makalah imunopresipitasi
Post on 18-Feb-2018
950 Views
Preview:
TRANSCRIPT
7/23/2019 MAKALAH Imunopresipitasi
http://slidepdf.com/reader/full/makalah-imunopresipitasi 1/11
DAFTAR ISI
DAFTAR ISI ..........................................................................................................1
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................2
BAB I PENDAHUL UAN
1.1. Latar Belakang .........................................................................................3
1.2. Rumuan Maala! ..................................................................................."
1.3. Tu#uan $an Man%aat ................................................................................"
BAB II TIN&AUAN PUSTA'A
2.1 Imun(k)m)a ......................................................................................................*
2.2 Imun(+re)+)ta) ..............................................................................................*
BAB III PEMBAHASAN
3.1 Met($e Imun(+re)+)ta) ..........................................................................,
3.2 Tekn)k - Tekn)k Immu+re)+)tat)(n .......................................................,
BAB I/ PENUTUP
".1 'e)m+ulan ..............................................................................................10
".2 Saran .........................................................................................................10
DAFTAR PUSTA'A ..........................................................................................11
1
7/23/2019 MAKALAH Imunopresipitasi
http://slidepdf.com/reader/full/makalah-imunopresipitasi 2/11
DAFTAR GAMBAR
Gamar 2 Langka! 'r(mat)n Imun(+re)+)ta................................................
Gamaar 2 U#) menggunakan Lael +r(te)n .....................................................
2
7/23/2019 MAKALAH Imunopresipitasi
http://slidepdf.com/reader/full/makalah-imunopresipitasi 3/11
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Tren modern dalam pengembangan teknologi biokimia berdasarkan protein-
protein dan ligan-protein interaksi mengharuskan memperbarui dan memperluas
terus-menerus serangkaian metode analisis dan model biokimia karakteristik
mengikat spesifik makromolekul. Hal ini memungkinkan untuk memperdalam
pengetahuan tentang sifat kimia proses bioteknologi dan untuk mengungkapkan
pola yang konsisten baru praktis penting pada tingkat molekuler. Pendekatan ini
efektif, khususnya, dalam mengembangkan tes imunokimia untuk diagnosa medis.
Imunokimia adalah suatu kajian imunologi yang berfokus pada level kimia
atau biokimia. Imunokimia juga menerangkan seara rini molekul - molekul dan
reaksi ! reaksi yang terlibat dalam sistem kekebalan yang berkembang pesat
dengan adanya teknik laboratorium.
"alah satu metode imunokimia, yaitu imunopresipitasi. Immunopreipitasi
adalah teknik yang popular digunakan di berbagai bidang ilmiah yang
menggunakan spesifisitas antibodi untuk mengisolasi protein. Prosedur
immunopresipitasi adalah dengan menghilangkan peptide dan protein larut dari
larutan. "edangkan protein yang bereaksi seara spesifik dengan antibody dapat
dianalisis. #ntuk aplikasi dari immunopresipitasi ini, terbagi kembali beberapa
teknik $ %-&iosienes, 2'12 (.
Teknik imunopresipitasi merupakan salah satu ara yang banyak dipakai untuk
mengukur kadar antigen atau antibodi. Proses ini dapat digunakan untuk
mengisolasi dan berkonsentrasi protein tertentu dari sampel yang mengandung
ribuan protein yang berbeda. Immunopresipitasi membutuhkan keterikatan antara
antibodi yang digabungkan ke substrat padat di beberapa titik dalam prosedur $
)ora, 2''* (.
)ari permasalahan diatas, maka dari itu kami menulis makalah tentang
immunopresipitasi ini untuk untuk mengetahui salah satu aplikasi yang digunakan
dalam teknik ini. Hal ini bertujuan untuk mengetahui teknik yang lebih baik dan
lebih ook dalam penggunaannya.
+
7/23/2019 MAKALAH Imunopresipitasi
http://slidepdf.com/reader/full/makalah-imunopresipitasi 4/11
1.2 Rumuan Maala!
1( pa yang dimaksud dengan imunokimia
2( pa yang dimaksud dengan imunopresipitasi
+( pa saja teknik-teknik dari imunopresipitasi
( &agaimana aplikasi dari imunopresipitasi
1.3 Tu#uan $an Man%aat
1( /engetahui pengertian dari imunokimia.
2( /emahami teknik ! teknik dari imunopresipitasi.
+( /engetahui salah satu aplikasi dari imunopresipitasi.
