efecto de la temperatura en prelarvas de l guttatus
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Efecto de diferentes dosis de GCH y OVAPRIM en el desove y efecto de la temperatura en
prelarvas del pargo manchado Lutjanus guttatus bajo condiciones de cautiverio
Elkin Javier Rodríguez Gómez
Universidad Jorge Tadeo Lozano
Facultad de Biología Marina
Santa Marta, Colombia
2005
1
Efecto de diferentes dosis de GCH y OVAPRIM en el desove y efecto de la temperatura en
prelarvas del pargo manchado Lutjanus guttatus bajo condiciones de cautiverio
Elkin Javier Rodríguez Gómez
Universidad Jorge Tadeo Lozano
Facultad de Biología Marina
Santa Marta, Colombia
2005
2
Efecto de diferentes dosis de GCH y OVAPRIM en el desove y efecto de la temperatura en
prelarvas del pargo manchado Lutjanus guttatus bajo condiciones de cautiverio
Elkin Javier Rodríguez Gómez
Tesis de grado para optar al titulo de
Biólogo Marino
Director de tesis:
M.Sc. Jorge Boza Abarca
Coordinador Laboratorio de Peces Marinos
Estación de Biología Marina
Universidad Nacional
Puntarenas, Costa Rica
Universidad Jorge Tadeo Lozano
Facultad de Biología Marina
Santa Marta, Colombia
2005
3
Nota de aceptación
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________ Presidente del jurado
__________________________________
Jurado
__________________________________ Jurado
Bogotá ___________________
4
A mis padres
y mi hermana
con todo mí
amor.
5
CONTENIDO
pag.
INTRODUCCIÓN 1. MANEJO DE REPRODUCTORES, INDUCCIÓN Y DESOVE 11 1.1 OBTENCION DE LOS REPRODUCTORES 13 1.2 INDUCCIÓN 14 1.3 RECOLECCIÓN Y CONTEO DE LOS HUEVOS 15 2. EFECTO DE GCH y OVAPRIM Y OPTIMIZACIÓN DE LA DOSIS DE GCH EN L. guttatus 17 2.1 SELECCION DE HORMONA 19 2.1.1 Procedimiento 19 2.1.2 Resultados. 21 2.2 OPTIMIZACIÓN DE LA DOSIS DE GCH EN L. guttatus 26 2.2.1 Procedimiento 26 2.2.2 Resultados 27 2.3 DISCUSIÓN 33 3. EFECTO DE LA TEMPERATURA EN PRELARVAS DE L. guttatus 37 3.1 PROCEDIMIENTO 39
6
3.2 RESULTADOS 42 3.3 DISCUSIÓN 50 4. CONCLUSIONES 54 BIBLIOGRAFÍA 56
ANEXOS 60
7
LISTA DE TABLAS
pag.
Tabla 1. Diferentes tipos y dosis de hormonas usadas en trabajos realizados
en especies de la familia Lutjanidae.
18
Tabla 2. Dosis utilizada en cada uno de los tratamientos del experimento de
selección de hormona.
19
Tabla 3. Peso, desoves, tiempo desde la inducción hasta el desove y
porcentaje de fertilización para las hembras de L. guttatus usadas en el
experimento de selección de hormona. 21
Tabla 4. Diámetros de los oocitos a las 0, 24 y 48 horas e incremento del
diámetro para hembras de L. guttatus, en cada uno de los tratamientos
en el experimento de selección de hormona. 23
Tabla 5. Tratamientos y diferentes dosis de GCH usadas en el experimento
de optimización. 26
Tabla 6. Peso, desoves, tiempo desde la inducción hasta el desove y
porcentaje de fertilización para las hembras L. guttatus usadas el
experimento de optimización de GCH. 28
8
Tabla 7. Diámetros de los oocitos a las 0, 24 y 48 horas e incremento del
diámetro a las 0, 24 y 48 horas para hembras de L. guttatus, en cada
uno de los tratamientos en el experimento de optimización. 29
Tabla 8. Diferentes parámetros fisicoquímicos monitoreados durante el
experimento de temperatura en prelarvas de L guttatus.
43
Tabla 9. Estimación de la longitud el y volumen del vítelo en prelarvas de
L. guttatus 44
9
LISTA DE FIGURAS
pag.
Figura 1: Adulto sexualmente maduro de L. guttatus 13
Figura 2. Vista aérea de la parte media del Golfo de Nicoya, mostrando
el recorrido realizado para el traslado de los reproductores. 14
Figura 3. Esquema del sistema de recolección de huevos usado durante el
desarrollo de los experimentos. 15
Figura 4: Diámetros promedio de los oocitos tomados de las hembras tratadas
con diluyente, GCH, OVAPRIM 0.7 y OVAPRIM 1.0, al iniciar el
experimento, 24 y 48 horas después de la primera inyección. 22
Figura 5: Porcentaje de los estados de maduración de los oocitos de las muestras
tomadas para los tratamientos de diluyente, GCH, OVAPRIM 0.7 y
OVAPRIM 1.0 al iniciar el experimento, 24 y 48 horas después de la primera
inyección. 24
Figura 6: Distribución de frecuencias de los diámetros de los oocitos en
los tratamientos de diluyente, GCH, OVAPRIM 0.7 y OVAPRIM 1.0 al
inicio, 24 y 48 horas luego de la primera inyección. 25
Figura 7: Diámetros promedio de los oocitos en cada tratamiento, al iniciar,
24 y 48 horas después de comenzar el experimento de optimización de la dosis
de GCH. 29
10
Figura 8: Porcentaje de los estados de maduración de los oocitos las muestras
tomadas para los tratamientos A, B, C y D, al iniciar el experimento , 24 y 48
horas después de comenzar el experimento de optimización de la dosis de GCH. 31
Figura 9: Distribución de frecuencias de los diámetros de los oocitos en
los tratamientos A , B , C y D al inicio, 24 y 48 horas después de comenzar el
experimento de optimización de la dosis de GCH. 32
Figura 10: Montaje utilizado para evaluar el efecto de la temperatura en las
prelarvas de L. guttatus 40
Figura 11: Medidas morfológicas estimadas en la prelarva de L. guttatus . 41
Figura 12. Cambios en la longitud total de las prelarvas y el volumen del vitelo
durante las primeras 60 horas luego de la eclosión. 45
Figura 13. Porcentajes de sobrevivencia en prelarvas de L. guttatus 60 horas
después del comienzo del experimento. 46
Figura 14. Fotografías de prelarvas de L. guttatus a 22 ºC, 25 ºC y 28 ºC 47
tomadas 12, 48 y 60 horas luego de la eclosión.
Figura 15: Prelarva de L. guttatus mantenida a 28 ºC luego de haber sido capturada 48
para su observación.
Figura 16: Regresión lineal entre la longitud total y el volumen del vitelo de la
prelarva para los tratamientos de 22 ºC, 25 ºC y 28 ºC. 49
11
AGRADECIMIENTOS
Extiendo un especial agradecimiento a:
M.Sc. Jorge Boza Abarca, Coordinador Laboratorio de Peces Marinos de la Estación de
Biología Marina -Universidad Nacional, por su constante orientación y motivación.
Bióloga Marina Patricia Rincón por su incondicional ayuda en el desarrollo de este
proyecto.
12
INTRODUCCIÓN
La actividad pesquera ha disminuido su tasa de crecimiento en el transcurso de los últimos
años, debido tanto a fenómenos atmosféricos, como a que las diferentes poblaciones de
interés comercial están llegando a su límite máximo de explotación, reduciéndose así sus
capturas. Las especies de importancia comercial a escala mundial con mayores
disminuciones fueron la Anchoveta (Engraulis sp, 78 % menos), el jurel chileno
(Trachurus murphyi, 44 % menos), El capelan (Mallotus villosus, 38 % menos), la pota
japonesa (Todarores pacificus, 37 % menos), La pota argentina (Illex argentinus, 33 %
menos), El jurel del Atlántico (Trachurus sp, 22 % menos) y el Estornino (Scomber
japonicus, 21 % menos). Aunque el crecimiento de las pesquerías en la última década ha
sido ínfimo, sigue mostrando los mayores niveles de producción, alcanzando para 1999
92.3 millones de toneladas, contra 32.9 millones de toneladas provenientes de la
acuicultura (FAO, 2000).
La acuicultura ha elevado su producción, generando gran cantidad de empleos, alimentos y
proteína de primera calidad, lo que se refleja en una rápida expansión de este sector, ya que
desde 1984 la tasa media de crecimiento de la acuicultura ha sido del 10 %, cifra que
sobrepasa ampliamente el 1.6 % de crecimiento de las pesquerías (Rana and Immink,
2000). Así mismo, la mayor parte de la acuicultura se ha desarrollado en agua continental,
alcanzando el 58.7 % de la producción total, siendo los mayores productores los países
asiáticos y en las especies de la familia Ciprinidae. La acuicultura en aguas salobres ocupa
un 35 % de la producción mundial, siendo el langostino tigre la especie más
comercializada, mientras el ambiente menos representativo es el marino con un 6. 3 % de
la producción acuícola total (FAO, 2000).
13
Aunque la producción acuícola marina este representada en tan baja proporción, los altos
precios en sus productos han provocado que el cultivo de peces marinos aumente su
producción en los últimos años (Rana and Immink, 2000). Algunos peces marinos de
importancia en la maricultura son él sea bream (Pagrus pagrus), mandarin fish
(Synchiropus splendidus), y Sea Bass (Epinephelus sp), que para 1996 sumaban una
producción de 629,078 toneladas, aproximadamente el 3.77 % del total de la producción
acuícola en peces (New, 1999).
De los países latinoamericanos, Chile se encuentra como el mayor productor con
323,115 toneladas por año, de las cuales el 61.6 % corresponde al cultivo de salmónidos.
Luego de Chile se encuentra Ecuador que basa su producción en el cultivo extensivo del
camarón (99 %), seguido por México, Brasil y Colombia (New, 1999). La piscicultura
marina en Latinoamérica es muy reducida, destacándose República Dominicana y Chile,
siendo este último, un importante productor de lenguado.
Costa Rica es el noveno productor acuícola a nivel Latinoamericano. Sus cultivos más
importantes son la tilapia y el camarón con un 70.6 % y 26.4 % de la producción acuícola
nacional que sumó para 1999 un total de 9,324 toneladas métricas (Incopesca, 1999).
En Costa Rica, de sus dos costas, la mas explotada es la costa Pacífica, que por su alta
productividad y amplia plataforma continental concentra el 98 % de la captura, siendo el
núcleo pesquero más importante el Golfo de Nicoya, donde se capturan el 50 % de los
peces marinos y mariscos a nivel Nacional (FID/CP/COS, 1996). Dentro del Golfo de
Nicoya las especies que sostienen la pesca artesanal son principalmente dos: En la parte
media e interna del golfo la corvina aguada (Cynoscion squamipinnis) y en la parte
externa el pargo mancha (Lutjanus guttatus), siendo este último una de las especies más
importantes en el litoral pacífico. Para L. guttatus se reportó un total de 62 toneladas por su
captura en 1996, pero esta se vió disminuida en un 10 % en comparación con 1994, al
igual que sus tallas medias de captura (38 cm y 43 cm, respectivamente), lo que indica que
14
el esfuerzo pesquero sobre esta población es excesivo y que se requiere de un manejo
apropiado para hacer sostenible su explotación y protección (Vargas, 1999).
L. guttatus habita fondos duros alrededor de áreas de arrecife. Son generalmente
solitarios, aunque ocasionalmente pueden formar grandes escuelas. Los juveniles habitan
en estuarios y bocas de los ríos. Son carnívoros, se alimentan de invertebrados y otros
peces (Fisher et al.,1995). Por su alto valor comercial, facilidad de manipulación,
aceptabilidad de alimento artificial y reproducción en cautiverio, L. guttatus es
potencialmente viable para la producción en medios de cultivo (Olivares y Boza, 1999).
Hasta el momento en cautiverio se ha logrado la inducción al desove, la reproducción y el
levante de la especie, pero con muy bajas tasas de sobrevivencia. (Valverde y Boza, 1999;
Olivares y Boza, 1999). Estas bajas tasas pueden ser atribuidas a la calidad de los productos
sexuales, factores ambientales y nutricionales que afectan el crecimiento larval y la
sobrevivencia (Keembiyehetty and Wilson, 1998; Tucker, 1998; Silva, 1999; Bargarinao,
1986. En: Koven et al.1999).
En un inicio la inducción al desove en pargo manchado se realizó mediante el uso de SPC
(Suspensión de pituitaria de carpa) (Valverde y Boza, 1999). Aunque los resultados fueron
satisfactorios se dejó de utilizar por dos razones: no saber exactamente el contenido de
GtH en el macerado y por la existencia de otras hormonas sintéticas que llevan al mismo
propósito conociendo la cantidad suministrada. Por esta razón, se comenzó a utilizar el
análogo sintético GCH (Gonadotropina corinonica humana). Como en la literatura se
encuentran diferentes tipos de hormonas usadas y las concentraciones varían desde unas
pocas unidades internacionales hasta miles y con el fin de mejorar los resultados hasta
ahora obtenidos, se planteó el determinar el efecto de las hormonas GCH y OVAPRIM.
Además, se probó si otras concentraciones de GCH (Según las dosis iniciadora y
definitoria) podrían mejorar los resultados hasta ahora obtenidos.
15
La temperatura influye en la tasa metabólica (mantenimiento y metabolismo de
crecimiento) en embriones y larvas de peces (Kinne, 1963, En: Bermudes y Ritar, 1999),
debido a que es uno de los factores que más varían durante los diferentes períodos de
tiempo en tanques de cultivo, exponiendo a las larvas a condiciones extremas de
temperatura (Keembiyehetty and Wilson, 1998). Esta exposición puede ocasionar desde
una absorción muy rápida del vitelo, que trae consigo deficiencias en las reservas
energéticas de la larva, hasta una demora en el desarrollo, lo que conlleva a un aumento en
la probabilidad de contraer enfermedades por parte de la larva (Tucker, 1998). Con el fin de
definir un rango de temperatura que beneficie la sobrevivencia larval en sus primeros días,
se realizó un experimento variando la temperatura del agua, mientras, las demás variables
se mantenían constantes, y se observó las diferencias en sobrevivencia entre las diferentes
temperaturas.
Esta investigación fue desarrollada en la Estación de Biología Marina (Escuela de Ciencias
Biológicas), en el área de maricultura bajo la tutoría y responsabilidad del profesor M. Sc.
Jorge Boza Abarca, cuya investigación es financiada por el Programa UNA-LUW,
convenio entre la Universidad Nacional y la Universidad Agrícola de Wageningen,
Holanda.
16
1. MANEJO DE REPRODUCTORES, INDUCCIÓN Y DESOVE
Los reproductores que son utilizados en experimentos de inducción al desove y larvicultura
pueden tener dos orígenes: capturados del medio natural, ya sea adultos o juveniles, o
criados desde larvas, para su posterior utilización. Cuando son capturados adultos,
dependiendo de la profundidad a la cual se encuentren, es necesario insertar una aguja en la
cavidad abdominal del pez para eliminar el exceso de gases de la vejiga natatoria. En el
caso que sean juveniles, ya sea salvajes o provenientes de un cultivo, los peces son
mantenidos en jaulas flotantes hasta que alcancen la talla mínima de madurez (Tucker,
1998). Dentro de los trabajos de maricultura desarrollados en la familia Lutjanidae, han
sido utilizados como reproductores a juveniles recolectados en zonas de manglar y luego
levantados en tanques de concreto (Emata et al., 1999; Watanabe et al., 1998), de tierra
(Singhagraiwan and Doi, 1993), mixtos (Rosas et al., 1998) o en jaulas flotantes
(Chaitanawisuti and Piyatiratitivorakul, 1994; Olivares y Boza, 1999). También han sido
utilizados peces adultos capturados con anzuelo (Davis and West, 1993; Valverde y Boza,
1999; Boza et al., 2005).
El adecuado control de la maduración sexual y el desove es un punto de interés primario
para la reproducción de peces. Inicialmente, se estudió cuáles factores estimulaban a las
diferentes especies a madurar sus productos sexuales y el disparador que provocaba el
desove. Como resultado, se encontró que la temperatura del agua, el fotoperíodo y las
estaciones controlaban los ritmos biológicos que influyen en la maduración sexual. De esta
manera, se comenzó a inducir a los peces a reproducirse, imitando las condiciones
ambientales de las que dependía este proceso, pero, debido a que algunas especies solo
lograban madurar sus gónadas, más no desovar, y a la necesidad de aumentar el número de
larvas obtenidas en laboratorio, se comenzó a estudiar la fisiología del desarrollo gonadal,
encontrando las hormonas responsables de la maduración e inductoras del desove. Desde
17
hace 60 años se han utilizado diferentes preparaciones hormonales, con las cuales se ha
logrado optimizar la reproducción en cautiverio de peces (Bromage and Roberts, 1995).
