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5/25/2018 BIOMETRIA HEMATICA manual.docx

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BIOMETRIA HEMATICA PRACTICAS DE LABORATORIO

Preparacin del equipoTubos de coleccin: Los tubos estn predeterminados para llenarse con un determinado

volumen de sangre por vaco. El tapn de caucho est codificado por color, de acuerdo a su uso o

sus aditivos.TUBO CON TAPON ROJO

USO: Qumica, Inmunologa, Banco de sangreADITIVO: Ninguno

TUBO CON TAPON ROJO

USO: QumicaADITIVO: Gel - Separador

TUBO CON TAPON MORADO

USO: HematologaADITIVO: Anticoagulante EDTA

TUBO CON TAPON CELESTE

USO: Pruebas de CoagulacinADITIVO: Anticoagulante Citrato de sodio

hemogramas, se recomienda una aguja de un dimetro de 0.8 mm (21G) para evitar dao a lasclulas. Las agujas de 0.9 mm a 1.1 mm de dimetro (20G19G) se utilizan normalmente parapuncin venosa en adultos.

.

-Vacutainer: Se utilizan para tubos al vaco.

planos.


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El procedimiento de la flebotomaLa muestra debe tomarse correctamente y bajo las condiciones ms favorables para evitar errores.Esto incluye la absoluta identificacin del paciente, el sitio a puncionar y el volumen a colectar. Elpaciente debe estar en posicin cmoda, de preferencia en una silla especial para venopuncincon descanso para los brazos y si est en cama, preferiblemente acostado.

Seleccin del sitio a puncionar:

Al proceder a seleccionar el sitio a puncionar, evite reas con hematoma, fstulas, quemaduras,escoriaciones de la piel o cicatrices. Si se trata de un paciente hospitalizado evite tomar muestrade un brazo que se est utilizando con venoclisis o del costado en que se ha realizado unamastectoma reciente.

La palpacin:Antes de proceder a puncionar, se debe escoger la vena. La mejor manera es realizando unapalpacin de las mismas para esa decisin. Para ello coloque el torniquete 3 a 4 pulgadas porarriba del sitio seleccionado, para visualizarlas mejor. Debe tener presente en no mantener eltorniquete por ms de 3 minutos, para evitar la hemoconcentracin.Las venas ms utilizadas para la venipuncin, estn localizadas en el rea antecubital. Entre stastenemos:

a) Vena Cubital: Es la ms larga y gruesa de todas y es la preferida por bordear la musculaturadel brazo.

b) Vena Ceflica:Tiene iguales caractersticas de la anterior, pero es un poco menos gruesa.

c) Vena Baslica: Es ms pequea que las anteriores. Esta vena est cerca de la arteria braquial,por lo que su puncin es riesgosa y su rea es ms sensible y dolorosa para el paciente.


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Al palpar hgalo con la punta de sus dedos, tratando de seguir el rastro de las venas. Aqu tambinson tiles sus conocimientos en la anatoma de las venas de las extremidades superiores. Enocasiones si no visualiza la vena, puede forzar la sangre dentro de la vena a travs de un suavemasaje de abajo hacia arriba.

PALPACIN DE LAS VENAS

La Descontaminacin:

Una vez que se ha decidido por la vena a puncionar, debe proceder a descontaminar el rea conalcohol etlico o isoproplico al 70% utilizando algodn y con movimientos circulares del interior alexterior. Debe tener presente que una vez realizada la descontaminacin, no debe volver a tocar elrea venosa.

DESCONTAMINACION DEL AREALa puncin venosa:

Ahora est preparado para realizar la extraccin sangunea.El brazo debe estar preferiblemente en posicin cmoda horizontalmente. Con el torniquete enposicin, haga que el paciente cierre y abra el puo de 3 a 5 veces para bombear mejor la sangre,y luego que mantenga el puo cerrado.Si se trata de un nio, es recomendable colocar 2 dedos de la mano, debajo del codo del paciente,para evitar que doble el brazo durante la extraccin.

Extraccin con jeringuilla:

Cuando vaya a proceder a realizar la extraccin con jeringuilla, usted debe tener presente elcalibre a utilizar y el tamao de la jeringuilla segn el volumen a extraer.

a) Coloque la punta de la aguja en un ngulo de 15 a 30 grados sobre la superficie de la venaescogida y atraviese la piel con un movimiento firme y seguro, hasta el lumen de la vena.

b) Apretando firmemente la jeringuilla, debe jalar el mbolo con movimiento continuo para extraerla sangre hasta el volumen requerido. Evite presionar fuertemente la aguja durante laextraccin.


