Tecnologa Mdica

Microbiologa Clnica I

BACILOS GRAMNEGATIVOS NO FERMENTADORES

(BGNNF)

Caractersticas de los BGNNF

Bacilos o cocobacilos gramnegativos que no fermentan hidratos de carbono.

No forman espora.

Generalmente oxidasa (+)

Mviles e inmviles.

Se designa BGNNF a todos los bacilos gramnegativos que muestran desarrollo

en TSI y que no fermentan azcares (K/K)

TSI (Triple Sugar Iron Agar)

K/K K/A -- K/A-+ A/A+- A/A++

Bacilos GRAM (-)

NO FERMENTADORES Pseudomonas

Acinetobacter

Stenotrophomonas

Achromobacter

Alcaligenes

Elizabethkingia

Burkholderia

Shewanella

Myroides

Moraxella

Medio OF (Hugh y Leifson)

Este medio se diferencia de los medios

para fermentacin de hidratos de carbono

dado que la concentracin de:

- peptona est disminuda del 1% al 0,2% -H. de carbono est aumentada del 0,5% a 1%

el agar est disminudo de 1,5 a 0,25 %

OF/glucosa

Fermentativo Oxidativo Inerte

Prueba de oxidasa

BGNNF

DIAGNOSTICO

de BGNNF

Aislamiento: Agar sangre

Agar MacConkey

Morfologa : Tincin de Gram

Identificacin presuntiva: TSI

Batera de identificacin primaria:

- Oxidasa

- OF/glucosa

- Movilidad

Esquema de identificacin de BGNNF

Batera de identificacin secundaria: Agar urea de Christensen

Lisina descarboxilasa

Agar de hidrlisis de esculina

Arginina dihidrolasa de Moeller

Ornitina descarboxilasa

Fenilalanina desaminasa

Hidrlisis de la gelatina

ONPG

Medio OF: fructosa, xilosa, manitol, lactosa, maltosa

Citrato de Simmons

NaCl 6.5%

Desarrollo a 42C

Tipo de flagelacin: Tincin de flagelos

Factores que predisponen a infecciones por

BGNNF

Neoplasias

Hospitalizacin prolongada

Instrumentacin y ciruga

Tratamientos prolongados con antibiticos,

corticoides, antineoplsicos, radiaciones.

Enfermedades crnicas o metablicas.

Quemaduras, heridas abiertas, lesiones exudativas.

Desnutricin

Edades extremas: prematuros y ancianos

Los BGNNF son importantes agentes casuales de

infecciones intrahospitalarias

Familia Pseudomonadaceae

Grupo I de rRNA

Grupo II de rRNA

Grupo III de rRNA

Grupo IV de rRNA

Grupo V de rRNA

-Bacilos Gram negativos

-Aerobios estrictos

-La mayora mviles

con uno o mas flagelos polares

-Oxidan los carbohidratos

-La mayoria son oxidasa positiva

Gnero Pseudomonas

Pseudomonas aeruginosa

Bacilo Gram(-) recto o ligeramente curvo.

Aerobio estricto, oxidasa (+)

OF/glucosa: oxida

Mvil, con un flagelo polar.

HABITAT: Se asla de ambiente acuticos,

alcantarillas, piscinas, del suelo.

Ambiente hospitalario

Pseudomonas aeruginosa tiene tres formas de desplazarse en:

MEDIO LIQUIDO_: Swimming con nico flagelo polar.

SUPERFICIE SOLIDA: Twitching que depende fimbrias o pili tipo IV

Medio SEMI-SOLIDO: Swarming, las clulas se alargan y presentan mltiples flagelos.

En el ambiente hospitalario

se puede aislar e: - Soluciones terapeticas (colirios)

- Desinfectantes (amonio cuaternario, clorhexidina) - Jabn con hexaclorofeno - Cremas de mano - Lociones - Jarras con agua

Catteres Plantas y flores Termmetros Nebulizadores Humidificadores Cepillos Jeringas Piletas Desages pisos

Factores de virulencia de Pseudomonas aeruginosa

Alginato Fimbria (tipo IV)

Proteasas: - Las A elastasa -Las B elastasa - proteasa alcalina Hemolisinas: - Fosfolipasa C - Ramnolpido

Exotoxina A Exotoxina S Enterotoxina Leucocidina Piocianina

Siderforos Pioquelina Pioverdina

Rol del alginato (polmero de acido manurnico y gulurnico)

Obstruye la opsonizacin y fagocitosis.

Neutraliza radicales de oxgeno liberados por PMNs.