La hormona que controla la maduración sexual es la gonadotropina (GtH), la cual se
produce en la hipófisis (Pituitaria). Para provocar su liberación es necesario que las
hormonas llamadas liberadora de la gonadotropina (GnRH) y la dopamina, una hormona
liberadora-inhibitoria, sean producidas en el hipotálamo. Así, en algunos peces como
ciprínidos y el pez gato (catfish) los investigadores utilizan métodos de inducción
aplicando una mezcla de GnRH con un antagónico de la dopamina como el domperidon o
pimozide ( Peter et al. 1988., En: Bromage and Roberts, 1995).
Una vez que se ha obtenido el desove, se debe realizar la colecta de los huevos. Este
proceso es de gran importancia ya que dependiendo de cuando se realice, se aumenta o
reduce el porcentaje de eclosión y de prelarvas sanas. Durante el desarrollo embrionario de
los peces se reconocen diferentes etapas, cada una de las cuales presenta una mayor o
menor resistencia a la manipulación. En los primeros clivajes, donde aún no hay una
diferenciación celular, el huevo tiene la capacidad de sustituir cualquier célula que salga
dañada durante la manipulación, sin perjudicar el desarrollo normal de cualquier estructura
u órgano. Al completar la neurulación, y de ahí en adelante, los huevos son muy resistentes
al manejo, sobre todo cuando llegan a la forma C, donde es apreciable un embrión con
todas las características de la prelarva, pero rodeando el vitelo (Caberoy and Quinitio,
1998).
Debido a que el intervalo de tiempo entre el estado de C y la eclosión del huevo es muy
pequeño la recolección se realizó unas horas antes (En el momento en que el corazón del
embrión comienza a latir) ya que es muy probable que comience la eclosión antes de
terminar de concentrar todos los huevos, perdiendo de esta manera información importante
como el porcentaje de fertilización y el número total de huevos, además de dañar a las
prelarvas ya que éstas son mas sensibles al perder la protección del corion (Hilomen-
García, 1998; Tucker, 1998).
18
1.1 OBTENCIÓN DE LOS REPRODUCTORES
Para el desarrollo del presente trabajo se usaron L. guttatus salvajes juveniles colectados
con trampas por pescadores artesanales, en zonas de manglar del Golfo de Nicoya. Estos
peces se mantuvieron en jaulas flotantes con una dieta de alimento para trucha (38% de
proteína), y se utilizaron una vez que alcanzaron su madurez sexual (alrededor de 500
gramos), aproximadamente 12 meses después de la captura (Figura 1).
Figura 1: Adulto sexualmente maduro de L. guttatus
Para cada experimento, los reproductores de pargo manchado se trasladaron desde Punta
Cuchillo (Figura 2 B), ubicada en el margen occidental del Golfo de Nicoya, al laboratorio
de la Estación de Biología Marina (figura 2 A), por vía marítima y terrestre durante un
período aproximado de una hora, tiempo durante el cual los peces se mantuvieron en un
contenedor de 75 litros con aireación constante y sin luz para reducir el efecto de estrés.
Cada reproductor se anestesió (MS-222, me lfato, diluido en agua de mar), se sexó
en adelante), edad (un año en
cautiverio), calidad de huevos en las hembras (se usa una cánula de 0.5 mm de diámetro
tasu
(presión abdominal en donde la presencia de fluido ovárico o semen indica el sexo del
ndividuo) y seleccionó de acuerdo a su peso (500 gr. i
19
para extraer una muestra de huevos) y la cantidad de semen en los machos (abundancia de
semen como respuesta a la presión abdominal) (Álvarez-Lajonchere y O. Hernández,1994).
Figura 2: Vista aérea de la parte media del Golfo de Nicoya, mostrando el recorrido realiza traslado de los reproductores La línea muestra el recorrido realizado con los reproductores desde Punta Cuchillo (B), hasta la Estación de Biología Marina (A) en Puntarenas.
Punta Cuchillo
Puntarenas
Isla San Lucas
Costa Rica G. Nicoya
1.2 INDUCCIÖN
Los reproductores de L. guttatus fueron sedados para facilitar la manipulación durante el
ismo tiempo que la segunda inyección
bras.
proceso de inducción. Las hembras se pesaron (± 1 gramo) e inyectaron por detrás de la
base de la aleta dorsal con el tipo y cantidad de hormona correspondiente al experimento en
curso y en dos dosis, con intervalos de 24 horas entre cada una. A los machos se les
administró una dosis única de 250 U.I. de GCH, al m
de las hem
20
Durante y después del proceso de inducción, los reproductores se mantuvieron en tanques
.3 RECOLECCIÓN Y CONTEO DE LOS HUEVOS
cilíndricos de fondo plano de 2.5 toneladas, en proporción de dos machos por hembra con
aireación y con recambio solo hasta el momento de aplicar la segunda dosis de hormona
para evitar la perdida de los huevos por el rebalse.
1
l tanque de E desove se encontraba unido al sistema de recolección (tanque de 250 litros)
or medio de una salida lateral a la altura del máximo nivel de agua, por medio de un tubo,
el agua caía en un colector de huevos, provisto de ventanas laterales y fondo en malla de
300 µm (Figura 3).
p
Figura 3: Esquema del sistema de recolección de huevos usado durante el desarrollo de los experimentos.
r
Huevos
Agua de mar Salida lateral
s
Al mar
Una vez c
contenedor
objetivo de
estén en la
fueron con
viables, lo
Colecto
onfirmado el desove, se inició
ealizó homogeneizando el tota
(1000- 2000 ml), tomando cinco m
el recam
colectar los huevos. La característica
s aguas superficiales del tanque y sean d
centrados en un volumen conocido de
cual se r
21
Reproductore
q d con el
l de huevos en la columna de agua de un
uestras de 1 ml con pipetas pasteur y
bio de agua del tan ue de esove
boyante de los huevos permite que estos
epositados en el colector. Una vez allí, lo
agua para estimar el número de huevos
contabilizando la cantidad de huevos viables y no viables. Los huevos viables se
caracterizan por ser transparentes con un embrión bien definido y la presencia de la gota de
aceite, mientras los huevos no viables están caracterizados por presentar un color
blanquecino. Estos últimos también fueron contados para así determinar el porcentaje de
fertilización de la siguiente manera:
% Fertilización = # huevos viables ×100 # total de huevos
Luego de contados, los huevos fueron lavados con agua de mar tratada y filtrada a 1 µm.
Luego se depositaron en un tanque de eclosión sin recambio y aireación moderada. Después
de la eclosión se sifoneó el fondo del tanque ucho cuidado con el fin de eliminar los
restos de corion.
con m
22
2. EFECTO DE GCH Y OVAPRIM Y OPTIMIZACIÓN DE LA DOSIS DE GCH
EN L. guttatus
Los trabajos de maricultura se han enfocado hacia el desarrollo de nuevas y mejores
técnicas de inducción a la maduración final y al desove teniendo como base el
conocimiento del mecanismo hormonal de maduración sexual. Debido a la necesidad de
aumentar la disponibilidad de larvas para la producción de peces marinos en cautiverio, en
las últimas décadas se han usado hormonas de origen natural extraídas de otros animales,
demás, de la creación de análogos sintéticos de las hormonas que naturalmente trabajan
actos de pituitaria, los cuales
enen resultados positivos, aunque es difícil su obtención y la concentración de la hormona
que en otras solo un porcentaje de las hembras responde a
inducción. Además, produce sobrehidratación de los huevos cuando la dosis es
liberad la gonad HRHa / G con excelentes resul n especies
s d jores r on los s. Algunos
tratamientos de inducción combin la dop domperidon
(Bromage nd Roberts
Dent ilia Lu idae se abajos de sando
diferentes hormonas y . La tab es d que han sido
sadas con el fin de inducir la maduración final y el desove.
a
sobre las especies (New, 1999).
Un método de inducción muy común es la inyección de extr
ti
es desconocida (Tucker, 1998). Una de las hormonas más utilizadas para la inducción en
peces es la gonadotropina coriónica humana (GCH), con la cual se han dado resultados
exitosos en muchas especies, aun
la
demasiado alta. Actualmente es común el uso de análogos sintéticos de la hormona
ora de otropina L nRHa tados e
ubtropicales, logran o me esultados que c métodos anteriore
an análogos de amina como el
a , 1995).
ro de la fam tjan han realizado tr inducción al desove u
dosis la 1 muestra diferent osis y hormonas
u
En la hembra, la GCH se utiliza para estimular la maduración final de los huevos y el
desove. En el macho, la GCH estimula la producción de testosterona e influye en la
cantidad de esperma disponible.
23
Tabla 1. Diferentes tipos y dosis hormonales en trabajos realizados en especies de la familia Lutjanidae.
Especie Hormona Dosis Autor
L. argentimaculatus GCH 1500 U.I. / Kg P.C Emata et al. (1994) GCH 1000 U.I. / Kg P.C Emata et al. (1999) LHRHa 100µg / Kg P.C Gonatropin 300 – 600 U.I. Singhagraiwan and Doi (1993)
L. linnaeus GCH 1000 - 6300 U.I. / Kg P.C Rosas et al. (1998)L. analis GCH 500 + 1000 U.I. / Kg P.C Watanabe et al. (1998)
L. guttatus EPC 800 U.I. / Kg P.C Valverde y Boza (1999).GCH 900 + 900 U.I. / Kg P.C Boza et al. (2005)
Los resultados de los experimentos realizados anteriormente en la Estación de Biología
de 900 U.I. / Kg. del peso corporal (P.C) provocan
l desove. Sin embargo la sobrevivencia de las larvas es muy baja después de 5 días. Con
s
comendadas por la Empresa productora Syndel Ltda. en salmonidos. Además, con el fin
uevos de la hembra, y consecuentemente, una baja sobrevivencia de las larvas, debido a la
ar un experimento variando las concentraciones
con el fin de determ nor concentración de
producir mejores resultados.
.1 SELECCIÓN DE LA HORMONA
Marina indican que dos dosis parciales
e
el fin de determinar si el uso de otra hormona puede mejorar los resultados obtenidos con
la GCH se realizó un experimento comparando el análogo de la hormona liberadora de la
gonadotropina (GnRH) con la GCH. Los nombres comerciales de las hormonas utilizadas
fueron OVAPRIM (GnRHa + domperidon) y CHORULON (GtH). Las dosis de
OVAPRIM que se usaron en el experimento fueron tomadas a partir de las dosi
re
de determinar si la dosis de 900 UI GCH/ Kg. P.C provoca una sobrehidratación en los
h
agresividad de la GCH, se planteó el realiz
de las dosis parciales de GCH inar si una me
hormona podría
2
2.1.1 Procedimiento. El diseño experimental utilizado incluyó los siguientes tratamientos.
Un tratamiento de 900 + 900 UI / Kg. P.C. de GCH (Control positivo). Dos tratamientos de
OVAPRIM: 0.35 + 0.35 ml / Kg. P.C y 0.50 + 0.50 ml / Kg. P.C. Como control negativo
24
se usó una doble dosis 0.5 ml de diluyente sin hormona / Kg. P.C. Cada uno de los
tratamientos se realizó por triplicado (tres hembras y sus respectivos machos) ( Tabla 2).
Tabla 2. Dosis utiliz e s trata ón de hormona Tratamiento Dosis
ada en cada uno d lo mientos del experimento de selecci
Diluyente de GCH ( Control negativo) 0.5 + 0.5 ml de diluyente de GCH
GCH (Control positivo)
OVAPRIM 0.70 .C
OVAPRIM 1.0 0.50 + 0.50 ml/ Kg. P.C
900 + 900 UI/ Kg. P.C.
0.35 + 0.35 ml/ Kg. P
Una vez que las hembras y los machos fueron trasladados a la Estación de Biología Marina
(según procedimiento en capítulo 1), se asignaron al azar en cada tratamiento, al igual que
los machos. Cada hembra se anestesió y se le tomó una muestra de oocitos (n =50) por
medio de una cánula de polietileno, la cual fue analizada en cuanto a diámetro de oocitos
y estados de madurez según la metodología utilizada por Rodríguez (1992) en donde:
Estado uno El núcleo se ubica en el centro
Estado dos El núcleo empieza a migrar
Estado tres El núcleo esta en posición periférica
Estado cuatro El núcleo esta en su polo animal y se ha
tre el intervalo de las 24
oras a las 48 se controló cada hora la ocurrencia del desove en los tanques mediante la
diluido su membrana.
Luego las hembras se pesaron en una balanza semi-analítica (Denver Instrumental
Company 8K, ± 0.01), se calculó la cantidad de hormona necesaria y se inyectó, a cada
una, con una dosis parcial dependiendo del tratamiento; a las 24 horas de tratamiento, las
hembras fueron anestesiadas y se les extrajo otra muestra de oocitos (n = 50),
aplicándoles inmediatamente la segunda dosis de hormona. En
h
toma de una muestra de agua de la superficie de cada tanque. Luego del desove se
contaron los huevos y se estimó el porcentaje de huevos fertilizados. Después de las 48
25
horas, luego de comenzado el experimento, se tomó una muestra de oocitos de cada hembra
y se analizó de la misma manera que las anteriores.
Las hormonas que se utilizaron en el experimento fueron la GCH (CHORULON) y la
nRHa+domperidon (OVAPRIM). El CHORULON® (Intervet International) es una
licoproteína compleja, que se prepara disolviendo un polvo liofilizado que contiene la
CH en una concentración de 1500 U.I.. en 1.5 ml de una solución estéril de
aH2PO4/Na2HPO4. OVAPRIM ® (Laboratorios Syndel Ltd.) es un agente liquido muy
otente para lograr la ovulación. Contiene como principios activos (D-Arg6,Pro9-NEt)
nRH, Domperidon, y propilen glicol como solvente primario.
os promedios del diámetro de los oocitos fueron analizados por tratamiento por medio de
n análisis de varianza (ANDEVA) y se compararon por medio de una prueba de Tuckey.
ambién se realizó un análisis de distribución de frecuencias del diámetro de los oocitos.
os estados de madurez se expresaron como porcentajes para cada uno de los tratamientos
fueron comparados gráficamente.
G
g
G
N
p
G
L
u
T
L
y
26
2.1.2 Resultados. La bra s ut ri entre
los 487 y 1067 gramo u o para todos los tratam .0 gr. ±
151.2 gr. Con respecto al resultado de la inducción se dieron desoves en por lo menos una
hembra, exceptuando el control negativo (diluyente). Solo las hembras inducidas con GCH,
desovaron las tres, siendo uno de estos desoves el único que fue fertilizado aunque en un
porcentaje muy bajo. El tiempo transcurrido desde la pri yección hasta el desove fue
de 37 a 38 horas para las hembras tratadas con GCH, m que las hemb en los dos
tratam entos con OVA desovar
Tabla 3. Peso, número de huevos desovados, tiempo desde la primera inyección hasta el desove y
porcentaje de fertilización para cada una de las hembras de L. guttatus usadas en el experimento de
elección de hormona.
Tratamiento Peso Tiempo(Horas) Número de huevos Porcentaje de
s hem s de L. guttatu ilizadas en el expe mento pesaron
ientos d 678s n, co n prom de pesedio e
mera in
ientras ras
i PRIM on después de 42 horas (Tabla 3).
s
( gr) Inducción- desove desovados fertilización Diluyente 516 N.D N.D - 708 N.D N.D - 754 N.D N.D -
GCH 538 38 130,000 0 1067 37 489,500 10 730 38 80,750 0
OVAPRIM 0.7 641 43 101,666 0 708 N.D N.D - 713 42 65,000 0
487 N.D N.D -
OVAPRIM 1.0 606 N.D N.D - 672 43 141,606 0
* N.D indica las hembras en las que no se produjo desove en el experimento.
Al iniciar el experimento los diámetros promedio de los oocitos tuvieron un rango de
variación entre 411,27 µm ± 24.9 µm y 423.21 µm ± 26.4 µm. Después de 24 horas los
oocitos de los tratamientos aumentaron su diámetro exceptuando el control negativo, siendo
los oocitos del tratamiento GCH los que obtuvieron un mayor diámetro promedio. 48 horas
27
luego de la primera inyección los oocitos de los tratamientos en los que se uso OVAPRIM
incrementaron su diámetro acercándose al diámetro de los oocitos de GCH (figura 4).
Figura 4: Diámetros promedio de los oocitos tomados de las hembras tratadas con diluyente, GCH, OVAPRIM 0.7 y OVAPRIM 1.0, al iniciar el experimento (a), 24 (b) y 48 (c) horas después de la primera inyección.
