buku 1 - forda-mof.org · pedoman ujicepat viabilitas benih tanaman hutan (acacia mangium, gmelina...

BUKU 1

KEMENTERIAN KEHUTANAN

BADAN PENELITIAN DAN PENGEMBANGAN KEHUTANAN

BALAI PENELITIAN TEKNOLOGI PERBENIHAN TANAMAN HUTANJl. Pakuan Ciheuleut, PO Box 105 BOGOR 16001

Telp/Fax : 0251 8327768 E mail : [email protected]

BOGOR 2014

PEDOMAN UJICEPAT

VIABILITAS BENIH TANAMAN HUTAN(Acacia mangium, Gmelina arborea,

Paraserianthes falcataria, Pinus merkusii,

Swietenia macrophylla)

Oleh :

Muhammad Zanzibar

Nanang Herdiana

Insan Novita

Enok Rohani K

Adang Muharam

Endang Ismiati

Hasan Royani

Achmad Suprayogi

BUKU 1

KEMENTERIAN KEHUTANAN

BADAN PENELITIAN DAN PENGEMBANGAN KEHUTANAN

BALAI PENELITIAN TEKNOLOGI PERBENIHAN TANAMAN HUTANJl. Pakuan Ciheuleut, PO Box 105 BOGOR 16001

Telp/Fax : 0251 8327768 E mail : [email protected]

BOGOR 2014

KATA PENGANTAR

Kegiatan pengujian benih merupakan hal yang penting dalam produksi semai

dan pemasaran bibit. Standardisasi metode pengujian dan mutu benih yang

telah dihasilkan oleh Balai Litbang Teknologi Perbenihan sebelumnya memuat

uji perkecambahan (langsung). Sehingga untuk penyempurnaannya perlu

dilengkapi dengan teknologi uji cepat viabilitas, agar para pengguna memiliki

alternatif lain dalam melakukan pengujian benih.

Buku ini berisi standar prosedur uji cepat viabilitas benih berdasarkan uji tetra-

zolium topografis, uji hidrogen peroksida, uji eksisi embrio dan uji belah untuk

5 jenis benih tanaman hutan ( , ,

, dan ) serta

kunci interpretasi benih hidup dan benih mati berdasarkan uji cepat yang

digunakan.

Diharapkan informasi ini dapat membantu dan mempermudah para peneliti,

akademisi dan laboran dalam melakukan aktivitas pengujian benih, serta

pengguna lainnya dalam rangka memperoleh kepastian informasi kualitas benih

dengan cepat.

Ucapan terima kasih disampaikan kepada semua pihak yang telah membantu,

baik tenaga maupun pikirannya sehingga buku ini dapat tersusun.

Bogor, September 2003

Kepala Balai Litbang Teknologi Perbenihan

Acacia mangium Gmelina arborea

Paraserianthes falcataria Pinus merkusii Swietenia macrophylla

Ir. Darmawan Budiantho, MP

NIP. 080052517

i

KATA PENGANTAR CETAKAN KEDUA

Dalam rangka penyebarluasan hasil penelitian dalam bentuk yang lebih praktis,Balai Penelitian Teknologi Perbenihan Tanaman Hutan (BPTPTH) telah menerbitkanbuku Pedoman Uji Cepat Viabilitas Benih Tanaman Hutan yang memuat informasitentang standar prosedur uji cepat viabilitas benih berdasarkan Uji TetrazoliumTopografis; Uji Hidrogen Peroksida; Uji Eksisi Embrio dan Uji Belah untuk 5 jenisbenih tanaman hutan, serta kunci interpretasi benih hidup dan benih matiberdasarkan uji cepat yang digunakan

Teknologi uji cepat viabilitas benih merupakan alternatif lain dalam melakukanpengujian benih. Informasi tersebut dikemas dalam bentuk praktis, lengkap,informatif dan mudah diaplikasikan untuk mengetahui kualitas benih secara cepat.

Buku Pedoman Uji Cepat Viabilitas Benih Tanaman Hutan memperoleh respon yangpositif dari: instansi pemerintah; swasta; maupun masyarakat umum. Berkaitandengan hal tersebut mengakibatkan banyaknya permintaan terhadap buku ini.BPTPTH secara bertahap melakukan pencetakan ulang buku Pedoman Uji CepatViabilitas Benih Tanaman Hutan, yang didalam buku cetakan ke dua tersebut telahdilakukan penyempurnaan antara lain nama Balai Litbang Teknologi Perbenihandiubah menjadi Balai Penelitian Teknologi Perbenihan Tanaman Hutan; perbaikanredaksional sebagaimana tercantum pada ralat cetakan sebelumnya; sertapenyempurnaan lainnya.

Ucapan terimakasih disampaikan kepada semua pihak yang telah berperan dalampenyusunan Buku Pedoman Uji Cepat Viabilitas Benih Tanaman Hutan cetakan kedua ini, sehingga buku ini dapat disusun dan dicetak ulang kembali.

Semoga buku ini bermanfaat

.

.

Bogor, Desember 2014Kepala Balai,

iii

DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR ........................................................................ i

KATA PENGANTAR CETAKAN KEDUA ................................................ iii

DAFTAR ISI ................................................................................ v

DAFTAR TABEL ............................................................................ ix

DAFTAR GAMBAR ......................................................................... xi

DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................... xiii

I. PENDAHULUAN ................................................................... 1

1.1. Mutu Benih ................................................................ 1

1.2. Viabilitas ................................................................... 1

1.3. Pengujian Viabilitas .................................................... 1

1.4. Uji Cepat Viabilitas ..................................................... 2

1.5. Standardisasi Uji Cepat Viabilitas ................................. 2

II. METODE UJI CEPAT VIABILITAS ............................................. 5

2.1. Uji Tetrazolium Topografis ............................................ 5

2.2. Uji Hidrogen Peroksida................................................. 6

2.3. Uji Eksisi Embrio ......................................................... 6

2.4. Uji Belah.................................................................... 7

III. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS ......................... 9

3.1. Umum....................................................................... 9


3.2.1. Standardisasi Prosedur..................................... 9

3.2.2. Kunci Interpretasi............................................ 11


3.3.1. Standardisasi Prosedur ..................................... 12

3.3.2. Kunci Interpretasi ............................................ 13




3.5. Uji Belah.................................................................... 15



Acacia mangium

v

IV. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS ........................... 19

4.1. Umum....................................................................... 19










4.5. Uji Belah.................................................................... 25



V. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS .............. 29

5.1. Umum....................................................................... 29










5.5. Uji Belah.................................................................... 36



VI. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS ............................ 39

6.1. Umum....................................................................... 39










6.5. Uji Belah.................................................................... 44



Gmelia arborea

Paraserianthes falcataria

Pinus merkusii

vi

VII. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS ................. 49

7.1. Umum....................................................................... 49










7.5. Uji Belah.................................................................... 55



DAFTAR PUSTAKA ........................................................................ 59

LAMPIRAN ................................................................................ 61

Swietenia mecrophylla

vii

DAFTAR TABEL

No. Teks Hal.

1. Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih ........ 11

2. Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih ..... 15

3. Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih ................ 16

4. Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih .......... 22

5. Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih ....... 25

6. Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih ..................

7. Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih ........ 32

8 Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih ...... 35

9. Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih ................

10. Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih .......... 41

11. Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih ........ 44

12. Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih ................... 46

13. Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih ..... 51

14. Kunci Interpretasi Hasil Uji Eksisi untuk Benih .... 55

15. Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih ............. 56

A. mangium

A. mangium

A. mangium

G. arborea

G. arborea

G. arborea 27

P. falcataria

P. falcataria

P. falcataria 37

P. merkusii

P. merkusii

P. merkusii

S. macrophylla

S. macrophylla

S. macrophylla

ix

DAFTAR GAMBAR

No. Teks Hal.

1. Sketsa Struktur Benih .......................................... 9

2. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih

.......................................................................... 11

3. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazolium untuk

Benih 17

4. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida

untuk Benih ........................................................ 17

5. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Eksisi Embrio untuk

Benih ................................................................. 17

6. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk

Benih ................................................................. 17

7. Sketsa Struktur Benih ............................................ 19


........................................................................... 22


Benih .................................................................. 28


untuk Benih ......................................................... 28


Benih .................................................................. 28

12. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih

............................................................................ 28

13. Sketsa Struktur Benih .......................................... 29


......................................................................... 32


Benih .................................................................. 38

A. manglum

A. mangium

A. mangium ................................................................

A. mangium

A. mangium

A. mangium

G. arborea

G. arborea

G. arborea

G. arborea

G. orborea

G. arborea

P. falcataria

P. falcataria

P. falcataria

xi


untuk Benih ........................................................ 38


Benih ................................................................. 38

18. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih

......................................................................... 38

19. Sketsa Struktur Benih ........................................... 35


.......................................................................... 41

21. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazolium

untuk ......................................................... 47


untuk Benih ......................................................... 47


Benih .................................................................. 47


25. Sketsa Struktur Benih ...................................... 49


..................................................................... 51


Benih ............................................................ 57


untuk Benih .................................................... 57


Benih ............................................................. 57


Benih ............................................................. 57

P. falcataria

P. falcataria

P. falcataria

P. merkusii

P. merkusii

merkusii

merkusii

macrophylla

macrophylla

S. macrophyila

macrophylla

macrophylla

S. macrophylla

Benih

Benih ................................................................... 47

P.

P.

merkusii

merkusii

P.

P.

S.

S.

S.

S.

xii

DAFTAR LAMPIRAN

No. Teks Hal.

1.

.................................... 61

5.

Bahan dan Alat yang Digunakan untuk Uji Cepat Viabilitas Benih

(a). Uji Tetrazolium, (b). Uji Hidrogen Peroksida,

(c). Uji Eksisi Embrio dan (e). Uji Belah

2. Prosedur Pengambilan Contoh Benih untuk Pengujian ................ 62

3. Cara Pembuatan Larutan Tetrazolium ...................................... 63

4. Cara Pembuatan Larutan Hidrogen Peroksida ............................ 64

Glosari ................................................................................ 65

xiii

I. PENDAHULUAN

1.1. Mutu Benih

Keberhasilan penanaman terutama dalam skala yang besar sangat dipengaruhi

oleh interaksi antara faktor-faktor biotik, klimatik, edafik, teknik maupun

manajemen. Secara tidak langsung faktor teknik seringkali dinyatakan sebagai

penyebab utama kegagalan, misalnya karena rendahnya mutu benih. Untuk

membedakan suatu benih bermutu atau tidak, secara visual sangat sulit. Apabila

benih ditanam tanpa melalui proses pengujian mutu, maka perbedaan baru

akan terlihat setelah benih tumbuh di lapangan atau setelah tanaman

berproduksi, sehingga konsumen benih akan dirugikan karena kehilangan waktu,

biaya dan kemungkinan harus melakukan penanaman ulang (Sadjad, 1980).

Informasi yang diperoleh dari pengujian benih akan bermanfaat bagi produsen,

penjual maupun konsumen benih, karena mendapat keterangan yang dapat

dipercaya tentang mutu atau kualitas dari suatu benih. Pengujian benih adalah

penilaian secara objektif tentang mutu benih yang diproduksi atau diedarkan.

Pengujian benih terdiri dari: pengujian karakteristik fisik benih dan pengujian

karakteristik biologis benih. Pengujian karakteristik benih meliputi : Kemurnian

benih, kadar air benih dan berat 1000 butir. Sedangkan karakteristik biologis

benih meliputi: pendugaan viabilitas dan vigor benih. Secara garis besar

pengujian kualitas suatu kelompok benih dapat dilakukan berdasarkan metode

indikasi viabilitas benih.

Viabilitas benih merupakan refleksi dari mutu benih, yang dapat didefinisikansebagai daya hidup benih yang ditunjukkan oleh fenomena pertumbuhan benihatau gejala metabolismenya dan dapat pula ditunjukkan oleh keadaan organelsitoplasma atau kromosom. Sementara Gordon (1992), menyatakan bahwaviabilitas adalah kemampuan yang dimiliki oleh benih untuk berkecambah,sedangkan perkecambahan adalah keberhasilan proses di dalam benih untukmenghasilkan semai yang baik di persemaian.

Viabilitas benih dapat dideteksi melalui beberapa pendekatan, pendekatan yangpaling lazim dilakukan adalam melalui pendekatan fisiologis. Metode pendekatanfisiologis ini dibagi menjadi metode langsung dan tidak langsung. Metodelangsung yaitu apabila pengamatan dilakukan pada setiap individu benih,sedangkan metode tidak langsung jika deteksi viabilitas tersebut dilakukanterhadap sejumlah benih sekaligus. Deteksi viabilitas benih dari gejalapertumbuhannya disebut penilaian dengan indikasi langsung, sedangkanpenilaian viabilitas benih dari gejala metabolisme, bentuk fisik yang kesemuanyatanpa memperlihatkan gejala pertumbuhan disebut pendekatan dengan indikasitidak langsung.

