ANALISIS BIOQUIMICOS ANALISIS BIOQUIMICOS DE LIQUIDOS BIOLDE LIQUIDOS BIOLGICOSGICOS

Dr. Jose C. Jara AguirreProfesor

Escuela de Tecnologa MedicaFacultad de Medicina Alberto HurtadoUniversidad Peruana Cayetano Heredia

LIQUIDOS BIOLLIQUIDOS BIOLGICOS GICOS EXTRAVASCULARESEXTRAVASCULARES

z Liquido Pleuralz Lquido Cefalorraquideoz Lquido Asciticoz Lquido Pericardicoz Lquido Sinovial

LIQUIDOS BIOLLIQUIDOS BIOLGICOSGICOS

z LA DEFINICION DE FLUIDOS SEROSOS SOLO SE RESTRINGE

LIQUIDO PLEURAL LIQUIDO ASCITICO LIQUIDO PERICARDICO

LIQUIDO PLEURALLIQUIDO PLEURAL(LP)(LP)

ProducciProduccin y Reabsorcin y Reabsorcin de n de Liquido PleuralLiquido Pleural

z Normalmente, 1 a 15 ml.z Producido por la pleura parietal.z Reabsorbido por la pleura visceral.z Proceso continuo por filtracin del

endotelio capilar.

ProducciProduccin y Reabsorcin y Reabsorcin de n de Liquido PleuralLiquido Pleural

z Proceso continuo por filtracin del endotelio capilar.

z Velocidad depende de: la presin hidrostatica capilar, la presin onctica y la permeabilidad capilar.

z Es reabsorbido va capilares y linfticos.

FormacionFormacion del del LiquidoLiquido pleuralpleuralCapilar

sistemicoCapilar

pulmonar

Espaciopleural

Pleura parietal Pleura visceral

PO 26

PH 30

PO 26

PH 11

Presionintrapleural

5 cm agua linfaticoslinfaticos

OBTENCION DEL LIQUDIO OBTENCION DEL LIQUDIO PLEURALPLEURAL

TORACOCENTESIS

ASPECTO Y COLOR DEL LIQUIDO PLEURAL

HEMATICO QUILOSO TRANSUDADOHEMATICO QUILOSO TRANSUDADO

Diferencia entre un Diferencia entre un TransudadosTransudados y Exudadosy Exudados

TransudadosTransudados y Exudadosy Exudados

z Transudados

Producidos por incremento de la presin hidrosttica en los capilares pleurales o disminucin de la

presin onctica del plasma.

TransudadosTransudados

Los estados patolgicos que pueden generar transudado pleural

CAUSA PATOGENESIS1. Insuficiencia Hipertension sistemica y

cardiaca congestiva pulmonar2. Cirrosis hepatica Hipertension portal y cava

inferiorhipoalbuminemia

3.Sndrome nefrtico hipoalbuminemia

Trasudados y ExudadosTrasudados y Exudados

z Exudados

Por incremento en la permeabilidad capilar o una reduccin de la reabsorcin linftica.

.

ExudadosExudadosz Ocurre en una variedad de enfermedades.

CAUSA PATOGENESIS 1. Pancreatitis - Inflamacion quimica secundaria2. AR - Inflamacion de serosa3. LES - Inflamacion de serosa4. Infecciones - Inflamacion secundaria a (TBC, bacteriana, microorganismoViral, fungica)5. Infarto - Inflamacion secundaria(miocardio/pulmonar: embolia)6. Neoplasia - Incremento permeabilidad capilar

por implantes de tumor- Obstruccion linfatica secundaria

EFUSION PLEURAL

LIQUIDO PLEURAL : LIQUIDO PLEURAL : EXUDADO O TRANSUDADOEXUDADO O TRANSUDADO

z COMO SE DEFINE UN LIQUIDO PLEURAL COMO EXUDADO O

TRANSUDADO DESDE EL PUNTO DE VISTA DE LABORATORIO CLINICO?