0
1 0 0
2 0 0
3 0 0
4 0 0
5 0 0
6 0 0
7 0 0
D i l u y e n t e H C G O V A P R I M 0 , 7 O V A P R I M 1 , 0
( a )
0
1 0 0
2 0 0
3 0 0
4 0 0
5 0 0
6 0 0
7 0 0
Dia
me
tro
D i l u y e n t e H C G O V A P R I M 0 , 7 O V A P R I M 1 , 0
( b )
Di
1 0 0
2 0 0
3 0 0
4 0 0
5 0 0
6 0 0
7 0 0
D i l u y e n t e H C G O V A P R I M 0 , 7 O V A P R I M 1 , 0
( c )
amet
ro (µ
m)
as 24 horas después de comenzar la inducción fue con las
embras tratadas con GCH, incrementando su diámetro en un 47 %; mientras que en el
atamiento de OVAPRIM 0.70 y OVAPRIM 0.5 los incrementos fueron de 14.1 % y
.9%, respectivamente (Figura 4). En las muestras de oocitos tomadas a las 48 horas los
* Las líneas sobre las barras indican el error estándar de cada uno de los tratamientos
El mayor diámetro promedio a l
h
tr
8
incrementos en el diámetro fueron mayores en los tratamientos en los que se usó
OVAPRIM, siendo de 19.1 % para el tratamiento de OVAPRIM 0.7 y 18.6 % para el
tratamiento de OVAPRIM 1.0.
28
El incremento de diámetro en el tratamiento GCH fue de solo un 0.5 %, a las 48 horas
(626,81 µm ± 213,00 µm) superando en un 11% el diámetro del tratamiento de OVAPRIM
.7 y en un 15 % el tratamiento de OVAPRIM 1.0 (Tabla 4).
Tabla 4. Diámetros de los oocitos a las 0 horas, 24 horas y 48 horas e incremento ra hembras de L. guttatus, en cada uno de los tratamientos. Los datos de diámetro a 0 horas, 24 horas y ego de ecció sados y d ion ue fu btenidas de edid e las 0 hue or hede cada uno de los tratamientos. Letras diferent entre los tra 05
os de maduración (En el tratamiento de GCH), siendo los estadios
e maduración 1 y 4 los más altos con un 29 % cada uno, seguido por el estadio 3 con un
4 % y finalmente con un 12 % el estadio 2. En las muestras de las hembras de OVAPRIM
.7 el porcentaje de oocitos que cambiaron su estado de maduración fue de 44 %, en su
0
del diámetro pa
48 horas lu la primera iny n están expre en medias esviac es qeron o los huevos m os en cada una d tres hembras (5 vos p mbra)
es indican diferencias significativas tamientos (P<0. ).
Los estados de maduración de los oocitos cambiaron de manera significativa en todos los
tratamientos exceptuando el control negativo, en el cual la mayor parte de los huevos se
encontraban en estado uno. A las 24 horas después de la primera inyección se observaron
oocitos en todos los estad
Tratamiento Diámetro 0 horas (µm)
Diámetro 24 horas (µm)
Diámetro 48 horas (µm)
Incremento en el Diámetro (%) 24 H 48 H
Diluyente 411.2 ± 24.9 a 406.8 ± 25.4a 384.4 ± 36.7 a -1.0 -5.4GCH 423.2 ± 26.4 a 623.1 ± 140.7 c 626.8 ± 213.0 c 47.2 0.5
OVAPRIM 0.7 414.6 ± 20.8 a 473.5 ± 52.2 b 564.0 ± 144.5 b 14.1 19.1OVAPRIM 1.0 420.1 ± 24.8 a 457.9 ± 58.5b 543.3 ± 174.4b 8.9 18.6
d
2
0
mayoría a estado de maduración 2, mientras que los oocitos de las hembras de OVAPRIM
1.0 cambiaron su estado de maduración en un 61 % siendo el estado de maduración 2 un
57% del total (Figura 5).
29
Transcurridas 48 horas de la aplicación de la primera dosis en cada tratamiento se
observaron oocitos en estado de maduración 2 con un 54 % para el tratamiento con GCH,
n 33 % para el tratamiento de OVAPRIM 1.0 y un 10 % en el tratamiento de OVAPRIM
madas para iar el experimento
.), 24 horas (b.) y 48 horas (c.) después de la primera inyección.
u
0.7 (Figura 5).
Figura 5: Porcentaje de los estados de maduración de los oocitos, según las muestras tolos tratamientos de diluyente, GCH, OVAPRIM 0.7 y OVAPRIM 1.0 al inic(a
Estado 1Estado 2Estado3Estado 4
(b.)
0
80
Diluyente HCG OVAPRIM 0,75 OVAPRIM 1,0
20
40
60
Ooc
itos e
n ca
da estad
io (
100
%)
(c.)
0
20
40
60
80
100
Diluyente HCG OVAPRIM 0,75 OVAPRIM 1,0
Estado 1 Estado 2 Estado 3 Estado 4
(a.)
80
100
IM 0,75 OVAPRIM 1,0
Ooc
i)
0
20
40
60
Diluyente HCG OVAPR
tos
en c
ada
esta
do (%
El diámetro promedio de los huevos desovados en el tratamiento GCH fue de 761.5 µm ±
21.7 µm, seguido por OVAPRIM 1.0 con un diámetro de 741.8 µm ± 56.0 µm y
finalmente OVAPRIM 0.75 con un diámetro de 596.1 µm ± 224.1 µm.
30
Al iniciar el experimento se observó una distribución unimodal en el diámetro de los
oocitos de todos los tratamientos, pero luego de la inducción fue posible apreciar una
distribución multimodal en el tratamiento GCH a las 24 y a las 48 horas y en los dos
tratamientos de OVAPRIM solo a las 48 horas (Figura 6).
Figura 6: Distribución de frecuencias de los diámetros de los oocitos en los tratamientos de
diluyente (a.), GCH (b.), OVAPRIM 0.75 (c.) y OVAPRIM 1.0 (d.). al inicio, 24 y 48 horas luego
de la primera inyección
Frecuencia01
35525490000000000000000
Frecuencia03
4154455
0
20000000000000
0
10
20
30
40
50
60
330 420 510 600 690 780 870 9600
10
20
30
40
50
60
330 420 510 600 690 780 870 9600
10
20
30
40
50
60
330 420 510 600 690 780 870 960
0
10
20
30
40
50
60
330 420 510 600 690 780 870 9600
10
20
30
40
50
60
330 420 510 600 690 780 870 9600
10
20
30
40
50
60
330 420 510 600 690 780 870 960
0330 420 510 600 690 780 870 960
10
40
50
60
20
30
0330 420 510 600 690 780 870 960
10
40
50
60
20
30
0330 420 510 600 690 780 870 960
10
40
50
60
20
30
0
10
20
30
40
50
60
330 420 510 600 690 780 870 9600
10
20
30
40
50
60
330 420 510 600 690 780 870 9600
10
20
30
40
50
60
330 420 510 600 690 780 870 960
Diametro (µm)
Fr
ecue
ncia
(b)
(a)
(c)
(d)
0 Horas 24 Horas 48 horas
31
2.2 OPTIMIZACIÓN DE LA DOSIS HORMONAL DE GCH EN L. guttatus
2.2.1 Procedimiento. Tomando en cuenta los resultados del experimento anterior, se
utili se
tomo en cuenta la d res resu dió en el experimento anterior como un
control positivo (dob 900 o de la hembra). El
experimento consisti s dos ar si un aumento o
disminución en la d inal p los desoves y en la
fertilización de los h rente izadas se encuentran
escritos en la tabla 5.
zó la hormona GCH para un experimento de optimización de la dosis hormonal y
osis que mejo ltados
le inyección de UI por kilogramo de pes
ó en variar la is de GCH para determin
osis inicial o f rovocaba una mejora en
uevos. Los dife s tratamientos y dosis util
d
Tabla 5. Tratamientos y diferentes dosis de GCH usadas en el experimento de optimización
Tratamiento Dosis
Tratamiento A 900 +900 UI GCH / Kg P.C
Tratamiento B 250 +900 UI GCH / Kg P.C
Tratamiento C 250 +750 UI GCH / Kg P.C
Tratamiento D 750 +750 UI GCH / Kg P.C
Cada uno de los tratamientos se aplicó por triplicado (tres hembras y sus respectivos
machos). Las hembras y los machos de L. guttatus usados para el desarrollo del
experimento se trajeron de Punta Cuchillo a la Estación de Biología Marina, luego se
asignaron al azar en cada tratamiento al igual que los machos. Cada hembra fue
anestesiada y se le tomó una muestra de oocitos de cada hembra (n = 50), por medio de
una cánula de polietileno, la cual fue analizada en cuanto a diámetro de oocitos y estados
de madurez según la metodología utilizada por Rodríguez (1992).
Una vez extraída la muestra se inyectó a cada hembra con una dosis parcial dependiendo
del tratamiento; a las 24 horas, las hembras fueron anestesiadas y se les extrajo otra
muestra de oocitos, aplicándoles inmediatamente la segunda dosis de hormona.
Normalmente entre el intervalo de las 24 horas a las 48 se da el desove, por lo que durante
32
este tiempo se controló cada hora, mediante la toma de una muestra de agua del tanque, si
había ocurrido el desove. Luego del desove se contaron los huevos y se estimó el
orcentaje de huevos fertilizados. Después de las 48 horas se tomó una muestra de oocitos
rencias por medio
e una prueba de Tuckey. También se realizó un análisis de distribución de frecuencias del
.2.2 Resultados.
p
de cada hembra analizándola de la misma manera que las anteriores.
Los valores promedio del diámetro de los oocitos fueron comparados entre los tratamientos
por medio de un análisis de varianza (ANDEVA) y se determinaron dife
d
diámetro de los oocitos .Los estados de madurez se expresaron como porcentajes para cada
uno de los tratamientos y fueron comparados gráficamente.
2 Los pesos de las hembras usadas para optimizar la dosis de GCH
ratamientos el número de huevos
esovados estuvo entre 7,650 y 40,800 huevos (tabla 6).
n el tratamiento B y D no se observó fertilización de los huevos en ninguna de las
solo
al 50 %, incluso en ue l un iento de
fertilización, tra e o C, uevos fueron
fertilizados, aunque en un porcentaje muy bajo (Tab
estuvieron entre 368 y 977 gr. El tiempo transcurrido desde la inducción hasta el desove
fue de entre 33 y 36 horas para las hembras del tratamiento A, mientras en los otros tres
tratamientos el tiempo transcurrido fue de entre 36 y 38 horas (Tabla 6).
Solo en los tratamientos A y C todas las hembras desovaron, aunque solo en el A , el
número de huevos sobrepaso los 100.000. En el resto de t
d
E
hembras, mientras que en los otros dos tratamientos se observó fertilización, aunque
s huevos de hembras del Tratamiento A mostraron porcentajes de fertilización superiores lo
los h vos de una de as hembras se dio
solo los h
ciento por c
de una hembra mien s qu en el tratamient
la 6).
33
Tabla 6. Pes e las he s, huevos ovados, tiempo desde la inducción hasta el desove y porcentaje de fertilización para L. gut el experimento de optimización de GCH
Trata nto Peso Tiempo(Horas) Inducción- desove
Número de huevos desovados
Porcentaje de fertilización (%)
o d mbra destatus .
mie ( gr) A 624 1 36 04000 90 741 34 1 100 539 33 163400 56
7650 0 N.D -
06633
B 526 38 26300 0 534 N.D N.D - 763 37 40800 0
C 641 38 25340 0 453 36 18334 4 564 37 16000 0
D 606 N.D N.D - 368 37 977 N.D
N.D indica a las hembras en las que no se produjo desove en el experimento
Al iniciar el experimento no hubo diferencias significativas en los diámetros de los oocitos
los tratamientos. Transcurridas 24 horas se observó un incremento en el diámetro de los
ocitos de todos los tratamientos especialmente en los tratamientos A y D. Al finalizar el
xperimento, los diámetros de los oocitos de los tratamientos se mantuvieron similares a la
l diámetro de los oocitos para el tratam m y 510.6
o
e
anterior medición exceptuando el tratamiento C, en donde fue notable el incremento del
diámetro de los oocitos (Figura 7).
E iento A estuvo entre 399.3 µm ± 40.3 µ
µm ± 57.4 µm, con un incremento en el diámetro de un 34 %, luego de 24 horas. Después
de 48 horas de la primera inyección se observó una reducción del 5% en el diámetro
promedio de los oocitos (Tabla 7).
34
Figura 7: rom s ooci a tratam inicio (c) horas después de comenzar el ex o de o n de la CH.
Diámetros p edio de lo tos en cad iento, al (a), 24 (b) y 48periment ptimizació dosis de G
( a . )
3 03 33 6 03 9 04 2 04 54 85 1 05 4 05 7 06 0
o A B T r a i e n t o D00
T r a m i e n t
00
0
t a T r a m i e n t ot a T r a t a e n t o Cm i t a m
( b
3 0 03 3 03 6 03 9 04 2 04 5 04 8 05 1 05 45 76 0
T r a t a m i e n t o A T r a t a m i e n t o B T r a t a m i e n t o C T r a t a m i e n t o D
Dia
me
tr
. )
000
( c . )
3 0 03 3 03 6 03 9 04 2 04 5 04 8 05 1 05 4 05 7 06 0 0
T r a t a m i e n t o A T r a t a m i e n t o B T r a t a m i e n t o C T r a t a m i e n t o D
Dia
met
ro (µ
rra representa el error estándar para cada media ( n = 150)
m)
1. La línea sobre la ba Tabla 7. Diámetros de los oocitos a las 0 horas, 24 horas y 48 horas e incremento del diámetro en L. guttatus, en cada uno de los tratamientos y dosis usadas. Los datos de diámetro a 0 horas, 24 horas y 48 horas luego de la primera inyección están expresados en medias y desviaciones estándar que fueron obtenidas de los huevos medidos en cada una de las tres hembras (50 huevos por hembra) de cada uno de los tratamientos. Letras diferentes indican diferencias significativas entre los tratamientos (P<0.05).
Tratamiento
Diámetro 0 h (µm)
Diámetro 24 h (µm)
Diámetro 48 h (µm)
Incremento (%) 24 H 48H
A 399.3 ± 40.3
a537.13± 87.5
c510.6 ± 57.4
b 34.0 -5.0
B 401.9 ± 49.3 a
456.6±98.2 a
454 ± 75.9 a 13.0 -0.4
C 410.6 ± 25.7
a486.51 ± 51.1
b566.9 ± 258.0
c 18.0 24.0
D 412.1 ± 36.8 a
523.9 ± 136 c
541.8 ± 161.0 bc 27.0 3.0
35
Para el tratamiento B el diámetro de los oocitos fue de 401.9 µm ± 49.3 µm
incrementándose en un 13 %, 24 horas luego de la primera inyección, en donde el
iámetro promedio fue de 456.6 µm ± 98.2 µm. Despues de 48 horas, luego de la primera
o en un 18 %, despues de 24 horas. A las 48 horas de
aber comenzado el experimento el diámetro promedio los oocitos fue de 566.9 µm ± 258
m, 24 % más grandes con respecto a la estimación realizada 24 horas antes (Tabla 7).
l diámetro de los oocitos del tratamiento D fue de 412.1 µm ± 36.8 µm al comenzar el
xperimento, incrementándose luego de 24 horas en un 27 % con un diámetro de 523.9 µm
n cuanto a la madurez de los oocitos antes de la primera inyección fueron en su mayoría
de estado uno en los cuatro tratamientos, y los porcentajes de oocitos en estados de
madurez dos y tres no superaron el 6% en ninguno de los tratamientos (Figura 8).
A las 24 horas de la primera inyección se dió una reducción del porcentaje de oocitos en
estado uno en todos los tratamientos; en el tratamiento A el 70 % de los oocitos observados
estaban en otros estados de maduración, mientras en el tratamiento B los estados de
maduración diferentes l uno representaron el 25 %, en el tratamiento C el 39 % y en el
tratamiento D el 40 % (Figura 8).
d
inyección, el diámetro promedio de los oocitos se redujo en un 0.4 % siendo promedio de
454 µm ± 75.9 µm (Tabla 7).
Los oocitos del tratamiento C tuvieron un diámetro promedio al iniciar el experimento de
410.6 µm ± 25.7 µm, aumentand
h
µ
E
e
± 136 µm. Al final del experimento el diámetro de los huevos fue de 541.8 µm ± 161 µm. E
36
Figura 8: Porcentaje de los estados de maduración de los oocitos las muestras tomadas para los tratamientos A, B, C y D, al iniciar el experimento (a.), 24 horas (b.) y 48 horas (c.) después de la primera inyección.
(a.)
0
20
40
60
80
100
Tratamiento A Tratamiento B Tratamiento C Tratamiento D
(b.)
0
20
40
60
80
100
Tratamiento A Tratamiento B Tratamiento C Tratamiento D
Porc
enta
je (%
)
(c.)