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c) Afloje el torniquete para que la sangre fluya mejor y remueva la aguja del brazo conmovimiento suave al terminar de colectar, sin apretar el rea de la puncin con el algodn.

d) Presione el algodn sobre el sitio de la puncin aplicando una presin adecuada y no excesivapara evitar la formacin de hematoma.

e) Llenar los tubos en su orden.

f) Descarte la jeringuilla y aguja en un contenedor apropiado.

g) Colocar un curita o venda en el sitio de la puncin

RECUENTO ERITROCITARIO Y DETERMINACION DE HEMATOCRITO

INTRODUCCION:EL RECUENTO DE ERITROCITOS es un examen de sangre que determina el nmero de glbulosrojos (GR) que tiene una persona. La cantidad de oxgeno recibida por los tejidos corporalesdepende de cuntos glbulos rojos tenga la persona y de qu tan bien stos estn funcionando. Elrecuento de eritrocitos, leucocitos y plaquetas son expresados en concentracin (clulas porunidad de volumen de sangre); en este caso que es el mtodo manual es de mm.

FUNDAMENTO DEL METODO MANUAL:

Para EL RECUENTO DE ERITROCITOS, la sangre se diluye con una solucin isotnica,conservando ntegros a los eritrocitos, impidiendo a su vez, que se hinchen o se contraigan, perotambin esta solucin destruye a los leucocitos. Luego, esta dilucin se coloca en una cmara deNeubauer con la ayuda de una pipeta automtica, Pasteur o de Thoma y se cuentan cada uno delos eritrocitos al microscopio con el objetivo de 40X, para calcular el nmero de eritrocitos por mm.Es preciso que cuando se interprete los resultados del conteo eritrocitario, se complemente conotras medidas de la biometra hemtica, es decir, con la hemoglobina, el hematocrito, la VCM, laHCM y la VMHC.No obstante, los valores disminuidos pueden deberse a:


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nemias ocasionadas por causas varias

Los valores aumentados a:

El hematocritoCon el valor hematocrito se confirma el diagnostico de diferentes enfermedades y patologas, comoes el caso de las anemias y la policitemia. En esta prueba se mide la cantidad de eritrocitos de la

sangre en porcentaje del total, o lo que es lo mismo, el porcentaje de clulas que transportanoxgeno frente al volumen total de sangre, determinado por proceso de centrifugacin. En esteproceso, se pueden apreciar dos niveles, los elementos formes que se sedimentan, y el plasmatotal que flota. En definitiva es la relacin porcentual entre ambos lo que representa el valorhematocrito.La finalidad que se persigue con esta prueba es la de confirmar el diagnstico de varias patologa oafecciones.Los valores altos de hematocrito puede deberse a afecciones tales como:

Enfermedades pulmonares crnicas

Sin embargo, los valores disminuidos nos pueden indicar:

MATERIAL BIOLOGICO:

REACTIVOS:


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MATERIAL NECESARIO:

PROCEDIMIENTO:Para recuento de eritrocitos:1. Obtener sangre total siguiendo el protocolo ya conocido2. Con la boquilla y la pipeta de Thoma aspirar sangre hasta la marca 0.5 (SIN BURBUJAS)3. Aspirar diluyente (Hayem o Dacie) hasta la marca 101 de la pipeta4. Agitar la pipeta por 3 min.5. Desechar las 5 o 6 primeras gotas de la pipeta de Thoma

6. Colocar el cubreobjetos sobre la cmara de Neubauer y llenarla, tratando que f luya librementepor difusin el lquido evitando llenar en exceso o formacin de burbujas7. Dejar en reposo 2 o 3 minutos el Hemacitmetro con el fin de que los eritrocitos sedimenten8. Localizar la cuadricula de la cmara de Neubauer con el objetivo seco dbil (10X); enseguidaenfocar con seco fuerte (40X)9. El recuento se realizara en los cuadros ms pequeos de la cmara, contando los hemateslocalizados en los 4 cuadros de los extremos y en el del centro, haciendo un total de 5 cuadros.(VER FIGURAS MAS ABAJO)10. Realizar los clculos para determinar la cantidad de eritrocitos resultantes