CRITERIOS DE LIGHTCRITERIOS DE LIGHTSS

1. Proteinas totalesz LP/SUERO > 0.52. LDH

LP/SUERO >0.63. LDH en el LP 2/3 superior al valor

referencial en suero

Ana C. Tarn. Biochemical analysis of pleural fluid. Ann Clin Bioch. 2001, 38:311-322

UTILIZACION DE LOS CRITERIOS DE UTILIZACION DE LOS CRITERIOS DE LIGHT PARA DEFINIR ENTRE UN LIGHT PARA DEFINIR ENTRE UN EXUDADO Y UN TRANSUDADOEXUDADO Y UN TRANSUDADO

Sensibilidad 99 %

Especificidad 98 %

Valor predictivo positivo 99%

Valor predictivo negativo 98%*

Ana C. Tarn. Biochemical analysis of pleural fluid. Ann Clin Bioch. 2001, 38:311-322

LLquidos Biolquidos BiolgicosgicosProcedimientos Procedimientos AnAnllticosticos

z Exmen Fsico (Ph, color, aspecto, coagulacin, aspecto del sobrenadante)

z Exmen Citolgicoz Exmen Qumicoz Papanicolaouz Exmen Bacteriolgico (Directo, BK, Cultivo para

germenes comunes, cultivos para BK y hongos)z Otros exmenes (Tinta china, ADA, marcadores

tumorales, enzimas)

Toma de la muestraToma de la muestra

z Citologico : EDTA

z Qumico: Tubo simple o tubo con anticoagulante

para enzimas -heparina

z Bacteriolgico: Tubo o frasco esteril con heparina

Procedimiento preliminarProcedimiento preliminar

z Tomar datos del examen fsico Color Aspecto Coagulo

Recuento diferencialRecuento diferencial

Tomar muestra para recuento.z Azul de metileno nuevo

0.5% en solucin fisiolgica.

CentrifugadoCentrifugado

z Centrifugar a 600g por 10 minutos.

z Decantar el sobrenadante.

z Resuspender el precipitado en vortex.

z Hacer cuatro frotices y fijar dos de ellos en metanol o etanol.

Examen BioquExamen Bioqumicomico

z LDH

z Proteinas

z ADA

z OTROS

PROTEINAS TOTALESPROTEINAS TOTALES

z 1. Fundamento:

z Metodo de Biuret-Proteinas Totalesz Metodo qumico colorimetrico de punto finalzz Los enlaces peptidicos de las protenas reaccionan en un medio alcalino con

el in cprico del reactivo de Biuret, estabilizado por el tartrato, para formar un complejo de color violeta cuya mxima absorcin se da a 540 nm.

NaOHz cobre + protenas LP complejos cupro-proteicoszz

z540 nm.Reactivo Biuret : Sulfato de cobre, NaOH, Tartrato de Sodio y PotasioEstabilizante : Ioduro de potasio y EDTA

Lactato Lactato deshidrogenasadeshidrogenasa(LDH)(LDH)

zMetodo segun Scandinavian Committe on EnzymeszMetodo puntos multiples UV-Metodo de referenciaz Principio :z LDHz Piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+

pH neutroAbs : 340 nm

- Cuantifica el consumo de NADH+ H+

Criterios Transudate Exudate Lechoso: quiloso

Rojizo: ver celulas abajo Turbio: lipidos o GB Purulento: empiema

Olor putrido: anaerobios Sanguinolento: neoplasia

Pasta de anchoas: amebas Densidad < 1.016 > 1.016

Proteinas totales 3.0 Relac. Proteinas liquido/suero 0.5*

LDH 200* Relac. LDH liquido/suero

LIQUIDO ASCITICO o LIQUIDO ASCITICO o LIQUIDO PERITONEALLIQUIDO PERITONEAL

TOMA DE MUESTRATOMA DE MUESTRA

Criterios Trasudado ExudadoProteinas 3.0

Relac. Proteinas liquido/suero >0.5 sugiere neop. maligna

LDH Incr en neop. maligna

Relac. LDH liquido/suero >0.6 sugiere neop. maligna

ACE >10 sugiere neop. malignaRelac. ACE liquido/suero >2 sugiere neop. maligna

Glucosa 1

LIQUIDO LIQUIDO CEFALORAQUIDEOCEFALORAQUIDEO

(LCR)(LCR)

