ) . T h e i n d i v i d u a l r e s u l t s f o r t o t a l H b a n d

H b A 1 c c o n c e n t r a t i o n s h o u l d n o t b e r e p o r t e d .

3 . A s a m a t t e r o f p r i n c i p l e , c a r e m u s t b e t a k e n w h e n i n t e r p r e t i n g

a n y H b A 1 c r e s u l t f r o m p a t i e n t s w i t h H b v a r i a n t s . A b n o r m a l

h e m o g l o b i n s m i g h t a f f e c t t h e h a l f l i f e o f t h e r e d c e l l s o r t h e

i n v i v o g l y c a t i o n r a t e s . I n t h e s e c a s e s e v e n a n a l y t i c a l l y c o r r e c t

r e s u l t s d o n o t r e f l e c t t h e s a m e l e v e l o f g l y c e m i c c o n t r o l t h a t

w o u l d b e e x p e c t e d i n p a t i e n t s w i t h n o r m a l h e m o g l o b i n . 2 3

W h e n e v e r i t i s s u s p e c t e d t h a t t h e p r e s e n c e o f a n H b v a r i a n t

( e . g . H b S S , H b C C , o r H b S C ) a f f e c t s t h e c o r r e l a t i o n b e t w e e n

t h e H b A 1 c v a l u e a n d g l y c e m i c c o n t r o l H b A 1 c m u s t n o t

b e u s e d f o r t h e d i a g n o s i s o f d i a b e t e s m e l l i t u s .

4 . A n y c a u s e o f s h o r t e n e d e r y t h r o c y t e s u r v i v a l o r d e c r e a s e i n

m e a n e r y t h r o c y t e a g e w i l l r e d u c e e x p o s u r e o f e r y t h r o c y t e s

t o g l u c o s e w i t h a c o n s e q u e n t d e c r e a s e i n m m o l / m o l H b A 1 c

v a l u e s ( I F C C ) a n d % H b A 1 c v a l u e s ( D C C T / N G S P ) , e v e n

t h o u g h t h e t i m e - a v e r a g e d b l o o d g l u c o s e l e v e l m a y b e

e l e v a t e d . C a u s e s o f s h o r t e n e d e r y t h r o c y t e l i f e t i m e m i g h t b e

h e m o l y t i c a n e m i a o r o t h e r h e m o l y t i c d i s e a s e s , h o m o z y g o u s

s i c k l e c e l l t r a i t , p r e g n a n c y , r e c e n t s i g n i f i c a n t o r c h r o n i c

b l o o d l o s s , e t c . S i m i l a r l y , r e c e n t b l o o d t r a n s f u s i o n s c a n a l t e r t h e m m o l / m o l H b A 1 c v a l u e s ( I F C C ) a n d % H b A 1 c v a l u e s

( D C C T / N G S P ) . C a u t i o n s h o u l d b e u s e d w h e n i n t e r p r e t i n g

t h e H b A 1 c r e s u l t s f r o m p a t i e n t s w i t h t h e s e c o n d i t i o n s .

H b A 1 c m u s t n o t b e u s e d f o r t h e d i a g n o s i s o f d i a b e t e s

m e l l i t u s i n t h e p r e s e n c e o f s u c h c o n d i t i o n s .

5 . G l y c a t e d H b F i s n o t d e t e c t e d b y t h e a s s a y a s i t d o e s n o t

c o n t a i n t h e g l y c a t e d β - c h a i n t h a t c h a r a c t e r i z e s H b A 1 c .

H o w e v e r , H b F i s m e a s u r e d i n t h e T o t a l H b a s s a y a n d a s a

c o n s e q u e n c e , s p e c i m e n s c o n t a i n i n g h i g h a m o u n t s o f H b F ( > 1 0 % ) m a y r e s u l t i n l o w e r t h a n e x p e c t e d m m o l / m o l H b A 1 c

v a l u e s ( I F C C ) a n d % H b A 1 c v a l u e s ( D C C T / N G S P ) . 1 3 , 2 2

6 . m m o l / m o l H b A 1 c v a l u e s ( I F C C ) a n d % H b A 1 c

v a l u e s ( D C C T / N G S P ) a r e n o t s u i t a b l e f o r d i a g n o s i s

o f g e s t a t i o n a l d i a b e t e s . 2 4

7 . I n v e r y r a r e c a s e s o f r a p i d l y e v o l v i n g t y p e 1 d i a b e t e s t h e

i n c r e a s e o f H b A 1 c v a l u e s m i g h t b e d e l a y e d c o m p a r e d t o t h e

a c u t e i n c r e a s e i n g l u c o s e c o n c e n t r a t i o n s . I n t h e s e c o n d i t i o n s

d i a b e t e s m e l l i t u s m u s t b e d i a g n o s e d b a s e d o n p l a s m a g l u c o s e

c o n c e n t r a t i o n s a n d / o r t h e t y p i c a l c l i n i c a l s y m p t o m s . 2 4

C r i t e r i o n : R e c o v e r y w i t h i n ± 1 0 % o f i n i t i a l v a l u e .