7/23/2019 MAKALAH Imunopresipitasi
http://slidepdf.com/reader/full/makalah-imunopresipitasi 5/11
BAB II
TIN&AUAN PUSTA'A
2.1 Imun(k)m)a
Imunokimia adalah suatu kajian imunologi yang berfokus pada level kimia atau
biokimia. Imunokimia juga menerangkan seara rini molekul ! molekul dan
reaksi ! reaksi yang terlibat dalam sistem kekebalan yang berkembang pesat
dengan adanya teknik laboratorium. Imunokimia berfungsi menerangkan reaksi
kimia masuknya benda asing, ontoh le0at penernaan urin dan lain ! lain.
&eberapa ontoh peran dari aplikasi imunokimia, yaitu $ )ora, 2''* (.
1. /engenali antibodi adalah imunoglobulin suatu glikoprotein dan gen
adalah ) suatu polinukleotida.
2. /engenali interaksi antigen-antibodi merupakan interaksi kimia0i yang
dapat dianalogikan dengan interaksi en3im dengan substratnya. "pesifitas
kerja antibodi mirip dengan en3im..
+. /enemukan fakta bah0a golongan darah &4 merupakan glikoprotein
sehingga pemberian transfusi darah yang tidak sesuai akan menimbulkan
hemolisi dan koagulasi.
2.2 Immun(+re)+)ta)
Immunopreipitation adalah teknik yang popular digunakan di berbagai
bidang ilmiah yang menggunakan spesifisitas antibodi untuk mengisolasi protein.
Prosedur immunopresipitasi adalah dengan menghilangkan peptide dan protein
larut dari larutan. "edangkan protein yang bereaksi seara spesifik dengan
antibodi dapat dianalisis. Immunopresipitasi merupakan teknik pengendapan dari
larutan antigen protein yang diggunakan sebagai antibodi yang seara khusus
mengikat protein tertentu. Proses ini dapat digunakan untuk mengisolasi dan berkonsentrasi dengan protein tertentu dari sampel yang mengandung ribuan
protein yang berbeda. Immunopresipitasi mengharuskan antibodi dapat
digabungkan ke substrat padat di beberapa titik dalam prosedur $ %-&iosienes,
2'12 (.
5
7/23/2019 MAKALAH Imunopresipitasi
http://slidepdf.com/reader/full/makalah-imunopresipitasi 6/11
BAB III
PEMBAHASAN
3.1 Met($e Immun(+re)+)ta)
Terdapat dua metode utama yang biasanya digunakan pada imunopresipitasi
yaitu diret dan indiret. Pada metode Indiret, ntibodi yang spesifik untuk
protein tertentu $atau kelompok protein( bergerak pada substrat padat-fase seperti
mirobeads superparamagneti atauagarosa mikroskopis $non-magnetik(. "ubstrat
dengan antibodi terikat kemudian ditambahkan ke ampuran protein, dan protein
yang ditargetkan oleh antibodi ditangkap ke substrat melalui antibodi,dengan kata
lain, terjadilah immunopreipitasi. "edangkan pada metode diret, ntibodi yang
spesifik untuk protein tertentu, atau sekelompok protein, ditambahkan langsung
ke ampuran protein. ntibodi belum melekat pada dukungan fase padat belum.
ntibodi bebas untuk mengapung di sekitar ampuran protein dan mengikat target
mereka. )engan berjalannya 0aktu, substrat dilapisi protein 6 % ditambahkan ke
ampuran antibodi dan protein. Pada titik ini, antibodi, yang sekarang terikat
dengan target mereka, akan menempel pada materi $ )ora, 2''* (.
3.2 Tekn)k - tekn)k Immun(+re)+)ta)
"eperti yang dijelaskan diatas, imunopresipitasi merupakan salah satu bagian
dari teknik imunokimia. Imunopresipitasi menggunakan teknik pengendapan dari
larutan antigen protein yang diggunakan sebagai antibodi yang seara khusus
mengikat protein tertentu sehingga dapat diisolasi. dapan beberapa jenis dari
imunopresipitasi, yaitu
1. Immun(+re)+)tat)(n +r(te)n )n$)4)$u 5IP6
/eliputi penggunaan antibodi yang spesifik untuk protein yang dikenal
untuk mengisolasi protein tertentu dari larutan yang mengandung banyak
protein yang berbeda. 7arutan ini akan sering berada dalam bentuk lisat
minyak dari jaringan tanaman atau he0an. 8enis sampel lainnya bisa
menjadi airan tubuh atau sampel lainnya asal biologis $ 9osenberg, 2'': (.
