cara mempelajari sel1.ppt
Post on 08-Jul-2018
238 Views
Preview:
TRANSCRIPT
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
1/29
Cara Memepelajari SelCara Memepelajari Sel
A. Teknik MikroskopiA. Teknik Mikroskopi −− cara visualcara visual
1.1. Mikroskop cahaya biasa (compoundMikroskop cahaya biasa (compound
microscope)microscope) →→ digunakan untuk melihat obyek !" # !$digunakan untuk melihat obyek !" # !$
µµm.m.
Mikroskop cahaya biasa menggunakan "Mikroskop cahaya biasa menggunakan "
lensa i.e. obyekti% & okuler.lensa i.e. obyekti% & okuler.
'esolving poer (') mikroskop cahaya'esolving poer (') mikroskop cahaya
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
2/29
' * kapasitas+kemampuan' * kapasitas+kemampuan untukuntuk mendi%erensiasimendi%erensiasi
" titikyang terpisah." titikyang terpisah.
' mata manusia' mata manusia ≅≅ 11 µµmm →→ dapatdapatmendi%erensiasi " titik berjarak 1mendi%erensiasi " titik berjarak 1 µµm.m.
Sel hean & bakteri mempunyai diameter 1 # "Sel hean & bakteri mempunyai diameter 1 # "
µµmm →→ tidak dapat didi%erensiasi mata biasatidak dapat didi%erensiasi mata biasa →→ diperlukan alat bantu (kaca pembesar+mikroskop)diperlukan alat bantu (kaca pembesar+mikroskop)
untukuntuk memperkuat '.memperkuat '.
' mikroskop cahaya !" # !$' mikroskop cahaya !" # !$ µµmm →→ dapatdapat
digunakan melihat bakteri atau mitokhondria dg.digunakan melihat bakteri atau mitokhondria dg.
diameter !,diameter !, µµm.m.
Mikrosko elektron! ' " # - nmMikrosko elektron! ' " # - nm →→ di unakandi unakan
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
3/29
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
4/29
asil di%erensiasi suatu mikroskop sehinggaasil di%erensiasi suatu mikroskop sehingga
dihasilkan gambar+bayangan yangdihasilkan gambar+bayangan yang
baik+jelas+nyata disebut resolusibaik+jelas+nyata disebut resolusi
'esolusi suatu mikroskop dipengaruhi+tergantung'esolusi suatu mikroskop dipengaruhi+tergantung
pada *pada *
/ panjang gelombang sinar (/ panjang gelombang sinar (λλ) yang digunakan) yang digunakan
/ inde0 re%raksi sinar (n) yang meleati/ inde0 re%raksi sinar (n) yang meleati sediaan+sediaan+ obyek!obyek!
tergantung media yang meneruskan sinar daritergantung media yang meneruskan sinar dari
obyekobyek
ke lensa obyekti%! dapat diperbesar denganke lensa obyekti%! dapat diperbesar dengan
memberimemberi
oli emersi! air! dsb. oli emersi! air! dsb.
/ aperture (sin/ aperture (sin ϕϕ)) −− sudut sinar datan+dikoleksi sudut sinar datan+dikoleksilensalensa
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
5/29
reparasi sel+sediaan yang diamati dengan mikroskopre
parasi sel+sediaan yang diamati dengan mikroskop
biasabiasa
Sel+jaringan yang akan diamati struktur & topogra8nyaSel+jaringan yang akan diamati struktur & topogra8nya
dalam organ dibuat statisdalam organ dibuat statis →→ sel dimatikan! diimobilisasi &sel dimatikan! diimobilisasi &diaetkan. Sel di8ksasidiaetkan. Sel di8ksasi −− dimasukkan ke larutan 8ksati%dimasukkan ke larutan 8ksati%
(asam dan+atau organik)(asam dan+atau organik)
/ alkohol/ alkohol
/ %ormaldehid/ %ormaldehid/ glutaraldehid/ glutaraldehid
Setelah di8ksasi sel+jaringan dibuat dalam ketebalanSetelah di8ksasi sel+jaringan dibuat dalam ketebalan
tertentu supaya dapat meleatkan sinar dengan baiktertentu supaya dapat meleatkan sinar dengan baik
(- # $(- # $ µµm).m).