I c t e r u s N o s i g n i f i c a n t i n t e r f e r e n c e u p t o a

c o n j u g a t e d a n d u n c o n j u g a t e d b i l i r u b i n

c o n c e n t r a t i o n o f 1 0 0 0 µ m o l / L ( 6 0 m g / d L ) .

L i p e m i a ( I n t r a l i p i d ) C O B A S I N T E G R A 8 0 0 a n a l y z e r :

N o s i g n i f i c a n t i n t e r f e r e n c e u p t o a n

I n t r a l i p i d c o n c e n t r a t i o n o f 8 0 0 m g / d L .

C O B A S I N T E G R A 4 0 0 / 4 0 0 p l u s a n a l y z e r s :

N o s i g n i f i c a n t i n t e r f e r e n c e u p t o a n

I n t r a l i p i d c o n c e n t r a t i o n o f 6 0 0 m g / d L .

T h e r e i s p o o r c o r r e l a t i o n b e t w e e n t h e

t r i g l y c e r i d e s c o n c e n t r a t i o n a n d t u r b i d i t y .

G l y c e m i a N o s i g n i f i c a n t i n t e r f e r e n c e u p t o a g l u c o s e

c o n c e n t r a t i o n o f 5 5 . 5 m m o l / L ( 1 0 0 0 m g / d L ) .

A f a s t i n g s a m p l e i s n o t r e q u i r e d .

R h e u m a t o i d f a c t o r s N o s i g n i f i c a n t i n t e r f e r e n c e u p t o a

r h e u m a t o i d f a c t o r c o n c e n t r a t i o n o f

7 5 0 I U / m L .

D r u g s N o i n t e r f e r e n c e w a s f o u n d a t t h e r a p e u t i c

c o n c e n t r a t i o n s u s i n g c o m m o n d r u g

p a n e l s . 2 5

O t h e r N o c r o s s r e a c t i o n s w i t h H b A 0 , H b A 1 a ,

H b A 1 b , a c e t y l a t e d h e m o g l o b i n ,

c a r b a m y l a t e d h e m o g l o b i n , g l y c a t e d

a l b u m i n a n d l a b i l e H b A 1 c w e r e f o u n d f o r

t h e a n t i - H b A 1 c a n t i b o d i e s u s e d i n t h i s k i t .

F o r d i a g n o s t i c p u r p o s e s , t h e r e s u l t s s h o u l d a l w a y s b e

a s s e s s e d i n c o n j u n c t i o n w i t h t h e p a t i e n t ’ s m e d i c a l h i s t o r y ,

c l i n i c a l e x a m i n a t i o n a n d o t h e r f i n d i n g s .

A C T I O N R E Q U I R E D

S p e c i a l w a s h p r o g r a m m i n g : T h e u s e o f s p e c i a l w a s h s t e p s i s m a n d a t o r y w h e n c e r t a i n t e s t c o m b i n a t i o n s a r e r u n t o g e t h e r

o n C O B A S I N T E G R A a n a l y z e r s . R e f e r t o t h e M e t h o d M a n u a l ,

I n t r o d u c t i o n , E x t r a W a s h C y c l e s f o r f u r t h e r i n s t r u c t i o n s .

W h e r e r e q u i r e d , s p e c i a l w a s h / c a r r y - o v e r e v a s i o n p r o g r a m m i n g

m u s t b e i m p l e m e n t e d p r i o r t o r e p o r t i n g r e s u l t s w i t h t h i s t e s t .

L i m i t s a n d r a n g e s

M e a s u r i n g r a n g e

C O B A S I N T E G R A 4 0 0 / 4 0 0 p l u s a n a l y z e r s :

H b : 4 - 3 5 g / d L

H b A 1 c : 0 . 3 - 2 . 6 g / d L *

* T h e m e a s u r i n g r a n g e f o r H b A 1 c l i e s b e t w e e n 0 . 3 g / d L a n d t h e

c o n c e n t r a t i o n o f t h e h i g h e s t s t a n d a r d . T h e t e s t r a n g e s t a t e d

a b o v e i s b a s e d o n a t y p i c a l c a l i b r a t o r v a l u e o f 2 . 6 g / d L . T h i s c o r r e s p o n d s t o a m e a s u r i n g r a n g e o f 2 3 - 1 9 7 m m o l / m o l

H b A 1 c ( I F C C ) a n d 4 . 3 - 1 9 . 5 % H b A 1 c ( D C C T / N G S P ) a t a

t y p i c a l h e m o g l o b i n c o n c e n t r a t i o n o f 1 3 . 2 g / d L .