0
20
40
60
80
100
Tratamiento A Tratamiento B Tratamiento C Tratamiento D
Estado 1 Estado 2 Estado 3 Estado 4
Al finalizar el experimento, 48 horas después de la primera inyección, el estado de
maduración uno volvió a ser el más representativo en todos los tratamientos superando el
75 % del total de oocitos observados, exceptuando C en el cual se observó un porcentaje de
oocitos en estado cuatro del 30 % y del 66 % en estado uno. Los estados de maduración dos
tres no sobrepasaron el 10 % en ninguno de los tratamientos (Figura 8). y
37
Figura 9: Distribución de frecuencias de los diámetros de los oocitos en los tratamientos A (a), B
), C (c) y D (d) al inicio, 24 y 48 horas luego de la primera inyección (b
0
10
20
30
40
330 420 510 600 690 780 870 960
50
60
0
10
20
30
40
330 420 510 600 690 780 870 960
50
60
0
10
20
30
40
330 420 510 600 690 780 870 960
50
60
0
10
20
30
40
50
330 420 510 600 690 780 870 960
60
0
10
20
30
40
50
330 420 510 600 690 780 870 960
60
0
10
20
30
40
50
330 420 510 600 690 780 870 960
60
0
10
20
30
40
50
60
330 420 510 600 690 780 870 9600
10
20
30
40
50
60
330 420 510 600 690 780 870 960
0
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330 420 510 600 690 780 870 960
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330 420 510 600 690 780 870 960
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330 420 510 600 690 780 870 960
60
0
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20
30
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50
330 420 510 600 690 780 870 960
60
Fr
ecue
ncia
0 Horas 24 Horas 48 horas
(a)
(c)
(b)
(d)
Diametro (µm)
Al iniciar el experimento se observó una distribución unimodal en el diámetro de los
oocitos de todos los tratamientos, pero luego de la inducción fue posible apreciar una
distribución multimodal en los tratamientos A, B y D (Figura 9).
38
2.3 DISCUSIÓN.
entre 180 y 830 gramos al igual que Millares et al.
979 En: Rosas et al. 1998) en hembras de L. synagris de pesos de entre 200 y 400 gr.
en
tras especies de la misma familia el diámetro de los oocitos presenta una distribución
Durante el desarrollo del experimento no se observó relación entre el peso de las hembras
y el tamaño del desove, es decir que al inducir, el número de huevos dependió
directamente de la capacidad de la hormona inductora y su concentración para provocar la
maduración final de los oocitos. Se ha comprobado en estudios anteriores que el tipo y
cantidad de hormona utilizada en la inducción afecta el tamaño del desove y el diámetro de
los huevos (Tucker, 1998). González et al. (1978, En: Rosas et al. 1998), produjo desoves
positivos con hembras de L. griseus
(1
Rosas et al. (1998), obtuvo desoves en hembras de L. griseus de entre 330 y 1150 gr.
En ambos experimentos todas las hembras usadas mostraron una distribución unimodal del
diámetro de los oocitos antes de ser inducidas, pasando a una distribución multimodal 24
horas después de comenzado el tratamiento hormonal. En algunas especies de lutjánidos se
ha observado una distribución unimodal de los oocitos (Watanabe et al., 1998), mientras
o
multimodal (Grimes, 1987. En: Watanabe et al., 1998), patrón que normalmente indica
desoves múltiples durante la época reproductiva. Sin embargo, la relación entre el número
de modas y el número de desoves aun no esta muy clara en esta familia y en estudios
realizados en otras especies se ha determinado que una distribución unimodal no excluye la
posibilidad de encontrar varios desoves de una hembra por época reproductiva (Watanabe
et al., 1998).
El diámetro promedio de los oocitos para todos los tratamientos al iniciar los experimentos
fue de 411.62 µm ± 7.6 µm. Este dato concuerda con lo observado para L. johni (400 µm)
(Lim et al. ,1985), L. campechanus (354 – 365 µm) (Minton et al., 1983) y L.
argentimaculatus (400 µm) (Emata et al., 1984). Los mayores diámetros promedio de los
oocitos 24 horas después de la primera inyección coincidieron con los tratamientos en los
que desovaron las tres hembras, en estos se dió un incremento de entre 14 % y 47 % y el
39
diámetro promedio estuvo sobre las 486 µm, resultado similar al obtenido para L. analis
(475 µm) (Watanabe et al., 1998).
En los tratamientos de 900 + 900 U.I. / GCH (en ambos experimentos) y 250 +750 U.I. /
GCH desovaron las tres hembras, aunque los tratamientos de 900 + 900 U.I. superaron en
número de huevos a los tratamientos en los cuales fue utilizado OVAPRIM y GCH en
otras concentraciones. En este experimento aunque OVAPRIM no produjo desoves en la
hembras, si logró la maduración de los oocitos. Es posible que la dos
is utilizada aunque fue
ayor a la recomendada, no fue lo suficientemente potente como para inducir al desove.
Tuckey (1995), afirma que la GCH en la familia Lutjanidae cumple con cuatro de los
oves de entre 120,000 a 1,180,000 huevos en
embras de L. argentimaculatus de entre 4.5 y 4.8 Kg. Rosas et al. Usaron en L. griseus
m
Aunque los resultados obtenidos en especies de la familias Acipenseridae, Chanidae,
Salmonidae, Centropomidae, Serranidae, Sparidae, Scianidae demuestran la efectividad de
los análogos de la GnRH para inducir al desove (Tuckey, 1995), los lutjánidos han
demostrado tener una sensibilidad especifica hacia el GCH. Así, Emata et al. (1999),
utilizó GCH y LHRHa, para inducir machos y hembras de L argentimaculatus obteniendo
desoves en solo las hembras inducidas con GCH.
cinco requisitos propuestos por Lin y Peter (1992) para una efectiva inducción al desove:
una tasa de ovulación alta, una ovulación casi completa, un tiempo de ovulación corto y
huevos fértiles y viables. Aunque la sensibilidad de los lutjánidos al GCH esta comprobada,
las dosis usadas son variadas. Watanabe (1998), usó dosis de 500 + 1000 U.I. / Kg P.C en
L. analis obteniendo desoves de entre 535 y 781 huevos. Emata et al. (1999) uso una dosis
de 1000 U.I. de GCH / Kg P.C obteniendo des
h
dosis de entre 1000 y 6300 U.I. de GCH/ Kg P.C con desoves entre 190,000 y 210,000
huevos. González et al. (1979) recomienda como la dosis más adecuada y viable para L.
griseus la inyección de 2000 U.I. de GCH/ Kg P.C. Teniendo en cuenta la variabilidad de
dosis y concentraciones usadas de GCH, determinar una dosis adecuada depende de
40
factores como la edad de los peces y su desarrollo ovárico, la temperatura del agua
(Shelton, 1989) y el tamaño del tanque de desove (Lim et al., 1985)
En el experimento de selección de hormona el porcentaje de huevos que cambiaron su
estado de madurez después de 24 horas fue mayor en el tratamiento de GCH, mientras que
en los dos tratamientos de OVAPRIM los oocitos que cambiaron su estado de madurez tan
olo llegaron a estado dos, aunque, a las 48 horas se dio un cambio significativo en los
spontáneos con o sin inducción
reeliminar pero estos desoves tienden a ser difíciles de predecir, además, producen
es de huevos relativamente pequeñas, aunque de buena calidad.
s
estados de madurez, predominando oocitos en estados II, III y IV. En el experimento de
optimización de la dosis de GCH tan solo el tratamiento A( 900 + 900 U.I. GCH/ Kg P.C)
mostró cambios importantes en la madurez de los oocitos a las 24 horas; después de 48
horas el estado I de madurez volvió a ser predominante en los cuatro tratamientos.
Al comparar la distribución de frecuencias del diámetro de los oocitos con el estado de
madurez, se apreció una relación entre el estado de madurez y el diámetro, así, las modas
de menor diámetro coincidieron con el porcentaje de huevos menos maduros. Se ha
demostrado que el tamaño de los huevos es indicador de la eficiencia del agente inductor,
ya que la serie de cambios que se originan dentro del huevo al ser estimulada la hembra a
desovar hacen, que este aumente su tamaño.
El estado de madurez de las muestras de oocitos después de 48 horas de la inducción
estaba dividido entre huevos de madurez avanzada y otros menos maduros, estos oocitos
son reabsorbidos por la hembra o son posteriormente desovados en los tanques en los
cuales se mantienen a los reproductores después de realizar la inducción. Aunque no
fueron observados desoves espontáneos luego de concluido el experimento en otras
experiencias realizadas en la Estación de Biología Marina, las hembras produjeron desoves
seriales luego de una inducción preeliminar, influenciadas por las fases lunares y las
mareas lo que confirma lo observado por Watanabe et al. (1998). Otras especies de la
familia Lutjanidae también han tenido desoves e
p
cantidad
41
En el experimento de selección de hormona solo fue posible observar fertilización en los
uevos de una de las hembras inducida con GCH en un 10 %, mientras en el experimento
e optimización de la dosis de GCH el tratamiento A (900 + 900 U.I. de GCH) tuvo
orcentajes de fertilización de entre un 56% y un 100% . En otros estudios realizados en
tjánidos, se han observado diferentes porcentajes de fertilización. Watanabe (1998),
btuvo porcentajes de fertilización de 84% usando una proporción de tres machos por
hembras de L.
argentimaculatus es debida a baja calidad de los huevos y a la premadurez de los huevos
e la
otilidad, la capacidad de fertilización y la concentración de esperma (Bromage and
h
d
p
lu
o
hembra. Singhagraiwan y Doi (1993), sugieren que la baja fertilización de
desovados, además, de la baja calidad de la esperma La calidad del huevo se define como
las características del huevo que determinan su capacidad de desarrollarse hasta llegar a una
larva de alimentación exógena. La apariencia del corion, la apariencia y distribución de la
gota de aceite y la tasa de fertilización son usados para estimar la calidad del huevo
(Bromage and Roberts, 1995).la calidad de la esperma es medida por medio de la d
m
Roberts, 1995). Otro de los factores que afecta la calidad de los productos sexuales de los
peces es el estrés. Schreck et al. (2001), afirma que frente un agente estresor, los peces
generan respuestas fisiológicas con el fin de evitar la muerte o establecer la normalidad
homeostática, las cuales afectan algunas funciones vitales y la calidad de los productos
sexuales. Campbell et al. (1992, En: Bromage and Roberts, 1995) reporta que la ovulación
fue retrasada en peces estresados, los huevos fertilizados fueron pobres de calidad y el
esperma también se redujo en los machos estresados.
42
3. EFECTO DE LA TEMPERATURA EN PRELARVAS DE L. guttatus
Actualmente la producción de larvas de peces marinos se lleva acabo bajo condiciones
controladas y requiere de técnicas específicas de cultivo, estrategias de alimentación y
control microbial. Esto se realiza así debido a la fragilidad y poco desarrollo al momento
de la eclosión de sus órganos de percepción y de su sistema digestivo, por esta razón antes
que la larva se alimente por primera vez se le da el nombre de prelarva (Segner, 2001).
La prelarva de un pez marino posee determinadas características las cuales van a depender
del tipo de estrategia de vida de la especie (Winemiller y Rose, 1992 En: Tucker, 1998).
Existen tres tipos diferentes de estrategias: periódica, oportunista y equilibrada. La
estrategia periódica se caracteriza por una maduración sexual tardía, talla de maduración
muy grande en los reproductores, grandes desoves de huevos pequeños, crecimiento larval
y juvenil rápido y una época de desove corta (Atún, cobia, striped bass). En los peces con
estrategia oportunista la talla de maduración de los reproductores es pequeña y temprana,
huevos pequeños, rápido crecimiento larval y una época de desove larga y con varios picos
nchoas, pargos). Sus larvas son poco competentes pero son producidas por un largo (a
intervalo de tiempo. La estrategia equilibrada esta entre de las dos anteriores (tilapia, pez
gato), produciendo larvas altamente competentes al medio. En el caso de L. guttatus la
estrategia es oportunista con prelarvas caracterizadas por la ausencia de boca, tubo
digestivo y ojos, dependiendo completamente de su reserva vitelina para terminar esta fase
(Tucker, 1998).
Sin importar el tipo de estrategia, algunas características son compartidas por todas las
prelarvas de peces marinos. La longitud de las prelarvas al momento de eclosionar en la
mayoría de especies esta entre uno y cinco milímetros de longitud total, el saco vitelino
mantiene a la prelarva dentro de la columna de agua gracias a una pequeña gota oleosa, que
es la última parte del vitelo en ser absorbida, rica en ácidos grasos altamente insaturados,
indispensables para el adecuado desarrollo de las enzimas digestivas. Al no tener que
43
alimentarse durante esta etapa, el optimo desarrollo de la prelarva depende de la calidad del
huevo, los factores fisicoquímicos (Temperatura, salinidad, oxigeno disuelto, nitritos, etc.)
y el control microbial (Sargent, 2005).
La temperatura del agua juega un papel decisivo en el desarrollo larval, al afectar el
antenimiento del metabolismo (Tucker, 1998). El mantenimiento del metabolismo tiene
se rango se reduce su crecimiento e incrementa
susceptibilidad a las enfermedades. Las temperaturas altas reducen la solubilidad de
tes. Si por el contrario, el rango
temperatura es bajo, el período de incubación será muy largo aumentando la
. Dentro de un rango normal, pequeños
crementos en la temperatura en el momento de eclosionar los huevos, puede reducir las
m
un costo energético alto o bajo de acuerdo al rango de tolerancia de temperatura de cada
especie, si el costo de mantenimiento del metabolismo es bajo, habrá un aporte importante
al crecimiento. Sin embargo, el rango en el que los costos de mantenimiento son bajos
(afectando únicamente la tasa de crecimiento) es muy reducido (Bermudes and Ritar,
1999).
En larvicultura los rangos de tolerancia a la temperatura son pequeños (2 y 3 °C). A nivel
del trópico se consideran temperaturas altas las que superan los 28 °C, y bajas por debajo
de los 25 °C. Las larvas de cada especie poseen un rango de temperatura que incluye el
óptimo, cuando la temperatura no esta en e
la
oxígeno contribuyendo a la reducción del oxígeno disuelto y tienen un efecto indirecto en
la calidad del agua ya que al cambiar las tasas metabólicas de los organismos, las
cantidades de desechos metabólicos tales como dióxido de carbono y amonio aumentan
afectando a las larvas debido a su toxicidad. (Tucker, 1998). En los huevos de los peces el
vitelo tiende a ser agotado rápidamente y las larvas eclosionan prematuramente dando
como resultado la larvas con reservas energéticas deficien
de
probabilidad de enfermedades (Tucker, 1998)
in
enfermedades, e incrementar los requerimientos alimenticios para sobrevivencia,
mantenimiento y crecimiento (Tucker, 1998).
44
Una manera de evaluar el efecto de la temperatura en el mantenimiento y crecimiento es la
estimación de la longitud larval y el volumen del vitelo. En estudios anteriores se ha
portado para especies como Hippoglossus hippoglosus y Dicentrarchus labrax, que altas
de ser alterada por
tras variables como la carga microbiana.
.1 PROCEDIMIENTO
re
temperaturas afectan los huevos produciendo larvas pequeñas con reservas vitelinas
pequeñas. Otras estimaciones como la sobrevivencia son de utilidad al evaluar el efecto de
la temperatura en las prelarvas. Un alto porcentaje de sobrevivencia al finalizar la fase
prelarval a una temperatura dada, demuestra una óptima utilización de las reservas
energéticas por parte de la larva, claro que siempre debe de apoyarse sobre la información
de la longitud larval y el volumen del vitelo ya que la sobrevivencia pue
o
Por lo anterior se desarrolló un experimento en el cual prelarvas de L. guttatus fueron
sometidas a tres diferentes temperaturas con el fin de encontrar el rango óptimo para el
desarrollo prelarval de esta especie. Las temperaturas con las cuales re realizó el
experimento fueron seleccionadas tomando en cuenta las temperaturas máximas de cultivo
reportadas para otras especies de la familia y la temperatura mas baja observada en los
tanques de la Estación de Biología Marina en Puntarenas.
3
Para el desarrollo del experimento se utilizó a una hembra y dos machos de L. guttatus
sexualmente maduros (ver capitulo uno) que fueron transportados desde las jaulas flotantes
en Punta Cuchillo hasta la Estación de Biología Marina en Puntarenas. El experimento fue
hecho por triplicado, usando en cada experiencia un grupo de reproductores diferente, pero
del mismo lugar y origen.
Tomando como base los experimentos de reproducción (Capitulo 2), se comprobó que la
dosis que mejor funciona con respecto a los desoves y porcentajes de fertilización en L.
guttatus es la doble inyección de 900 UI GCH/ Kg. P.C, dosis con la cual se inyectó a la
hembra utilizada para el experimento con el fin de inducirla a desovar. Los machos fueron
45
inyectados con 250 U.I. de GCH sin importar su peso. Luego de obtener el desove los
huevos fertilizados fueron pasados al tanque de eclosión (Capitulo uno).