Nota: Se puede realizar con la pipeta automtica, se toma 20 L (0,02mL) de sangre total con

anticoagulante, o sangre capilar y se deposita en un tubo de 12 x 75 que contenga 4 mL desolucin de Hayem (aqu se tiene una dilucin de 1:200). Se deja reposar aproximadamente 5

minutos y se procede a cargar la cmara con la misma pipeta usando un nuevo tip.PARTES DE LA PIPETA DE THOMA:


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ILUSTRACION PARA EL LLENADO DE LA CAMARA DE NEUBAUER

CONTEO DE GLOBULOS ROJOSCuadrantes dentro de la cmara de Neubauer donde se realizara el conteo celular, contaremoscada uno de los glbulos rojos que encontremos en los cuadrantes que estn marcados con la

letra R y en el orden como se indica en las flechas .


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De los 25 cuadrados en que se encuentra subdividido, se cuentan los cuatro angulares y el central,con un recuento total representativo de 1/5 de milmetro cuadrado. Sobre la base de una dilucinde 200, de un recuento de 1/5 mm2 y una profundidad de 0.1 mm, el clculo se efecta comosigue:

Eritrocitos contabilizados X 5 X 200 X 10 = NUMERO DE ERITROCITOS POR mm3, o bien

Eritrocitos contabilizados X 10,000 = NUMERO DE ERITROCITOS/ mm3

Para determinacin de hematocrito:Con el valor del hematocrito se confirma el diagnostico de diferentes enfermedades y patologas,como es el caso de las anemias y la policitemia. En esta prueba se mide la cantidad de eritrocitosde la sangre en porcentaje del total, o lo que es lo mismo, el porcentaje de clulas que transportanoxgeno frente al volumen total de sangre, determinado por proceso de centrifugacin. En esteproceso, se pueden apreciar dos niveles, los elementos formes que se sedimentan, y el plasmatotal que flota. En definitiva es la relacin porcentual entre ambos lo que representa el valorhematocrito.PROCEDIMIENTO:

1. Utilice tubos capilares de 7 cm de largo por 1 mm de grosor, llenar las partes del capilar, consangre venosa bien homogeneizada.2. Cerrar la punta del tubo capilar sellando a la llama del mechero (evite quemar el paqueteglobular) o con plastilina.3. Centrifugar por 5 min. A 10,000 rpm4. Leer el resultado en escalas comerciales, de la siguiente manera:a. Extremo inferior del tubo) quede exactamente al mismo nivel de la lnea horizontalcorrespondiente al cero.b. Desplace el tubo a travs de la escala hasta que la lnea marcada con el nmero 100 quede alnivel del tope de la columna de plasma. Vigile que el fondo de la columna de eritrocitos continesobre la lnea cero. El tubo debe encontrarse completamente en posicin vertical.c. La lnea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicar la fraccin de volumende stos.

TUBO DE MICROHEMATOCRITO Y METODOS DE LECTURA DEL VOLUMEN DE CELULAS

EMPACADAS.

CAUSAS DE ERROR EN RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS:o Agitado imperfecto.o Suciedad del material.o Error en la aspiracin de sangre y dilucin hasta las marcas correctas.o Desecamiento del lquido en la cmara de recuento.o Errores en el recuento y en el clculo.


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o Olvido de descartar el lquido de dilucin de la pipeta antes de cargar la cmarao Carga excesiva de la cmara

CAUSAS DE ERROR EN DETERMINACION DE HEMATOCRITO:o Velocidad inadecuada al centrifugar.o Actividad muscular del paciente antes de la toma de muestra.o Exceso de anticoagulantes.o Prolongado uso del torniquete.o Quemar el paquete globular al cerrar el capilar.o Utilizar sangre hemolisada.