Inhibe el complemento.

Limita la difusin de los antibiticos.

Quorum sensing en P.aeruginosa

Implica la activacin de genes especficos a altas densidades de clulas en respuesta a las seales qumicas liberadas (autoinductor) por Pseudomonas aeruginosa.

Es importante para que se exprese la virulencia.

Los factores de virulencia estn bajo en control de dos sistemas de quorum sensing:

las y rhl Sistema las: Las R :(Factor transcripcional) Autoinductor : N-(3-oxododecanoyl)-L homoserina lactona 3 oxo-C12-HSL 8 (PAI-1) Auntoinductor sintetasa: LasI

Sistema rhl: Rhl R : (Factor transcripcional) Autoinductor : N-butyoyl-1 homoserina lactona C4-HSL(PAI-2)

Auntoinductor sintetasa: RhlI

las : elastasa Las A

elastasa Las B

proteasa alcalina

exotoxina A

rhl: ramnolpidos

piocianina

Sistemas de secrecin utilizados por

Pseudomonas aeruginosa Sistema de secrecin tipo I - proteasa alcalina

Sistema de secrecin tipo II - elastasa - lipasa - exotoxina A -fosfolipasas - fosfatasa alcalina

Sistema de secrecin tipo III - exotoxina S - exotoxina T - ramnolpidos

Etapas de la infeccin por P.aeruginosa

Se distinguen tres estados:

1.-Adherencia y colonizacin

-fimbria

-alginato (biofilm)

2.- Invasin local

-elastasas

-proteasa alcalina

-citotoxina (leucocidina)

-fosfolipasa C y ramnolpidos

- sideroforos (pioquelina, pioverdina)

-piocianina

3.-Enfermedad diseminada sistmica

los factores anteriores contribuyen a

la diseminacin de la infeccin agregndose la accin de toxinas:

- Exotoxina A

- LPS (endotoxina)

Cuadros clnicos producidos porP.aeruginosa

-INFECCIONES RESPIRATORIAS: Neumona,

Pacientes con fibrosis qustica

- BACTERIEMIA

- INFECCIONES DEL S.N.C.: meningitis, abscesos cerebrales

INFECCION AL OIDO : otitis

INFECCION A OJOS : queratitis

INFECCION DEL TRACTO URINARIO

INFECCIONES A HUESOS: osteomielitis

INFECCIONES GASTROINTESTINALES: gastroenteritis

INFECCIONES DE HERIDAS QUIRURGICAS

INFECCIONES DE QUEMADURAS Y HERIDAS

Ectima gangrenoso por Pseudomonas aeruginosa

Ectima gangrenoso

Rev Chil Infect 2011; 28 (6): 592-596

Heridas por quemadura

Otitis externa

Endoftalmitis por Pseudomonas aeruginosa

Factores de virulecia:

Exotoxina A ,Proteasas alcalinas,

proteasa IV,

proteasa pequea (PASP)

Foliculitis por P.aeruginosa La foliculitis por Pseudomonas se presenta con

lesiones foliculares, maculosas y papulopustulosas

localizadas en la zona lateral del tronco, muslos,

huecos axilares y rea suprapbica. Habitualmente,

comienza entre 8-48 h trasla exposicin a una

fuente contaminada. En ocasiones, se puede

acompaar de sntomas generales como fiebre,

malestar general, nuseas y vmitos, dolor ocular,

farngeo, de odos, mamas inflamadas y dolorosas,

y linfadenopatas. La aparicin de estos sntomas

no implica diseminacin de P.aeruginosa.

Sndrome de la ua verde causado por Pseudomonas aeruginosa

FIBROSIS QUISTICA

Enfermedad gentica, autosmica recesiva*, causada por una mutacin en el

brazo largo del cromosoma 7. Este gen contiene la informacin para la produccin

de una protena reguladora del intercambio de electrolitos a travs de las

membrana, llamada CFTR, y su anomala produce alteraciones en el transporte de

cloro y sodio en los rganos cubiertos por tejido epitelial.

Afecta diferentes rganos y sistemas, en especial el aparato respiratorio, el pncreas, las glndulas sudorparas y el sistema reproductor

masculino. Crnica y de evolucin progresiva.

* Un trastorno autosmico recesivo significa que deben

estar presentes dos copias de un gen anormal para

que se desarrolle la enfermedad.

Pseudomonas aeruginosa

Agar F (King B)

Agar P (King A)

Resistencia de P.aeruginosa

a los antibiticos

Alginato restringe la difusin de antibiticos.

Disminuye la permeabilidad a antibiticos.