A 1 C - H 4 / 6 2 0 1 1 - 1 0 , V 9 E N

S p e c i f i c P r o t e i n s 4 0 0 / 8 0 0C O B A S I N T E G R A 8 0 0 a n a l y z e r :

H b : 4 - 3 5 g / d L

H b A 1 c : 0 . 3 - 3 . 4 g / d L

T h i s c o r r e s p o n d s t o a m e a s u r i n g r a n g e o f 2 3 - 2 5 8 m m o l / m o l

H b A 1 c ( I F C C ) a n d 4 . 3 - 2 4 . 8 % H b A 1 c ( D C C T / N G S P ) a t a

t y p i c a l h e m o g l o b i n c o n c e n t r a t i o n o f 1 3 . 2 g / d L . L o w e r l i m i t s o f m e a s u r e m e n t

L o w e r d e t e c t i o n l i m i t o f t h e t e s t :

H b : 0 . 5 g / d L

H b A 1 c : 0 . 1 g / d L

A t y p i c a l l o w e r d e t e c t i o n l i m i t f o r t h e H b A 1 c r a t i o m a y b e

c a l c u l a t e d , b a s e d o n a g i v e n H b c o n c e n t r a t i o n . A s s u m i n g a

t y p i c a l H b c o n c e n t r a t i o n o f 1 3 . 2 g / d L , t h e l o w e r d e t e c t i o n l i m i t i s

8 m m o l / m o l H b A 1 c ( I F C C ) o r 2 . 9 % H b A 1 c ( D C C T / N G S P ) .

T h e l o w e r d e t e c t i o n l i m i t r e p r e s e n t s t h e l o w e s t m e a s u r a b l e

a n a l y t e l e v e l t h a t c a n b e d i s t i n g u i s h e d f r o m z e r o . I t i s c a l c u l a t e d

a s t h e v a l u e l y i n g 3 s t a n d a r d d e v i a t i o n s a b o v e t h a t o f t h e l o w e s t

s t a n d a r d ( s t a n d a r d 1 + 3 S D , r e p e a t a b i l i t y , n = 2 1 ) .

E x p e c t e d v a l u e s P r o t o c o l 1 ( a c c . t o I F C C ) : 2 9 - 4 2 m m o l / m o l H b A 1 c 2 6

P r o t o c o l 2 ( a c c . t o D C C T / N G S P ) : 4 . 8 - 5 . 9 % H b A 1 c 2 6

T h i s r e f e r e n c e r a n g e w a s o b t a i n e d b y m e a s u r i n g

4 7 4 w e l l - c h a r a c t e r i z e d h e a l t h y i n d i v i d u a l s w i t h o u t d i a b e t e s

m e l l i t u s . H b A 1 c l e v e l s h i g h e r t h a n t h e u p p e r e n d o f t h i s r e f e r e n c e

r a n g e a r e a n i n d i c a t i o n o f h y p e r g l y c e m i a d u r i n g t h e p r e c e d i n g

2 t o 3 m o n t h s o r l o n g e r . A c c o r d i n g t o t h e r e c o m m e n d a t i o n s o f

t h e A m e r i c a n D i a b e t e s A s s o c i a t i o n v a l u e s a b o v e 4 8 m m o l / m o l

H b A 1 c ( I F C C ) o r 6 . 5 % H b A 1 c ( D C C T / N G S P ) a r e s u i t a b l e f o r t h e

d i a g n o s i s o f d i a b e t e s m e l l i t u s . 2 4 , 2 7 P a t i e n t s w i t h H b A 1 c v a l u e s i n

t h e r a n g e o f 3 9 - 4 6 m m o l / m o l H b A 1 c ( I F C C ) o r 5 . 7 - 6 . 4 % H b A 1 c

( D C C T / N G S P ) m a y b e a t a r i s k o f d e v e l o p i n g d i a b e t e s . 2 4 , 2 7

H b A 1 c l e v e l s m a y r e a c h 1 9 5 m m o l / m o l ( I F C C ) o r 2 0 %

( D C C T / N G S P ) o r h i g h e r i n p o o r l y c o n t r o l l e d d i a b e t e s .