VALORESNORMALES:HOMBRES

MUJERES UNIDADES

Eritrocitos (RBC) 5.4 (4.66.0) 4.8 (3.95.0) 106 LHematocrito(HTO)

45 (4252) 42 (3648) %

FORMULA ROJA Y CLASIFICACION DE ANEMIAS

OBJETIVO:Realizar una formula roja mediante la medicin de cada uno de los parmetros que la integran:recuento de eritrocitos, medicin de la hemoglobina, Hematcrito y clculo de los valores absolutosde la concentracin de hemoglobina; para poder diagnosticar y clasificar una anemia.INSTRUCCIONES:Tomar una muestra de sangre y realizar CADA UNO DE LOS RECUENTOS que ya hemosrealizado (eritrocitos, Hematcrito y dosificacin de hemoglobina) con el material requerido paracada prueba. Anotar y hacer clculos correspondientes para determinar y clasificar anemias. Yfinalmente realizar el reporte correspondiente a cada paciente.

CLASIFICACION DE ANEMIAS POR MEDIO DE LA DETERMINACIONES DE LOSINDICES ABSOLUTOS.

La anemia es una deficiencia en la cantidad o calidad de los glbulos rojos y frecuentemente essecundaria a alguna enfermedad subyacente.Para diagnosticar a un paciente con anemia debemos clasificar que tipo de anemia est cursando,es necesario realizar algunos clculos para la determinacin del tamao, contenido yconcentracin de hemoglobina en los glbulos rojos. Estos ndices han resultado tiles para lacaracterizacin morfolgica de las anemias y pueden calcularse a partir del recuento de glbulosrojos, de la concentracin de hemoglobina y del hematocrito.

El Volumen Corpuscular Medio(VCM o VGM) da idea DEL TAMAO promedio DE CADAERITROCITO, se calcula con la siguiente frmula:

VGM= Hto X 10 /Eritroc.

HCM:Hemoglobina Corpuscular Mediaes la CANTIDAD HEMOGLOBINA PRESENTE en loseritrocitos, se calcula:HCM= Hb (g /dL) x 10 /Eritroc.

CMHC:Concentracin Corpuscular Media de Hemoglobina, es laCONCENTRACIN media de Hb en un volumen determinado de eritrocitos, y se calcula:


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CMHC= Hb * 100 / Hto.

ERITROSEDIMENTACION GLOBULAR Y RECUENTO DE RETICULOCITOS

La eritrosedimentacin globular es una prueba que se usa ampliamente para estudiar la actividadde diversas enfermedades. La velocidad de sedimentacin de los glbulos rojos se refiere al

tiempo que tardan en separarse del plasma. Se le mide en MILIMETROS POR HORA.La velocidad de sedimentacin es un examen hematolgico que no est incluido en el desarrollode un hemograma; sin embargo, es una prueba muy importante por su gran sensibilidad, puesresulta anormal en las enfermedades funcionales, as como en los procesos inactivos oestrictamente locales.

FUNDAMENTO:La eritrosedimentacin depende de la formacin de ROULEAUX, de la concentracin defibringeno y de la concentracin de globulinas alfa y beta en el plasma. La concentracin de lasdiversas protenas plasmticas afecta la eritrosedimentacin y en muchas enfermedades se alterala relacin entre las protenas, con la consiguiente aceleracin de la eritrosedimentacin. Unadisminucin en el nmero de glbulos rojos tambin la acelera y en algunos laboratorios se corrigesu resultado en los casos de anemia. Adems de las elevaciones producidas en procesos

infecciosos e inflamatorios, se producen elevaciones fisiolgicas en el embarazo y durante lamenstruacin. La VSG disminuye en la anemia falciforme y en las 39fibringeno39 severas.FENOMENO DE ROULEAUX:El ROULEAUX o formacin de pilas de monedas, es un fenmeno que consiste en que losglbulos se aglomeran en masas. Las causas de este fenmeno radican en el plasma o en el sueroy no estn influidas por la temperatura. La administracin de algunos medicamentos puedeproducir este fenmeno. Otras veces se trata de una causa intrnseca al paciente, que tiene undesequilibrio de sus protenas (aumento del 39fibringeno o aparicin de protenas anormales).Observado en el microscopio, el fenmeno de Rouleaux es caracterstico: se ven los glbulosreunidos en filas, apilados por sus caras planas, varias filas se entrecruzan en diversos planos,produciendo un grumo el cual puede ser visto de forma macroscpica (a simple vista)INTERPRETACION CLINICA:

La VSG es un buen ndice de la presencia de procesos infecciosos activos como la tuberculosis ola endocarditis bacteriana subaguda, el lupus eritematoso diseminado, las carditis reumticas,ciertas neoplasias, embarazo ectpico, etc. Sirve igualmente para controlar la actividad evolutivade las infecciones mencionadas.