Hidrlisis de antibiticos (ej. betalactamasas)

Sistemas de bomba de eflujo

Estudio de susceptibilidad antibiticos a 85 cepas de Pseudomonas aeruginosa

aisladas de pacientes del Hospital de Talca.

Daniela Prez Leal.,Memoria para optar al grado de Licenciado en Tecnologa Mdica.2009

Pseudomonas oryzihabitans Tambien denominada Flavimonas oryzihabitans

-Bacilo Gram negativo, aerobio no fermentador.

-Movil por un flagelo polar.

-Oxidasa negativa

-Catalasa positiva

-Oxida la glucosa

Crece bien en agar MacConkey y agar Cetrimida (despues de 24 a 48 de incubacion las colonias se tornan arrugadas de color

amarillo).

No producen hemolisis en agar sangre de caballo al 5%.

Crece entre 18C a 42 C.

Agar Cetrimida

Grupo II rRNA Incluye la familia Burkholderiacee que comprende los gneros:

Burkholderia Lautropia Pandoraea Ralstonia Cupriavidus

Las principales especies son: Burkholderia mallei Burkholderia pseudomallei Complejo Burkholderia cepacia

Burkholderia mallei

OF glucosa= oxidativo

Oxidasa (+)

Inmvil.

Parsito obligado de animales.

Agente causal del Muermo.

Antimicrobianos de eleccin:

Cotrimoxazol asociado a:

- fluorquinolonas, ceftazidima .

Burkholderia pseudomallei

Oxidasa (+)

Mvil

OF/glucosa= oxidativo

Agente causal de Melioidosis

Complejo Burkholderia cepacia

Oxidasa : w (+) OF/glucosa: oxidativo

Descarboxilasa de lisina: (+)

Grupo III rRNA

Los miembros de este grupo pertenecen a la familia Comamonadaceae

Comprende los siguientes gneros:

Comamonas

Delftia

Acidovorax

Grupo IV

La familia Caulobacteraceae incluye

el gnero Brevudimonas

Grupo V rRNA

La familia Xanthomonadaceae

Comprende los gneros:

Stenotrophomonas.

Xanthomonas

Caractersticas de Stenotrophomonas maltophilia

Bacilo mvil con flagelos polares

Oxidasa (-)

Dnasa (+)

Descarboxilasa de lisina (+)

Susceptible a : sulfametoxazol-trimetoprim

OF/glucosa: (-) o dbilmente (+) a las 24 hrs.

ANTIBITICOS DE ELECCIN:

Cotrimoxazol, Minociclina, Levofloxacino, Ciprofloxacino.

Shewanella putrefaciens

Oxidasa (+), mvil con flagelos polares OF/glucosa = oxidativo

produce H2S en TSI y KIA

Grupo oxidasa negativo

Acinetobacter (del griego akinetos: inmovil)

Gnero Acinetobacter (del griego akinetos: inmovil)

Las especies de este gnero son:

Cocobacilos Gram negativos, aerobios estrictos,

inmviles, catalasa (+),oxidasa(-).

En 1986 Bouvet y Grimont hicieron una clasificacin que distingua 12 grupos diferentes (genomaespecies) sobre las base de

caractersticas de hibridacin DNA-DNA y nutricionales.

En 1989 Tjernberg y Ursing describieron

tres grupos DNA adicionales, numerados del 13 al 15.

Bouvet y Jeanjean describieron 5 grupos que numeraron del 13 al 17.

Actualmente el gnero contiene 33 genoespecies.

Slo 21 de ellas han sido denominadas y 12 recuperadas de

muestras clnicas.

Complejo Acinetobacter baumannii-calcoaceticus

Acinetobacter calcoaceticus genoespecie 1

Acinetobacter baumannii genoespecie 2

Acinetobacter pitti geneoespecie 3

Acinetobacter nosocomialis genoespecie 13

Especies de importancia clnica

que se aislan de brotes nosocomiales:

Acinetobacter baumannii

Acinetobacter gen.sp. 3

Acinetobacter gen.sp.13 TU

HABITAT

Hospitales y pacientes hospitalizados (Aislamientos multiresistentes) A.baumannii , gen. sp 3 ,gen.sp13 TU

Piel (humanos, animales), Animales (Aislamientos sensibles) A.johnsonii, A.lwoffii

Suelo, medio ambiente y agua. (Aislamientos sensibles) A.calcoaceticus, A. johnsonii

Infecciones por Acinetobacter

Neumona

Bacteriemia

Meningitis

Infeccin del Tracto Urinario (ITU) Endocarditis aguda

Peritonitis

Conjuntivitis

Queratitis

Factores de riesgo

Hospitalizacin prolongada

Edad avanzada

Enfermedad de base: Enf. pulmonar crnica, Neoplasias, Diabetes.