Pada pengujian viabilitas benih dengan menggunakan indikator pertumbuhankecambahnya sering disebut dengan indikasi langsung, di mana yang dinilai

1.2. Viabilitas

1.3. Pengujian Viabilitas

1

adalah kenormalan pertumbuhan kecambah dan dilakukan dalam jangka waktutertentu. Sedangkan metode pengujian yang didasarkan pada prosesmetabolisme benih yang merupakan indikasi tak langsung atau sering disebutjuga dengan uji cepat.

Pendugaan potensial perkecambahan dari suatu kelompok benih denganmengecambahkannya langsung merupakan suatu metode yang hampir relevandalam praktek bidang kehutanan. Tetapi pengujian tersebut akan membutuhkanwaktu yang lama, seperti yang diungkapkan oleh Zanzibar (1996), bahwapelaksanaan pengujian viabilitas benih dengan menggunakan indikator gejalapertumbuhan kecambah biasanya memerlukan waktu yang relatif lama. Untukjenis pohon hutan, waktu yang diperlukan berkisar antara 7- 30 hari tergantungpada jenis benihnya. Dalam beberapa keadaan, jenis-jenis tertentu secaranormal akan berkecambah secara lambat atau menunjukan gejala dormansisehingga informasi mengenai viabilitas benih tidak dapat segera diperoleh.Keadaan ini akan berpengaruh terhadap benih yang diuji dan keputusan tentangpengadaan benih untuk keperluan yang bersangkutan misalnya untukpenanaman. Sehingga diperlukan metode pengujian viabilitas benih yang dapatmenduga secara akurat namun lebih cepat dari pada pengujian perkecambahansecara langsung. Dalam hal ini maka dikembangkan uji cepat viabilitas benih.

Tujuan dari uji cepat viabilitas benih menurut Manan (1976) dan Willan (1985),adalah:

(a). Untuk menentukan secara cepat viabilitas benih suatu spesies yangberkecambah normal secara lambat atau menunjukkan dormansi di bawahperkecambahan normal.

(b). Untuk menentukan viabilitas dari suatu sampel yang pada akhir ujiperkecambahan menyatakan suatu persentase yang tinggi dari yang tidakberkecambah (hard seed).

Beberapa metode uji cepat yang dapat digunakan dalam menduga viabilitasbenih, antara lain: uji belah (cutting test), uji tetrazolium, uji hidrogen peroksida,metode radiografi, uji eksisi embrio, uji daya hantar listrik dan uji indigo car-mine.

Penilaian secara objektif dapat dilaksanakan dengan baik dalam melakukanuji cepat viabilitas bila ditetapkan adanya pembakuan dalam segala segi, mulaidari benih yang diuji, metode pengujian, alat pengujian, skill atau keahliantenaga penguji sampai dengan parameter yang digunakan untuk menilai hasilpengujian tersebut.

Standarisasi uji cepat viabilitas benih tanaman hutan mencakup standarprosedur pengujuan dan kunci interpretasi. Pedoman standarisasi uji cepatviabilitas ini diharapkan dapat membantu mempermudah aktivitas berbagaipihak yang berkepentingan dalam pengujian benih. Dengan adanya pedoman

1.4. Uji Cepat Viabilitas

1.5. Standardisasi Uji Cepat Viabilitas

2

standar ini maka hasil pengujian lot benih akan seragam jika dikerjakan olehpihak lain, informasi data hasil pengujian diharapkan mempunyai keakuratanyang cukup baik dan dapat digunakan sebagai acuan dalam rangka penerapanaspek legalitas perbenihan.

Metode uji cepat viabilitas benih tanaman hutan yang terdapat dalam pedomanini meliputi : (1). Uji Tetrazolium Topografis (Tetrazolium Topography Test),(2). Uji Hidrogen Peroksida (Hidrogen Peroxida Test), (3). Uji Eksisi Embrio(Exicion Embryo Test) dan (4). Uji Belah (Cutting Test). Sedangkan jenisbenih tanaman hutan yang diuji meliputi : (1). Akasia ( ),

(2). Gmelina ( ), (3). Sengon ( ),

(4). Pinus ( ) dan (5). Mahoni ( ).

Acacia mangium

Gmelina arborea Paraserianthes falcataria

Pinus merkusii Swietenia macrophylla .

3

II. METODE UJI CEPAT VIABILITAS

2.1. Uji Tetrazolium Topografis

Metode ini merupakan salah satu dari sejumlah metode uji secara biokimiayang telah dikembangkan dan merupakan teknik pengujian yang cukup tepatuntuk menduga viabilitas benih. Dengan mengunakan metode ini, dalam waktukurang lebih 24 jam viabilitas dari suatu kelompok benih telah dapat diduga.Walaupun metode uji tetrazolium telah dinyatakan oleh ISTA sebagai metoderesmi untuk beberapa jenis kayu daun lebar dan konifer pada tahun 1976,tetapi sampai saat ini metode dan standar pengujian dengan cara tetrazoliumuntuk benih tanaman hutan masih sangat sedikit yang telah dibakukan dalamperaturan pengujian internasional/ISTA.

Metode uji tetrazolium menggunakan prinsip bahwa setiap sel hidup akanberwarna merah oleh reduksi dari suatu pewarnaan garam tetrazolium danmembentuk endapan formazan merah sedangkan sel-sel yang mati menunjukanwarna putih. Dengan merendamnya terlebih dahulu selama semalam, kemudiandibelah dan direndan dalam larutan garam selama beberapa jam, telah dapatmenunjukan reaksi yang jelas dan dapat membedakan antara sel yang masihhidup dengan yang sudah mati.

Reaksi tesebut diringkas sebagai berikut:

2, 3, 5 trifenil tetrazolium chlorida 2, 3, 5 trifenil formazan

Enzim yang mendorong terjadinya proses ini adalah dehidrogenase dan kegiatanini berkaitan dengan respirasi. Faktor-faktor yang mempengaruhi reaksi tetra-zolium menurut Byrd (1983) adalah suhu, pH larutan, perlakuan terhadapbenih, konsentrasi larutan dan tekanan udara tempat pengujian dilakukan.

Menurut Sutopo (1998), beberapa kelebihan dan kekurangan uji tetrazolium antaralain:

N N – C H6 5–

C H6 5 C–

N N – C H6 5–

Cl

N = N – C H6 5

N N – C H6 5–

C H – C6 5 H lC+

+ 2H+

5

(a). Jika diperlukan keterangan segera tentang viabilitas dari suatu kelompokbenih tertentu, maka uji tetrazolium akan dapat memberikan keteranganlebih cepat dibanding uji perkecambahan secara langsung. Tetapi untukpelaksanaan uji tetrazolium diperlukan waktu yang lebih lama dari pada ujiPerkecambahan secara langsung.

