priones en odontologÍa - microbiologyrosario.org operativa/22 de junio... · • se sugirió que...
Post on 07-Feb-2018
218 Views
Preview:
TRANSCRIPT
PRIONES EN ODONTOLOGÍA
Sushma B, Gugwad S, Pavaskar R, Malik SA.
Prions in dentistry: A need to be concerned and known.
J Oral Maxillofac Pathol 2016;20:111-4.
Carrera de Especialización en Esterilización
Seguridad Operativa
FARM. MARÍA EUGENIA HERGENREDER
Objetivo: brindar a odontólogos una breve descripción de las
características de los priones, el riesgo de transmisión, información
actualizada de los mismos y la necesidad de adoptar medidas eficientes
para el control de infecciones.
Metodología: uso de datos obtenidos de búsqueda bibliográfica en
PubMed.
Los priones son partículas infecciosas proteicas que resisten la inactivación
por medio de procedimientos estándar de descontaminación y esterilización.
La proteína priónica (PrPsc,) causante de las enfermedades conocidas como
Encefalopatías Espongiformes Transmisibles (EET) es una forma
modificada de una proteína normal llamada PrPc (constituyente normal de
las membranas celulares) sensible a proteasas; por su parte la PrPsc es
parcialmente resistente a proteasas e insoluble en detergentes.
La infección con PrPsc induce la conversión de PrPc en PrPsc, lo cual lleva a
la propagación de la forma infecciosas y a la aparición de la enfermedad.
¿QUÉ ES UN PRIÓN?
Existe en al menos dos estados
conformacionales con diferentes
propiedades fisicoquímicas
PROTEÍNA PRIÓNICA
• Constituyen una familia de enfermedades
neurodegenerativas, de “baja incidencia”, que
afectan tanto a los animales como a los humanos.
• Causadas por partículas transmisibles que
contienen una isoforma patógena de la proteína
prion
• Largo período de incubación
• Grandes cambios (pérdida) de la masa neuronal
(aparición de agujeros, como esponjas)
• incapacidad del sistema inmunológico de producir
respuesta
• Pueden ser de origen hereditaria, esporádicas o
adquiridas
EET (TSE) EN HUMANOS ( Flia CJD)
• Creutzfeldt-Jakob Disease (sCJD)
• Variant Creutzfeldt-Jakob Disease (vCJD)
• Gerstmann-Straussler-Scheinker Syndrome
( hereditaria)
• Fatal Familial Insomnio ( hereditaria)
• Kuru
• Iatrogénica
ENCEFALOPATÍAS ESPONGIFORMES
TRANSMISIBLES (EET ó TSE)
CJD Iatrogénica ( período de incubación 2 – 35 años)
• Transplantes de córnea
• Neurocirugía
• Implantes de duramadre
• Uso de electrodos cerebrales
• Paciente operado con material quirúrgico usado en pacientes
con CJD
• Sondas de electroencefalogramas utilizadas en pacientes previos.
• Transfusiones de sangre
• Inyección de Hormonas de crecimiento obtenidas de glándulas
hipofisiarias humanas
• El riesgo de infección por procedimientos odontológicos es bajo pero
existe una posibilidad de contaminación cruzada después del uso de
instrumentos dentales infectados.
LAS MANIFESTACIONES ORALES DE LAS
ENFERMEDADES PRIÓNICAS
Disfagia (dificultad para tragar) y disartria (mala articulación del habla),
parestesia (hormigueo, pinchazos o entumecimiento), disestesia orofacial
(sensaciones anormales en ausencia de estimulación) y en una pérdida
del sabor y olor.
Se observó un nivel significativo de infectividad en los ganglios del
trigémino, en el gingival y tejidos pulpares (de hámsteres con
tembladera afectado después de la inoculación intraperitoneal), lo que
sugiere la posible transmisión de la infección a través de los nervios
trigeminales hacia la cavidad oral.
Necesidad de tomar precauciones y principios de control de infecciones adecuado para
minimizar la transmisión iatrogénica de los priones.
Hasta la fecha, no se han registrado casos definitivos o sospechosos de EET humanas
que surgen de procedimientos dentales.
Los mecanismos postuladas para la transferencia de la CJD a través de los
instrumentos dentales eran abrasión accidental de amígdala lingual durante
procedimientos dentales y el contacto de los instrumentos dentales con tejido de la
pulpa.
Como la pulpa dental se origina a partir de células de la cresta neural ricamente
inervadas, es teóricamente posible que la pulpa dental de las personas infectadas con la
ECJ puede ser infecciosa.
