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Bioseguridad en el laboratorio: trabajo con muestras en condiciones BSL2 y
BSL3
Maite Alvarez
Banco de ADN de la UPV/EHU
Servicios Generales de Investigación/Ikerkuntzarako Zerbitzu Orokorrek (SGIker)
6 Noviembre 2012
Muestras + habituales en BB normalmente pensamos en sangre – Resto de muestras biológicas??
Muestras biológicas
Materiales potencialmente infecciosos
• Sangre, tejidos y órganos humanos y de otros primates • Secreciones vaginales y semen • Fluido cerebroespinal • Fluidos sinoviales, pleurales, peritoneales o amnióticos • Saliva de procedimientos dentales (frecuentemente contienen sangre) • Cualquier fluido visiblemente contaminado con sangre • Todos los fluidos corporales en situaciones donde es difícil o imposible diferenciar entre
ellos. • Cualquier tejido u órgano humano no fijado (diferentes de la piel) vivo o muerto. • Células, cultivos celulares o cultivos de órganos que contengan VIH, así como medios de
cultivo u otras soluciones que contengan VIH o VHB. • Sangre, órganos u otros tejidos de animales de experimentación infectados con VIH o
VHB. • Líneas celulares establecidas y cultivos primarios humanos y de otros primates. • Cualquier tipo de muestra en la que exista incertidumbre sobre la presencia de agentes
patógenos humanos.
Nivel 3: No suelen corresponder a la mayoría de los biobancos y aquellos que sí entran dentro de estas características poseen formación específica.
Bacterias: Bacillus anthracis Brucella E. coli, cepas verocitotóxicas* Mycobacterium africanum (V), tuberculosis,... Rickettsia Salmonella typhi*(V) Yersinia pestis (V) Virus: Fiebre Valle del Rift VHE*, VHB*, VHC* Asociados a las TSE (CJD, vCJD, BSE, GSS, Kuru)* VIH
Muestras biológicas Ser consciente de con que podemos estar trabajando
http://www.redbiobancos.es/Pages%5CDocs%5CDOCUMENTO_BIOSEGURIDAD_01_2012.pdf
Evaluación de riesgo
Niveles de riesgo + actividad experimental
Donde encontrar listados de los patógenos y su nivel de riesgo
Todos 2-3, excepto virus que también hay de nivel 4
nivel de bioseguridad
Recepción muestra
Cuando llega una muestra, que hacer??
-Adoptar precauciones universales y usar EPIs - Prácticas y procedimientos de nivel 2 como mínimo
-Transporte de muestras respetando normas y reglamentos nacionales o internacionales
Registro LIMs (trazabilidad)
Comprobar estado del paquete.
Guía sobre la reglamentación relativa al Transporte de sustancias infecciosas 2009–2010 (OMS, 2009)
1º- conocer que tipo de muestra es
2º- conocida o no, abrir contenedor primario dentro de cabina de bioseguridad
Como llevarlo a la CBS
Manipulación muestra
– ¿Durante mucho tiempo has visto al personal hospitalario, químicos, biólogos, estudiantes, profesores, investigadores, médicos, transportando muestras biológicas de las formas más ridículas posibles? ¿En un guante?, ¿En la bolsillo de la bata?, ¿En la mano sin guantes?
• Las muestras que contengan agentes biológicos, químicos o radiactivos se
acondicionarán en contenedores adecuados para su transporte fuera de la zona de laboratorio.
– Transporte interno
• Para el transporte de botellas se sujetarán siempre por el fondo, nunca del cuello o el tapón.
• Se utilizaran medios de transporte (carros, bandejas con asa,...) para facilitar el transporte de varios recipientes o grandes volúmenes (> 10 litros).
– Entrada y salida del LCB3 SAS de materiales y/o dunk-tunk
Todos los procesos llevados a cabo en un BioBanco se deben de realizar cumpliendo las recomendaciones de los protocolos de bioseguridad.