(b). Untuk benih-benih yang sangat dominan atau yang lambat berkecambahlebih menguntungkan bila menggunakan uji tetrazolium.

(C). Kadangkala suatu kelompok benih gagal berkecemabah atau mungkinberkecambah lebih lambat dari biasanya disebabkan oleh tipe dormansi afterripening. Untuk menentukan viabilitas benih tersebut secara cepat makadapat digunakan uji tetrazolium.

(d). Efek phytotoxic dari fungisida, insektisida atau fumigasi dengan metylbromide yang telah diperlakukan pada benih tidak dapat diketahui denganuji tetrazolium.

(e). Uji tetrazolium tidak selalu dapat memberikan keterangan tentangkerusakan pada benih yang disebabkan oleh proses pengeringa .

(f). Uji tetrazolium memerlukan lebih banyak kecakapan dan keputusan daripada yang biasa diperlukan dalam uji perkecambahan secara langsung.Seringkali diperlukan beberapa kali pembesaran untuk dapat mempelajaridengan seksama pola noda dan lokasi daerah nekrotik yang tidak ternoda.

Hidrogen peroksida (HZOZ) merupakan suatu larutan yang dapat merangsangperkecambahan benih, sehingga dapat digunakan untuk uji perkecambahanterhadap beberapa benih jenis konifer di Amerika Barat (Willan, 1985). MenurutLeadem (1984), metode pengujian benih dengan menggunakan hidrogenperoksida merupakan satu-satunya uji cepat viabilitas benih yang dapatmerangsang perkecambahan benih dan dapat digunakan untuk mempercepatperkecambahan. Namun uji ini memerlukan waktu selama satu minggu penuh danpengujiannya agak sulit untuk benih-benih yang berukuran kecil.

Keuntungan penggunaan metode hidrogen peroksida sebagai uji cepat viabilitasbenih antara lain: tidak mahal dan alat-alat yang dibutuhkan cukup sederhana,bersifat objektif dan sederhana dalam penyiapannya. Sedangkan kekurangandari metode pengujian ini antara lain: tidak praktis untuk benih yang berukurankecil, pengujiannya bersifat merusak dan relatif lambat (memerlukan waktu7 – 8 hari sampai memberikan hasil pengujian yang memuaskan).

Merupakan uji viabilitas benih yang mempunyai nilai yang khusus karenadigunakan terutama untuk mendeterminasi viabilitas benih yang bisanyaberkecambah lambat atau memperlihatkan dormansi karena kulit benih dan/atau embrio. Viabilitas benih tersebut dapat dideterminasi secara cepat 5 – 14hari melalui pengamatan terhadap perilaku embrio dalam kondisi jaringan setelahpemotongan dan inkubasi selanjutnya. Embrio yang viabel akan memperlihatkanwarna hijau, tumbuh atau tetap segar sementara embrio yang non viabel akanrusak. Meskipun uji ini bersifat labour intensif dan memerlukan keterampilan

n

2.2. Uji Hidrogen Peroksida

2.3. Uji Eksisi Embrio

6

serta kesabaran dalam memotong embrio benih secara utuh, tapi merupakanalternatif yang dapat diterima untuk uji viabilitas benih, terutama untuk benih-benih yang memerlukan waktu yang lama jika diuji dengan metode pengujian yangumum, biasanya mencapai 60 hari.

Menurut Bonner (1994), keuntungan penggunaan metode eksisi embriosebagai uji cepat viabilitas benih antara lain: peralatan yang dibutuhkan untukpengujian cukup sederhana, yang diuji merupakan kondisi benih sebenarnyadan mudah untuk dievaluasi. Sedangkan kekurangan dari metode ini antaralain: bersifat labour intensive dan memerlukan waktu yang panjang dalammempersiapkan benih sebelum diuji, pengujiannya bersifat merusak dan relatiflambat (memerlukan waktu 10 - 14 hari sampai memberikan hasil pengujian yangmemuaskan).

Uji belah (cutting test) merupakan suatu metode uji cepat yang biasanyadigunakan untuk menguji viabilitas benih dalam jumlah yang banyak. Uji inidapat digunakan di lapangan untuk memperkirakan benih yang telah masakatau kualitas kumpulan benih (seed lot) dalam kegiatan pengumpulan benih.

Metode ini merupakan salah satu metode pengujian viabilitas benih yang palingsederhana, yang dilakukan dengan cara melihat secara langsung dengan mataterhadap benih yang telah dibelah dengan pisau atau skapel. Jika endospermnyamempunyai warna normal dengan embrio yang baik, maka benih tersebutmempunyai kemungkinan untuk berkecambah, sehingga pengujian ini bersifatsangat subjektif. Dengan hanya melihat penampilannya secara langsung, benihtersebut seperti hidup padahal kalau dikecambahkan mungkin tidak akanberkecambah. Sehingga hasil dari pengujian ini akan memberikan nilaiperkecambahan yang lebih besar dibanding keadaan sebenarnya.

Menurut Boner ( 1994), keuntungan uji cepat viabilitas benih denganmetode belah antara lain: merupakan metode uji viabilitas benih yang cepatdan murah, dapat digunakan di lapangan untuk memeriksa kualitas benih yangdikumpulkan pada saat pemanenan dan hasil pengujian cukup akurat untukbenih-benih yang masih segar. Sedangkan kekurangan dari metode pengujianini antara lain: sulit dilakukan untuk benih-benih yang berukuran kecil,memberikan hasil pengujian yang tidak tepat untuk benih-benih yang telahmengalami penyimpanan dan merupakan uji yang merusak.

et al.

et al.

2.4. Uji Belah

7

Benih memiliki kulit benih yang keras dan sulit ditembus air. Bilabenih tersebut dikecambahkan secara konvensional dengan metode uji di ataskertas (UDK) maupun di rumah kaca diperlukan waktu lebih kurang 21 hari.

, termasuk kedalam famili Leguminosae, umumnya memiliki 3 bagiandasar benih yaitu embrio, jaringan penyimpan cadangan makanan dan pelindungbiji. Jaringan penyimpan cadangan makanan berupa kotiledon, sedangkanembrio terdiri dari radikel dan plumula. Pengamatan terhadap benih yangakan diuji dengan menggunakan metode uji cepat viabilitas difokuskan padastruktur tumbuh benihnya berupa radikel, plumula dan kotiledon (Gambar 1).