Sel diembed dalam supporting medium * a0! para9nSel diembed dalam supporting medium * a0! para9n →→ embedding tissue dipotong dengan mikrotom danembedding tissue dipotong dengan mikrotom dan
die0pose (letakkan) pada permukaan gelas obyek (glassdie0pose (letakkan) pada permukaan gelas obyek (glass
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
6/29
earnaan sel+jaringanearnaan sel+
jaringan
Sel diarnai dengan :at arna agar dapatSel diarnai dengan :at arna agar dapat
dibedakan bagian sel satu dari yang lain.dibedakan bagian sel satu dari yang lain.
;at arna tertentu mempunyai a8nitas terhadap;at arna tertentu mempunyai a8nitas terhadap
sel+komponen tertentu sehingga bagian yangsel+komponen tertentu sehingga bagian yang
lebih bera8nitas ke :at arna tsb tampaklebih bera8nitas ke :at arna tsb tampakberbeda dari organel+ komponen sel yang lain.berbeda dari organel+ komponen sel yang lain.
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
7/29
→→ sel yang diarnai
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
8/29
?eberapa modi8kasi mikroskop cahaya?eberapa modi8kasi mikroskop cahaya
1. Mikroskop @uoresensi1. Mikroskop @uoresensi
6igunakan utk melihat struktur+molekul spesi8k dlm sel.6igunakan utk melihat struktur+molekul spesi8k dlm sel.
Sel (spesimen) diarnai dg @uoresenSel (spesimen) diarnai dg @uoresen →→ bagian sel yangbagian sel yang
menyerap @uoresen akan ber@uoresensi.menyerap @uoresen akan ber@uoresensi.
Molekul yang ber@uoresensi menyerap cahaya denganMolekul yang ber@uoresensi menyerap cahaya dengan
energi tinggi (B) dan memancarkannya kembali padaenergi tinggi (B) dan memancarkannya kembali pada
energi yang lebih rendah (visible).energi yang lebih rendah (visible).
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
9/29
Mikroskop @uoresensi dilengkapi lampu halogenMikroskop @uoresensi dilengkapi lampu halogen
yang menghasilkan sinar B dan dilengkapi "yang menghasilkan sinar B dan dilengkapi "8lter *8lter *
a. 8lter penyeleksi sinar B dengana. 8lter penyeleksi sinar B dengan λλ tertentutertentu
untukuntukdileatkan spesimen. dileatkan spesimen.
b. 8lter penyeleksi sinar visible yangb. 8lter penyeleksi sinar visible yang
meninggalkanmeninggalkanspesimen & ditangkap lensa obyekti%. spesimen & ditangkap lensa obyekti%.
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
10/29
". Mikroskop %ase kontras". Mikroskop %ase kontras
?iasa digunakan utk melihat sel dlm keadaan?iasa digunakan utk melihat sel dlm keadaanhidup+utuhhidup+utuh
?ila sinar meleati sel+bagian sel! sinar tsb akan?ila sinar meleati sel+bagian sel! sinar tsb akan
berubah %ase sesuai inde0 re%raksi sel.berubah %ase sesuai inde0 re%raksi sel.
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
11/29
Fnter%erensi cahaya satu %aseFnter%erensi cahaya satu %ase →→ memperkuatmemperkuat →→
lebih terang.lebih terang.
Fnter%erensi cahaya berbeda %aseFnter%erensi cahaya berbeda %ase →→ salingsaling
meniadakanmeniadakan →→ lebih redup.lebih redup.
Gambaran sel *Gambaran sel *
daerah sekitar+luar seldaerah sekitar+luar sel // terang terang
di dalam seldi dalam sel / sitoplasma redup/ sitoplasma redup
nukleus lebih gelap nukleus lebih gelap
→→ Sel redup dengan latar belakang terangSel redup dengan latar belakang terang..
