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Análisis del agua

Objetivos

S  Determinar la presencia de bacterias coliformes en una muestra de agua

Introducción

S  Las tres pruebas básicas para determinar la presencia de bacterias coliformes (asociada con materia fecal) en el agua son:

S  La prueba presuntiva

S  La prueba de confirmación

S  La prueba completa

Pruebas para determinar bacterias coliformes

S  Las pruenbas se realizan secuencialmente para cada una de las muestras.

S  Bacterias coliformes S  Bacterias gram negativas

S  Bacilos

S  No formadoras de esporas

S  Anaerobos fermentativos

S  Fermentan lactosa

Coliformes fecales S  Incluyen E.coli algunas Klebsiella y Enterobacter spp. Microbiología de Agua

¿Qué es un coliforme?

Escherichia coli

Citrobacter freundaii

Klebsiella pneumoniae

Enterobacter aerogenes

Grupo de especies de varios géneros

Prueba Presuntiva

S  Es una prueba específica para determinar la presencia de bacterias coliformes.

S  Se realiza agregando alícuotas de muestra de agua que se quiere evaluar en caldo de fermentación que contienen lactosa y que posea un tubo invertido.

S  Un resultado positivo de esta prueba indica que la muestra de agua no es potable.

Prueba de Confirmación

S  Confirman la presencia de bacteria coliformes en muestras de aguas que dieron resultados positivos a las pruebas presuntivas.

S  Un resultado positivo de una prueba presuntiva debe confirmarse ya que resultados positivos pueden deberse a organismos de origen no coliformes que no son reconocidos como contaminantes causados por materia fecal.

Coliformes

S  En la prueba de confirmación se usa Eosine Methylene Blue (EMB) un medio de cultivo selectivo y diferencial o Endo Agar.

S  El EMB contiene azul de metileno que inhibe el crecimiento de organismos gram positivos ( selectivo).

S  En un ambiente ácido, EMB forma un complejo que se precipita sobre las colonias coliformes y produce un centro negro y borde verde metálico (diferencial).

S  Esta reacción es característica para Escherichia coli., el principal indicador de contaminación con materia fecal.

S  El Endo Agar tiene el colorante fuchsina y en presencia de ácidos producidos por las bacterias coliformes, la fuchsina forma un complejo de color rosado obscuro que convierte a la colonias coliformes y sus alrededores en color rosado.

Prueba Completa

S  Análisis final de la muestra de agua. Se utiliza para examinar las colonias coliformes que aparecieron en el medio EMB en la prueba de confirmación.

S  Se selecciona una colonia aislada para ser transferida a un tubo con caldo de lactosa y se siembra en un tubo con agar inclinado para hacer la tinción Gram.

S  Despúes de hacer la inoculación y la incubación, los tubos que muestren la formación de gas en el caldo de lactosa y den positivos en la tinción Gram (Gram negativos) comprueban la presencia de bacterias coliformes en la muestra de agua.

Parte Práctica Prueba Presuntiva

S  Mezcle las muestras de agua. S  Agregue con una pipeta estéril 1 mL de la muestra de agua a tres

tubos de LB1X y a tres tubos LB 2X S  LB1X= Caldo con lactosa S  LB 2X=Caldo con doble concentración de lactosa

S  Saque los gases del tubo durham S  Incube los tubos por 48 horas a 37 grados.

S  Si se observa la presencia de gas en el tubo durham es muy posible que tengan bacterias coliformes.

S  Resultados positivos se realiza la prueba de confrmación

Parte Práctica Prueba Confirmativa

S  Cultivos que dieron positivos a la presuntiva se utilizan para esta parte.

S  Identificar placas petri debidamente.

S  Transferir bacterias del medio de cultivo de la prueba presuntiva a las placas de EMB utilizando la técnica de siembra por dilución.

S  Incubar todas las cajas petri en posición invertida a 37 grados por 24 horas.

S  Observar placas y guardar para realizar prueba completa.

Parte Práctica Prueba Completa

S  Inocular en tubos con caldo de lactosa y agar inclinado con las colonias aisladas en EMB .

S  Incubar todos los tubos durante 24 horas a 37 grados.

S  Observar los tubos y hacer la tinción Gram.