Gambar 1. Sketsa Struktur Benih

3.2.1.1. Bahan dan Alat

Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, garam tetrazolium (2,3,5,–triphenil tetrazolium chlorida), Na HPO .2H O, KH PO , etanol 70%, kertasmerang dan aluminium foil.

Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinsetsilet, oven, alat pengaduk, saringan, semprotan tangan, timbangan dan alatpembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji tetrazoliumdapat dilihat pada Lampiran 1.

3.2.1.2. Pengambilan Contoh Benih

Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benar-benar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedurpengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian,Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnyadisajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian iniadalah 4 x 100 butir benih.

III. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Acacia mangium

3.1. UMUM

3.2. UJI TETRAZOLIUM TOPOGRAFIS

3.2.1. Standardisasi Prosedur

A. mangium

A. mangium

A. mangium

2 2 2 2 4

9

3.2.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat

Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, saringan,kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °Cselama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakansemprotan tangan.

3.2.1.4. Pembuatan Larutan Tetrazolium

Cara pembuatan larutan tetrazolium disajikan pada Lampiran 3.

3.2.1.5. Pengkondisian, Perendaman dan Pengujian

Pengkondisian, perendaman dalam larutan tetrazolium dan pengujian dilakukandengan cara sebagai berikut :

(1) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengangunting kuku. Pada saat melubangi kulit, jangan sampai terkena kotiledon,karena akan mempengaruhi pola pewarnaan yang terbentuk.

(2) Rendam benih tersebut dalam aquades selama 24 jam di dalam gelas piala.

(3) Kupas kulit dan belah benih menjadi keping benih dengan silet,Pengupasan dan pembelahan benih harus dilakukan secara hati-hati,jangan sampai terjadi cacat. Pada saat membelah, kondisi radikel,plumula, dan kotiledon harus terbagi dua.

(4) Rendam salah satu keping benih dalam larutan tetrazolium 1% yangditempatkan dalam gelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnyadengan aluminium foil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih).

(5) Masukkan gelas piala tersebut ke dalam oven dengan suhu 40 °C selama2 jam.

(6) Tempatkan benih dalam saringan, lalu bilas dengan aquades selama 30 -60 detik.

(7) Tempatkan benih pada cawan petri yang beriz)i 2 lembar kertas meranglembab untuk dianalisis pola pewarnaan yang terbentuk pada radikel,plumula dan kotiledon.

(8) Amati intensitas dan luas pewarnaan yang terbentuk. Intensitaspewarnaan dibagi menjadi warna merah (M), merah muda (Mm) danputih (P), sedangkan penghitungan luas pewarnaan (%) dilakukan denganmembandingkan masing-masing warna yang terbentuk terhadap luaskeseluruhan permukaan bagian dalam keping benih. Pola pewarnaanyang terbentuk dicocokkan dengan kunci interpretasi.

10

3.2.2. Kunci Interpretasi

Viabilitas benih yang diuji dapat diketahui dengan melihatpersentase pola pewarnaan yang terbentuk dan mencocokkannya dengan kunciinterpretasi pada Tabel 1 dan Gambar 2, sedangkan contoh benih viabel dannon viabel hasil uji tetrazolium dapat dilihat pada Gambar 3.

Tabel 1. Kunci Interpretasi Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih

A. mangium

A. mangium

Gambar 2. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih A. mangium

11

Berdasarkan Tabel 1 dan Gambar 2, secara umum kunci interpretasi uji tetra-zolium untuk benih adalah sebagai berikut:

(1). Benih viabel :

a. Radikel dan plumula berwarna merah sampai merah muda tanpa putih.

b. Kotiledon berwarna merah sampai 50 % putih (terletak jauh di atas/tidak di sekitar poros embrio) dan memiliki 3 50% merah.

(2). Benih non viabel :

a. Terdapat warna putih pada radikel dan plumula.

b. Pada kotiledon terdapat > 50 % putih dengan warna merah < 50 %merah.


Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, larutan hidrogen peroksida,benomil, etanol 70%, kertas merang dan aluminium foil. Alat-alat yang digunakanadalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, penggaris, oven, alatpengaduk, inkubator dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yangdigunakan untuk uji hidrogen peroksida dapat dilihat pada Lampiran 1.


Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benar-benar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedurpengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi PengujianMutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnyadisajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian iniadalah 4 x 100 butir benih.


3.3.1.3.1. Sterilisasi dengan Oven/Etanol

Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, alat pengaduk, kertas merangdan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam.Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secaramerata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotantangan.

3.3.1.3.2. Sterilisasi dengan Benomil

Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam benomilselama 1 jam, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji.

3.3.1.4. Pembuatan Larutan Hidrogen Peroksida

Cara pembuatan larutan hidrogen peroksida disajikan pada Lampiran 4.

A. mangium

3.3. UJI HIDROGEN PEROKSIDA


12


Pengkondisian, perendaman dalam larutan hidrogen peroksida dan pengujiandilakukan dengan cara sebagai berikut :

(1) Sterilkan benih dengan benomil (lihat 3.3.1.3.2.).

(2) Potong ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan guntingkuku.

(3) Rendam benih tersebut dalam larutan H O 0,5% (volume larutan H O= 3 x volume benih) dalam gelas piala yang ditutup dengan aluminiumfoil.

(4) Masukkan gelas piala tersebut ke dalam inkubator atau ruangan gelappada suhu 20 - 30 °C. Pengujian dilakukan selama 7 hari.

(5) Ganti larutan HZOz dengan larutan HzOz yang baru pada hari ke-1 danke-4.

(6) Bilas benih dengan aquades, kemudian tempatkan benih tersebut dalamcawan petri yang berisi 2 lembar kertas merang lembab.

(7) Ukur panjang radikel yang muncul dengan penggaris, kemudian hasilpengukuran tersebut dicocokkan dengan kunci interpretasi.

Kunci interpretasi untuk benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksidadidasarkan pada panjang radikel yang muncul pada akhir periode pengamatan.Benih viabel memiliki panjang radikel 0,5 mm, sedangkan benih non viabelmemiliki panjang radikel < 0,5 mm atau tidak terjadi pemunculan radikel. Contohbenih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida dapat dilihat padaGambar 4.


Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, benomil, etanol 70% dan kertassaring. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, guntingkuku, pinset, silet, lup, semprotan tangan, oven, inkubator, laminar flow danalat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji eksisiembrio dapat dilihat pada Lampiran 1.



A. mangium

2 2 2 2


3.4. UJI EKSISI EMBRIO


>

13



Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas saring dipanaskandalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukandengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alattersebut dengan menggunakan semprotan tangan.