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
12/29
?. Teknik ?iokimia?. Teknik ?iokimia −− Cara AnalitikCara Analitik
Tujuan * Mempelajari sel pada tingkat molekul untukTujuan * Mempelajari sel pada tingkat molekul untukmemahami %ungsi dan peran molekul tsbmemahami %ungsi dan peran molekul tsb
dalam mengkonstruksi sel atau komponen sel. dalam mengkonstruksi sel atau komponen sel.
rinsip * Mengisolasi atau memisahkan molekul dari sel!rinsip * Mengisolasi atau memisahkan molekul dari sel!
dan mengujinya berdasarkan si%at/si%at 8sik!dan mengujinya berdasarkan si%at/si%at 8sik!biologi dan kimianya. biologi dan kimianya.
Metoda dasar (prinsip kerja) *Metoda dasar (prinsip kerja) *
1. Memecah+menghancurkan sel+jaringan menjadi1. Memecah+menghancurkan sel+jaringan menjadibagian/bagian kecil atau %ragmen sel. bagian/bagian kecil atau %ragmen sel.
". uri8kasi+pemisahan komponen sel.". uri8kasi+pemisahan komponen sel.
H. Menganalisa struktur dan %ungsi %ragmen/%ragmen tsbH. Menganalisa struktur dan %ungsi %ragmen/%ragmen tsb
pada tingkat molekul pada tingkat molekul
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
13/29
Memecah+%ragmentasi selMemecah+%ragmentasi sel **
?ervariasi! tergantung struktur dan karakter sel.?ervariasi! tergantung struktur dan karakter sel.
1. '?C1. '?C →→ mudah sekali dihancurkan denganmudah sekali dihancurkan dengan
larutanlarutan
hipotonushipotonus −− !3, M ICl!!3, M ICl!
aDuadest. aDuadest.
". Sonikasi". Sonikasi →→ memberi kejutan dengan getaranmemberi kejutan dengan getaran −− menggunakan sonikator menggunakan sonikator
Satuan getaran 4 : (hert:) Satuan getaran 4 : (hert:)
H.
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
14/29
-. 6eterjen *-. 6eterjen *
a. nonionic detergenta. nonionic detergent →→ mild detergent!mild detergent!
menghancur/menghancur/kan membran! nukleus & organel tidak rusak kan membran! nukleus & organel tidak rusak
/ triton / triton
/ nonidet / nonidet
b. cationic detergentb. cationic detergent →→ melarutkan membranmelarutkan membranselsel
/ cTA? / cTA?
/ 6JC / 6JC
c. Anionic detegentc. Anionic detegent →→ merusak semua organelmerusak semua organelselsel
/ S6S / S6S
,. omo eni:er* untuk men hancurkan arin an,. omo eni:er* untuk men hancurkan arin an
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
15/29
uri8kasi+emisahan komponen seluri8kasi+emisahan komponen sel **
1. Sentri%ugasi1. Sentri%ugasi −− emisahan komponen selemisahan komponen sel
berdasarkanberdasarkan perbedaan kecepatanperbedaan kecepatan
sedimentasi.sedimentasi.
Iomponen/komponen sel akan tersedimentasiIomponen/komponen sel akan tersedimentasikarenakarena
mendapat daya sentri%ugal yang dihasilkanmendapat daya sentri%ugal yang dihasilkan
oleh per/oleh per/
putaran rotor. putaran rotor.
omogenat sel berisi partikel/partikel molekul+omogenat sel berisi partikel/partikel molekul+
%ragmen sel dimasukkan ke dalam tabung%ragmen sel dimasukkan ke dalam tabungsentri%u asisentri%u asi
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
16/29
6aya sentri%ugal yang diperlukan untuk6aya sentri%ugal yang diperlukan untuk
mengendapkan suatu partikel tergantung pada *mengendapkan suatu partikel tergantung pada *
/ Massa partikel (berat+g)/ Massa partikel (berat+g)/ Iecepatan putaran rotor/ Iecepatan putaran rotor
Iecepatan putaran rotor dinyatakan dalam rpmIecepatan putaran rotor dinyatakan dalam rpm
(revolution+rotation per minute).(revolution+rotation per minute).rpm tergantung pada kecepatan sudut rotorrpm tergantung pada kecepatan sudut rotor
(( ωω 4 radial+dt).4 radial+dt).
