taller de microscopia ii
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TALLER DE TALLER DE DIAGNOSTICO MICOLOGICO Y DIAGNOSTICO MICOLOGICO Y APLICACIÓN CLÍNICAAPLICACIÓN CLÍNICA
Dr. Gustavo E. Giusiano
Facultad de MedicinaInstituto de Medicina Regional Universidad Nacional del NordesteArgentinagustavogiusiano@yahoo.com.ar
Guayaquil Guayaquil -- 20112011
Módulo II
Rhinosporidium seeberi
Scientific classification
Kingdom: ProtistaPhylum: Choanozoa
Class: Ichthyosporea
Order: Dermocystida
Genus: Rhinosporidium
Species: R. seeberiSpecies: R. seeberi
Rhinosporidium
Micosis SubcutáneasMicosis Subcutáneas
EsporotricosisEsporotricosis
Agente etiológico: Agente etiológico: Sporothrix schenckiiSporothrix schenckii
DiagnósticoDiagnóstico
�� Examen directo en frescoExamen directo en fresco
Cuerpos asteroides
�� ElEl agenteagente raramenteraramente eses observadoobservado enen elel examenexamen microscópicomicroscópico directodirecto..
Coloraciones
Giemsa, Gram, Grocott, PASPAS
Giemsa
ESPOROTRICOSISESPOROTRICOSISPAS
MICOLOGIAMICOLOGIA::
�� BIOPSIABIOPSIA:: HiperplasiaHiperplasia seudoepiteliomatosa,seudoepiteliomatosa, microabscesosmicroabscesos intradérmicos,intradérmicos, infiltracióninfiltración porpor
leucocitosleucocitos yy célulascélulas plasmáticas,plasmáticas, eosinófilos,eosinófilos, granuloma,granuloma, cuerposcuerpos asteroidalesasteroidales..
CultivoCultivo
Sabouraud con ATB
Cultivo a 28ºC
�Hongo dimórfico
Cultivo a 37ºC
�Hongo dimórfico
�CULTIVO: 37ºC: Colonia levaduriforme
� Células brotantes ovales, fusiformes.
�Forma parasítica o cultivo a 37ºC de Sporothrix schenckii
�CULTIVO: 25-28ºC: Hifas finas (1 a 2 micras de diam.), septadas, conidios ovales a piriformes (2-3 a 6µ) producidos en bouquet en el extremo del conidióforo. La acumulación de estas microconidias da aspecto de flor o “margarita”.
MicrocultivoMicrocultivo
Micetomas
Grano con hifas hialinas o dematiaceas
�Sospechar grano micótico
Eumicetoma
GRANOS NEGROS
Corte histológico
MO 10X
MO 100X
Principales Agentes Etiológicos de Principales Agentes Etiológicos de
EumicetomasEumicetomas
GRANOS NEGROS GRANOS BLANCOS
�� Madurella griseaMadurella grisea
�� Madurella mycetomatisMadurella mycetomatis
�� Pyrenochaeta romeroiPyrenochaeta romeroi
�� Leptosphaeria senegalensisLeptosphaeria senegalensis
�� Exophiala jeanselmeiExophiala jeanselmei
�� Exophiala Exophiala wernekii wernekii
�� Scedosporium apiospermumScedosporium apiospermum
�� Acremonium kilienseAcremonium kiliense
�� Acremonium recifeiAcremonium recifei
�� Acremonium falciformeAcremonium falciforme
�� Fusarium moniliforme Fusarium moniliforme
�� Fusarium solaniFusarium solani
por Madurella mycetomatis
GRANOS NEGROS
Conidióforos cilíndricos pigmentados con anélide en la porción apical dando aspecto de espinaPuede estar ramificado
Exophiala spinifera
Scedosporium apiospermumScedosporium apiospermum
Acremonium sp.Acremonium sp.
Fusarium sp.Fusarium sp.
CromomicosisCromomicosisCromomicosisCromomicosis
Examen directo en fresco
Cuerpos escleróticos (células fumagoides)Esclerotes de Medlar
elementos esféricos, dematiáceos, tabicadosy agrupadosde 2, 4, 6 o más. tabicadosy agrupadosde 2, 4, 6 o más.
Examen en fresco
Cuerpos escleróticos (células fumagoides)Esclerotes de Medlar
Principales Agentes Etiógicos de Principales Agentes Etiógicos de CromomicosisCromomicosis
►► Phialopora verrucosaPhialopora verrucosa
►►Cladosporium carrioniiCladosporium carrionii
►► Fonsecaea pedrosoiFonsecaea pedrosoi
►► Fonsecaea compactaFonsecaea compacta
►►Rhinocladiella aquaspersaRhinocladiella aquaspersa
Phialophora verrucosaPhialophora verrucosa
Fialides con forma de botella con collarete conico
Cladosporium sp.Cladosporium sp.