3.4.1.3.2. Sterilisasi dengan Benomil

Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam benomilselama 1 jam, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji.

3.4.1.4. Pengkondisian, Pemotongan Embrio dan Pengujian

Pengkondisian, pemotongan embrio dan pengujian dilakukan dengan carasebagai berikut :

(1) Sterilkan benih dengan benomil (lihat 3.4.1.3.2.).

(2) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengangunting kuku.

(3) Rendam benih tersebut dalam aquades selama 24 jam dengan suhuperendaman 25 °C.

(4) Ganti air perendam 2 x sehari guna mencegah terakumulasinya eksudatyang dikeluarkan oleh benih.

(5) Belah benih dan keluarkan embrionya dengan menggunakan silet. Ketikamembelah, kondisi plumula dan radikel harus utuh (tidak boleh ikutterbelah atau cacat). Untuk menjamin kondisi aseptik selama kegiatanpemotongan, lakukan kegiatan di dalam laminar flow atau di tempatyang steril. Peralatan yang digunakan harus selalu dalam keadaan steril.

(6) Letakkan embrio pada cawan petri yang berisi media berupa 2 lembarkertas saring lembab.

(7) Masukkan cawan petri tersebut ke dalam inkubator atau ruang kamarpada suhu konstan (20 - 25 °C) selama 5 hari dengan periode pencahayaanminimal 8 jam per hari.

(8) Amati setiap hari kondisi embrio dan buang embrio yang busuk danberjamur. Apabila media mulai kering, semprotkan aquades secukupnya.

(9) Kondisi radikel dan plumula yang diperoleh pada akhir pengamatan,dicocokkan dengan kunci interpretasi.

Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benih dapatdilihat pada Tabel 2, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabel hasil ujieksisi embrio dapat dilihat pada Gambar 5.

A. mangium

A. mangium


14

Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70% dan kertas merang.Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset,silet, semprotan tangan, lup, oven dan alat pembagi benih. Gambar bahandan alat yang digunakan untuk uji belah dapat dilihat pada Lampiran 1.

Tabel 2. Kunci Interpretasi Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih A. mangium


Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70% dan kertas merang.Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset,silet, semprotan tangan, lup, oven dan alat pembagi benih. Gambar bahandan alat yang digunakan untuk uji belah dapat dilihat pada Lampiran 1.




Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas merangdipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapatjuga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruhbagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.

3.5.1.4. Pengkondisian, Pembelahan dan Pengujian Benih

Pengkondisian, pembelahan dan pengujian benih dilakukan dengan cara sebagaiberikut :

(1) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan dengan arah radikel) dengangunting kuku.

(2) Rendam benih tersebut dalam aquades selama 24 jam dalam gelas piala.

(3) Kupas kulit benih an belah benih searah keping (memanjang) denganmenggunakan silet. Radikel, plumula dan kotiledon harus terbagi dua.

3.5. UJI BELAH


d

15

(4) Amati warna dan penampakan radikel, plumula dan kotiledon denganmata telanjang atau menggunakan kaca pembesar (lup), sehingga dapatditentukan benih tersebut viabel atau non viabel, sesuai dengan kunciinterpretasi.

Kunci interpretasi hasil uji belah untuk benih dapat dilihat padaTabel 3, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji belah dapatdilihat pada Gambar 6.


A. mangium

Tabel 3. Kunci Interpretasi Hasil Uji Belah untuk Benih A. mangium

16

Gam

bar3.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Te

tra

zo

liu

mu

ntu

kBenih

A.m

angiu

m

Gam

bar4.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Hid

rogen

Pero

ksid

auntu

kBenih

A.m

angiu

m

Gam

bar5.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Eksis

iEm

bri

ountu

kBenih

A.m

angiu

m

Gam

bar6.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Bela

hu

ntu

kB

en

ihA.m

angiu

m

17

IV. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS

4.1. UMUM



Gmelina arborea

G. arborea

G. arborea

G. arborea

G. arborea

G. arborea

G. arborea

yang dikenal dengan jati putih, termasuk ke dalam familiVerbenaceae. Jenis ini merupakan salah satu jenis komersil yang banyak ditanamdalam program pembangunan HTI meskipun jenis ini termasuk jenis pohonasing (exotic). Untuk mengetahui viabilitas benih secara konvensionaldengan mengecambahkannya di persemaian pada media campuran tanah danpasir (1 : 1) memerlukan waktu lebih kurang 30 hari.

Buah termasuk buah basah, panjangnya sekitar 20 - 35 mm danmengkilap, pericarp keras dan beraroma manis, mempunyai mesocarp yanglunak (pulpy) dan endocarp keras dengan panjang sekitar 10 - 25 mm. Bijiumumnya terdiri dari empat ruang embrio (poliembrio), terkadang lima embrio.Benih memiliki struktur tumbuh yang terdiri dari extreme tip ofradicle, embryonic axis dan kotiledon. Bagian-bagian benih tersebut akanmenjadi fokus pengamatan pada uji cepat viabilitas. Struktur tumbuh benih

dapat dilihat pada Gambar 7.



Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, garam tetrazolium (2,3,5-triphenilbetrazolium chlorida), Na HPO .2H , KH , etanol 70%, natrium hipoklorit,kertas merang, lembaran plastik dan aluminium foil.

Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, ragum, martil, pinset,silet, oven, alat pengaduk, saringan, semprotan tangan, timbangan dan alatpembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji tetrazoliumdapat dilihat pada Lampiran 1.

2 4 2 2 4O PO

19





Cawan petri, gelas piala, pinset, silet, alat pengaduk, saringan, kertas merangdan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam.Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan cara menyemprotkan etanol 70% secaramerata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.

4.2.1.3.2. Sterilisasi dengan Larutan Natrium Hipoklorit

Benih-benih yang telah dikeluarkan dari endocarp-nya, disterilkan dengan caramerendamnya dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran 1: 5) selama 5menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap diuji.





(1) Keluarkan benih dari endocarpnya dengan menggunakanragum dan martil secara hati-hati. Kondisi benih jangan sampai cacat ataurusak, karena akan mempengaruhi pola pewarnaan yang terbentuk.

(2) Ambil salah satu benih dalam satu endocarp untuk mewakili satu biji.

(3) Sterilkan benih-benih tersebut dengan natrium hipoklorit (lihat 4.2.1.3.2).

(4) Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang lembab selama24 jam. Kertas merang lembab yang berisi benih tersebut dimasukkanke dalam plastik atau cawan petri untuk mencegah penguapan.