6aya sentri%ugal yang dihasilkan rotor dg6aya sentri%ugal yang dihasilkan rotor dgkecepatan sudut (kecepatan sudut (ωω) dan radius '! dinyatakan) dan radius '! dinyatakan
dengan 'CE (relative centri%ugal %orce).dengan 'CE (relative centri%ugal %orce).
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
17/29
ωω"" ''
'CE 4'CE 4
g g
ωω"" ''
4 4
5$ 5$
4 'M+g 4 'M+g
Satuan universal yg dipakai untuk menyatakanSatuan universal yg dipakai untuk menyatakan
daya sentri%ugal yg dihasilkan rotor adalah g.daya sentri%ugal yg dihasilkan rotor adalah g.
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
18/29
Iecepatan sedimentasi molekul tergantung padaIecepatan sedimentasi molekul tergantung padako8sien sedimentasi (S 4 Svedberg).ko8sien sedimentasi (S 4 Svedberg).
1 S 4 11 S 4 1 /1H/1H dt.dt.
Iecepatan sedimentasi B (cm+dt) 4 SIecepatan sedimentasi B (cm+dt) 4 S ωω"" ''
Suspensi sel disentri%ugasi dengan kecepatanSuspensi sel disentri%ugasi dengan kecepatan
tertentu dihasilkan * pellet (preipitat)tertentu dihasilkan * pellet (preipitat) super natan super natan
b k ik i% i? b
t k ik t i% i
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
19/29
?eberapa teknik sentri%ugasi?eberapa teknik sentri%ugasi
1. Sentri%ugasi di%erensial (di>erential centri%ugation)1. Sentri%ugasi di%erensial (di>erential centri%ugation) KK
Liver homogenate Liver homogenate
7 g 0 1 pellet *7 g 0 1 pellet *
supernatan sel! nukleus! debris jar. supernatan sel! nukleus! debris jar.
1" g 0 1, pellet *1" g 0 1, pellet *
supernatan mitokhondria supernatan mitokhondria
1-. g 0 " pellet * 1-. g 0 " pellet *
supernatan lisosom supernatan lisosom
i% i d i b i k d i" S i% i d i b i k (d i
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
20/29
". Sentri%ugasi densitas bertingkat (density". Sentri%ugasi densitas bertingkat (density
gradientgradient
centri%ugation). centri%ugation).
Sucrose gradientSucrose gradient
Tabung sentri%ugasi diisi sukrose dg konsentrasi Tabung sentri%ugasi diisi sukrose dg konsentrasi
bertingkat. Ionsentrasi sukrose pekat didasar!bertingkat. Ionsentrasi sukrose pekat didasar!
makinmakin
berkurang (encer) di bagian atas. berkurang (encer) di bagian atas.
?ila suspensi sel ditaruh dipermukaan medium?ila suspensi sel ditaruh dipermukaan medium
dandan
disentri%ugasidisentri%ugasi
→→
tiap %raksi akantiap %raksi akan
tersedimentasi adatersedimentasi ada
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
21/29
Molekul dg ?M besar tertahan di bag. Atas2Molekul dg ?M besar tertahan di bag. Atas2
molekul dg ?M kecil tersedimentasi lebih ke dasarmolekul dg ?M kecil tersedimentasi lebih ke dasar
(mengalami %riction lebih kecil).(mengalami %riction lebih kecil).
Sucrose gradient sensiti% utk memisahkan proteinSucrose gradient sensiti% utk memisahkan protein
dan organel sel.dan organel sel.