Técnicas microbiológicas apropiadas
Recomendaciones generales:
- Usar bata, gafas de seguridad y guantes. - No usar ropa corta, sandalias o zapatos descubiertos. - No llevar mascotas a los laboratorios. - Evitar pipetear con la boca. - Usar el cabello corto o recogerlo y no llevar complementos. - Evitar introducir y consumir alimentos en los laboratorios. - Lavar las manos y cambiar de guantes frecuentemente. - No trabajar sólo en el laboratorio. - Evitar usar el teléfono móvil y equipos de sonido en el laboratorio. - No usar la bata fuera de los laboratorios, ya que se puede dispersar cualquier contaminación. - Usar material de plástico - Mantener las áreas de trabajo ordenadas y limpias
BSL2-BSL3: • Evitar el uso de elementos punzantes o cortantes.
•Recipientes roscados
• Procedimientos que eviten la formación de aerosoles • Procedimientos que eviten las turbulencias en el interior de la CBS • Descontaminación de las áreas de trabajo y de los materiales utilizados. • Protocolos y procedimientos de actuación en caso de accidente o vertido. •Infraestructuras y elementos protectores: Cabinas de seguridad biológica tipo II para el procesamiento de las muestras, centirífugas con tapas de seguridad, sistemas de filtración de vacio,…
Técnicas microbiológicas apropiadas
http://article.wn.com/view/2009/10/05/Biosafety_workshop_begins_at_Comstech/#
Equipos de Protección Individual (EPIs)
BSL2
BSL3
Trabajo en el laboratorio
1. 2. 3.
4. 6. 5.
http://multimedia.3m.com/mws/mediawebserver?66666UuZjcFSLXTtmXTcMxF6EVuQEcuZgVs6EVs6E666666--
Antes - Encender 5’ antes de comenzar - Desinfectar la superficie de trabajo Durante -Esperar al menos 1’ después de meter las manos (ajuste del flujo de aire) - Reducir al mínimo nº de movimientos en su interior - Movimientos lentos -Correcta colocación del material en el interior:
• Lo mas en el interior posible (sin bloquear la rejilla) • De lo limpio a lo sucio • Recipientes de desechos dentro de la CBS
Después - Desinfectar la superficie de trabajo - Apagar 5’ después de terminar
Como trabajar en una CBS:
Cabinas de bioseguridad biológica (CBS)
Descontaminación
Descontaminar:
- superficies y material de trabajo (poyatas, pipetas,...)
- Equipos: centrifugas, agitadores,...
- CBS: antes y después
Siempre previa limpieza???
Desinfectantes - Hipoclorito de Sodio - Alcohol (etanol e isopropil 70-95%) - Peroximonosulfato de Potasio (Virkon S)
Esterilizantes - Químicos: Perborato sódico (Perasafe) - Físicos: Autoclave de vapor
Respetar los tiempos que dependen de: - Descontaminante
- Microorganismo
Residuos LCB2:
Se recomienda descontaminar antes de esterilizar
LCB3:
Se descontaminan obligatoriamente antes de esterilizar.
Esterilización en el propio laboratorio: Autoclave de doble puerta
Almacenamiento
Conservación a -20ºC
Conservación a -80ºC
Conservación en N2 líquido
Conservación a -152ºC
Derrames
http://www.youtube.com/watch?v=ZnUW1N-JJz8&feature=related
Kit de derrames
Llamar al responsable de bioseguridad del laboratorio
Derrame fuera de la CBS
Derrame dentro de la CBS
Mucho ojo y Sentido común
¿Nivel 2 o nivel
3?
Reflexión
Conclusión
Y la de los demás
…Muchas gracias por vuestra atención.
Banco de ADN de la UPV/EHU Servicios Generales de
Investigación/Ikerkuntzarako Zerbitzu Orokorrek (SGIker)
Campus de Álava Universidad del País Vasco
/Euskal Herriko Unibertsitatea
Avda. Miguel de Unamuno, 3 01006 Vitoria-Gasteiz Tfno: +34 945 014500