ativação de linfócitos b - usp · fases da resposta imune adaptativa linfócitos b (humoral): os...
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Universidade de São Paulo- USP
Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto
Pós Graduação em Imunologia Básica e Aplicada
Ativação de linfócitos B
Ribeirão Preto- SP
Dra. Daniela Carlos Sartori
Histórico da descoberta
dos anticorpos
1890: Primeiro indício de utilização de
anticorpos “Bala mágica” 1975:
Hibridomas
Antitoxinas: neutralizar a toxina diftérica
Emil Adolf Von Behring
Corynebacterium diphteriae
Composto que atua apenas no causador da enfermidade, sem afetar o hospedeiro = Receptores específicos
Paul Erlich Imortalização de linfócitos B por meio da fusão com células de mieloma
Georges Kohler e Cesar Milstein
Anticorpos: do alemão “antikorper”
Histórico da descoberta dos anticorpos
Fases da resposta imune adaptativa Linfócitos B (humoral): os linfócitos B foram assim chamados porque, em pássaros,
foram encontradas maduros em um órgão denominado bursa de Fabricius.
Linfócitos T (celular): os linfócitos T surgem na medula óssea, migram e amadurecem no timo; por isso receberam essa denominação.
Maturação e recirculação de linfócitos T e B
Baço e linfonodos
Segregação dos linfócitos T e B nos OLP
Folículos linfóides: zonas de células B (primários e secundários) Córtex parafolicular: zonas de células T -
Vias de acesso dos antígenos
Linfócitos B naives foliculares
(recirculantes)
Subpopulações de células B
Asplenia congênita: suscetibilidade de S. pneumoniae e H. influenzae
Reconhecimento de antígenos não-proteicos (T independentes)
Igα Igβ: moléculas invariantes que contém ITAM
Polissacarídeos, lipídeos e ácidos nucleicos
múltiplos epítopos idênticos
ITAM: motivo de ativação do imunorreceptor baseado em tirosina
Papel do CD21/CR2 e TLR
Sinal 1: ligação do BCR ao antígeno Sinal 2: moléculas ligadas ou expressas por patógenos
1) C3d: fragmento do SC se liga ao receptor (CR2/CD21) e induz transdução via CD19 2) PAMP: padrões moleculares associados a patógenos: LPS (TLR4) Flagelina (TLR5) RNA (TLR7) DNA não metilado (TLR9)
Sinalização intracelular
1) Sobrevivência de célula B: • aumento da expressão de proteínas anti-apoptóticas (Bcl-2)
2) Proliferação : • Estágio G1 do ciclo celular • Aumento do tamanho • Conteúdo de RNA citoplasmático e organelas
3) Diferenciação: • Plasmócitos secretores de anticorpos (IgM) • Baixa afinidade •Sem ou pouca troca de Isótipo (IgM-IgG)
FcµRI: receptor da IgM MZB: Célula B da zona marginal (menor ativação e produção de IgM)
Infeçção com C. rodentium (bactéria gram-negativa)
Expansão clonal • Um única célula B:
• Aproximadamente 5 mil células secretoras de anticorpos
• 1012 moléculas de anticorpos por dia
proliferação e destruição dos microrganismos
Expressão de IL-2 e do receptor
Reconhecimento de antígenos proteicos (T dependentes)
MHC II-TCR
CD40-CD40L
Endocitose e internalização
do antígeno
Apresentação do antígeno e ligação do
CD40-CD40L
vários epítopos diferentes
Sequência de eventos (cooperação B-T)
Linfócitos T: reconhecem antígenos processados (peptídeos) peptídeos apresentados pelas DC Linfócitos B: reconhecem antígenos na conformação nativa
Ativação inicial e Migração de células B e células T auxiliares
CXCL13 (CXCR5)
CCL19,CCL21 (CCR7)
Mecanismos de ativação de linfócito B (extra-folicular)
Ligação CD40-CD40L (Célula B): 1) Translocação de fator de transcrição 2) Síntese proteica, proliferação e produção de anticorpos IgM (vida curta) 3) Expressão da desaminase induzida por ativação (AID)
Primeira e segunda fase da resposta humoral
Primeira fase: extrafolicular
Segunda fase: intra-folicular (centro germinativo)
Diferenciação de Linfócitos T foliculares (LTfh)
1) Dependente de DC: expressão de CXCR5 (CXCL13) e migração para folículo linfóide 2) Dependente de LB: diferenciação da LTfh via interação do ligante de ICOS (LB) com ICOS (LT)
Células dendríticas foliculares (FDC)
Não expressam MHC II Expressam CR1, CR2 e CR3 e receptores Fc
Produção de anticorpos extra-folicular Formação de Imunocomplexos
Folículo primário Linfonodo
Centro germinativo (4-7 dias): por células B em proliferação e células T antígeno-específicas que fornecem auxílio indispensável às células B (folículos secundários).