T h e r a p e u t i c a c t i o n i s s u g g e s t e d a t l e v e l s a b o v e 6 4 m m o l / m o l

H b A 1 c ( I F C C ) o r 8 % H b A 1 c ( D C C T / N G S P ) . D i a b e t e s

p a t i e n t s w i t h H b A 1 c l e v e l s b e l o w 5 3 m m o l / m o l H b A 1 c

( I F C C ) o r 7 % H b A 1 c ( D C C T / N G S P ) m e e t t h e g o a l o f

t h e A m e r i c a n D i a b e t e s A s s o c i a t i o n . 1 9 , 2 8

H b A 1 c l e v e l s b e l o w t h e e s t a b l i s h e d r e f e r e n c e r a n g e m a y

i n d i c a t e r e c e n t e p i s o d e s o f h y p o g l y c e m i a , t h e p r e s e n c e o f

H b v a r i a n t s , o r s h o r t e n e d l i f e t i m e o f e r y t h r o c y t e s . E a c h

l a b o r a t o r y s h o u l d i n v e s t i g a t e t h e t r a n s f e r a b i l i t y o f t h e

e x p e c t e d v a l u e s t o i t s o w n p a t i e n t p o p u l a t i o n a n d i f n e c e s s a r y

d e t e r m i n e i t s o w n r e f e r e n c e r a n g e s .

S p e c i f i c p e r f o r m a n c e d a t a

R e p r e s e n t a t i v e p e r f o r m a n c e d a t a o n C O B A S I N T E G R A a n a l y z e r s a r e g i v e n b e l o w . R e s u l t s o b t a i n e d i n i n d i v i d u a l

l a b o r a t o r i e s m a y d i f f e r .

P r e c i s i o n

P r e c i s i o n w a s d e t e r m i n e d u s i n g h u m a n s a m p l e s a n d c o n t r o l s i n

a n i n t e r n a l p r o t o c o l w i t h r e p e a t a b i l i t y a ( n = 2 1 ) a n d i n t e r m e d i a t e

p r e c i s i o n b ( 1 a l i q u o t p e r r u n , 1 r u n p e r d a y , 2 1 d a y s ) .

T h e f o l l o w i n g r e s u l t s w e r e o b t a i n e d ( d a t a b a s e d o n

D C C T / N G S P v a l u e s ) :

L e v e l 1 L e v e l 2

M e a n C V M e a n C V

% H b A 1 c % % H b A 1 c %

R e p e a t a b i l i t y a 5 . 5 1 . 0 1 0 . 6 0 . 6

I n t e r m e d i a t e p r e c i s i o n b 5 . 3 1 . 0 1 0 . 7 0 . 8

a ) r e p e a t a b i l i t y = w i t h i n - r u n p r e c i s i o n b ) i n t e r m e d i a t e p r e c i s i o n = t o t a l p r e c i s i o n / b e t w e e n - r u n p r e c i s i o n / b e t w e e n - d a y p r e c i s i o n

M e t h o d c o m p a r i s o n

% H b A 1 c ( D C C T / N G S P ) v a l u e s f o r h u m a n b l o o d s a m p l e s

o b t a i n e d o n a C O B A S I N T E G R A 4 0 0 a n a l y z e r u s i n g t h e

C O B A S I N T E G R A T i n a - q u a n t H e m o g l o b i n A 1 c G e n . 2

r e a g e n t s y s t e m ( y ) w e r e c o m p a r e d t o t h o s e d e t e r m i n e d

u s i n g t h e C O B A S I N T E G R A T i n a - q u a n t H e m o g l o b i n A 1 c G e n . 2 r e a g e n t s y s t e m ( h e m o l y s a t e a p p l i c a t i o n )

o n a C O B A S I N T E G R A 8 0 0 a n a l y z e r ( x ) . S a m p l e s

w e r e m e a s u r e d i n d i v i d u a l l y .

C O B A S I N T E G R A 4 0 0 a n a l y z e r S a m p l e s i z e ( n ) = 6 9

P a s s i n g / B a b l o k 2 9 L i n e a r r e g r e s s i o n

y = 1 . 0 0 1 x + 0 . 0 5 0 % y = 0 . 9 9 5 x + 0 . 0 6 9 %

τ = 0 . 9 5 7 r = 0 . 9 9 7

S D ( m d 9 5 ) = 0 . 1 8 3 S y . x = 0 . 1 0 6

V a l u e s r a n g e d f r o m 5 . 2 0 t o 1 2 . 9 % H b A 1 c ( D C C T / N G S P ) .

o b t a i n e d o n a C O B A S I N T E G R A 8 0 0 a n a l y z e r u s i n g t h e

C O B A S I N T E G R A T i n a - q u a n t H e m o g l o b i n A 1 c G e n . 2 r e a g e n t

s y s t e m ( y ) w e r e c o m p a r e d t o t h o s e d e t e r m i n e d u s i n g t h e C O B A S I N T E G R A H e m o g l o b i n A 1 c r e a g e n t ( h e m o l y s a t e

a p p l i c a t i o n ) o n a C O B A S I N T E G R A 8 0 0 a n a l y z e r ( x ) .