CsCl gradientCsCl gradient
Medium terdiri dari larutan garam CsCl ygMedium terdiri dari larutan garam CsCl yg
mempunyai densitas tinggi (, # 7N) &mempunyai densitas tinggi (, # 7N) &viskositas rendah. 6igunakan utk memisahkanviskositas rendah. 6igunakan utk memisahkan
molekul yg mempunyai struktur+bentuk samamolekul yg mempunyai struktur+bentuk sama
dengan ?M berbeda. Sensiti% untuk memisahkandengan ?M berbeda. Sensiti% untuk memisahkan
6=A+'=A.6=A+'=A.
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
22/29
". Ihromatogra8". Ihromatogra8
rinsip * Suspensi molekul dipisahkan oleh "rinsip * Suspensi molekul dipisahkan oleh "%ase+%aktor%ase+%aktor
yang tidak dapat bercampur+bergabungyang tidak dapat bercampur+bergabung
(nonimiscible phase)(nonimiscible phase) →→ %ase stasioner+diam%ase stasioner+diam
(stationary phase) &(stationary phase) & %ase mobil (mobile phase) %ase mobil (mobile phase)
emisahan terjadi karena perbedaan a8nitasemisahan terjadi karena perbedaan a8nitas
molekul yg dipisahkan terhadap %ase stasionermolekul yg dipisahkan terhadap %ase stasionerdan %ase mobil.dan %ase mobil.
M kh t 8M kh
t 8
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
23/29
Macam khromatogra8Macam khromatogra8
1. Ihromatogra8 kertas (paper chrom.)1. Ihromatogra8 kertas (paper chrom.)
tk memisahkan molekul/molekul kecil spttk memisahkan molekul/molekul kecil sptnukleotida! peptida & as. amino. Menggunakannukleotida! peptida & as. amino. Menggunakan
kertas selulose sbg media penunjang (supportingkertas selulose sbg media penunjang (supporting
medium).medium).
Ease stasionerEase stasioner K air yg membasahi kertasK air yg membasahi kertas
Ease mobil K pelarut nonpolar! bergerak lebihEase mobil K pelarut nonpolar! bergerak lebih
cepat pada kertas selulose! mis.* n/butanolcepat pada kertas selulose! mis.* n/butanol
Suspensi yg akan dipisahkan diteteskan padaSuspensi yg akan dipisahkan diteteskan pada
salah satu ujung kertas (dlmsalah satu ujung kertas (dlm µµl) & dikeringkanl) & dikeringkan →→
ujung kertas dg noda sampel dicelupkan ke dlmujung kertas dg noda sampel dicelupkan ke dlm
be ana berisi air & butanolbe ana berisi air & butanol →→ ter adi artisiter adi artisi
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
24/29
". Ihromatogra8 lapisan tipis (thin layer chrom.)". Ihromatogra8 lapisan tipis (thin layer chrom.)
Supporting mediumSupporting medium K lempeng kacaK lempeng kaca%ase stasioner K selulose + silica gel dilapiskan%ase stasioner K selulose + silica gel dilapiskan
pada permukaan kaca! ber%ungsi sbg Oadsorptionpada permukaan kaca! ber%ungsi sbg Oadsorption
materialP.materialP.
%ase mobil K campuran nonpolar CCl%ase mobil K campuran nonpolar CCl"" & C& CHHJ.J.
Sampel diteteskan pada sumur di ujung plateSampel diteteskan pada sumur di ujung plate →→
plate dicelupkan ke %ase mobilplate dicelupkan ke %ase mobil →→ molekul ygmolekul ygsukar teradsorpsi akan bergerak lebih cepatsukar teradsorpsi akan bergerak lebih cepat
terbaa oleh pelarut nonpolarterbaa oleh pelarut nonpolar
H C l h t hH Column chromatography kh t 8khromatogra8 mengguna
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
25/29
H. Column chromatographyH. Column chromatography K khromatogra8 mengguna/K khromatogra8 mengguna/
kan kolum (tabung). kan kolum (tabung).