FormaciFormacin y Circulacin y Circulacin de n de LCRLCR

FormaciFormacin y Circulacin y Circulacin de n de LCRLCR

CirculaciCirculacin de LCRn de LCR

CirculaciCirculacin de LCRn de LCR

Adultos

150 mL total

30 ml cerebro

120 mL ESA

500 mL/d

4-6 horas se renueva

AbsorciAbsorcin de LCRn de LCR

FUNCIONES DEL LCRFUNCIONES DEL LCR

z FUNCION DE SOSTENz FUNCION DE DISMINUIR EL PESO

TOTAL CEREBRALz FUNCION DE DETOXIFICACION

CEREBRALz FUNCION DE TRASPORTE DE

SEGUNDOS MENSAJEROS Y HOMEOSTASIS DEL SIST NERVIOSO

PUNCION LUMBARPUNCION LUMBAR

PUNCION LUMBARPUNCION LUMBAR

Toma de la muestraToma de la muestra

z TUBO 1: ESTUDIO QUIMICO E

INMUNOLOGICO

z TUBO 2: MICROBIOLOGICO

z TUBO 3 : CITOLOGICO

Toma de la muestraToma de la muestra

z TUBO 1: ESTUDIO QUIMICO BASICO

z -GLUCOSA

z - PROTEINAS TOTALES

z - IgG e Index Ig G

z - ACIDO LACTICO

MetodosMetodos de laboratorio para cuantificar de laboratorio para cuantificar GlucosaGlucosa

zMetodos Enzimatico de Punto final colorimetrico

Metodo de Glucosa Oxidasa /Trinder

Glucosa OxidasaGlucosa +02 cido glucnico +

H202

1/3 alfa-d-glucosa mutarotasas2/3 beta-d-glucosa

PeroxidasaH202+fenol+4-AF cromgeno coloreado

+ H20

VR : 2/3 del valor en suero

Trinder

510 nm

El anEl anlisis de protelisis de protenas totales en LCR puede nas totales en LCR puede clasificarse en 3 tipos de mclasificarse en 3 tipos de mtodos principales :todos principales :1. TURBIDIMETRICO :1. TURBIDIMETRICO :

a. Prueba de Acido a. Prueba de Acido SulfusalicilicoSulfusalicilico+ sulfato + sulfato de sodiode sodio

b. Prueba de Acido Tricloacetico12,5% b. Prueba de Acido Tricloacetico12,5% 2. QUIMICO :2. QUIMICO :

a. a. BiuretBiuret MODIFICADOMODIFICADO3. FIJACION DE COLORANTES3. FIJACION DE COLORANTES

a. Azul brillante de a. Azul brillante de CoomassieCoomassieb. Rojo de b. Rojo de PirangolPirangol

VR: 20VR: 20--40 40 mgmg//dLdL

PROTEINAS TOTALES

INDEX INDEX IgGIgG

z Ig G index = Ig G ( LCR) x albumina ( suero)z Ig G ( suero) x albumina ( LCR)

z VR: 0.25-0.85z Ig G (LCR) :1-4 mg/dL

ProteinogramaProteinograma o o ElectroforesisElectroforesisde de proteinasproteinas

zFundamento:Separa a lasProteinas enFuncion deSu carga o Puntoisolectrico

ElectroforesisElectroforesis de de proteinasproteinas

Albumina

Globulinas

Muestra :LCR

Coloracion:Coosmasie bluePonceu S

ElectroforesisElectroforesis porpor inmunofijacioninmunofijacionde de proteinasproteinas

Albumina

Globulinas

Uso de AbMonoclonalContra lasFracciones deIg (G, A, M y Cadenas ligerasKappa y Lamda)

Muestra 1

Enfermedad Presin GB Totales Cel. Predom. Glucosa ProteinasNormal 7-18 cm 0-10 Mononucleares 45-80 15-45Meningitis bateriana aguda Elevada or nl 5-miles PMNs

ADENOSINA DEAMINASAADENOSINA DEAMINASA

z Es una enzima del grupo de las hidrolasas, involucrada en el catabolismo de las bases purnicas.