PRIONES Y ODONTOLOGÍA
• artículos de un solo uso y equipos tales como agujas
desechables y cartuchos anestésicos
• el riesgo de transmisión sCJD es más alta debido a la
reutilización de los instrumentos endodónticos en
ausencia de procedimientos efectivos de
descontaminación de priones ( por las características del
instrumental y la resistencia de los priones). Hay una
posibilidad de que estos instrumentos que estaban en
contacto con el tejido pulpar dental puedan transferir las
PPR de los pacientes infectados a otros pacientes
(En 2001, Federación Dental Internacional) recomendaba:
• la historia clínica completa del paciente,
• antecedentes familiares de enfermedades priónicas,
• historial de viajes para saber acerca de la posible
exposición durante las visitas a zonas endémicas
como Reino Unido
• la formación continua adecuada para los dentistas
sobre el control de la infección cruzada en la
práctica odontológica.
• Para los pacientes en situación de riesgo, se
recomienda la derivación a clínicas especializadas u
hospitales y la incineración de todos los
instrumentos y los dientes extraídos.
• Se sugirió que los materiales de injerto derivados de
animales no se deben utilizar en la cirugía oral o
periodontal a menos que la seguridad del producto
haya sido certificado. Tener precaución en el uso de
materiales de injerto humanos heterólogos.
CONTROL DE INFECCIONES EN ODONTOLOGÍA
En 2007 se publicó “consejo para los dentistas en la re-utilización de instrumentos de
endodoncia y Creutzfeldt-Jakob variante” emitida por el Departamento de Salud del
Reino Unido
• garantizar un solo uso de escariadores y limas de endodoncia
• para los instrumentos dentales resistentes al calor, sugirieron someterlos a un
proceso de limpieza a fondo y esterilización por vapor en autoclave a 134 ° C
durante 18 min.
• Los pacientes con enfermedad priónica confirmada deben programarse al final del
día para permitir una limpieza más profunda y descontaminación. Es preferible
evitar la activación de las líneas de agua, debido al riesgo de la retracción de los
priones presentes en fluidos orales. Utilizar una unidad independiente de aspiración
con el depósito desechable, en lugar del componente de aspiración de la unidad
dental y un recipiente desechable en lugar de la unidad de escupidera dental. Para
evitar la contaminación del medio ambiente, el equipo dental debe ser
adecuadamente protegido utilizando cubiertas desechables, impermeables.
CONTROL DE INFECCIONES EN ODONTOLOGÍA
PROTOCOLO DE TRATAMIENTO CON DETERGENTE
ENZIMÁTICO
QUE REDUCE LA CARGA DE PROTEÍNA PRIÓNICA
RESISTENTE A LA PROTEASA Y LA INFECTIVIDAD A PARTIR
DE MONOFILAMENTOS DE ACERO QUIRÚRGICO
CONTAMINADOS CON UNA CEPA DE PRIONES DE ORIGEN
HUMANO.
Victoria A. Lawson, James D. Stewart and Colin L. Masters
Department of Pathology, The University of Melbourne and Mental
Health Research Institute,
Parkville, Victoria 3010, Australia
Journal of General Virology (2007), 88, 2905–2914
Carrera de Especialización en Esterilización
Seguridad Operativa
FARM. MARÍA EUGENIA HERGENREDER
Implican la necesidad de aplicar estrategias de control universal hacia
la infección e implementar procedimientos de descontaminación que
se puedan incorporar en los procesos de rutina y sean compatibles
con el instrumental
Preocupación por transmisión neurológica y hematológica de la vECJ
Riesgo de transmisión a través de trasplante de tejidos y cirugía
general.
Presencia de proteína priónica en órganos linfoides y músculo
esquelético en pacientes de vCJD ( distribución tisular extraneuronal)
Isoforma resistente a proteasa.
Resistencia a métodos generales de limpieza y desinfección
Período pre-sintomático prolongado y ausencia de métodos de
diagnósticos adecuados
OBJETIVO:
Determinar la capacidad y los parámetros óptimos (t y T) de
preparaciones de soluciones enzimáticas de lavado de
instrumental médico para reducir la infectividad asociada a una
cepa de proteína priónica resistente a proteasas y a la
inactivación con protocolo estándar utilizando NaOH.
Demostrar la eficacia en la disminución de los niveles de
infectividad aplicando un protocolo de descontaminación óptimo con estas soluciones seguido de un proceso de
esterilización por autoclave de vapor.
MATERIALES Y MÉTODOS
FUENTE DE DESCONTAMINANTES QUÍMICOS.
o Rapid Multi Enzyme Cleaner trial formulation A (RMEC A) and trial
formulation B (RMEC B)
o Trial variations prepared by Novapharm Research (Australia) Pty
Ltd, Endozyme AW Plus (Ruhof) and Klenzyme (Steris)
o Preparations of RMEC A and B were prepared without enzymes
(Novapharm Research) and are referred to as Cleaner A and
Cleaner B
o NaOH (Pronalysis) was freshly prepared in distilled water for
each experiment.