S a m p l e s w e r e m e a s u r e d i n d i v i d u a l l y .

C O B A S I N T E G R A 8 0 0 a n a l y z e r S a m p l e s i z e ( n ) = 1 0 0

y = 0 . 8 9 2 x + 0 . 5 8 3 % y = 0 . 9 0 7 x + 0 . 4 7 6 %

τ = 0 . 9 5 3 r = 0 . 9 9 6

S D ( m d 9 5 ) = 0 . 2 8 7 S y . x = 0 . 1 2 8

o b t a i n e d o n a C O B A S I N T E G R A 8 0 0 C T S a n a l y z e r u s i n g

t h e C O B A S I N T E G R A T i n a - q u a n t H e m o g l o b i n A 1 c G e n . 2 r e a g e n t s y s t e m ( y ) w e r e c o m p a r e d t o t h o s e d e t e r m i n e d o n

a C O B A S I N T E G R A 8 0 0 a n a l y z e r ( h e m o l y s a t e a p p l i c a t i o n )

( x ) . S a m p l e s w e r e m e a s u r e d i n d i v i d u a l l y .

C O B A S I N T E G R A 8 0 0 C T S a n a l y z e r S a m p l e s i z e ( n ) = 5 0

y = 0 . 9 8 7 x + 0 . 5 7 7 % y = 1 . 0 7 6 x + 0 . 1 2 4 %

τ = 0 . 7 1 4 r = 0 . 9 8 2

S D ( m d 9 5 ) = 0 . 3 5 7 S y . x = 0 . 1 8 0

I n a d d i t i o n , a c o m p a r i s o n t o a c o m m e r c i a l l y a v a i l a b l e

H P L C m e t h o d w a s p e r f o r m e d . T h e H P L C m e t h o d w a s

s t a n d a r d i z e d i n c o n f o r m a n c e w i t h D C C T ( D i a b e t e s C o n t r o l a n d C o m p l i c a t i o n s T r i a l ) . 3 , 4

H P L C m e t h o d S a m p l e s i z e ( n ) = 6 0

y = 1 . 0 0 5 x + 0 . 0 5 3 % y = 1 . 0 0 4 x + 0 . 0 7 2 %

τ = 0 . 9 5 6 r = 0 . 9 9 7

S D ( m d 9 5 ) = 0 . 2 0 8 S y . x = 0 . 1 0 4

V a l u e s r a n g e d f r o m 4 . 9 t o 1 2 . 1 % H b A 1 c .

A n a l y t i c a l s p e c i f i c i t y

H b d e r i v a t i v e s L a b i l e H b A 1 c ( p r e - H b A 1 c ) , a c e t y l a t e d H b ,

a n d c a r b a m y l a t e d H b d o n o t a f f e c t t h e a s s a y

r e s u l t .

H b v a r i a n t s S p e c i m e n s c o n t a i n i n g h i g h a m o u n t s o f H b F ( > 1 0 % ) m a y y i e l d l o w e r t h a n e x p e c t e d

H b A 1 c r e s u l t s .

2 0 1 1 - 1 0 , V 9 E N 5 / 6 A 1 C - H

S p e c i f i c P r o t e i n s 4 0 0 / 8 0 0P l e a s e n o t e

A c c o r d i n g t o t h e c o n s e n s u s s t a t e m e n t o f t h e A m e r i c a n D i a b e t e s

A s s o c i a t i o n ( A D A ) , t h e E u r o p e a n A s s o c i a t i o n f o r t h e S t u d y

o f D i a b e t e s ( E A S D ) , t h e I n t e r n a t i o n a l F e d e r a t i o n o f C l i n i c a l

C h e m i s t r y a n d L a b o r a t o r y M e d i c i n e ( I F C C ) a n d t h e I n t e r n a t i o n a l

D i a b e t e s F e d e r a t i o n ( I D F ) H b A 1 c r e s u l t s s h o u l d b e r e p o r t e d i n p a r a l l e l , b o t h i n m m o l / m o l H b A 1 c ( I F C C ) a n d % H b A 1 c

( D C C T / N G S P ) v a l u e s . 3 0 I n a d d i t i o n a n H b A 1 c d e r i v e d e s t i m a t e d

a v e r a g e g l u c o s e c o n c e n t r a t i o n c a n b e r e p o r t e d w h i c h c a n b e

c a l c u l a t e d a c c o r d i n g t o t h e e q u a t i o n s g i v e n i n t h e s u m m a r y

s e c t i o n o f t h i s m e t h o d s h e e t . F o r m e r % H b A 1 c ( I F C C ) v a l u e s

m u s t n o t b e u s e d d u e t o t h e r i s k o f m i x u p / m i s i n t e r p r e t a t i o n

w i t h t h e % H b A 1 c ( D C C T / N G S P ) v a l u e s .