(5) Kupas kulit benih dan belah benih menjadi keping benih denganmenggunakan silet. Pengupasan dan pembelahan benih harus dilakukansecara hati-hati, jangan sampai terjadi cacat. Pada saat membelah, kondisiextreme tip of radicle, embryonic axis dan kotiledon harus terbagi dua.

(6) Rendam salah satu keping benih dalam larutan tetrazolium 0,5% yangditempatkan dalam gelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnyadengan aluminium foil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih).

G. arborea

G. arborea

20

(7) Masukkan gelas piala tersebut ke dalam oven dengan suhu 40 °C selama 4jam.

(8) Tempatkan benih dalam saringan, lalu bilas benih dengan aquades selama30 - 60 detik.

(9) Tempatkan benih pada cawan petri yang berisi 2 lembar kertas meranglembab untuk dianalisis pola pewarnaan yang terbentuk pada extremetip of radicle, embryonic axis dan kotiledon.


Viabilitas benih yang diuji dapat diketahui dengan melihat persentasepola pewarnaan yang terbentuk dan mencocokkannya dengan kunci interpretasipada Tabel 4 dan Gambar 8, sedangkan contoh benih viabel dan non viabelhasil uji tetrazolium dapat dilihat pada Gambar 9.


Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, larutan hidrogen peroksida,natrium hipoklorit, etanol 70%, kertas merang dan aluminium foil.

alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, ragum, martil, pinset,penggaris, oven, alat pengaduk, inkubator dan alat pembagi benih. Gambarbahan dan alat yang digunakan untuk uji hidrogen peroksida dapat dilihatpada lampiran 1.





Cawan petri, gelas piala, pinset, alat pengaduk, kertas merang dan aluminium




G. arborea

21

foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapatjuga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruhbagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.


Benih-benih yang akan diuji dan telah dikeluarkan dari endocarp-nya, disterilkandengan cara merendamnya dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran)

Tabel 4. Kunci Interpretasi Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih G. arborea

Gambar 8. Skeksa Pola Penawaran Hasil Uji Tetrazolium pada Benih G. arborea

22

1:5) selama 5 menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untukdiuji.


Cara pembuatan larutan hidrogen peroksida disajikan pada Lampiran


Pengkondisian, perendaman dalam larutan hidrogen peroksida dan pengujiandiakukan dengan cara sebagai berikut :

(1) Keluarkan benih dari endocarp-nya dengan menggunakan ragum danmartil secara hati-hati. Kondisi benih jangan sampai retak atau cacat,karena benih akan cepat terkontaminasi oleh jamur.


(3) Sterilkan benih-benih tersebut dengan natrium hipoklorit (lihat 4.3.1.3.2.).

(4) Rendam benih tersebut dalam larutan H O 2% (volume larutan H O =3xvolume benih) dalam gelas piala yang ditutup dengan aluminium foil.


(6) Ganti larutan H O dengan larutan H O yang baru pada hari ke-1 danke-3.


(8) Ukur panjang radikel yang muncul dengan penggaris, kemudian hasilpengukuran dicocokkan dengan kunci interpretasi.

kunci interpretasi untuk benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksidadidasarkan pada panjang radikel yang muncul pada akhir periode pengamatan.Benih viabel memiliki panjang radikel 2 mm dan atau kotiledon terbuka,sedangkan benih non viabel memiliki panjang radikel < 2 mm atau tidak terjadipemunculan radikel. Contoh benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogenperoksida dapat dilihat pada Gambar 10.


Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, natrium hipoklorit, etanol 70%,

4.

G. arborea

2 2 2 2

2 2 2 2




>

23

kertas saring, kertas merang dan lembaran plastik. Alat-alat yang digunakanadalah cawan petri, gelas piala, ragum, martil, pinset, silet, lup, semprotantangan, oven, inkubator, laminar flow dan alat pembagi benih. Gambar bahandan alat yang digunakan untuk uji eksisi embrio dapat dilihat pada Lampiran 1.





Cawan petri, gelas piala, pinset, silet, kertas saring dan kertas merangdipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapatjuga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruhbagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.


Benih-benih yang akan diuji dan telah dikeluarkan dari endocarp-nya, disterilkandengan cara merendamnya dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran 1 :5) selama 5 menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untukdiuji.


Pengkondisian, pemotongan embrio dan pengujian dilakukan dengan carasebagai berikut:

(1) Keluarkan benih dari endocarp-nya dengan menggunakanragum dan martil secara hati-hati. Kondisi benih jangan sampai retak,cacat atau rusak, karena benih akan mudah terkontaminasi oleh jamur.


(3) Sterilkan benih-benih tersebut dengan natrium hipoklorit (lihat 4.4.1.3.2).

(4) Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang lembab selama24 jam. Kertas merang lembab yang berisi benih tersebut dimasukkanke dalam plastik atau cawan petri agar benih tidak kering/mencegahpenguapan.

(5) Kupas kulit benih dengan silet dan untuk memisahkan extreme tip ofradicle dan embryonic axis dari kotiledonnya, potong bagian kotiledonyang berada di sekitar embryonic axis dengan menggunakan siletmembentuk potongan segitiga. Pengupasan kulit benih dan pemotonganextreme tip of radicle dan embryonic axis harus dilakukan secara hati-

G. arborea

G. arborea

24

hati, kondisi extreme tip of radicle dan embryonic axis harus utuh (tidakboleh terpotong atau cacat). Untuk menjamin kondisi aseptik selamakegiatan pemotongan, lakukan kegiatan di dalam laminar flow di tempatyang steril. Peralatan yang digunakan harus selalu dalam keadaan steril.

(6) Letakkan extreme tip of radicle dan embryonic axis yang telah dipisahkantersebut pada cawan petri yang berisi media berupa 2 lembar kertassaring lembab.


(8) Amati setiap hari kondisi extreme tip of radicle dan embryonic axis danbuang bila busuk dan berjamur. Apabila media mulai kering, semprotkanaquades secukupnya.

(9) Kondisi embryonic axis dan extreme tip of radicle yang diperoleh padaakhir pengamatan, dicocokkan dengan kunci interpretasi.

Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benih dapatpada Tabel 5, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabel hasil ujiembrio dapat dilihat pada Gambar 11.

5. Kunci Interpretasi Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih


Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70%, natrium hipoklorit,kertas merang dan lembaran plastik. Alat-alat yang digunakan adalah cawanpetri, gelas piala, ragum, martil, pinset, silet, lup, semprotan tangan, oven danalat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji belahdapat dilihat pada Lampiran 1.


Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benar-benar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedurpengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian


4.5.UJI BELAH


G. arborea

G. arborea

25

Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnyadisajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian iniadalah 4 x 100 butir benih.