MATERIAL:

PROCEDIMIENTO (METODO DE WINTROBE):1. Mezclar la muestra de sangre2. Llenar de sangre una pipeta Pasteur

3. Introducir la punta de la pipeta Pasteur hasta el fondo del tubo de Wintrobe4. Lentamente vaciar la sangre e ir retirando la pipeta arrastrndola por la pared interna del tuboEVITANDO la formacin de burbujas de aire.5. El tubo se llena hasta la marca cero y se coloca en una gradilla en posicin vertical.6. INMEDIATAMENTE activar el cronometro que indique 1 hora, durante la cual ocurrir elfenmeno de Rouleaux


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7. Transcurrida la hora se leern los milmetros que haya sedimentado la muestra de sangre8. La escala se lee hacia abajo, representando cada nmero 10 mm o 1 cm.VALORES DE REFERENCIA:Hombres: 09 mm/hrMujeres y nios: 015 mm/hrCAUSAS DE ERROR:1. Uso de anticoagulante incorrecto (heparina aumenta el resultado).2. Exceso de anticoagulante (aumenta)3. Posicin inadecuada del tubo (que este ladeado el tubo)4. Aglomeracin anormal de los glbulos rojos en pilas de monedas.

CUENTA DE RETICULOCITOSFUNDAMENTO:La investigacin de reticulocitos es una de las pruebas ms tiles en la investigacin de lacausa de la anemia, pues nos d idea del estado de la produccin de glbulos rojos por lamdula sea.Los reticulocitos contienen una fina red de ARN y protoporfirina que se puede teir con elazul de cresil brillante. Este colorante en combinacin con una misma cantidad de sangreanticoagulada se mezcla y con la ayuda de la temperatura (bao mara) se produce lacoloracin de estos eritrocitos jvenes visualizndose en los frotices sanguneos pormicroscopaREACTIVOS:

Azul brillante de cresilMATERIAL:

PROCEDIMIENTO:1. En un tubo de ensaye chico se depositan tres gotas de sangre con EDTA2. Se agregan 3 gotas de reactivo3. Mezclar el tubo y tapar con parafilm4. Incubar a 37oC por 10 minutos.5. Hacer frotis en un portaobjetos6. Leer en el microscopio con el objetivo de inmersin (100X)7. Se leern varios campos, contando 300 eritrocitos en total, incluyendo a losreticulocitos

8. Se har un clculo de regla de tres simple para obtener el valor porcentual de losreticulocitos encontrados.

VALORES DE REFERENCIA:Recin nacidos: 36 %

Adultos: 0.51.5 %INTERPRETACION CLINICA:

Causas de aumento


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El nmero de reticulocitos aumenta en todas las circunstancias en las que existe un

incremento de la eritropoyesis, tales como en la hemlisis, como respuesta a

sangrados o tras el inicio de un tratamiento antianmico que ha resultado eficaz.

Causas de disminucin

Como la produccin de reticulocitos es necesaria para compensar las prdidas fisiolgicas deglbulos rojos maduros, una disminucin de su nmero es la expresin de un estadoarregenerativo o hiporegenerativo de la serie roja. Esta circunstancia es tpica de anemiasaplsicas, anemias carenciales y enfermedades inflamatorias y neoplsicas.

RECUENTO DE LEUCOCITOS TOTALESINTRODUCCION: Efectuaremos un recuento de leucocitos totales de un paciente.Esto nos servir de referencia para determinar si hay algn proceso infeccioso activo. Al efectuar elrecuento total no encontraremos diferenciacin entre los 5 tipos de leucocitos normales(neutrfilos, monocitos, linfocitos, basfilos y eosinfilos). En esta prctica nos limitaremos a contarmanualmente los leucocitos totales dados en mm3 o litros.FUNDAMENTO: En el mtodo de Turk se utiliza una solucin de cido actico al 2% que tienecomo funcin lisar los eritrocitos para evitar interferencias en el recuento.