R e f e r e n c e s

1 . G o l d s t e i n D E , L i t t l e R R , L o r e n z R A , e t a l . T e s t s o f g l y c e m i a

i n d i a b e t e s . D i a b e t e s C a r e 1 9 9 5 ; 1 8 : 8 9 6 - 9 0 9 .

2 . G o l d s t e i n D E , L i t t l e R R . M o r e t h a n y o u e v e r w a n t e d

t o k n o w ( b u t n e e d t o k n o w ) a b o u t g l y c o h e m o g l o b i n

t e s t i n g . D i a b e t e s C a r e 1 9 9 4 ; 1 7 : 9 3 8 - 9 3 9 .

3 . S a n t i a g o J V . L e s s o n s f r o m t h e D i a b e t e s C o n t r o l a n d C o m p l i c a t i o n s T r i a l . D i a b e t e s 1 9 9 3 ; 4 2 : 1 5 4 9 - 1 5 5 4 .

4 . T h e e f f e c t o f i n t e n s i v e t r e a t m e n t o f d i a b e t e s o n t h e

d e v e l o p m e n t a n d p r o g r e s s i o n o f l o n g - t e r m c o m p l i c a t i o n s

i n i n s u l i n - d e p e n d e n t d i a b e t e s m e l l i t u s . T h e D i a b e t e s

C o n t r o l a n d C o m p l i c a t i o n s T r i a l R e s e a r c h G r o u p .

N E n g l J M e d 1 9 9 3 ; 3 2 9 : 9 7 7 - 9 8 6 .

5 . I n t e n s i v e b l o o d g l u c o s e c o n t r o l w i t h s u l f o n y l u r e a s o r

i n s u l i n c o m p a r e d w i t h c o n v e n t i o n a l t r e a t m e n t a n d

r i s k o f c o m p l i c a t i o n s i n p a t i e n t s w i t h t y p e 2 d i a b e t e s

( U K P D S 3 3 ) . U K P r o s p e c t i v e D i a b e t e s S t u d y ( U K P D S )

G r o u p . L a n c e t 1 9 9 8 ; 3 5 2 : 8 3 7 - 8 5 3 .

6 . F i n k e A , K o b o l d U , H o e l z e l W , e t a l . P r e p a r a t i o n o f a

c a n d i d a t e p r i m a r y r e f e r e n c e m a t e r i a l f o r t h e i n t e r n a t i o n a l

s t a n d a r d i z a t i o n o f H b A 1 c d e t e r m i n a t i o n s . C l i n C h e m

L a b M e d 1 9 9 8 ; 3 6 ( 5 ) : 2 9 9 - 3 0 8 . 7 . G o l d s t e i n D E , L i t t l e R R , W i e d m e y e r H M , e t a l . G l y c a t e d

h e m o g l o b i n : m e t h o d o l o g i e s a n d c l i n i c a l a p p l i c a t i o n s .

C l i n C h e m 1 9 8 6 ; 3 2 : B 6 4 - B 7 0 .

8 . N a t h a n D M , K u e n e n J , B o r g R , e t a l . T r a n s l a t i n g

t h e A 1 C a s s a y i n t o e s t i m a t e d a v e r a g e g l u c o s e v a l u e s .

D i a b e t e s C a r e 2 0 0 8 ; 3 1 : 1 4 7 3 - 1 4 7 8 .

9 . B u n n H F , G a b b a y K H , G a l l o p P M . T h e g l y c o s y l a t i o n

o f h e m o g l o b i n : r e l e v a n c e t o d i a b e t e s m e l l i t u s .

S c i e n c e 1 9 7 8 ; 2 0 0 : 2 1 - 2 7 .

1 0 . Z a n d e r R , L a n g W , W o l f H U . A l k a l i n e h a e m a t i n D - 5 7 5 ,

a n e w t o o l f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f h a e m o g l o b i n a s a n

a l t e r n a t i v e t o t h e c y a n h a e m i g l o b i n m e t h o d . I . D e s c r i p t i o n

o f t h e m e t h o d . C l i n C h i m A c t a 1 9 8 4 ; 1 3 6 : 8 3 - 9 3 .

1 1 . W o l f H U , L a n g W , Z a n d e r R . A l k a l i n e h a e m a t i n D - 5 7 5 ,

a n e w t o o l f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f h a e m o g l o b i n a s

a n a l t e r n a t i v e t o t h e c y a n h a e m i g l o b i n m e t h o d . I I .