La adenosina es un nucleosido endgeno encontrado en cantidades pequeas a travs del cuerpo. Su frmula qumico es C l0 H 13 N 5 O 4 .

Adenosina Adenosina DeaminasaDeaminasa (ADA)(ADA)

z Es un marcador de inmunidad celular, cuya actividad plasmatica estaumentada en enfermedades donde la respuesta inmune tiene una mediacin celular.

z Se encuentra presente en los linfocitos T activados.

Adenosina Adenosina DeaminasaDeaminasa (ADA)(ADA)

z Presente en linfocitos T activadosz Presente en liquidos biolgicos de procesos

inflamatorios mediados por inmunidad celular

zMicosis TBCz Alta sensibilidad y especificidad en TBC

pleural, pericardica, meningea, articular y peritoneal

IsoenzimasIsoenzimas de ADAde ADA

z La Adenosina Deaminasa presenta tres isoenzimas:

z ADA 1

z ADA 2 est relacionada a procesos de actividad linfocitos T y en especial en tuberculosis menngea, pleural.

MMTODO DE GALANTI Y GIUSTI PARA TODO DE GALANTI Y GIUSTI PARA DETERMINACIDETERMINACIN DE ADAN DE ADA

z Fundamento

El NH3 reacciona con el hipoclorito de sodio y fenol a 37oC (con nitroprusiato de sodio en medio alcalino como catalizador) para formar indofenol de color azul intenso, que es medido a 640 nm.

32 NH Inosina deaminasa Adenosina H Adenosina ++ O

SIGNIFICADO CLINICOSIGNIFICADO CLINICO*Aumento: Enfermedades hepticas Mononucleosis infecciosa Fiebre tifoidea Leucemia aguda Micosis TBC

En la tuberculosis pulmonar activa se ha encontrado una elevacin srica de ADA. Asmismo en meningitis y peritonitis tuberculosa se observa de ADA en LCR y lquido peritoneal.

VALORES DE REFERENCIAVALORES DE REFERENCIA

z Es un gran mtodo auxiliar en el diagnstico de tuberculosis de serosas, pleura, peritoneo o pericardio.

z Valores referencia : z - L Pleural : 0 45 U/L

LCR : 0 6 U/L L asctico : 0 40 U/L L. pericardico: 0 20 U/L

LIQUIDO SINOVIALLIQUIDO SINOVIAL

- Es un dializado del plasma ricoen acido hialuronico

-99% mucoproteinas (acetilglucosamina +ac. Glucoronico)

Criterios Normal No inflamatorio Inflamatorio Purulento Hemorragico

Color Claro o amarillo palido

Xantocromico Xantocromico a blanco

Blanco Sanguinolento

Aspecto Transparente Transparente Translucido u opaco

Opaco Opaco

Viscosidad Muy alto Alto Bajo Muy bajo -Coagulacin c/mucina Buena Pobre a buena Pobre a buena Pobre -

Coagulacin espontanea Ninguna Frecuente Frecuente Frecuente -GB 150 3000 3000-50K 50K-300K -

PMNs 25% 25% 70% 90% -GR - - - - +++

Examen de cristales* - Puede ser + Puede ser + - -

Etiologias

Osteoartritis, AR temprana, trauma, deterioro/cronico,

sinovitis por cristales, LES, poliartritis, escleodermia,

necrosis aseptica, etc.

AR, Reiter, aguda por cristales,

sinovitis, artritis psoriatica, (enf

inflam. de Bowel), viral artritis, fiebre

reumatic.

Bacteriana, TBC, por hongos.

Fractura, articulacin de

Charcot, hemofilia, tumor,

condrocalcinosis, anticoagulantes, n rx, protesis artic,

enf cel falciformes.

