itraq isobaric tag for relative and absolute quantitation
Post on 05-Apr-2015
114 Views
Preview:
TRANSCRIPT
iTRAQ
isobaric tag for relative and absolute quantitation
• Methode zur absoluten und relativen Quantifizierung von Proteinen
• Einsatz von isobaren Reagenzien, die an N-Terminus und Lysin-Seitenketten binden
• Erhalt von MS/MS-Spektren, anhand derer quantifiziert werden kann
iTRAQ
Ablauf der Analyse
iTRAQ Reagenzien
iTRAQ-Reaktion
MS/MS
Einsatzbereiche
• Vergleich von gesunden und kranken Zellen
• Vergleich der Proteinexpression in verschiedenen Bakterienstämmen
• absolute Quantifizierung von Proteinen
Absolute Quantifizierung
Beispiel: Nonsense-mediated mRNA decay
• NMD ist der Abbau fehlerhafter mRNA• Vergleich von funktionsfähigen und defekten
Hefezellen
Signale der Reporterionen
Vorteile
• 4 unterschiedliche Proben können in einem Experiment analysiert werden
• jedes Protein mit einer freien Aminofunktion kann gemessen werden
• reproduzierbar
Reproduzierbarkeit
Vorteile
• Tags haben optimale Massen, da diese sonst nicht im Spektrum auftreten
• Peakübelappung wird reduziert
• absolute Quantifizierung einzelner Proteine möglich
Nachteile
• Notwendigkeit der MS/MS-Analyse
• kein quantitatives Labeling
• enzymatische Spaltung erhöht Komplexität der Probe
Literatur
• Philip L. Ross, Multiplexed Protein Quantitation in Saccharomyces cerevisiae Using Amine-reactive Isobaric Tagging Reagents, Molecular & Cellular Proteomics 3.12, 2004, 1154-1169
• Sebastian Wiese, Kai A. Reidegeld, Helmut E. Meyer and BettinaWarscheid, Protein labeling by iTRAQ: A new tool for quantitative mass spectrometry in proteome research, Proteomics 2006, 6, 1-11
• Lottspeich, Fr., Engels J. W., Bioanalytik, 2. Auflage, Elsevier GmbH, München, 2006, S. 1012
top related