S t a n d a r d i z a t i o n o f t h e m e t h o d u s i n g p u r e c h l o r o h a e m i n .

C l i n C h i m A c t a 1 9 8 4 ; 1 3 6 : 9 5 - 1 0 4 .

1 2 . L i t t l e R R , W i e d m e y e r H M , E n g l a n d J D , e t a l . I n t e r l a b o r a t o r y

s t a n d a r d i z a t i o n o f m e a s u r e m e n t s o f g l y c o h e m o g l o b i n s .

C l i n C h e m 1 9 9 2 ; 3 8 : 2 4 7 2 - 2 4 7 8 .

1 3 . C h a n g J , H o k e C , E t t i n g e r B , e t a l . E v a l u a t i o n a n d i n t e r f e r e n c e

s t u d y o f h e m o g l o b i n A 1 c m e a s u r e d b y t u r b i d i m e t r i c

i n h i b i t i o n i m m u n o a s s a y . A m J C l i n P a t h o l 1 9 9 8 ; 1 0 9 : 2 7 4 - 2 7 8 .

1 4 . F r a n k E L , M o u l t o n L , L i t t l e R R , e t a l . E f f e c t s o f h e m o g l o b i n

C a n d S t r a i t s o n s e v e n g l y c a t e d h e m o g l o b i n m e t h o d s .

C l i n C h e m 2 0 0 0 ; 4 6 ( 6 ) : 8 6 4 - 8 6 7 .

1 5 . D a t a o n f i l e a t R o c h e D i a g n o s t i c s .

1 6 . K o b o l d U , J e p p s s o n J O , D u e l f f e r T , e t a l . C a n d i d a t e r e f e r e n c e m e t h o d s f o r h e m o g l o b i n A 1 c b a s e d o n p e p t i d e

m a p p i n g . C l i n C h e m 1 9 9 7 ; 4 3 : 1 9 4 4 - 1 9 5 1 .

1 7 . J e p p s s o n J O , K o b o l d U , F i n k e A , e t a l . A p p r o v e d I F C C

r e f e r e n c e m e t h o d f o r t h e m e a s u r e m e n t o f H b A 1 c i n h u m a n

b l o o d . C l i n C h e m L a b M e d 2 0 0 2 ; 4 0 : 7 8 - 8 9 .

1 8 . G l i c k M R , R y d e r K W , J a c k s o n S A . G r a p h i c a l C o m p a r i s o n s

o f I n t e r f e r e n c e s i n C l i n i c a l C h e m i s t r y I n s t r u m e n t a t i o n .

C l i n C h e m 1 9 8 6 ; 3 2 : 4 7 0 - 4 7 5 . 1 9 . S a c k s B W , B r u n s D E , G o l d s t e i n D E , e t a l . G u i d e l i n e s a n d

r e c o m m e n d a t i o n s f o r l a b o r a t o r y a n a l y s i s i n t h e d i a g n o s i s a n d

m a n a g e m e n t o f d i a b e t e s m e l l i t u s . C l i n C h e m 2 0 0 2 ; 4 8 : 4 3 6 - 4 7 2 .

2 0 . M a r t i n a W V , M a r t i j n E G , v a n d e r M o l e n M , e t a l .

β - N - t e r m i n a l g l y c o h e m o g l o b i n s i n s u b j e c t s w i t h c o m m o n

h e m o g l o b i n o p a t h i e s : r e l a t i o n w i t h f r u c t o s a m i n e a n d m e a n

e r y t h r o c y t e a g e . C l i n C h e m 1 9 9 3 ; 3 9 : 2 2 5 9 - 2 2 6 5 .

2 1 . W e y k a m p C W , P e n d e r s T J , M u s k i e t F A J , e t a l . I n f l u e n c e o f

h e m o g l o b i n v a r i a n t s a n d d e r i v a t i v e s o n g l y c o h e m o g l o b i n

d e t e r m i n a t i o n s , a s i n v e s t i g a t e d b y 1 0 2 l a b o r a t o r i e s u s i n g

1 6 m e t h o d s . C l i n C h e m 1 9 9 3 ; 3 9 : 1 7 1 7 - 1 7 2 3 .

2 2 . R o h l f i n g C , C o n n o l l y S , E n g l a n d J , e t a l . E f f e c t o f e l e v a t e d

f e t a l h e m o g l o b i n o n H b A 1 c m e a s u r e m e n t s : f o u r c o m m o n

a s s a y m e t h o d s c o m p a r e d t o t h e I F C C r e f e r e n c e m e t h o d .