A. Eiltrasi gel * memisahkan komponen sel berdasarkanA. Eiltrasi gel * memisahkan komponen sel berdasarkan
perbedaan ukuran (?M) molekul. perbedaan ukuran (?M) molekul.artikel gel dari bahan selulose (sephade0) yg memp. poriartikel gel dari bahan selulose (sephade0) yg memp. pori
dg ukuran tertentu diisikan ke dalam kolum & sampel ygdg ukuran tertentu diisikan ke dalam kolum & sampel yg
akan dipisahkan dileatkan pada kolum dg larutan bu%er.akan dipisahkan dileatkan pada kolum dg larutan bu%er.
Ease stasioner K bu%er dalam partikel gel.Ease stasioner K bu%er dalam partikel gel.Ease mobil K bu%er diluar partikel gel.Ease mobil K bu%er diluar partikel gel.
?ila suspensi sel dileatkan kolum *?ila suspensi sel dileatkan kolum *
/ partikel besar berada diluar gel & terbaa keluar/ partikel besar berada diluar gel & terbaa keluar
kolum oleh bu%er lebih cepat. kolum oleh bu%er lebih cepat.
/ partikel sedang K sebagian masuk & sebagian di luar/ partikel sedang K sebagian masuk & sebagian di luar
gelgel
/ partikel kecil K semua masuk ke pori/pori gel & keluar/ partikel kecil K semua masuk ke pori/pori gel & keluar
kolumkolum
? F h h t h (kh t 8? F h h t h (kh t 8
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
26/29
?. Fon e0change chromatography (khromatogra8?. Fon e0change chromatography (khromatogra8
pertukaran ion). pertukaran ion).
emisahan komponen sel berdasarkan perbedaanemisahan komponen sel berdasarkan perbedaanmuatan listrik (ion) molekul yang dipisahkan.muatan listrik (ion) molekul yang dipisahkan.
Iolum diisi ion e0changerIolum diisi ion e0changer K partikel bermuatanK partikel bermuatan
yang diikat pada suporter * seluloseyang diikat pada suporter * selulosepolystirenpolystiren
divinil ben:enedivinil ben:ene
sephade0sephade0
%ase stasioner K partikel bermuatan pada ion%ase stasioner K partikel bermuatan pada ion
e0changere0changer
%ase mobil K bu%er dengan p bertingkat atau%ase mobil K bu%er dengan p bertingkat atau
konsentrasi aram bertin katkonsentrasi aram bertin kat
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
27/29
Ieeratan hubungan molekul dengan e0changerIeeratan hubungan molekul dengan e0changer
tergantung pada besarnya muatan pada molekultergantung pada besarnya muatan pada molekul
molekul dilepaskan dari e0changer dengan " caramolekul dilepaskan dari e0changer dengan " cara
**
/ Meningkatkan ionic strength dg meninggikan/ Meningkatkan ionic strength dg meninggikan
konsentrasi garam pada bu%erkonsentrasi garam pada bu%er →→ menyebabkanmenyebabkan
rusaknya ikatan elektrostatik antara e0changerrusaknya ikatan elektrostatik antara e0changer
dgdg
molekul yang dipisahkan. molekul yang dipisahkan./ Mengubah p bu%er */ Mengubah p bu%er *
p tinggip tinggi →→ menetralkan anionmenetralkan anion
p rendahp rendah →→ menetralkan kationmenetralkan kation
H
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
28/29
H.
-
8/19/2019 cara mempelajari sel1.ppt
29/29
?ila sampel dlm media ditaruh dalam bejana?ila sampel dlm media ditaruh dalam bejana
berisi bu%erberisi bu%erelektrolit & dihubungkan ke poer supplyelektrolit & dihubungkan ke poer supply →→ terjadi partisi karena migrasi molekul bermuatanterjadi partisi karena migrasi molekul bermuatan
ke elektroda yang berlaanan.ke elektroda yang berlaanan.
Iecepatan migrasi menentukan partisi!Iecepatan migrasi menentukan partisi!
tergantung pada*tergantung pada*
/ besar muatan/ besar muatan/ ukuran molekul/ ukuran molekul
/ bentuk (shape) molekul/ bentuk (shape) molekul
top related