Tratamiento con antibiticos de amplio espectro

Tratamiento con corticosteroides

Instrumentalizaciones: Ventilacin mecnica, Broncoscopio, Catter.

Ciruga mayor

Pacientes quemados

Acinetobacter Colonizacin / infeccin

Piel Tracto digestivo Faringe

Ciruga Catter ITU Endgena Ventilacin mecnica

Broncoscopa

ITU

NEUMONIA

SEPTICEMIA

Rev Chil Infect 2005; 22 (4): 298-320

Factores de virulencia

Polisacrido capsular

Adherencia( fimbrias y polisacrido capsular)

Enzimas

Produccin de Slime

Acinetobacter baumannii multiresistente

(AB-MR): Solo preservan susceptibilidad a: carbapenmicos, amikacina ,

sulbactam y minociclina.

Acinetobacter baumannii pan-resistente

(AB-PR): Son resistente a los carbapenmicos y son susceptible a

polimixinas como colistin.

Mecanismos de resistencia:

Enzimas inactivadoras de antibiticos Amplia variedad de betalactamasas que le confiere resistencia a penicilinas, cefalosporinas,y

carbapenemes.

Limitacin del acceso a las dianas bacterianas

Mutaciones que alteran las dianas o las funciones celulares.

Esquemas de tratamiento

Estudio de susceptibilidad a antibiticos en 25 cepas de

Acinetobacter baumannii aisladas de pacientes del

hospital de Talca

Paula Bravo Nuez, Memoria para optar al Grado de Licenciado en Tecnologa Mdica, 2010

Gnero Achromobacter

A.xylosoxidans

A.piechaudii

A.denitrificans

A.xylosoxidans es resistente a cefalosporinas,aminoglicosidos

fluorquinolonas.

Oxidasa positiva

O F/ glucosa: oxida lentamente

Movil. Flagelacin pertrica

Gnero Alcaligenes

Bacilos gramnegativos, oxidasa positivo,

Mviles con flagelacin pertrica.

Se desarrollan en agar MacConkey

Alcaligenes faecalis OF/glucosa: inerte

NaCl 6.5% (+)

Urea: negativo

endoftalmitis

Alcaligenes faecalis

Gnero Elizabethkingia (Chryseobacterium)

Bacilos gramnegativos inmviles

oxidasa positiva.

Indol (+)

Producen colonias pigmentadas amarillas

en agar sangre.

Se desarrollan poco o nada en agar MacConkey.

OF/glucosa: oxida

La especie ms importante es: E.meningoseptica

agente causal de meningitis neonatal, con alta mortalidad.

En adultos puede provocar neumona.

Weeksella virosa

Bacilo Gram negativo

Inmovil

No sacaroltico

Oxidasa (+)

Catalasa (+)

No crece en agar

MacConkey

Rev. chil. infectol. vol.28 no.5 Santiago oct. 2011

Myroides Se conocen 2 especies: M.odoratus y M.odoratimimus M.odoratus ( Flavobacterium odoratum)

Bacilo Gram , aerobio, Inmvil.

Colonia pigmentada de color amarllo. Olor frutal.

Oxidasa (+)

Dnasa (+)

Ureasa (+)

HABITAT: suelo y agua.

Patologa: celulitis, fascitis necrotizante,infeccin tracto urinario

infeccin de heridia quirrgica,ventricuitis, endocarditis.

Producen metalobetalactamasas de origen cromosomal

Capaces de hidrolizar: penicilinas, cefalosporinas,

carbapenem, aztreonam.

Presentan susceptibilidad a:

Ciprofloxacino y Sulfametoxazol Trimetoprim

Gnero Moraxella

Cocos o cocobacilos gramnegativos, oxidasa (+), inmviles, no tienen accin sobre hidratos de carbono.

No se desarrollan en agar MacConkey.

Las especies ms importante son:

M.catarrhalis M.lacunata, M.osloensis ,M.nonliquefaciens.

M.lacunata produce : conjuntivitis, queratitis, sinusitis crnica, endocarditis.

Para su cultivo requiere de medios especiales enriquecidos con suero de conejo.

Sensible a penicilina G, .

ESQUEMA DE

IDENTIFICACION DE BACILOS

GRAM NEGATIVOS NO

FERMENTADORES

Muchas gracias

por su atencin