Con el fin de encontrar la temperatura adecuada para el desarrollo prelarval de L guttatus
se hizo un montaje de tres baterías cada una con cuatro incubadoras cilíndricas en PVC
de fondo plano, color transparente, con fondo en malla de 40 micras y con capacidad para
cinco litros; sumergidas en un baño maría con una capacidad de 250 litros, a temperaturas
de 22 ºC (Tratamiento I), 25 ºC (Tratamiento II) y 28 ºC (Tratamiento III) (± 1 ºC),
mantenidas con un termostato (figura 7). La temperatura externa se mantuvo en un rango de
15 – 20 ºC por medio del aire acondicionado del laboratorio que durante el desarrollo del
experimento funciono continuamente.
igura 10: Montaje utilizado para evaluar el efecto de la temperatura en las prelarvas de L. guttatus. F
El número en cada incubadora indica la cantidad de larvas colocadas.
Termostato
Aireador
200 100 100 100
(Álvarez-Lanjonchere, 1994). Posterior al montaje, las larvas se colectaron del tanque de
Tanto el baño maría, como cada incubadora, se llenó con agua marina clorada a razón de
0.06 ml /l, pasada por luz ultravioleta, filtrada a 1 µm y con aireación moderada
46
eclosión y se aclimataron a la temperatura de cada tratamiento, el proceso de aclimatación
tomo aproximadamente una hora. En seguida se colocaron en tres de las incubadoras de
cada tratamiento 100 larvas y en la cuarta incubadora se colocaron 200 larvas.
De la cuarta incu de 30
larvas cada 12 horas y se estimó la longitud total y el volumen del vitelo (figura 6). La
Volumen de vitelo = (π/6) × LV × AV2
badora de cada uno de los tres tratamientos se tomo una muestra
ecuación utilizada para encontrar el volumen del vitelo es:
Donde LV es la longitud del vitelo y AV es el alto del vitelo (Ávila and Juario, 1987 En:
Bermudes and Ritar, 1999) (Ver Figura 1). Al cabo de dos días, momento en el que las
larvas pigmentan los ojos y la boca se vuelve funcional (Drass et al., 2000) y después de
haber mantenido constantes las condiciones ambientales en las diferentes baterías, se
contó el número de larvas en los tres incubadoras que no fueron manipulados duranteel
experimento, con el objeto de determinar la sobrevivencia.
Figura 11: Medidas morfológicas estimadas en la prelarva de L. guttatus
En cada uno de los tratamientos se hizo un seguimiento de la temperatura, el oxígeno
isuelto y la salinidad con el fin de llevar el control de estas variables durante el desarrollo
e la experiencia.
d
d
47
Los promedios de longitud y volumen de vitelo de la prelarva fueron comparados entre
ada uno de los tratamientos por medio de un análisis de varianza (ANDEVA) y las
iferencias entre promedios se detectaron por medio de una prueba de Tuckey. La
obrevivencia se expresó como porcentaje para cada uno de los tratamientos y se comparo
ráficamente. La relación entre la longitud y el volumen del vitelo fue expresada como una
gresión de la longitud en función de vitelo para cada tratamiento, determinando el índice
e Pearson y su significancia por medio de una prueba t planteando las siguientes hipótesis:
H0: Longitud Tratamiento n ≠ Volumen del vitelo Tratamiento nHa: Longitud Tratamiento n = Volumen del vitelo Tratamiento n
c
d
s
g
re
d
48
3.2 RESULTADOS
El tratamiento I tuvo una temperatura promedio de 22.1 °C ± 0,47. Para el tratamiento II la
temperatura promedio fue 24.7 °C ± 0.38 °C. La media de temperatura del tratamiento III
fue 27.6 °C ± 0.42 °C (Tabla 8).
Para los tratamientos de I y II los promedios de oxigeno disuelto fueron de 6.20 mg/ l ±
0.66 mg/ l y 5.90 mg/ l ± 0.67 mg/ l, respectivamente. El tratamiento III, el oxígeno
disuelto tuvo un promedio de 5.7 mg / l. Durante el desarrollo de las tres replicas del
xperimento se manejo una salinidad de 35 ‰ sin que esta hubiese cambiado en ningún e
momento (Tabla 8).
Tabla 8. Diferentes parámetros fisicoquímicos monitoreados durante el experimento de temperatura en prelarvas de L guttatus. Los datos de temperatura y oxígeno disuelto están expresados en medias y desviaciones que fueron obtenidas del total de mediciones hechas en las tres repeticiones del experimento.
Tratamientos Temperatura (°C) Oxigeno Disuelto (mg/l) Salinidad (UPS)
(22°C) 22.10 ± 0.47 6.20 ± 0.66 35
(25°C) 24.70 ± 0.38 5.90 ± 0.67 35
(28°C) 27.60 ± 0.42 5.70 ± 0.62 35
En las primeras 12 horas no se observaron diferencias en la longitud total de las prelarvas,
no obstante en los muestreos subsiguientes se observaron diferencias significativas en la
longitud prelarval en todos los tratamientos, exceptuando el muestreo realizado a las 36
horas en el cual no se observaron diferencias significativas entre el tratamiento I y III.
abla 9). El volumen del vitelo fue significativamente diferente en los tres tratamientos a
e los tres tratamientos agotaron sus reservas vitelinas. ( Tabla 9).
(T
las 12, 36 y 48 horas, mientras que a las 24 horas los promedios de volumen de vitelo de
los tratamientos I y III no mostraron diferencias significativas. Luego de 60 horas las larvas
d
49
En el tratamiento tud total aumento e ión con
la medida inicial, llegando a una longitud prom s
0 v vitelo en las primeras 12 horas fue de 101.64
µ 3 n re ic in e
com et v om de ± as
t ie C u en 65 mparación con
id b a omedio de 2.66 mm 2 mm al fi l del
xperimento. El volumen del vitelo a las 12 horas luego de la eclosión fue de 94.36 µm³ ±
ltima medición de 11.51 µm³ ± 4.99 µm³ , 36 horas después de la eclosión (Tabla 9).
volumen del vítelo en prelarvas de L. guttatus.. Los datos de ngitud total, y volumen del vítelo son promedios y desviaciones estandar obtenidas del total de
mediciones hechas en las tres repeticiones para cada muestreo(n= 90). Letras diferentes indican diferencias entre los tratamientos (P<0.05). Muestra Longitud total (mm)
22 °C 25°C 28°C Volumen del vitelo ( µm³ )
22 °C 25 °C 28 °C
I (22 °C), la la longi n un 63.91 % en comparac
edio al momento de la pigmentación de lo
ojos de 2.63 mm ± .11 mm. El olumen del
m³ ± 7.5 µm³ y o tuvo dife ncias signif ativas con el icial. Antes d desaparecer
pl amente el olumen pr edio fue 14.93 µm³ 2.7 µm³. L larvas del
ratam nto II (25 º ) mostraron n aumento longitud del .21 % en co
la med a inicial, o servando un longitud pr ± 0.1 na
e
19.59 µm³, y de 2.13 µm³ ± 0.45 µm³ 48 horas después de la eclosión (tabla 9). Las larvas
mantenidas a una temperatura de 28 ºC (Tratamiento III) mostraron un aumento en longitud
del 52.17 % en comparación con la medida inicial. La longitud promedio al final del
experimento fue de 2.47 mm ± 0.09 mm. La altura del cuerpo se redujo en un 52.17 %. El
vitelo fue absorbido 12 horas antes que en los otros dos tratamientos con un promedio en la
ú
abla 9. Estimación de la longitud el yTlo
t 0 h 1.61 ± 0.09 a 1.61 ± 0.09 a 1.61 ± 0.09 a 99.77± 0.02 a 99.77± 0.02 a 99.77± 0.02 a
t 12 h 2.17 ± 0.20 a 2.18 ± 0.40 a 2.20 ± 0.42 a 101.64 ± 37.5 c 94.36± 19.59 b 92.99± 15.6 a
t 24 h 2.47 ± 0.18 b 2.57 ± 0.18 c 2.40 ± 0.19 a 40.85 ± 9.70 a 59.31± 12.82 b 43.48± 9.9a
t 36 h 2.52 ± 0.19 a 2.67 ± 0.18 b 2.56 ± 0.13 a 22.45 ± 4.22 c 15.65± 4.22 b 11.51± 4.99 a
t 48 h 2.60 ± 0.19 b 2.66 ± 0.12 c 2.43 ± 0.25 a 14.93 ± 2.70 c 2.13± 0.45 b 0.00 a
t 60 h 2.63 ± 0.11 b 2.66 ± 0.12 c 2.47± 0.09 a 0.00 a 0.00 a -
La longitud prelarval mostró un comportamiento similar en los tres tratamientos,
aumentando rápidamente para luego estabilizarse transcurridas 24 horas. En los
tratamientos de 22 y 28 ºC se observó una variación en la longitud luego de las 24 horas. Al
50
finalizar el experimento, la longitud de las prelarvas fue mayor para los tratamientos de 22
y 25 ºC, mientras en el tratamiento de 28 ºC se observó un menor crecimiento (Figura 12).
Figura 12. Cambios en la longitud de las prelarvas (a) y el volumen del vitelo (b) durante las primeras 60 horas luego de la eclosión. Cada uno de los puntos representa el valor promedio de la longitud y el volumen del vitelo (n= 90).
HORAS 22 ºC 25 ºC 28 ºC0 99,77 99,77 99,77
12 101,64 94,36 92,9924 40,85 59,31 43,4836 22,45 15,65 11,5148 14,93 2,13 060 0 0 0
1,5
1,7
1,9
2,1
2,3
2,5
2,7
2,9
0 10 20 30 40 50 6Horas
Long
itud
(mm
)
(a)
0
01020
0 10 20 30 40 50 60Horas
30405060708090
100110
Vol
umen
( µm
³)
22 ºC25 ºC28 ºC
(b)
El tratamiento I tuvo una rápida reducción en el volumen de vitelo entre las 12 y 24 horas,
aunque luego de 36 horas se redujo la velocidad de absorción y desapareció por completo
0 horas posteriores a la eclosión. El vitelo del tratamiento II después de 12 horas tuvo un
decrecimiento constante, desapareciendo completamente a las 60 horas de la eclosión. El
6
51
vitelo de las prelarvas mantenidas del tratamiento III fue el que desapareció más
rápidamente de los tres tratamientos, siendo consumido completamente a las 48 horas
(Figura 12).
En el tratamiento I (22 °C) se dió una sobrevivencia promedio de 63.22 % ± 21.55 % con
n máximo de 92.06%. El tratamiento II (25 °C) tuvo un porcentaje promedio de 62.93 % ±
% (Figura 13).
plicas y
u
25.92 % con un máximo de 97.77 %. A 28 °C (Tratamiento III) tan solo se dió la
sobrevivencia de las larvas en la primera repetición, reduciendo así el promedio final a un
26.18 % ± 39.66
Figura 13: Porcentajes de sobrevivencia en prelarvas de L guttatus 60 horas después del comienzo del experimento. Las barras muestran el promedio de sobrevivencia obtenido de las tres relas repeticiones realizadas del experimento. (n= 9).La línea sobre la barra indica el error estándar de cada tratamiento
26,2%
62,9%63,2%
0
20
40
60
80
22°C 25°C 28°C Tratamientos
Porc
enta
je
52
Figura 14: Fotografías de prelarvas de L. guttatus a 22 ºC ( A, B y C), 25 ºC( D, E y F) y 28 ºC(G y H), tomadas 12, 48 y 60 horas luego de la eclosión.
12 h
48 h Tratamiento I ( 22°C)
12 h
60 h
Tratamiento II ( 25 °C)
En las prelarvas se adelantó o retrasó la aparición de algunas estructuras dependiendo del
tratamiento. En las 12 horas posteriores a la eclosión no se observaron diferencias
morfológicas entre los tres tratamientos. En todos se observaba claramente a la prelarva
sobre el vitelo, con un diámetro de gota oleosa similar para los tres, sin estructuras bucales,
pigmentos ópticos u órganos digestivos. Tan solo se notó que las prelarvas del tratamiento
ostraban ligeras deformaciones o imperfecciones en su vitelo (Figura 14).
48 h
12 h
48 h
60 h
Tratamiento III ( 28 °C)
III m
53
Luego de 48 horas las prelarvas de los tres tratamientos habían consumido parte de su
itelo, aunque en el tratamiento I la gota oleosa tenia un tamaño mayor comparado al de
los otros tratamientos. El desarrollo morfológico de las prelarvas fue similar si bien en el
tratamiento II las estructuras ópticas se observaban más definidas, aunque aún sin
pigmentar. Las prelarvas del tratamiento III mostraban algunas irregularidades; su
notocordo se veía en muchos casos doblado o recogido y el tamaño del vitelo y la gota
oleosa variaba mucho entre una prelarva y otra (Figura 14).
I el desarrollo de las estructuras bucales y la
aparición de los pigmentos ópticos en las prelarvas no se había terminado , el vitelo aún no
e había consumido por completo y la gota oleosa había sido consumida completamente, En
n las observaciones realizadas cada 12 horas fue apreciable una mayor resistencia a la
s prelarvas mantenidas a 22 y 25 ºC, puesto que a 28 ºC las prelarvas se
eterioraban rápidamente dificultando así la observación de sus características. La figura 13
v
Después de 60 horas, en el tratamiento
s
el tratamiento II la fase de prelarva había concluido y eran apreciables larvas con ojos
pigmentados completamente y boca e intestinos, mientras que en el tratamiento III que
igualmente había concluido la fase prelarval la pocas larvas vivas mostraban muchas
deformaciones en su notocordo a parte de ser muy sensibles a la manipulación por lo que
no fue posible lograr un registro fotográfico.
E
manipulación en la
d
muestra el estado de una prelarva mantenida a 28 ºC 12 horas luego de la eclosión minutos
después de haber sido capturada y anestesiada para su observación.
Figura 15: Prelarva de L. guttatus mantenida a 28 ºC luego de haber sido capturada para su observación.
54
Figura 16: Regresión lineal entre la longitud y el volumen del vitelo de la prelarva para los
tratamientos de 22 ºC (a), 25 ºC (b) y 28 ºC (c).
y = -129,59x + 357,94R2 = 0,5785y = -86,871x + 255,5R2 = 0,4433y = -67,463x + 194,68R2 = 0,2693
(a)
0255075
100125150175200225250275
1 1,2 1,4 1,6 1,8 2 2,2 2,4 2,6 2,8 3
(b)
0255075
100125150175200225250275
1 1,2 1,4 1,6 1,8 2 2,2 2,4 2,6 2,8 3
(c)
0255075
100125150175200225250275
1 1,2 1,4 1,6 1,8 2 2,2 2,4 2,6 2,8 3
Vol
umen
del V
itelo
(µm
³)
Longitud Total (mm)
La relación entre la longitud total de la prelarva y el volumen de vitelo fue inversa en los
tres tratamientos, siendo el tratamiento I en el que se obtuvo una mayor pendiente y el
tratamiento III el de menor pendiente (figura 12). El índice de correlación de Pearson
superó en los tres tratamientos el 50 %, siendo más alto en el tratamiento I con un valor de
.76, seguido por el de II y III con un valor de 0.60 y 0.51, respectivamente. 0
55
3.3 DISCUSION
La longitud total de las prelarvas de L. guttatus al momento de la eclosión fue de 1.61 ±
0.09 mm, Emata et al. (1994) encontró una longitud total inicial de 1.61 ± 0.018 mm (n =
20) a 28 º C para L. argentimaculatus, mientras que Singhagraiwan and Doi. (1993)
observaron una Longitud total inicial de 1.8 mm a una temperatura que fluctuó entre los 27
y 32 º C para la misma especie. En L. griseus, la longitud total al momento de la eclosión
fue de 1.872 ± 88.21 mm con una temperatura del tanque de eclosión de 28 ± 1 ºC (Rosas et
al., 1998). Así , las prelarvas de las diferentes especies del género Lutjanus guardan
características similares y que las diferencias especificas se dan cuando el desarrollo larval
se encuentra mas adelantado.
La longitud total de las prelarvas de los tratamientos I (22ºC) , II (25º C) y III (28º C),
fueron significativamente diferentes en las primeras 12 horas (I = 2.17 mm ± 0.20 mm, II =
2.18 mm ± 0.40 mm y III = 2.20 mm ± 0.42 mm ), aunque luego de las primeras 24 horas
fue la longitud total de las prelarvas del tratamiento II (2.57 mm ± 0.18 mm ) la mayor de
las tres, con un crecimiento que se detuvo entre las 48 y 60 horas. El Tratamiento I
mantuvo un crecimiento estable, a diferencia del tratamiento III, en el cual luego de 36
horas se redujo la longitud total en un 5.06 % (2.56 mm ± 0.13 a 2.43 ± 0.25). Watanabe et
al (1998), encontraron una longitud total para L. analis de 2.66 ± 0.12, 48 horas luego de la
eclosión a una temperatura promedio de 25.7 ± 0.2 ºC; Rosas et al.(1998) midieron la
prelarva de L. griseus 55 horas después de la eclosión cuyo valor fue de 2.54 mm a una
temperatura de 28 ºC Aunque las diferencias con otras especies de la familia Lutjanidae
son muy pequeñas, en ninguno de los artículos citados se realizaron trabajos en los cuales el
efecto de la temperatura en las prelarvas fuera estudiado directamente. A las 48 horas de
iniciado el experimento es apreciable una reducción en el incremento de la longitud total en
s tres tratamientos; esta reducción posiblemente este relacionada con la manera en que la lo
prelarva utiliza la energía del vitelo. Antes de que las reservas vitelinas de la prelarva se
agoten, la prioridad es desarrollar las estructuras que van a permitir a la larva procurarse
de alimento, por esto la formación de los órganos mecano-receptores, quimiorreceptores y
56
óptico receptores es crucial. Estos órganos se encuentran ubicados en su mayoría en la
región cefálica, por lo que ésta es la parte de la prelarva que mas cambios tiene en su
proceso de transformación en una larva verdadera y debido a que el desarrollo de estos
órganos no contribuyen a la longitud total, es normal que el incremento de la longitud total
se vea reducido (Segner, 2002; Tucker, 1998). Teniendo en cuenta lo anterior una
temperatura de 25 °C favorece el crecimiento de las prelarvas de L. guttatus, puesto que
llegan rápidamente a la longitud máxima, dejando a disposición de la prelarva una mayor
cantidad de energía para el desarrollo de las estructuras necesarias en el momento en el cual
la reserva vitelina se termina.