Anlisis de Lquido Sinovial

ADENOSINA DEAMINASAADENOSINA DEAMINASA

z Es una enzima del grupo de las hidrolasas, involucrada en el catabolismo de las bases purnicas.

La adenosina es un nucleosido endgeno encontrado en cantidades pequeas a travs del cuerpo. Su frmula qumico es C l0 H 13 N 5 O 4 .

Adenosina Adenosina DeaminasaDeaminasa (ADA)(ADA)

z Es un marcador de inmunidad celular, cuya actividad plasmatica estaumentada en enfermedades donde la respuesta inmune tiene una mediacin celular.

z Se encuentra presente en los linfocitos T activados.

Adenosina Adenosina DeaminasaDeaminasa (ADA)(ADA)

z Presente en linfocitos T activadosz Presente en liquidos biolgicos de procesos

inflamatorios mediados por inmunidad celular

zMicosis TBCz Alta sensibilidad y especificidad en TBC

pleural, pericardica, meningea, articular y peritoneal

IsoenzimasIsoenzimas de ADAde ADA

z La Adenosina Deaminasa presenta tres isoenzimas:

z ADA 1

z ADA 2 est relacionada a procesos de actividad linfocitos T y en especial en tuberculosis menngea, pleural.

MMTODO DE GALANTI Y GIUSTI PARA TODO DE GALANTI Y GIUSTI PARA DETERMINACIDETERMINACIN DE ADAN DE ADA

z Fundamento

El NH3 reacciona con el hipoclorito de sodio y fenol a 37oC (con nitroprusiato de sodio en medio alcalino como catalizador) para formar indofenol de color azul intenso, que es medido a 640 nm.

32 NH Inosina deaminasa Adenosina H Adenosina ++ O

SIGNIFICADO CLINICOSIGNIFICADO CLINICO*Aumento: Enfermedades hepticas Mononucleosis infecciosa Fiebre tifoidea Leucemia aguda Micosis TBC

En la tuberculosis pulmonar activa se ha encontrado una elevacin srica de ADA. Asmismo en meningitis y peritonitis tuberculosa se observa de ADA en LCR y lquido peritoneal.

VALORES DE REFERENCIAVALORES DE REFERENCIA

z Es un gran mtodo auxiliar en el diagnstico de tuberculosis de serosas, pleura, peritoneo o pericardio.

z Valores referencia : z - L Pleural : 0 45 U/L

LCR : 0 6 U/L L asctico : 0 40 U/L L. pericardico: 0 20 U/L

LIQUIDO SINOVIALLIQUIDO SINOVIAL

- Es un dializado del plasma ricoen acido hialuronico

-99% mucoproteinas (acetilglucosamina +ac. Glucoronico)

Criterios Normal No inflamatorio Inflamatorio Purulento Hemorragico

Color Claro o amarillo palido

Xantocromico Xantocromico a blanco

Blanco Sanguinolento

Aspecto Transparente Transparente Translucido u opaco

Opaco Opaco

Viscosidad Muy alto Alto Bajo Muy bajo -Coagulacin c/mucina Buena Pobre a buena Pobre a buena Pobre -

Coagulacin espontanea Ninguna Frecuente Frecuente Frecuente -GB 150 3000 3000-50K 50K-300K -

PMNs 25% 25% 70% 90% -GR - - - - +++

Examen de cristales* - Puede ser + Puede ser + - -

Etiologias

Osteoartritis, AR temprana, trauma, deterioro/cronico,

sinovitis por cristales, LES, poliartritis, escleodermia,

necrosis aseptica, etc.

AR, Reiter, aguda por cristales,

sinovitis, artritis psoriatica, (enf

inflam. de Bowel), viral artritis, fiebre

reumatic.

Bacteriana, TBC, por hongos.

Fractura, articulacin de

Charcot, hemofilia, tumor,

condrocalcinosis, anticoagulantes, n rx, protesis artic,

enf cel falciformes.

Anlisis de Lquido Sinovial