MATERIAL UTILIZADO:1. Pipeta de Thoma para LEUCOCITOS2. Cmara de Neubauer3. Microscopio4. Contador celular5. Boquilla

REACTIVO UTILIZADO:Reactivo de TurkPROCEDIMIENTO: Se requiere de sangre total con EDTA1. Pipetear sangre con la pipeta de Thoma y la boquilla, hasta la marca de 0.5 evitando la

formacin de burbujas.2. Limpiar la pipeta para ELIMINAR el exceso de sangre3. Aspirar reactivo de Turk hasta la marca 11, EVITANDO las BURBUJAS.4. Se retira la boquilla de la pipeta y esta se agita vigorosamente por 3 min.5. Preparar la cmara de Neubauer.6. Se eliminan las 3 primeras gotas de la dilucin.7. Colocar una gota en la cmara de Neubauer y dejar reposar por 3 min. Para que se asienten losleucocitos.8. Leer al microscopio con objetivo de 10X y el contador celular, SOLO EN LOS 4 CUADROSGRANDES de la cmara de Neubauer, como se indica en la figura.9. Realizar clculos correspondientes.

CALCULOS:El total de clulas en estos 4 mm3 se multiplica por 50 (factor obtenido entre ladilucin de la sangre y la profundidad de la cmara).

El recuento de glbulos blancos se realizara en las 4 CUADRICULAS GRANDES que estn en lasorillas, en este dibujo estn MARCADAS con la letra W (White). Y con el OBJETIVO DE 10XLEUCOCITOS TOTALES/ mm3 = clulas contadas X 50


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VALORES DE REFERENCIA:5,00010,000/mm35.0010.00 X109 /L

SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALES:

Un bajo nmero de glbulos blancos se denomina leucopenia y puede deberse a:

ad del hgado o el bazo

Un alto nmero de glbulos blancos se denomina leucocitosis y puede deberse a:

reumatoide o alergia)

RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS

INTRODUCCION:El recuento diferencial de leucocitos es una parte rutinaria de la biomtricahemtica que puede ser til en la valoracin de una infeccin o inflamacin, en la determinacin delos defectos de intoxicacin posible por sustancias qumicas o drogas, en el monitoreo detrastornos sanguneos como la leucemia, y en los efectos secundarios de tratamientos como laquimioterapia. El procedimiento consta de una toma de sangre, la misma se disemina en unportaobjetos de vidrio y luego se tie. A continuacin se determina el porcentaje de cada tipo deleucocitos.

FUNDAMENTO: Los leucocitos son parte fundamental del tejido hemtico y presentan lassiguientes caractersticas: son clulas que tienen un mayor dimetro que los eritrocitos, presentanun ncleo de forma irregular, su citoplasma presenta algunas granulaciones las cuales son teidoscon diferentes colorantes, y la cromatina del ncleo puede ser de diferentes densidades.Pueden distinguirse 5 tipos de leucocitos maduros (neutrfilos, eosinfilos, basfilos, monocitos ylinfocitos) basndose en general en las siguientes caractersticas:

El 65% de leucocitos corresponde a los GRANULOCITOS: Eosinfilos, Basfilos y Neutrfilos.El 35% corresponde a los AGRANULOCITOS: Monocitos y Linfocitos.Los leucocitos se desplazan por medio de movimientos amiboideos saliendo de los vasos

sanguneos y llegando a los tejidos, por medio de la DIAPEDESIS. Estas clulas vagabundas sonimportantes en las reacciones de defensa contra enfermedades y en general en infecciones,puesto que pueden fagocitar cuerpos extraos y bacterias.Tienen una importante funcin en las reacciones inmunolgicas de nuestro organismofavoreciendo la produccin de anticuerpos.MATERIAL:


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PROCEDIMIENTO:1. Homogenizar la muestra sangunea y ANTES de 3 hrs. realizar un frotis2. Empleando un aplicador de madera, depositar una pequea gota de sangre en el extremo de unportaobjetos totalmente limpio.3. Con el borde de otro portaobjetos a 20 o 30 grados, tocar la gota, esperar a que la sangre sedistribuya por capilaridad en el extremo del portaobjetos extensor y deslizarlo suavemente sobre elotro portaobjetos, en sentido longitudinal hasta que la gota quede bien extendida sobre lasuperficie del primer portaobjetos (NOTA: revisar clase de leucopoyesis para recordar la forma dehacer el frotis)4. Dejar secar el frotis.5. Teir el frotis con la tincin correspondiente de la siguiente manera:

a. fijar la extensin en metanol absoluto aproximadamente 30 segundos.b. teir con la solucin de Eosina bufferizada por 20 segundos.c. enjuagar con agua de la llave.d. introducir la extensin en solucin de azul de policromo durante 30 segundos.e. enjuagar con agua de la llave, dejar escurrir el agua y dejar secar al aire libre.6. colocar una gota de aceite de inmersin y leer al microscopio con el objetivo de 100x.7. se har un recuento de 100 clulas blancas en total, DIFERENCIANDO cada una de ellas segnsus caractersticas antes citadas. (VER CLASE LEUCOPOYESIS)8. evaluar la morfologa de eritrocitos, leucocitos y plaquetas y reportar anormalidades.