MATERIAL INFECCIOSO Y DE CONTROL
La cepa de priones M1000 utilizado en este estudio se deriva de la Fukuoka-1 (o FU-1) cepa de priones humanos adaptado a ratón
Homogeneizado cerebral infeccioso (IBH)
Homogeneizado cerebral no infectado (UBH) (control negativo)
MATERIALES Y MÉTODOS
Análisis In vitro de degradación PrP Sc
Método Western Blot
MÉTODOS
Preparación de los alambres de acero con contaminación priónica..
a) 30 mm de longitud de monofilamento de acero inoxidable (B. Braun) se limpiaron por sonicación en
2% (v / v) de Triton X-100, durante 15 minutos. Se enjuagaron en agua destilada estéril y se secaron
al aire.
b) La punta de cada cable, se sumergió a una profundidad de aproximadamente 10 mm en un tubo
que contiene IBH.
c) Un lote de cables también estaba contaminado con UBH como un control negativo.
d) Se incubaron en UBH o IBH durante 1 h a temperatura ambiente y se secaron al aire durante la
noche
e) Se eliminó el contaminante no unido lavando los cables una vez en PBS (Gibco) durante 5 min.
f) Se secaron al aire durante al menos 30 min antes de realizar los procedimientos de
descontaminación.
MÉTODOS
g) Estos alambres de acero contaminados fueron sometidos:
1. procedimientos de decontaminación química
2. procedimientos de autoclave
3. protocolo de tratamiento químico seguido por un protocolo de tratamiento físico
h) Los alambres se implantaron en el hemisferio cerebral izquierdo de ratones de 6-8 semanas de edad.
Preparación de los alambres de acero con contaminación priónica..
Confirmación de la infectividad en animales sintomáticos.
MÉTODOS
Se observaron diariamente para detectar signos de enfermedad.
Los animales se sacrificaron bajo anestesia con metoxiflurano cuando los signos persistentes consistentes con la enfermedad de prión fueron evidentes, como la actividad reducida del motor, pérdida de peso, postura encorvada, parestesia del miembro posterior y ataxia.
Confirmación de la presencia de infección en animales sintomáticos.
Análisis de Western blot convencional y Western blot de alta sensibilidad.
RESULTADOS
RESULTADOS
La proteasa presente en las soluciones RMEC es una subtilisina
derivada de Bacillus subtilis. La actividad de esta enzima es mayor
entre 50 y 65 ºC
RESULTADOS
RESULTADOS
La solución de limpieza puede
desplegar eficazmente PrPsc en una
forma sensible a proteasas a todas las T
ensayadas, el paso limitante en la
degradación es la incapacidad de la
proteasa para la degradación a T
donde se reduce su actividad.
RESULTADOS
Se requiere calor para desplegar
la estructura de PrPsc y hacerla
accesible a la digestión por
proteasas presentes en RMEC
RESULTADOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
Formulaciones optimizadas de soluciones de limpieza con detergentes
multienzimaticos ( RMEC) requieren que se trabaje en un rango de temperatura de
40 a 60 ºC para favorecer el despliegue de la PrPsc
Temperaturas más altas ayudan al despliegue de PrPsc en una forma sensible a
protesasas y puede ser digerida eficientemente por enzimas proteolíticas de las
soluciones de limpieza.
En el estudio actual, los tiempos de tratamiento de 30 min se ensayaron a T. de
50ºC y 60 ºC. A T. más altas se disminuía la degradación debido probablemente a
la disminución de la actividad enzimática.
La modificación química para aumentar la estabilidad enzimática podría acortar
los tiempos de tratamiento a temperaturas más altas para la descontaminación de
instrumental quirúrgico resistente al calor.
DISCUSIÓN
DISCUSIÓN
Se puede predecir que la combinación del protocolo RMEC B (
reducción de 3,5 log10 unidades de infectividad) con el ciclo de
autoclave más eficaz de 134ºC durante 18 min. ( reducción de 2,2
log10 unidades de infectividad) podría dar una inactivación a priones
cercana a 6 log10 .
Además se podría inferir que protocolos con RMEC eficaces en
combinación con un ciclo de autoclave darían mejores resultados y
permitirían el uso de soluciones de limpieza no corrosivas, con
detergentes de pH neutro aptas para su en instrumental quirúrgico y
endoscopia.
Es necesario validar aún más la eficacia de estos protocolos contra
otras cepas de priones humanos.
top related