éticas deficientes, afectando así la
sistencia de la larva y su posterior habilidad para capturar alimento. Una temperatura alta
vorece el incremento de poblaciones bacterianas que van a afectar directamente la salud
de la larva. Cuando el rango de temperatura es óptimo se da una sincronización entre el
crecimiento, la disponibilidad de energía y el momento de comenzar a alimentarse.
Además, la cantidad de energía que usa la larva para su mantenimiento se reduce y es
utilizada desarrollo estructural (Tucker, 1998, Bermudes and Ritar. 1999). Es de gran
En la mayoría de trabajos realizados no se hace mención al volumen del vitelo. El único
dato reportado es el de Rosas et al. (1998) para L. griseus con un vitelo inicial de 861.4
mm ± 61.2 mm dato que no es posible ya que la prelarva solo mide 1.8 mm (99.77± 0.02
µm³). El tratamiento I (22 ºC) tuvo una rápida reducción en el volumen de vitelo entre las
12 y 24 horas, aunque a las 36 horas se redujo la velocidad de absorción desapareciendo
por completo 60 después de la eclosión. El vitelo del tratamiento II (25º C) a las 12
horas tuvo un decrecimiento constante, desapareciendo completamente transcurridas 60
horas desde la eclosión. El vitelo de las prelarvas del tratamiento III (28º C) fue consumido
más rápidamente que el de los otros dos tratamientos, desapareciendo completamente a las
48 horas. A temperaturas por debajo del rango óptimo, las prelarvas de peces pueden
aumentar en exceso tiempo de absorción del vitelo, aumentando las probabilidades de
contraer enfermedades, además, puede afectar la viabilidad de las larvas. Si por el contrario
la temperatura excede el rango normal la tendencia del vitelo es de agotarse rápidamente
dando como resultado larvas con reservas energ
re
fa
57
importancia el momento en que la prelarva se transforma en una larva verdadera ya que si
la energía del vitelo fue correctamente aprovechada, la larva podrá comenzar a alimentarse
y seguir con su desarrollo ontogénico, pero si la larva no aprovecho adecuadamente la
energía del vitelo y atrasa el momento de su primera alimentación cruza un punto de no
retorno (PNR), luego del cual, aunque se alim te no va a lograra terminar su desarrollo y
morirá (Tucker, 1998). Así, según lo observado durante el experimento la temperatura de
25 °C favorece el crecimiento y desarrollo de estructuras en la prelarva de L guttatus sin
agotar rápidamente el volumen del vitelo ni retrasar su absorción.
No hay trabajos realizados en sobrevivencia prelarval para la familia Lutjanidae. Tan solo
se encontró reportada una sobrevivencia de 79.16 % para L. griseus calculada 24 horas
luego de la eclosión (Rosas et al., 1998). La sobrevivencia de las larvas fue mayor en los
tratamientos I y II (63.22 % ± 21.55 % y 62.93 % ± 25.92 % respectivamente), mientras el
tratamiento III observó un porcentaje de sobrevivencia mas bajo (26.18 % ± 39.66 %).
Tomando en cuenta lo anterior, aunque en edio la sobrevivencia a60 horas post-
eclosión del tratamiento I sea mayor , las prelarvas del tratamiento II tienen más
probabilidades de culminar su desarrollo ontogénico ya que se han convertido en larvas
verdaderas y están listas para alimentarse, m entras que en el tratamiento I aún no se ha
completado el desarrollo de toda boca y entre mas se retrase el
omienzo de la alimentación las probabilidades que las larvas mueran aumentan
ignificativamente.
La pru
vitelo T
de la p lumen del vitelo de la misma. El modelo que mejor se
justo a los datos de los tres tratamientos fue el logarítmico, esto debido a la reducción en el
increm
varió p
tratami ente). Al observar el comportamiento de la
nea de tendencia es apreciable que la pendiente de las gráficas depende de la temperatura,
en
prom
i
s las estructuras de la
c
s
eba t de significancia rechazó la hipótesis Longitud Tratamiento n ≠ Volumen del
ratamiento n, es decir, que existe una relación entre el aumento en la longitud total
relarva y la reducción del vo
a
ento de la longitud total luego de 36 horas de la eclosión. El índice de correlación
ara cada uno de los tres tratamientos encontrando así una mayor correlación en los
entos I y II, (0.58 y 0.43 respectivam
lí
58
es i
temper
condici como resultado una larva mas grande, fuerte y
ejor nadadora. Sin embargo, Alderdice and Velsen (1971, En: Bermudes and Ritar,
199
opacad
dec r que la cantidad de vitelo de la prelarva en un momento dado dependerá de la
atura a la cual este. Blaxter (1969, En: Bermudes and Ritar, 1999), sugiere que las
ones ideales de temperatura dan
m
9), dicen que la ventaja de tener una larva mas grande a bajas temperaturas puede verse
a por una reducción en la actividad de larva.
59
6. CONCLUSIONES
1. Las dosis de OVAPRIM utilizadas en el experimento (0.35 + 0.35 ml/ Kg. P.C y 0.5
+ 0.5 ml/ Kg. P.C ) son eficaces para inducir la maduración final de los oocitos de
L. guttatus, aunque su desempeño para inducir el desove en las concentraciones
utilizadas es deficiente.
2. El tiempo que requieren las dosis de OVAPRIM utilizadas para lograr la
maduración final de los oocitos es el doble del que necesita la GCH en una
concentración de 900 + 900 U.I/ P.C.
3. Las dosis de GCH menores a 900 + 900 U.I / P.C, son eficaces al inducir la
maduración final de los oocitos, mas su desempeño es irregular y poco confiable al
inducir el desove de L. guttatus.
4. Las hembras de L. guttatus son afines a la GCH como hormona inductora de la
maduración y el desove , además, una dosis de 900 + 900 U.I / P.C es la cantidad
de hormona que produce me a que dosis menores no poseen la
potencia suficiente para asegurar la m duración de los oocitos y el posterior desove
de los huevos.
L. guttatus consumen más
rápidamente su vitelo, crecen menos, son más sensibles a la manipulación, a parte
Las prelarvas mantenidas a 22 °C tienen un adecuado crecimiento, consumen
lentamente su vitelo, pero retrasan el desarrollo de la boca y la pigmentación de los
jores resultados, y
a
5. A una temperatura de 28 °C, las prelarvas de
de generarse deformaciones en el notocordo.
6.
ojos aumentándose las probabilidades de que la larva pase el punto de no retorno
sin alimentarse.
60
7. A 25 °C las prelarvas tienen un importante incremento en su longitud y el final de
su reserva vitelina esta sincronizada con la aparición de la boca y la pigmentación
de los ojos así, la nueva larva esta lista para alimentarse justo cuando se termina el
vitelo.
e en 22 °C aún no se ha terminado la fase de prelarval en la cual se reduce de
manera importante la sobrevivencia.
vitelo y sobrevivencia es a los 25 °C.± 1°C.
8. La sobrevivencia es alta entre los 22 y 25 °C , 60 horas luego de la eclosión,
aunqu
9. La temperatura en la cual la prelarva tiene un mejor desarrollo morfológico,
crecimiento, adecuada absorción del
61
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. A., 1: 109 – 115. C
65
ANEXO A. Jaulas flotantes ubicadas en Punta Cuchillo y Estación de Biología Marina en
untarenas. P
66
67
ANEXO B. Diferentes estados de madurez de los oocitos y huevos de L. guttatus. (a) fase I, (b) fase III, (c) fase IV, (d) Huevo fertilizado, (e) clivajes tempranos, (f) embrión post-neurula, (g) prelarva a punto de eclosionar.
a. b.
c. d.
e. f.
g.
A C s v r e e u pap a .
NEXO . Característica obser adas pa a la sel cción d reprod ctores y método usado ara licar la hormon en L. guttatus
P a e s sresenci de sem n en lo macho
Pr to s aesencia de ooci s en la hembr s
Mét ad a l o
odo us o para plicar a horm na
68
69
A D i e e e se strando l e lo to e IL H P 7 1
m A
m R
R
NEXO . Matr z compl ta del xperim nto de lección de hormona mo os diám tros des oocitos (µm) de los tratamien s Diluy nte (D ), GC , OVA RIM 0. Y OVAPRIM .0.
Diá etro (µm ) 0 HOR S DIL. GCH OV 0,7 OV1,0
Diá etro (µm ) 24 HO AS DIL. GCH OV 0,7 OV1,0
Diámetro (µm ) 48 HO AS DiL. GCH OV 0,7 OV1,0
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Diám A
m R
R
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Diámetro (µm ) 48 HO AS DiL. GCH OV 0,7 OV1,0
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,2 454,5 420,5 431 ,4 784,1 590,9 556 ,7 409,1 477,3 35409,1 420,5 431,8 454,5 375,0 761,4 625,0 522,7 409,1 454,5 500,0 386,4454,5 431,8 386,4 431,8 386,4 840,9 477,3 488,6 363,6 477,3 534,1 420,5431,8 443,2 409,1 431,8 443,2 693,2 477,3 443,2 397,7 363,6 522,7 420,5409,1 443,2 397,7 431,8 420,5 795,5 477,3 431,8 352,3 352,3 511,4 465,9420,5 431,8 386,4 454,5 386,4 750,0 488,6 465,9 375,0 431,8 511,4 454,5340,9 409,1 409,1 465,9 420,5 761,4 465,9 431,8 431,8 420,5 500,0 443,2363,6 386,4 409,1 420,5 375,0 795,5 465,9 420,5 352,3 454,5 488,6 420,5431,8 386,4 397,7 431,8 397,7 738,6 488,6 465,9 375,0 397,7 511,4 397,7443,2 409,1 386,4 420,5 397,7 772,7 625,0 488,6 375,0 375,0 534,1 386,4420,5 488,6 431,8 420,5 443,2 784,1 477,3 477,3 375,0 420,5 488,6 454,5420,5 386,4 409,1 397,7 363,6 727,3 454,5 488,6 397,7 409,1 511,4 420,5420,5 386,4 431,8 386,4 397,7 772,7 477,3 511,4 386,4 625,0 511,4 420,5363,6 420,5 409,1 420,5 375,0 738,6 454,5 488,6 409,1 454,5 488,6 420,5
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70
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829,5397,7 465,9 420,5 420,5 454,5 477,3 431,8 397,7 454,5 386,4 647,7 772,7386,4 386,4 431,8 409,1 500,0 579,5 465,9 420,5 420,5 329,5 681,8 818,23 397,7 420 ,2 806,8
9 4 772,7, , 0 4 7 3 818,2, , 9 0 7 4 772,7, , 9 3 1 3 795,5, , 7 2 7 4 761,4, , 9 0 9 4 761,4, , 9 2 1 4 784,1, , 6 2 8 4 806,8, , 7 8 3 3 750,0, , 1 9 8 4 750,0, , 4 9 8 5 784,1, , 0 3 1 4 806,8, , 9 0 9 3 750,0, , 1 3 8 4 806,8, , 0 9 6 4 818,2, , 5 8 5 4 750,0, , 5 8 3 4 795,5, , 5 0 4 4 795,5, , 5 6 8 4 761,4, , 9 9 0 4 772,7, , 7 0 7 4 727,3, , 7 9 1 4 750,0, , 9 0 9 4 806,8, , 1 9 8 3 772,7
443,2 386,4 420,5 443,2 431,8 738,6 477,3 409,1 386,4 579,5 659,1 750,0397,7 409,1 420,5 431,8 443,2 772,7 477,3 352,3 420,5 602,3 795,5 840,9375,0 409,1 454,5 420,5 500,0 670,5 431,8 431,8 409,1 522,7 511,4
63,6 443,2 409,1 443,2 681,8 465,9 ,5 409,1 500,0 568420397
,5 , 0 4437 454
2 425 409
,5 40,1 42
,1 4,5 4
3 8 41,8 63,2 6
1,80,5 4
20,531,8
20,586,4
397,7 375,0
454,5 556,8
670,5568,2
443 2 409 1 409,1 40 ,1 4 9,1 7 2,7 409,1 54,5 409,1 590,9 579,5397 7 454 5 386,4 40 ,1 4 1,8 7 5,9 500,0 86,4 443,2 863,6 431,8386386
4 4434 420
2 4095 397
,1 47,7 40
,3 4,1 4
0,5 79,1 7
2,7 45,5 5
88,600,0
09,154,5
409,1 409,1
875,0 727,3
409,1534,1
386 4 409 1 420,5 40 ,1 4 0,5 8 8,2 397,7 43,2 386,4 625,0 568,2375 0 409 1 409,1 38 ,4 4 0,5 7 4,1 500,0 09,1 420,5 636,4 568,2386397
4 4437 431
2 4208 431
,5 39,8 43
,7 3,8 3
6,4 67,7 7
6,4 44,1 4
77,331,8
97,765,9
465,9 409,1
613,6 636,4
681,8693,2
375 0 352 3 454,5 45 ,5 3 7,7 7 4,1 420,5 00,0 375,0 602,3 534,1409 1 386 4 431,8 42 ,5 4 1,8 8 8,2 420,5 65,9 397,7 670,5 545,5386431
4 3868 409
4 4201 431
,5 40,8 43
,1 4,8 4
9,1 71,8 6
5,5 31,8 4
86,431,8
86,431,8
386,4 409,1
693,2 852,3
465,9579,5
397 7 465 9 420,5 42 ,5 3 7,7 3 3,6 465,9 43,2 420,5 500,0 681,8420 5 420 5 409,1 37 ,0 3 6,4 6 9,1 443,2 43,2 397,7 863,6 579,5431386
8 4094 386
1 4314 397
,8 37,7 37
,0 3,0 4
6,4 79,1 8
8,6 40,9 5
88,600,0
54,543,2
397,7 409,1
795,5 625,0
602,3625,0
409 1 375 0 409,1 37 ,0 4 5,9 6 1,8 500,0 31,8 397,7 875,0 579,5375 0 363 6 375,0 40 ,1 3 7,7 8 6,8 488,6 20,5 420,5 545,5 647,7409409
1 3861 443
4 4202 409
,5 39,1 39
,7 4,7 3
9,1 77,7 8
2,7 48,2 4
54,543,2
54,520,5
397,7 420,5
659,1 590,9
579,5556,8
431 8 431 8 375,0 40 ,1 4 9,1 6 3,2 431,8 31,8 352,3 840,9 556,8431 8 431 8 420,5 43 ,8 3 7,7 7 4,1 431,8 97,7 420,5 420,5 590,9
71
Diámetro ( H
tr L G
me RAS G OV1,0
µm ) 0 ORAS DIL. GCH OV 0,7 OV1,0 DI
Diáme o (µm ) 24 HORAS . CH OV 0,7 OV1,0
Diá tro (µm ) 48 HODiL. CH OV 0,7
420, , 9 4 1 4 829,55 454 5 431,8 40 ,1 4 3,2 7 5,9 465,9 09,1 386,4 397,7 568,2375, , 0 8 8 4 784,1
, , 6 0 3 4 761,4, , 1 7 8 4 772,7, , 0 9 9 4 772,7, , 7 0 8 4 806,8, , 0 2 8 3 829,5, , 5 9 5 3 750,0, , 7 2 7 4 772,7, , 5 2 2 4 795,5, , 3 5 0 4 818,2, , 0 8 6 4 806,8
1 7 5 3 761,4
0 465 9 386,4 42 ,5 3 6,4 7 4,1 488,6 43,2 420,5 375,0 568,2443 2 409 1 397,7 38 ,4 4 9,1 7 8,6 488,6 20,5 443,2 613,6 590,9454 5 443 2 443,2 43 ,8 3 5,0 6 1,8 522,7 20,5 397,7 579,5 579,5465 9 363 6 454,5 42 ,5 3 7,7 7 5,5 454,5 09,1 386,4 590,9 681,8409 1 397 7 409,1 39 ,7 4 9,1 7 4,1 465,9 54,5 397,7 590,9 477,3386 4 409 1 477,3 42 ,5 4 0,5 6 1,8 511,4 86,4 375,0 465,9 579,5397 7 420 5 431,8 37 ,0 3 7,7 5 6,8 500,0 97,7 397,7 522,7 579,5375 0 420 5 431,8 47 ,3 4 0,5 4 7,3 454,5 09,1 431,8 465,9 602,3409 1 454 5 420,5 46 ,9 4 0,5 3 9,5 454,5 54,5 409,1 556,8 534,1409 1 420 5 397,7 44 ,2 3 2,3 8 6,8 420,5 54,5 409,1 363,6 500,0431 8 375 0 409,1 42 ,5 3 6,4 5 8,2 454,5 31,8 431,8 340,9 522,7
431,8 43 ,8 4 7,3 7 0,0 431,8 97,7 443,2 545,5 625,0
72
ANEXO E. M c t x e n d os de los s d a 9 0 C g B + Kg P.C),
. ( .