VALORES DEREFERENCIA:Celular

Relativo (%)

Neutrfilos enBanda

0 - 5

Neutrfilossegmentados

45 - 65

Linfocitos 30 - 40Monocitos 3 - 8Eosinfilos 1 - 5Basfilos 0 - 1

RECUENTO DE PLAQUETAS

OBJETIVO


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Realizar el conteo de plaquetas existentes en un milmetro cbico de sangre total Identificar morfolgicamente las plaquetas coloreadas con Wright en extendidos de sangreperifrica y apreciar su nmero por campo. Correlacionar la prctica con la teora expuesta en clase.

MARCO TEORICO

Las plaquetas o trombocitos constituyen el elemento forme ms pequeo de la sangre; suevaluacin en el hemograma manual usualmente slo se realiza en los extendidos coloreados. Enel electrnico, su estudio aporta, adems del valor numrico, otros parmetros de importanciadiagnstica, tales como promedio del volumen plaquetario e histograma plaquetario. A estavaloracin la llamamos plaquetograma.Existen dos mtodos para el conteo de plaquetas: manual y electrnico.

PROCEDIMIENTO

El conteo de plaquetas se realiza en sangre anticoagulada con EDTA y diluida con oxalato deamonio al 1% mediante el uso de la pipeta para dilucin de hemates y el hemocitmetro.

RECURSOS

Sangre anticoagulada con EDTA Solucin de oxalato de amonio al 1% y/ o Rees Ecker Pipeta para dilucin de hemates Cmara de recuento de Neubauer Laminilla de cuarzo Caja de Petri con papel filtro humedecido Agitador de pipetas Microscopio Material bibliogrfico Presentacin en Power point

METODO

Mezcle cuidadosamente, por inversin por lo menos 10 veces, la sangre anticoagulada con el finde obtener una muestra homognea Llene la pipeta con la muestra de sangre hasta la marca 1.0 exactamente Elimine el exceso de sangre de las paredes externas de la pipeta para no contaminar la solucin

diluente Aspire el lquido diluente hasta la marca 101 exactamente Sujeta la pipeta entre los dedos ndice y pulgar, desprenda la boquilla y deje en reposo durante 3minutos Agite durante 10 minutos Descarte hasta la mitad del bulbo con el fin de eliminar el lquido del capilar e inmediatamentellene la cmara Llene la cmara de Neubauer en ambos lados y coloque en ambiente hmedo por 10 minutos. El


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ambiente hmedo se logra cubriendo la cmara con una Caja de Petri que llevar adherido undisco de papel de filtro humedecido Coloque la cmara en el microscopio. Enfoque con objetivo de 40X y observe el llenado de lacmara. No debe haber agregados plaquetarios. Cuidadosamente enfoque el cuadrado central Disminuya la intensidad de la luz. As le ser ms fcil distinguir y contar las plaquetas Las plaquetas se reconocen como estructuras pequeas, opacas, redondas o alargadas,

medianamente refrctiles, y a veces con prolongaciones El nmero est determinado por el conteo de los 25 cuadrados en que se subdivide el cuadradocentral, descartando las plaquetas que tocan las lneas derecha e inferior.

Clculo

El nmero de plaquetas por mm se calcula de acuerdo con:1. Volumen del rea contada: 0.1 mm (1x1x0.1)2. Dilucin utilizada: 1:1003. Nmeros de clulas contadas

Plaquetas /mm Nmero de clulas contadas X 1 X dilucin volumen de rea contada

Plaquetas/mm = B X 10 X 100

Plaquetas /mm = B X 1000

Valores de ReferenciaEl rango normal para el recuento de plaquetas es de 150.000 a 400.000xmm

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