2. Pr(te)n )mmun(+re)+)tat)(n k(m+lek 57(8IP6
Immunopresipitasi kompleks protein utuh yaitu antigen bersama dengan
protein atau ligan yang terikat untuk itu dikenal sebagai o-
immunopreipitation $;o-IP(. ;o-IP bekerja dengan memilih antibodi
:
7/23/2019 MAKALAH Imunopresipitasi
http://slidepdf.com/reader/full/makalah-imunopresipitasi 7/11
yang menargetkan protein yang dikenal agar diyakini sebagai bagian dari
kompleks yang lebih besar dari protein. )engan menargetkan bagian yang
dikenal dengan antibodi hal itu mungkin menjadi menarik untuk seluruh
larutan dari kompleks protein dan dengan demikian mengidentifikasi
bagian yang tidak diketahui dari kompleks. Teknik ini berfungsi ketika
protein yang terlibat mengikat kompleks untuk saling erat, sehingga
memungkinkan untuk menarik beberapa bagian dari larutan kompleks
dengan menempel ke salah satu bagian dari antibodi. <onsep menarik dari
larutan kompleks protein kadang-kadang disebut sebagai =pull-do0n=. ;o-
IP adalah teknik yang kuat yang digunakan seara teratur oleh ahli biologi
molekuler untuk menganalisis interaksi protein-protein $ 9osenberg,
2'': (.
3. 'r(mat)n )mmun(+re)+)tat)(n 57HIP6
<romatin immunopreipitation
$;HIP( adalah metode yang
digunakan untuk menentukan lokasi
binding site ) pada genom untuk
protein tertentu yang menarik. Teknik
ini memberikan gambaran dari
interaksi protein-) yang terjadi di
dalam inti sel hidup atau jaringan.
"ifat in vivo dari metode ini berbeda
dengan pendekatan lain seara
tradisional. >ondasi prinsip pengujian
ini adalah ikatan protein )
$termasuk faktor transkripsi danhiston( dalam sel hidup dapat menjadi
hubungan silang dengan ) dimana mengikat. )engan menggunakan
antibodi yang spesifik untuk protein ) yang diduga mengikat,
imunipresipitasi kompleks protein-) dapat dilihat terjadi lisis seluler.
Ikatan silang sering dilakukan dengan menerapkan formaldehid ke sel
$atau jaringan(, meskipun kadang-kadang menguntungkan untuk
menggunakan ikatan silang dan konsisten seperti )T&P. Pada titik ini
immunopresipitasi dilakukan dengan menghasilkan pemurnian kompleks
*
7/23/2019 MAKALAH Imunopresipitasi
http://slidepdf.com/reader/full/makalah-imunopresipitasi 8/11
protein-). <ompleks protein-) dimurnikan kemudian dipanaskan
untuk membalikkan formaldehida silang protein dan ) kompleks,
sehingga ) yang akan dipisahkan dari protein dan untuk identifikasi
serta kuantitas framen ) sapat dilanjutkan dengan P;9 $ 9osenberg,
2'': (.
". RNA Imun(+re)+)tat)(n 5 RIP6
Prinsip kerja 9 Imupresipitasi mirip dengan kromatin
immunopreipitation $;HIP(, hanya saja bukan menargetkan ikatan
protein ) tetapi protein yang mengikat target 9
immunopreipitation 9. 9IP juga merupakan metode yang in vivo
dalam sel-sel hidup yang segaris. )an imunopresipitasi yang dilakukan
dengan antibodi yang menargetkan protein yang menarik. )enganmengisolasi protein, 9 juga akan terisolasi karena terikat dengan
protein. <ompleks 9-protein murni dapat dipisahkan dengan
melakukan ekstraksi 9 dan identitas 9 dapat ditentukan oleh
) se?uening atau 9T-P;9. &eberapa varian dari 9IP, seperti P9-
;7IP termasuk langkah ikatan silang, yang selanjutnya membutuhkan
kondisi lisis $<eene et al , 2'': (.