Segunda fase da resposta humoral (centro germinativo)
Zona escura: centroblastos em intensa proliferação Zona clara: centrócitos diferenciados
Maturação de afinidade
Região constante
Região variável
CDR 1
CDR 2
CDR 3
Regiões hipervariáveis
É o processo de aumento da afinidade de anticorpos a um determinado antígeno como resultado da mutação somática dos genes V das Ig
(antígenos proteicos)
Hipermutação somática
Adenina
Guanina
Timina
Citosina
É o processo de mutação que ocorre nas regiões V dos genes de Ig em nos centroblastos induzida pela citidina-deaminase
induzida por ativação (AID)
Representação do centro germinativo
Centroblastos (zona escura): redução de sIg (IgM ou IgD) e aumento da expressão de CXCR4 (retenção)
Centrócitos (zona clara): aumento da expressão de CXCR5 e aumento da expressão de sIg (superfície)
Respostas de linfócitos B (centro germinativo)
Ausência de FDC e Tfh
Presença de FDC e Tfh
Reentrada acíclica
1) Cada etapa de mutação: expressão de um novo receptor 2) Ligação ao antígeno 3) Ciclos adicionais de divisão e volta a expressar CXCR4 (centroblasto) 4) Novo processo de mutação e seleção
Seleção positiva de células B (centro germinativo)
Sobrevivência de células com receptores de alta afinidade: 1) Reconhecimento antigênico induz a expressão de proteínas anti-apoptóticas (Bcl-2)
2) Preferência na endocitose e apresentação do antígeno para LTfh (centro germinal)
Seleção e Diferenciação
Recombinação de troca
Sµ Sε Sα Sγ
•: Região de troca (Sequencias repetidas)
Estímulo: CD40-CD40L e citocinas
Mudança de isótipo
Alterações na estrutura do anticorpo
Geração de plasmoblastos e plasmócitos
Plasmoblastos
Plasmócitos
Destino das células efetoras (plasmócitos) e de memória
1) Linfócitos efetores (Plasmócitos): Medula óssea (BAFF-BCMA) 2) Linfócitos memória: OLS ou circulantes
Imunodeficiência de super-IgM
-Caracteriza-se por produção defeituosa de isótipos IgG e
IgA com produção acentuada de IgM.
-Mutações: gene que codifica a molécula efetora CD40L
em linfócitos T ou defeitos genéticos na deaminase induzida
por ativação (AID) ou uracil N-glicosilase (UNG).
-Defeitos : anormalidades na imunidade humoral
e mediada por células.
Manifestações clínicas: Início entre 1 e 2 anos de vida.
Infecções bacterianas respiratórias recorrentes, virais e
fúngicas
Antigenicidade versus Imunogenicidade
Antigenicidade: é a capacidade de combinar especificamente ao BCR e TCR (antígenos)
Imunogenicidade: indução de resposta imune (imunógenos). Todas as
moléculas com imunogenicidade possuem antigenicidade, mas o contrário não é verdadeiro.
Efeito hapteno-carreador
Reconhecimento de peptídeo pelo BCR (epítopo conformacional-hapteno)
Endocitose (carreador-proteína) e apresentação
de peptídeo (epítopo linear)
Secreção de anticorpos específicos
para determinantes conformacionais
(mesma especificidade da Ig membrana)
Resposta de anticorpo específica
para a proteína natural
Vacinais Conjugadas
Eventos celulares e moleculares
Células efetoras: plasmócitos
5.000 células: 1012 moléculas de anticorpos
por dia Células de memória
Resposta humoral primária e secundária
Recapitulando...