R
atriz omple a del e perimento de dosis d GCH mostra do los iámetroocito (µm) e los tr tamientos A ( 00 +9 0 UI G H / K P.C), (250 900 UI GCH /C (250 +750 UI GCH / Kg P C) y D 750 +750 UI GCH / Kg P.C)
Diámetro (µm ) 0 HORAS A B C D
Diámetro (µm ) 24 HO AS A B C D
Diámetro (µm ) 48 HORAS A B C D
381,3 409,1 397,7 409,1 554,6 477,3 431,8 556,8 543,1 431,8 477,3 579,5 346,6 397,7 431,8 397,7 462,2 511,4 454,5 636,4 520,0 454,5 2784,1 659,1 381,3 439,1
454,5 443,2
386,4 443,2
454,5 443,2
496,9 473,8
500,0 488,6
420,5 511,4
670,5 397,7
508,4 508,4
420,5 511,4
556,8 454,5
613,6 636,4
392,9 420,5 443,2 443,2 392,9 488,6 420,5 545,5 508,4 420,5 545,5 568,2 346,6 431,8 409,1 465,9 473,8 534,1 454,5 613,6 554,6 454,5 568,2 613,6 381,3 346,6
420,5 431,8
375,0 386,4
465,9 409,1
520,0 508,4
477,3 556,8
454,5 477,3
511,4 670,5
531,5 554,6
454,5 477,3
511,4 488,6
590,9 579,5
369,8 375,0 454,5 454,5 543,1 488,6 488,6 625,0 496,9 488,6 534,1 625,0 323,5 420,5 431,8 409,1 473,8 477,3 454,5 670,5 485,3 454,5 522,7 602,3 323,5 358,2
409,1 431,8
397,7 409,1
454,5 443,2
427,5 531,5
488,6 454,5
500,0 454,5
602,3 636,4
496,9 520,0
500,0 454,5
522,7 488,6
704,5 613,6
416,0 443,2 420,5 443,2 50 ,2 53 5 8,4 500,0 522,7 568 1,5 522,7 500,0 579,416,0 375,0 397,7 443,2 450,6 454,5 454,5 704,5 496,9 454,5 522,7 556,8 416,0 454,5 454,5 454,5 485,3 534,1 454,5 704,5 520,0 454,5 500,0 534,1 392,9 397,7 431,8 420,5 462,2 465,9 465,9 681,8 485,3 465,9 465,9 556,8 358,2 431,8 420,5 443,2 450,6 500,0 443,2 670,5 462,2 443,2 579,5 625,0 358,2 431,8 363,6 454,5 450,6 522,7 454,5 625,0 543,1 454,5 511,4 625,0 358,2 465,9 409,1 454,5 485,3 488,6 454,5 602,3 520,0 454,5 556,8 568,2 369,8 386,4 397,7 443,2 462,2 488,6 556,8 670,5 543,1 556,8 511,4 545,5 392,9 340,9 409,1 443,2 485,3 454,5 465,9 590,9 589,3 465,9 500,0 556,8 381,3 386,4 386,4 465,9 404,4 500,0 477,3 670,5 554,6 477,3 511,4 613,6 369,8 431,8 431,8 454,5 416,0 511,4 545,5 659,1 566,2 443,2 500,0 704,5 381,3 363,6 477,3 454,5 427,5 477,3 511,4 681,8 566,2 511,4 534,1 750,0 381,3 431,8 431,8 386,4 462,2 420,5 522,7 670,5 520,0 522,7 556,8 647,7 369,8 375,0 477,3 454,5 439,1 500,0 465,9 590,9 473,8 465,9 454,5 522,7 369,8 443,2 409,1 454,5 427,5 465,9 420,5 625,0 508,4 420,5 522,7 579,5 381,3 409,1 375,0 477,3 439,1 454,5 500,0 636,4 416,0 500,0 568,2 602,3 427,5 420,5 386,4 340,9 508,4 488,6 477,3 670,5 496,9 477,3 590,9 625,0 346,6 363,6 465,9 454,5 450,6 465,9 431,8 568,2 520,0 431,8 431,8 579,5 323,5 409,1 397,7 420,5 531,5 465,9 465,9 693,2 520,0 465,9 534,1 602,3 392,9 420,5 409,1 465,9 485,3 465,9 477,3 681,8 496,9 477,3 488,6 681,8 416,0 352,3 386,4 477,3 439,1 477,3 500,0 602,3 496,9 500,0 500,0 693,2 439,1 443,2 420,5 420,5 473,8 465,9 465,9 625,0 508,4 465,9 488,6 636,4 404,4 443,2 420,5 420,5 450,6 488,6 488,6 681,8 496,9 488,6 534,1 602,3 392,9 409,1 386,4 431,8 473,8 488,6 500,0 704,5 543,1 500,0 488,6 568,2 427,5 397,7 409,1 488,6 473,8 465,9 465,9 659,1 531,5 465,9 556,8 500,0 416,0 397,7 375,0 488,6 439,1 522,7 590,9 636,4 496,9 590,9 534,1 579,5 358,2 431,8 409,1 454,5 496,9 465,9 454,5 613,6 508,4 454,5 534,1 670,5 462,2 454,5 420,5 454,5 508,4 465,9 431,8 568,2 462,2 431,8 568,2 556,8 404,4 369,8 42
443,2 0,5 42
386,4 0,5 40
465,9 9,1 56
473,8 6,2 48
454,5 8,6 48
477,3 8,6 62
659,1 5,0 56
508,4 6,2 48
477,3 8,6
545,5 568,2 73
636,4 8,6
73
Diámetro (µm ) 0 HORAS A
R
B C D
etro (µm ) 24 HO AS Diám A B C D
Diámetro (µm ) 48 HORAS A B C D
312,0 443,2 420,5 409,1 485,3 534,1 454,5 556,8 531,5 454,5 534,1 556,8 392,9 352,3 431,8 454,5 462,2 534,1 420,5 659,1 554,6 420,5 568,2 647,7 358,2 375,0 386,4 454,5 450,6 477,3 500,0 659,1 520,0 500,0 511,4 659,1 381,3 409,1 431,8 454,5 485,3 477,3 534,1 681,8 520,0 534,1 500,0 556,8 323,5 409,1 409,1 477,3 450,6 477,3 465,9 681,8 496,9 465,9 454,5 636,4 381,3 409,1 420,5 454,5 496,9 568,2 500,0 681,8 496,9 500,0 465,9 625,0 369,8 397,7 409,1 454,5 416,0 420,5 431,8 693,2 520,0 431,8 522,7 647,7 346,6 363,6 363,6 409,1 439,1 488,6 465,9 568,2 496,9 465,9 556,8 534,1 381,3 386,4 375,0 375,0 612,4 386,4 477,3 613,6 577,7 636,4 500,0 897,7 392,9 340,9 363,6 363,6 520,0 386,4 556,8 579,5 531,5 443,2 318,2 715,9 358,2 386,4 420,5 375,0 554,6 261,4 488,6 568,2 543,1 443,2 511,4 852,3 381,3 386,4 386,4 386,4 531,5 215,9 318,2 681,8 566,2 431,8 500,0 397,7 358,2 420,5 431,8 397,7 589,3 340,9 329,5 681,8 554,6 363,6 795,5 875,0 369,8 386,4 397,7 397,7 439,1 363,6 397,7 625,0 508,4 397,7 1
404 ,9 48 ,1 288 1 5,0 9,1 5,0
1
04,4 375,0 409,1 386,4 496,9 363,6 545,5 738,6 566,2 534,1 454,5 420,5 9,8 306,8 409,1 375,0 600,9 465,9 579,5 625,0 589,3 318,2 340,9 545,5
58,2 409,1 409,1 397,7 566,2 431,8 534,1 647,7 554,6 363,6 1125,0 670,5 92,9 295,5 409,1 386,4 496,9 579,5 556,8 306,8 566,2 500,0 1000,0 784,1 92,9 284,1 386,4 397,7 485,3 250,0 534,1 295,5 589,3 784,1 488,6 681,8 69,8 386,4 397,7 363,6 496,9 250,0 409,1 352,3 589,3 465,9 522,7 488,6 2,9 397,7 420,5 340,9 543,1 295,5 556,8 602,3 554,6 852,3 500,0 500,0
16,0 375,0 477,3 352,3 520,0 488,6 488,6 556,8 566,2 454,5 511,4 522,7 92,9 386,4 431,8 375,0 520,0 397,7 500,0 738,6 554,6 443,2 465,9 465,9 92,9 329,5 386,4 340,9 543,1 352,3 522,7 659,1 520,0 409,1 1090,9 477,3 92,9 375,0 420,5 352,3 543,1 329,5 545,5 636,4 577,7 340,9 1000,0 704,5 81,3 420,5 454,5 409,1 543,1 295,5 534,1 693,2 485,3 454,5 852,3 909,1
000,0 750,0 358,2 306,8 329,5 420,5 531,5 500,0 431,8 647,7 577,7 363,6 977,3 670,5 358,2 352,3 409,1 340,9 427,5 454,5 500,0 647,7 543,1 352,3 590,9 431,8
,4 386,4 397,7 340 5,3 465,9 420,5 784 ,9 329,5 715,9 909,323,5 375,0 409,1 37 439,1 352,3 454,5 65 508,4 431,8 977,3 37381,3 329,5 431,8 363,6 462,2 352,3 454,5 727,3 462,2 409,1 988,6 454,5 381,3 340,9 409,1 386,4 496,9 534,1 465,9 363,6 566,2 340,9 761,4 420,5 392,9 306,8 409,1 363,6 520,0 352,3 443,2 318,2 589,3 386,4 011,4 477,3 392,9 295,5 409,1 352,3 554,6 261,4 477,3 352,3 543,1 318,2 943,2 454,5 381,3 318,2 386,4 375,0 554,6 284,1 477,3 647,7 543,1 409,1 920,5 420,5 358,2 386,4 386,4 363,6 485,3 204,5 454,5 647,7 589,3 431,8 954,5 465,9 369,8 386,4 386,4 363,6 462,2 363,6 522,7 579,5 416,0 340,9 522,7 761,4 381,3 420,5 409,1 409,1 520,0 250,0 522,7 613,6 543,1 375,0 511,4 602,3 358,2 352,3 397,7 352,3 473,8 204,5 556,8 534,1 554,6 340,9 454,5 738,6 381,3 295,5 409,1 409,1 496,9 215,9 500,0 636,4 554,6 431,8 454,5 454,5 358,2 340,9 409,1 409,1 589,3 261,4 443,2 363,6 508,4 477,3 522,7 454,5 369,8 431,8 420,5 340,9 508,4 250,0 443,2 329,5 520,0 477,3 556,8 454,5 404,4 329,5 375,0 386,4 566,2 511,4 488,6 340,9 531,5 465,9 454,5 465,9 404,4 295,5 420,5 363,6 531,5 465,9 363,6 579,5 508,4 363,6 534,1 465,9 358,2 329,5 420,5 375,0 624,0 579,5 397,7 568,2 554,6 465,9 568,2 488,6 369,8 431,8 431,8 340,9 531,5 329,5 488,6 613,6 566,2 340,9 545,5 443,2 43633333943333
74
Diámetro (µm ) 0 HORAS C D
Diámetro (µm ) 24 HORAS A B C D
Diámetro (µm ) 48 HORAS A B C D A B
392,9 329,5 443,2 352,3 543,1 352,3 397,7 681,8 531,5 454,5 977,3 477,3 43
04,4 318,2 397,7 363,6 358,2 352,3 488,6 329,5 496,9 829,5 1022,7 477,3 81,3 363,6 397,7 363,6 508,4 352,3 409,1 318,2 520,0 340,9 1045,5 477,3 58,2 284,1 397,7 409,1 473,8 340,9 488,6 556,8 520,0 397,7 522,7 534,1 46,6 386,4 409,1 431,8 543,1 329,5 556,8 659,1 531,5 318,2 659,1 511,4 04,4 329,5 443,2 409,1 346,6 465,9 522,7 340,9 543,1 454,5 522,7 454,5 04,4 409,1 409,1 409,1 566,2 318,2 522,7 306,8 520,0 454,5 522,7 500,0 2,9 363,6 386,4 420,5 520,0 340,9 431,8 625,0 531,5 477,3 511,4 443,2
69,8 329,5 420,5 420,5 485,3 397,7 500,0 659,1 554,6 340,9 511,4 454,5 46,6 375,0 340,9 409,1 543,1 500,0 431,8 318,2 531,5 352,3 511,4 465,9 16,0 340,9 363,6 363,6 543,1 295,5 500,0 363,6 485,3 340,9 511,4 454,5 63,6 465,9 454,5 431,8 647,7 659,1 602,3 420,5 431,8 454,5 261,4 795,5 1,8 443,2 409,1 443,2 625,0 590,9 488,6 375,0 409,1 454,5 227,3 704,5
31,8 465,9 397,7 431,8 704,5 568,2 454,5 375,0 352,3 500,0 465,9 375,0 97,7 431,8 420,5 431,8 579,5 568,2 477,3 386,4 454,5 465,9 340,9 329,5 86,4 431,8 431,8 397,7 636,4 545,5 477,3 409,1 477,3 454,5 511,4 375,0
4 545,5 465,9 511,4 375,0 477,3 431,8 534,1 454,5 45,5 420,5 420,5 386,4 545,5 477,3 454,5 397,7 454,5 420,5 431,8 818,2
454,5 420, ,1 409,1 568,2 556,8 386,4 568,2 409,1 920,5 6 1,
1 4 ,2 1 7 4 ,9 6 2 1 397,7 602,3 454,5 534,1 375,0 465,9 431,8 397,7 738,6
420,5 443,2 386,4 420,5 534,1 534,1 443,2 397,7 454,5 431,8 352,3 931,8 420,5 363,6 386,4 420,5 454,5 568,2 431,8 375,0 431,8 409,1 534,1 306,8 454,5 409,1 431,8 431,8 511,4 500,0 454,5 352,3 363,6 409,1 488,6 806,8 420,5 465,9 409,1 397,7 613,6 534,1 545,5 420,5 829,5 352,3 545,5 272,7 443,2 420,5 363,6 397,7 500,0 454,5 522,7 352,3 534,1 375,0 659,1 340,9 431,8 443,2 409,1 443,2 613,6 477,3 511,4 375,0 477,3 568,2 625,0 772,7 443,2 420,5 431,8 397,7 647,7 488,6 556,8 386,4 511,4 522,7 613,6 363,6 454,5 465,9 409,1 420,5 681,8 522,7 511,4 375,0 488,6 465,9 488,6 431,8 409,1 409,1 443,2 420,5 761,4 534,1 545,5 431,8 590,9 500,0 568,2 397,7 488,6 454,5 420,5 420,5 750,0 443,2 534,1 363,6 454,5 477,3 227,3 340,9 409,1 420,5 409,1 397,7 613,6 579,5 511,4 340,9 409,1 443,2 511,4 352,3 443,2 386,4 386,4 420,5 568,2 522,7 534,1 397,7 511,4 454,5 477,3 329,5 409,1 465,9 397,7 386,4 556,8 511,4 545,5 465,9 465,9 454,5 318,2 340,9 409,1 477,3 420,5 386,4 659,1 500,0 500,0 454,5 477,3 477,3 488,6 340,9 420,5 397,7 431,8 375,0 738,6 488,6 545,5 454,5 500,0 420,5 556,8 375,0 454,5 454,5 386,4 397,7 681,8 488,6 477,3 454,5 511,4 409,1 227,3 318,2 443,2 465,9 409,1 386,4 670,5 534,1 568,2 397,7 352,3 488,6 488,6 340,9 409,1 454,5 420,5 409,1 727,3 545,5 477,3 409,1 500,0 420,5 556,8 352,3 443,2 477,3 386,4 454,5 625,0 579,5 568,2 409,1 511,4 443,2 602,3 431,8 477,3 431,8 477,3 454,5 681,8 500,0 534,1 386,4 488,6 454,5 556,8 625,0 443,2 420,5 409,1 477,3 534,1 488,6 454,5 454,5 511,4 431,8 465,9 340,9 443,2 443,2 397,7 397,7 681,8 454,5 511,4 454,5 534,1 409,1 386,4 363,6
334439334343433420,5 431,8 420,5 454,5 750,0 602,3 488,6 340,9 477,3 465,9 375,0 375,0 431,8 375,0 397,7 386,5
5 409 409,1 625,0 420,5 454,5 409,1 352,3 25,0 511,4 534,1 352,3 43 8 500,0 454,5 920,5 443,2 409, 409,1 397,7 625,0 54,5 454,5 318 477,3 5 1,4 329,5 681,8 397,7 397, 386,4 431,8 556,8 77,3 556,8 340 500,0 4 5,9 227,3 886,4 420,5 443, 409,
75
Diámetro (µm ) 0 HORAS A B C D
Diámetro (µm ) 24 HORAS A B C D
Diámetro (µm ) 48 HORAS A B C D
454,5 431,8 397,7 397,7 522,7 522,7 556,8 363,6 420,5 477,3 511,4 352,3 477,3 454,5 454,5 443,2 659,1 465,9 477,3 352,3 488,6 477,3 511,4 329,5 477,3 625,0 443,2 409,1 715,9 500,0 431,8 375,0 465,9 443,2 568,2 363,6 454,5 454,5 454,5 454,5 704,5 465,9 420,5 386,4 477,3 454,5 488,6 352,3 420,5 443,2 386,4 397,7 647,7 454,5 522,7 363,6 454,5 454,5 454,5 306,8 465,9 431,8 420,5 431,8 647,7 511,4 545,5 431,8 420,5 454,5 215,9 284,1 454,5 409,1 454,5 431,8 681,8 500,0 590,9 477,3 454,5 465,9 193,2 375,0 443,2 397,7 454,5 386,4 750,0 568,2 454,5 306,8 500,0 454,5 579,5 386,4 443,2 431,8 375,0 431,8 579,5 613,6 454,5 386,4 522,7 465,9 647,7 340,9 477,3 420,5 420,5 397,7 579,5 534,1 534,1 431,8 511,4 534,1 522,7 306,8 488,6 420,5 397,7 386,4 625,0 522,7 534,1 431,8 590,9 443,2 454,5 329,5 465,9 397,7 386,4 397,7 647,7 568,2 545,5 352,3 454,5 454,5 340,9 306,8 465,9 454,5 420,5 420,5 659,1 590,9 556,8 420,5 409,1 465,9 340,9 465,9 409,1 358,2 443,2
443,2 409,1 420,5
409,1 420,5 420,5
420,5 409,1 420,5
727,3 496,9 431,8
545,5 227,3 522,7
500,0 409,1 511,4
352,3 443,2 431,8
522,7 462,2 522,7
477,3 454,5 420,5
340,9 954,5 375,0
465,9 465,9 318,2
76
ANEXO F. Matriz completa de la longitud total (mm) del experimento de temperatura en las prelarvas de L. guttatus.