*. Lael) Pr(te)n
@
%ambar 27angkah <romatin Imunopresipitasi
%ambar 1. Tahapan <romatin Imunopresipitasi
7/23/2019 MAKALAH Imunopresipitasi
http://slidepdf.com/reader/full/makalah-imunopresipitasi 9/11
"alah satu hambatan teknis utama dengan imunopresipitasi adalah
kesulitan besar dalam menghasilkan antibodi yang seara khusus
menargetkan protein yang
dikenal tunggal. <euntungan
teknik ini adalah label yang
sama dapat digunakan pada
banyak protein yang berbeda
dan digunakan antibodi yang
sama setiap kali. <euntungan
lain dengan menggunakan
protein lebel yaitu bah0a
teknik ini telah menjadi
terbiasa untuk semua jenis
imunopresipitasi termasuk semua jenis IP yang dijelaskan di atas. ;ontoh
lebel yang digunakan adalah %reen >luoresent Protein $%>P( tag,
%lutathione-"-transferase $%"T( tag dan tag >7%-tag $ 9osenberg, 2'':
(.
,. S)tem Immun(+re)+)tat)(n Lu)%erae 5 LIP 6
"istem immunopreipitation luiferase merupakan teknik yang
sangat kuantitatif dan tinggi dalam mendeteksi antibodi. Teknik ini
merupakan teknik baru yang biasanya digunakan untuk perbandingan
dalam identifikasi virus dalam uji sensitifitas dan spesifisitas dengan uji
lain $;ohen et al , 2'1 (.
A
%amabar 2#ji menggunakan 7abel protein
7/23/2019 MAKALAH Imunopresipitasi
http://slidepdf.com/reader/full/makalah-imunopresipitasi 10/11
BAB III
PENUTUP
3.1 'ESIMPULAN
Imunokimia adalah suatu kajian imunologi yang berfokus pada level kimia
atau biokimia. Imunokimia juga menerangkan seara rini molekul - molekul dan
reaksi ! reaksi yang terlibat dalam sistem kekebalan yang berkembang pesat
dengan adanya teknik laboratorium. "alah satu metode imunokimia, yaitu
imunopresipitasi. Immunopresipitasi merupakan teknik pengendapan dari larutan
antigen protein yang diggunakan sebagai antibodi yang seara khusus mengikat
protein tertentu. Proses ini dapat digunakan untuk mengisolasi dan berkonsentrasi
dengan protein tertentu dari sampel yang mengandung ribuan protein yang
berbeda. Immunopresipitasi mengharuskan antibodi dapat digabungkan ke
substrat padat di beberapa titik dalam prosedur. /etode imunopresipitasi ada 2,
yaitu langsung dan tidak langsung. "edangkan teknik-teknik imunopresipitasi
terbagi atas Immunopreipitation protein individu, Protein immunopreipitation
kompleks, <romatin Immunopreipitasi, 9 Imunopresipitation, dan "istem
Immunopreipitation 7uiferase.
".2 Saran
dapun saran yang dapat kami sampaikan, semoga makalah ini bisa
menjadi referensi untuk mengetahui apasaja teknik dan metode dalam
imunopresipitasi dari subteknik imunokimia.
1'
7/23/2019 MAKALAH Imunopresipitasi
http://slidepdf.com/reader/full/makalah-imunopresipitasi 11/11
DAFTAR PUSTA'A
&onifaino, 8. "., )ellBngelia, C. ;. and "pringer, T. . 2''1.
Immunopreipitation. ;urrent Protools in /oleular &iology. 1'.1:.1!
1'.1:.2A.
;ohen, 8effrey I., /ir . li., hmad &ayat., "haron P. "teinberg., Hosun Park.,
nne . %ershon., Peter ). &urbelo. 2'1. )etetion of ntibodies to
Dariella-Eoster Dirus in 9eipients of the Dariella Daine by #sing a
7uiferase Immunopreipitation "ystem ssay. #". ;linial and Daine
Immunology p. 12@@!12A1.
;ristea I/, Filliams 9, ;hait &T, 9out /P. 2''5. >luoresent proteins as
proteomi probes. Molecular & Cellular Proteomics " $12( 1A++!1.
)ora, %etra. 2''*. Respon Imun Ayam Single Comb Brown Leghorn Terhada oi
!erpes"irus #!$%. &ogor. Institut Pertanian &ogor.
%-&iosienes. 2'12. Immunoprecipitation Techniue. %eno Tehnology, In.
$#"(.
<eene 8), <omisaro0 8/, >riedersdorf /&. 2'':. 9IP-;hip the isolation and
identifiation of m9s, miro9s and protein omponents of
ribonuleoprotein ompleGes from ell eGtrats. 'at Protoc 1 $1( +'2!*.
9osenberg, Ian $2''5(. Protein analysis and puri(ication) benchtop techniues.
"pringer. p. 52'. I"& A*@-'-@1*:-+'-A.
11
top related