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7/22/2019 Articulo de Dpph

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Un nuevo mtodo para la evaluacin

de la actividad antioxidante basado

en la determinacin amperomtricade DPPH radicales libres

SHIRLEY JIMENEZ HIDALGO

DOLIS GUZMAN MIRANDA


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Introduccin

Existe amplia evidencia de una asociacin entre el estrs oxidativoresultante de la generacin de radicales e insuficiencia antioxidante ydao tisular. La oxidacin de lpidos como un resultado de la reaccinen cadena de radicales causa:

la prdida de calidad en el sabor

color

valor nutritivo de los alimentos.

Se han propuesto por lo tanto muchos mtodos para la determinacinde la actividad antioxidante en las muestras de alimentos y fluidosbiolgicos durante la ultima dcada.


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Reaccin entre un compuesto cromgeno y un antioxidante. Despusde la reaccin, la concentracin residual de compuesto cromgenose determina espectrofotomtricamente o colorimtricamente.

Los compuestos cromgenos utilizados ms a menudo incluyen :

2,2 Vazino-bis (cido 3-etilbenzotiazolina)

-6-sulfnico (ABTS)

2,2 difenil-1-picrilhidracilo (DPPH), ya que reaccionan directa yrpidamente con compuestos antioxidantes.

Radical libre reacciona DPPHI con un antioxidante (AH) o una especiesde radicales (RI) de acuerdo con las Ecs. (1) y (2).


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Los detalles experimentales

Reactivos y soluciones

DPPH , cido L-ascrbico , glico , cafeico , y cido rico , Lglutatin ( forma reducida ) y quercetina se obtuvieron deSigma - Aldrich ( St. Louis , EE.UU. ) .

N-acetil - lcysteine ,( + ) catequina hidrato , ferlico , sinpico ,la curcumina y de Trolox ( 6 - hydroksy 2,5,7,8 -tetrametilcroman - 2 - carboxlico ) se adquirieron en Fluka (Buchs, Suiza ) .

El fosfato de sodio dihidrgeno , fosfato de hidrgeno de sodio ,cloruro de potasio , metanol de grado HPLC y etanol absoluto seadquirieron de Kemika ( Zagreb, Croacia ) .


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Diez mililitros de soluciones 10 mm de antioxidantes se prepararondiariamente . Las soluciones de antioxidantes solubles en agua (cido L-ascrbico , L - glutatin , N-acetil - L - cistena , Trolox , glico, y el cido rico ( 5 mM ) se prepararon utilizando agua

doblemente desionizada de sistema Millipore Milli-Q - ( EE.UU. ) .

Todos los otros antioxidantes se prepararon en etanol absoluto .Diez mililitros de solucin madre. 5 mm de DPPH se prepararon enetanol absoluto .

La solucin era ultra - sonica ( Transsonic 460 / H, Elma, Alemania )durante aproximadamente 2 h y se mantuvo en la oscuridad paraminimizar la descomposicin por la luz.

Solucin de tampn fosfato (0,033 M, pH = 7,4) que contiene 0,033M de KCl y 40% en volumen de etanol absoluto se utiliza en todaslas mediciones electroqumicas y espectrofotomtricos.


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Instrumentacin y medicin

establecidos

Las medidas electroqumicas se llevaron a cabo en la

Potenciostato 273 A (Princeton Applied Research,

EE.UU.)


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Determinacin

espectroscpica

En un rango de 700 y 250 nm para 100AM de DPPHdisuelto ne etanol se logro una absirvancia en elintervalo de 518 nm.

Lo mismo para una solucion etanol-agua mezclada.

Luego de alcanzada esta absorvancia se aadio un

antioxidante y se mezclo por 10 s.

Las lecturas se realizaron a los 3min (cinetica rapida),15 despues (cinetica lenta).


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VOLTAMETRIA CICLICA DE DPPH

FIG. 2


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VOLTAMETRIA CICLICA DE

ANTIOXIDANTES

FIG. 1A

FIG. 1B


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DETERMINACION AMPEROMETRICA

DE ANTIOXIDANTES

FIG. 2


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FIG. 3FIG. 4


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ACTIVIDAD DE DPPH RADICAL LIBRE EN UNA

SOLUCION TAMPON FOSFATO ETANOL-AGUA

FIG. 5

TABLA 1 Equivalentes de Trolox para compuestos puros de antioxidantes y


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TABLA 1. Equivalentes de Trolox para compuestos puros de antioxidantes, y

las muestras del t, el vino y los jugos determinaron amperomtricamente y

espectroscpica


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ANALISIS DE MUESTRAS Y

COMPARACION DE RESULTADOS

FIG. 6


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FIG. 7


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CONCLUSION

el mtodo amperomtrico tiene las mismasventajas y desventajas en comparacin con elmtodo espectrofotomtrico ya que ambos sebasan en la misma reaccin qumica y cintica

el mtodo amperomtrico mostr buenaestabilidad qumica

confirm la utilidad del mtodo amperomtricopara la determinacin de la actividadantioxidante de una amplia variedad demuestras.


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