22 ºC 12 h 24h 36h 48h 60h
22 ºC 12 h 24h 36h 48h 60h
22 ºC 12 h 24h 36h 48h 60h
2,30 2,17 2,17 2,61 2,39 2,50 2,39 2,91 2,61 2,61 2,17 2,17 2,61 2,50 2,50 2,33 2,11 2,39 2,50 2,83 1,67 2,28 2,28 2,61 2,54 2,50 2,17 2,61 2,76 2,39 2,17 2,17 2,39 2,50 2,70 2,50 2,17 2,50 2,72 2,57 2,28 2,39 2,65 2,61 2,57 2,28 2,17 2,39 2,52 2,61 2,61 2,28 2,28 2,87 2,50 2,43 2,50 2,52 2,50 2,52 2,30 2,13 2,28 2,61 2,76 2,28 2,17 2,50 2,78 2,50 2,50 2,50 2,67 2,61 2,39 2,17 2,17 2,17 2,39 2,67 2,28 2,17 2,91 2,76 2,61 1,74 2,52 2,61 2,50 2,50 2,28 2,09 2,39 2,61 2,67 2,50 2,43 2,72 2,50 2,72 1,63 2,50 2,76 2,61 2,39 2,24 2,17 2,17 2,57 2,70 1,72 2,72 2,72 2,61 2,76 2,39 2,65 2,39 2,50 2,50 2,30 2,83 2,17 2,61 2,76 1,63 2,83 2,83 2,83 2,61 2,52 2,39 2,61 2,61 2,17 2,33 2,83 2,28 2,39 2,70 2,50 2,76 2,61 2,61 2,76 2,50 2,61 2,61 2,50 2,39 2,28 2,76 2,30 2,43 2,61 1,59 2,74 2,61 2,50 2,78 2,50 2,67 2,59 2,50 2,39 2,28 2,61 2,28 2,72 2,61 2,59 2,76 2,80 2,61 2,78 2,54 2,50 2,61 2,57 2,43 2,28 2,74 2,11 2,72 2,50 1,63 2,61 2,72 2,61 2,85 2,61 2,74 2,59 2,50 2,52 2,28 2,72 2,28 2,83 2,63 2,43 2,83 2,72 2,61 2,50 2,63 2,28 2,50 2,50 2,50 2,28 2,50 2,28 2,50 2,57 2,59 2,78 2,57 2,50 2,50 1,72 2,13 2,61 2,43 2,52 2,30 2,61 2,28 2,63 2,61 1,67 2,80 2,43 2,83 2,61 1,67 2,17 2,07 2,65 2,57 2,28 2,72 2,17 2,57 2,61 2,54 2,72 2,93 2,87 2,61 1,63 2,07 2,28 2,67 2,35 2,30 2,50 2,28 2,61 2,50 2,46 2,61 2,28 2,87 2,39 1,63 2,17 2,28 0,33 2,46 2,17 2,54 2,65 2,50 2,57 2,57 2,67 2,61 2,83 2,46 1,59 2,17 2,39 2,50 2,50 2,28 2,39 2,50 2,50 2,61 1,65 2,76 2,61 2,76 2,50 1,65 2,17 2,57 2,39 2,54 2,24 2,67 2,80 2,61 2,54 2,46 2,76 2,50 2,63 2,76 1,41 2,13 2,72 2,43 2,57 1,65 2,50 2,76 2,50 2,39 1,65 2,76 2,61 2,61 2,78 2,61 2,17 2,61 2,39 2,39 1,57 2,57 2,65 2,70 2,65 2,54 2,67 2,96 2,39 2,87 2,39 2,17 2,78 2,50 2,61 1,57 2,74 2,83 2,61 2,61 2,61 2,76 2,61 2,50 2,80 2,48 2,17 2,78 2,61 2,50 1,74 2,61 2,76 2,57 2,61 1,74 2,39 2,50 2,57 2,78 2,54 2,61 2,72 2,50 2,28 2,17 2,61 2,61 2,61 2,50 1,41 2,43 2,61 2,61 2,72 2,39 2,50 2,83 2,65 2,43 1,52 2,74 2,28 2,61 2,61 1,52 2,35 2,50 2,74 2,50 1,52 2,57 2,61 2,46 2,50 2,37 2,46 2,72 2,72 2,50 2,54 2,35 2,54 2,72 2,54 1,30 2,39 2,61 2,50 2,39 1,70 2,61 2,17 2,72 2,57 1,70 2,39 2,50 2,65 2,50 1,70 2,61 2,78 2,43 2,43 2,37 2,72 2,72 2,61 2,39 1,52 2,17 2,54 2,72 2,50 1,52 2,09 2,61 2,39 2,39 2,17 2,61 2,72 2,61 2,72 2,52 2,83 2,87 2,65 2,78 2,54 2,43 2,39 2,28 2,61 2,28 2,61 2,70 2,50 2,65 2,39 2,83 2,83 2,61 2,78 2,39 2,61 2,39 2,39 2,61 2,28 2,65 2,61 2,74 2,61 1,63 2,80 2,93 2,65 2,50 2,54 2,39 2,76 2,39 2,63 2,28 2,61 2,65 2,39 2,76 1,63 2,72 2,80 2,65 2,61 2,37 2,61 2,57 2,28 2,61 2,30 2,57 2,72 2,50 2,72 2,50 2,67 2,61 2,61 2,61 2,50 2,43 2,72 2,39 2,50 2,33 2,50 2,61 2,63 2,50 2,54 2,61 2,76 2,61 2,83 2,43 2,50 2,72 2,28 2,61 2,17 2,46 2,72 2,61 2,39 2,39 2,72 2,17 2,52 2,80 1,63 2,39 2,61 2,57 2,57 2,28 2,61 2,76 2,61 2,39 2,54 2,83 2,50 2,63 2,61 1,67 2,28 2,65 2,65 2,39 2,17 2,72 2,72 2,54 2,72 1,63 2,17 2,17 2,61 2,72 1,63 2,50 2,72 2,50 2,39 2,33 2,39 2,76 2,61 2,39 2,50 2,41 2,39 2,61 2,67 1,67 2,17 2,50 2,28 2,50 2,37 2,17 2,61 2,39 2,61 1,63 2,39 2,89 2,61 2,72 1,67 2,17 2,39 2,35 2,61 2,37 2,39 2,54 2,61 2,72 1,72 2,39 2,96 2,50 2,78 2,43 2,17 2,61 2,35 2,61 1,65 2,39 2,78 2,57 2,83 2,39 2,65 2,87 2,61 2,61 2,50 2,39 2,39 2,28 2,39
77
22 ºC 12 h 24h 36h 48h 60h
22 ºC 12 h 24h 36h 48h 60h
22 ºC 12 h 24h 36h 48h 60h
1,41 2,17 2,74 2,72 2,57 2,43 2,61 2,50 2,43 2,61 2,59 2,54 2,61 2,17 2,43 2,17 2,39 2,61 2,59 2,72 2,35 2,72 2,50 2,70 2,61 2,59 2,63 2,50 2,59 2,28 2,28 2,39 2,39 2,61 2,61 2,39 2,70 2,80 2,87 2,78 2,46 2,59 2,61 2,28 2,61 2,17 2,28 2,65 2,65 2,76 2,50 2,65 2,74 2,59 2,83 2,54 2,61 2,63 2,39 2,39 2,28 2,39 2,50 2,52 2,61 2,39 2,39 2,54 2,83 2,72 2,50 2,59 2,50 2,35 2,61 2,26 2,33 2,57 2,83 2,72 2,50 2,76 2,72 2,70 2,72 2,39 2,28 2,61 2,57 2,50 2,35 2,39 2,65 2,61 2,67 1,57 2,72 2,67 2,76 2,54 2,54 2,17 2,50 2,35 2,61 2,33 2,39 2,67 2,72 2,72 1,57 2,78 2,67 2,83 2,50 1,63 2,65 2,50 2,39 2,39 2,17 2,33 2,57 2,72 2,72 2,50 2,28 2,50 2,87 2,61 1,65 2,70 2,72 2,52 2,48 2,17 2,33 2,72 2,76 2,72 2,50 2,39 2,61 2,83 2,50 1,63 2,50 2,67 2,50 2,50 2,33 2,39 2,28 2,61 2,61 2,39 2,43 2,67 2,83 2,57 2,48 2,43 2,50 2,39 2,46 2,24 2,33 2,28 2,74 2,59 1,63 2,39 2,61 2,72 2,61 2,57 2,39 2,52 2,39 2,39 2,33 2,39 2,28 2,72 2,72 2,39 2,39 2,48 2,74 2,57 2,54 2,43 2,61 2,30 2,50 2,33 2,28 2,17 2,76 2,61 2,61 2,39 2,76 2,61 2,80 2,39 2,50 2,59 2,61 2,61 2,37 2,35 2,61 2,72 2,59 1,63 2,72 2,72 2,72 2,72 2,59 2,54 2,72 2,28 2,50 2,17 2,43 2,28 2,72 2,61 1,30 2,72 2,61 2,65 2,72 2,50 2,57 2,67 2,39 2,39 2,28 2,35 2,70 2,72 2,72 1,65 2,72 2,59 2,61 2,78 2,57 2,50 2,50 2,46 2,33 2,39 2,63 2,57 2,80 2,39 2,65 2,87 2,57 2,72 2,39 2,70 2,59 2,28 2,24 2,33 2,54 2,67 2,78 2,46 2,72 2,61 2,61 2,54 2,50 2,28 2,61 2,50 2,17 2,39 2,39 2,72 2,83 2,17 2,61 2,83 2,50 2,76 1,65 2,46 2,39 2,39 2,17 2,37 2,61 2,70 2,76 2,57 2,80 2,93 2,76 2,61 1,57 2,50 2,61 2,57 2,17 2,28 2,39 2,70 2,72 2,39 2,72 2,89 2,61 2,80 1,57 2,28 2,61 2,52 2,28 2,35 2,50 2,65 2,78 1,63 2,72 2,83 2,50 2,72 1,74 2,17 2,61 2,39 2,15 2,28 2,59 2,72 2,78 1,67 2,43 2,61 2,61 2,67 1,41 2,61 2,59 2,50 2,09 2,17 2,61 2,61 2,83 2,39 2,43 2,50 2,50 2,72 2,50 2,39 2,78 2,39 2,17 2,39 2,61 2,50 2,59 2,50 2,28 2,50 2,61 2,78 2,61 2,61 2,72 2,50 2,17 2,57 2,61 2,61 2,61 2,28 2,39 2,43 2,50 2,83 2,61 2,17 2,50 2,17 2,24 2,61 2,39 2,50 2,63 2,39 2,43 2,39 2,61 2,83 2,50 1,96 2,39 2,39 2,26 2,50 2,61 2,43 2,61 2,17 2,46 2,50 2,50 2,85 2,61 2,09 2,39 2,39 2,22 2,65 2,61 2,61 2,57 2,39 2,39 2,50 2,50 2,72 2,50 2,17 2,46 2,44 2,26 2,72 2,39 2,39 2,50 2,28 2,76 2,72 2,57 2,78 2,63 2,07 2,33 2,52 2,22 2,61 2,50 2,61 2,65 2,17 2,61 2,78 2,50 2,83 2,39 2,61 2,61 2,50 2,26 2,57 2,54 2,54 2,61 1,41 2,67 2,87 2,50 2,57 2,61 2,61 2,50 2,52 2,17 2,67 2,39 2,50 2,61 2,07 2,57 2,93 2,44 2,61 2,39 2,50 2,39 2,57 2,17 2,61 2,39 2,61 2,61 2,61 2,63 2,87 2,65 2,50 2,61 2,54 2,50 2,35 2,07 2,54 2,74 2,50 2,67 1,63 2,74 2,89 2,67 2,43 2,50 2,61 2,52 2,46 2,02 2,57 2,61 2,39 2,52 2,39 2,54 2,91 2,50 2,41 2,28 2,52 2,50 2,50 1,91 2,65 2,50 2,72 2,61 2,61 2,78 2,87 2,50 2,59 2,61 2,17 2,61 2,54 2,17 2,59 2,39 2,61 2,83 2,61 2,61 2,83 2,39 2,76 2,50 2,50 2,39 2,57 2,13 2,61 2,76 2,72 2,72 2,50 2,57 2,91 2,44 2,83 2,54 2,52 2,48 2,39 2,09 2,39 2,72 2,80 2,65 2,46 2,54 2,80 2,39 2,72 2,46 2,59 2,50 2,61 2,07 2,33 2,78 2,72 2,61 2,57 2,61 2,83 2,50 2,61 1,63 2,39 2,46 2,50 2,11 2,61 2,72 2,78 2,67 2,52 2,39 2,76 2,61 2,78 1,72 2,61 2,61 2,28 2,17 2,57 2,61 2,50 2,67 2,54 2,50 2,61 2,50 2,76 1,63 2,61 2,61 2,44 2,09 2,61 2,67 2,39 2,70 2,61 2,76 2,78 2,65 2,72 1,63 2,61 2,39 2,50 2,13 2,72 2,54 2,72 2,72 2,46 2,72 2,87 2,46 2,67 2,57 2,63 2,39 2,39
78
ANEXO G. Matriz completa del volumen del vitelo (µm³) del experimento de temperatura en las prelarvas de L. guttatus.
22 ºC 12 h 24h 36h 48h 60h
22 ºC 12 h 24h 36h 48h 60h
22 ºC 12 h 24h 36h 48h 60h
151,3 26,0 27,3 19,4 0,0 86,1 64,7 14,5 2,0 0,0 151,0 57,8 19,5 0,0 151,3 33,3 19,5 10,9 0,0 117,2 78,4 11,8 4,0 0,0 151,0 74,9 15,6 0,0 158,0 48,4 27,3 18,2 0,0 117,2 71,5 15,1 2,0 0,0 113,8 54,5 14,5 0,0 139,4 28,7 27,3 13,4 0,0 96,8 70,0 14,5 2,0 0,0 123,9 49,6 16,1 0,0 92,5 38,2 19,5 14,0 0,0 96,8 87,4 16,1 1,9 0,0 87,4 52,0 15,6 0,0
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