C l i n C h e m 2 0 0 6 ; 5 2 S u p p l 6 : A 1 0 8 . 2 3 . M i e d e m a K . I n f l u e n c e o f h e m o g l o b i n v a r i a n t s

o n t h e d e t e r m i n a t i o n o f g l y c a t e d h e m o g l o b i n .

K l i n L a b 1 9 9 3 ; 3 9 : 1 0 2 9 - 1 0 3 2 .

2 4 . I n t e r n a t i o n a l E x p e r t C o m m i t t e e r e p o r t o n t h e r o l e o f

t h e A 1 c a s s a y i n t h e d i a g n o s i s o f d i a b e t e s . D i a b e t e s

c a r e 2 0 0 9 ; 3 2 ( 7 ) : 1 3 2 7 - 3 4 .

2 5 . S o n n t a g O , S c h o l e r A . D r u g i n t e r f e r e n c e s i n c l i n i c a l

c h e m i s t r y : r e c o m m e n d a t i o n o f d r u g s a n d t h e i r

c o n c e n t r a t i o n s t o b e u s e d i n d r u g i n t e r f e r e n c e s t u d i e s .

A n n C l i n B i o c h e m 2 0 0 1 ; 3 8 : 3 7 6 - 3 8 5 .

2 6 . J u n g e , W , W i l k e B , H a l a b i A e t a l . D e t e r m i n a t i o n o f

r e f e r e n c e l e v e l s i n a d u l t s f o r h e m o g l o b i n A 1 c ( H b A 1 c ) .

P o s t e r p r e s e n t a t i o n 1 8 t h I n t e r n a t i o n a l D i a b e t e s

F e d e r a t i o n C o n g r e s s P a r i s , 2 0 0 3 .

2 7 . D i a g n o s i s a n d c l a s s i f i c a t i o n o f d i a b e t e s m e l l i t u s .

D i a b e t e s C a r e 2 0 1 ; 3 3 S u p p l 1 : S 6 2 - 6 9 .

2 8 . A m e r i c a n D i a b e t e s A s s o c i a t i o n . S t a n d a r d s o f M e d i c a l

C a r e f o r p a t i e n t s w i t h d i a b e t e s m e l l i t u s . D i a b e t e s

C a r e 1 9 9 5 ; [ S u p p l ] 1 8 / 1 : 8 - 1 5 .

2 9 . P a s s i n g H , B a b l o k W , B e n d e r R , e t a l . A g e n e r a l r e g r e s s i o n

p r o c e d u r e f o r m e t h o d t r a n s f o r m a t i o n . J C l i n C h e m

C l i n B i o c h e m 1 9 8 8 N o v ; 2 6 ( 1 1 ) : 7 8 3 - 7 9 0 .

3 0 . C o n s e n s u s s t a t e m e n t o n t h e w o r l d w i d e s t a n d a r d i z a t i o n

o f t h e h e m o g l o b i n A 1 c m e a s u r e m e n t . A m e r i c a n D i a b e t e s

A s s o c i a t i o n , E u r o p e a n A s s o c i a t i o n f o r t h e S t u d y o f

D i a b e t e s , I n t e r n a t i o n a l F e d e r a t i o n o f C l i n i c a l C h e m i s t r y a n d

L a b o r a t o r y M e d i c i n e a n d I n t e r n a t i o n a l D i a b e t e s F e d e r a t i o n

C o n s e n s u s C o m m i t t e e . D i a b e t e s C a r e 2 0 0 7 ; 3 0 : 2 3 9 9 - 2 4 0 0 .

A p o i n t ( p e r i o d / s t o p ) i s a l w a y s u s e d i n t h i s M e t h o d S h e e t

a s t h e d e c i m a l s e p a r a t o r t o m a r k t h e b o r d e r b e t w e e n t h e

i n t e g r a l a n d t h e f r a c t i o n a l p a r t s o f a d e c i m a l n u m e r a l .

S e p a r a t o r s f o r t h o u s a n d s a r e n o t u s e d .

C O B A S I N T E G R A , C O B A S C a n d T I N A - Q U A N T a r e t r a d e m a r k s o f R o c h e . O t h e r b r a n d o r p r o d u c t n a m e s a r e t r a d e m a r k s o f t h e i r r e s p e c t i v e h o l d e r s .

S i g n i f i c a n t a d d i t i o n s o r c h a n g e s a r e i n d i c a t e d b y a c h a n g e b a r i n t h e m a r g i n . © 2 0 1 1 , R o c h e D i a g n o s t i c s

R o c h e D i a g n o s t i c s G m b H , S a n d h o f e r S t r a s s e 1 1 6 , D - 6 8 3 0 5 M a n n h e i m w w w . r o c h e . c o m

A 1 C - H 6 / 6 2 0 1 1 - 1 0 , V 9 E N

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