Conidios ovoidales dispuestos en largas cadenasuni o bicelulares
Cladosporium carrioni
RhinocladiellaRhinocladiella
Conidios ovoidales - fusiformes, laterales, unicelulares
que se forman en la extremidad de
largos conidióforoserectos cilíndricos
((AcrothecaAcrotheca))
erectos cilíndricos
Fonsecaea pedrosoiFonsecaea pedrosoiTres tipos de fructificaciónTres tipos de fructificación
Fonsecaea pedrosoiFonsecaea pedrosoiTres tipos de fructificaciónTres tipos de fructificación
Micosis Sistémicas EndémicasMicosis Sistémicas Endémicas
Agente: Agente: Paracoccidioides brasiliensisParacoccidioides brasiliensis
ParacoccidioidomicosisParacoccidioidomicosis
Examen directo
FRESCO
400X
TODAS LAS MUESTRAS
Examen directo
GiemsaCOLORACIONES
GroccotPass
Z-N (TBC)Kinyoun (Nocardia)Gram Weigert (P. jiroveci)Azul de toluidina (P. jiroveci)
Coloración de Giemsa
Grocott
Z -N * importante por la dificultad en algunos casos de diferenciar con TBC por radiología o clínica
* Asociaciones
Tº : 25-28ºC y 35-37ºC
Forma saprofítica Forma parasitaria
TERMODIMORFOTERMODIMORFO
35-37ºC – Forma parasitaria
Cultivo
25-28ºC – Forma saprofítica
microconidias
Cultivo
Histoplasmosis
Agente: Histoplasma capsulatumvar capsulatum (Argentina)
Histoplasmosis
Diagnóstico
Fase parasitaria
Examen directo
intracelular1-5 micras
Coloración de Giemsa(100X)
Citoplasma en casquete Citoplasma en casquete (forma semilunar, desplazado hacia hacia uno de los polos)(forma semilunar, desplazado hacia hacia uno de los polos)
Grocott – metenamina plata
Histoplasmosis
HEMOcultivo
Método de elección – Lisis centrifugación
Tº : 25-28ºC y 35-37ºC
Forma saprofítica Forma parasitaria
TERMODIMORFOTERMODIMORFO
Forma parasitaria
Fase Levaduriforme Fase Levaduriforme
unicelular, unicelular, in vitroin vitro 3434--3737°°CC
HHistoplasma capsulatum istoplasma capsulatum
varvar. capsulatum. capsulatum
Elementos levaduriformes(unicelulares) ovoidescon un solo brote -Tamaño 1-5 micras
Micelio hialino tabicadoMicroconidiasMicroconidias pequeñas, piriformes ( < 5 pequeñas, piriformes ( < 5 µµµµµµµµm)m)
Fase MicelialFase Micelial
multicelular en la naturaleza e multicelular en la naturaleza e in vitroin vitro 2525--28 28 °°CC
MacroconidiasGlobosas (8-15micras)Pared gruesa tuberculada
HHistoplasma capsulatum istoplasma capsulatum
varvar. capsulatum. capsulatum
HHistoplasma capsulatum istoplasma capsulatum
varvar. capsulatum. capsulatum
Fase Fase saprofíticasaprofítica
CoccidioidomicosisCoccidioidomicosis
Agente: Coccidioides immitis (Valle de San Joaquín – California)
Coccidioides posadasiiCoccidioides posadasii
TODAS LAS MUESTRAS
Examen directo
FRESCO
Fase parasitaria
esférulas de 20 a 80 µ de diámetro con endosporos
Examen directo
Examen directo
Coccidioides immitis Coccidioides posadasii
Examen directo
Coccidioides immitis Coccidioides posadasii
Calcofluor
Coccidioides immitis Coccidioides posadasii
Coloraciones• Giemsa• Gram• Grocott• PAS
Z-N (TBC)Kinyoun (Nocardia)Kinyoun (Nocardia)Gram Weigert (Pneumocistis)Azul de toluidina (Pneumocistis)
CultivoTº : 25-28ºC y 35-37ºC
Forma saprofítica
113Forma saprofítica
micelio hialino tabicado fragmentado en clamido-artroconidias Coccidioides immitis
Coccidioides posadasii
112
Micosis oportunistas IIMicosis oportunistas IIMicosis oportunistas IIMicosis oportunistas II
Examen microscópico de colonias levaduriformes
Cryptococcus sp Cryptococcus sp
Saccharomyces cerevisiaeSaccharomyces cerevisiae
Pichia membranifaciensPichia membranifaciens Candida globosaCandida globosa
Examen microscópico de colonias levaduriformes
Saccharomyces cerevisiaeSaccharomyces cerevisiae
Candida kruseiCandida krusei
Examen microscópico de colonias levaduriformes
Trichosporon sppTrichosporon cutaneum
Blasto-artroconidios
25ºC por 25ºC por 2 a 7 días2 a 7 días
� en agar harina de maíz - Tween 80
� agar arroz -Tween 80
MicrocultivoMicrocultivo ( Dalmau, 1929 ) Estudio micromorfológico de levaduras
Candida albicans – Candida dubliniensis
CryptococcusCryptococcus
Cryptococcus en LCR Test de tinta china
Pneumocystis sp.
Trofozoitos (formas troficas): formas libres de pneumocystis, pequeñas, aparece frecuentemente en acúmulos
Formas quísticas : redondos o en media luna, de 5-8 micras de diametro. En su interior se encuentran los esporozoitos(cada quiste puede tener hasta 8 esporozoitos).
Giemsa
5-8 µm
Formas quísticas
Lavado broncoalveolar (BAL)
4-7 µm
Contienen 1 o más núcleos
Formas tróficas(pre-quiste)
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