Cawan petri, gelas piala, pinset, silet dan kertas merang dipanaskan dalamoven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan denganmenyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebutdengan menggunakan semprotan tangan.


Benih-benih yang akan diuji dan telah dikeluarkan dari endocarpnya, disterilkandengan cara merendamnya dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran 1 :5) selama 5 menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untukdiuji.

4.5.1.4. Pengkondisian, Pembelahan dan Pengujian Benin


(1) Keluarkan benih dari endocarp-nya dengan menggunakanragum dan martil secara hati-hati. Kondisi benih jangan sampai retak,cacat atau rusak, karena benih akan mudah terkontaminasi oleh jamur.

(2) Ambil salah satu benih dalam satu endocarp untuk mewakili satu biji

.

(3) Sterilkan benih-benih tersebut dengan natrium hipoklorit (lihat 4.5.1.3.2.).

(4) Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang lembab selama24 jam. Kertas merang lembab yang berisi benih tersebut dimasukkanke dalam plastik atau cawan petri agar benih tidak kering/mencegahpenguapan.

(5) Kupas kulit benih dan belah benih searah keping (memanjang) denganmenggunakan silet. Extreme tip of radicle, embryonic axis dan kotiledonharus terbagi dua.

(6) Amati warna dan penampakan extreme tip of radicle, embryonic axisdan kotiledon dengan mata telanjang atau menggunakan kaca pembesar(lup), sehingga dapat ditentukan benih tersebut viabel atau non viabel sesuaidengan kunci interpretasi.


G. arborea

G.

arborea

G. arborea


26

6. Kunci Interpretasi Hasil Uji Belah untuk Benih G. arborea

27

Gam

bar

.Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Te

tra

zo

liu

mu

ntu

kBenih

9

A.arb

ore

a

Gam

bar10.

Benih

Via

bel

(a)

dan

Non

Via

bel

(b)

Hasil

Uji

Hid

rogen

Pero

ksid

auntu

kBenih

A.arb

ore

a

Gam

bar11.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Eksis

iEm

bri

ountu

kBenih

A.arb

ore

a

Gam

bar12.

Benih

Via

bel

(a)

dan

Non

Via

bel

(b)

Hasil

Uji

Bela

huntu

kBenih

A.arb

ore

a

28

29

V. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS

5.1. UMUM



Paraserianthes falcataria

P. falcataria

P. falcataria

P. falcataria

P. Falcataria

yang dikenal dengan nama sengon laut, termasuk ke dalam famili

Leguminosae. Uji viabilitas benih secara konvensional yangdilakukan dengan metode uji di atas kertas (UDK) memerlukan waktu lebihkurang 14 hari.

Seperti benih-benih yang tergolong ke dalam famiii Leguminosae lainnya, benihjuga memiliki 3 bagian dasar benih yaitu embrio, jaringan penyimpan

cadangan makanan an pelindung biji. Pengamatan terhadap benih yangakan diuji dengan menggunakan metode uji cepat viabilitas difokuskan padastruktur tumbuh benihnya berupa radikel, plumula an kotiledon (Gambar 13).



Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, garam tetrazolium (2,3,5–triphenil tetrazolium chlorida), Na HPO .2H , KH P , etanol 70%, kertasmerang, lembaran plastik an aluminium foil.

Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset,silet, oven, alat pengaduk, saringan, semprotan tangan, timbangan dan alatpembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji tetrazoliumdapat dilihat pada Lampiran 1.


Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benar-benar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedurpengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian

d

d

2 4 2 2 4O Od

30

Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnyadisajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian iniadalah 4 x 100 butir benih.


Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, saringan,kertas merang dan alumunium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 Cselama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakansemprotan tangan.




Uji tetrazolium pada benih P. dapat dilakukan dengan dua cara, yaitu1) menggunakan keping benih yang direndam dalam larutan tetrazolium 0,5%selama 2 jam, atau 2) menggunakan benih utuh yang direndam dalam larutantetrazolium 1% selama 3 jam.

5.2.1.5.1. Menggunakan Keping Benih


(1) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengangunting kuku. Pada saat melubangi kulit benih, jangan sampai terkenakotiledon, karena akan mempengaruhi pola pewarnaan yang terbentuk.


(3) Kupas kulit benih dan belah benih menjadi keping benih denganmenggunakan silet. Pengupasan dan pembelahan benih harus dilakukansecara hati-hati, jangan sampai terjadi cacat. Pada saat membelah, kondisiradikel, plumula dan kotiledon harus terbagi dua.

(4) Rendam salah satu keping benih dalam larutan tetrazolium 0,5% yangditempatkan dalam gelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnyadengan aluminium foil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih).



(7) Tempatkan benih pada cawan petri yang berisi 2 lembar kertas meranglembab untuk dianalisis pola pewarnaan yang terbentuk pada radikelplumula dan kotiledon.

O

falcataria

(8) Amati intensitas dan Was pewarnaan yang terbentuk. Intensitaspewarnaan dibagi menjadi warna merah (M), merah muda (Mm) danputih (P), sedangkan penghitungan luas pewarnaan (%) dilakukan denganmembandingkan masing-masing warna yang terbentuk terhadap luaskeseluruhan permukaan bagian dalam keping benih. Pola pewarnaanyang terbentuk dicocokkan dengan kunci interpretasi.

5.2.1.5.2. Menggunakan Benih Utuh


(1) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengangunting kuku. Pada saat melubangi kulit benih, jangan sampai terkenakotiledon, karena akan mempengaruhi pola pewarnaan yang terbentuk.


(3) Kupas kulit benih dengan menggunakan silet. Pengupasan kulit benihharus dilakukan secara hati-hati, jangan sampai terjadi cacat.

(4) Rendam benih tersebut dalam larutan tetrazolium 1% yang ditempatkandalam gelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnya dengan alu-minium foil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih).



(7) Belah benih tersebut menjadi keping benih dengan menggunakan silet.Pada saat membelah, kondisi radikel, plumula dan kotiledon harus terbagidua.

(8) Ambil salah satu keping benih dan tempatkan pada cawan petri yangberisi 2 lembar kertas merang lembab untuk dianalisis pola pewarnaanyang terbentuk pada radikel, plumula dan kotiledon.


Viabilitas benih . yang diuji dapat diketahui dengan melihat persentasepewarnaan yang terbentuk dan mencocokkannya dengan kunci interpretasiPada Tabel 7 dan Gambar 14, sedangkan contoh benih viabel dan non viabelhasil uji tetrazolium dapat dilihat pada Gambar 15.


P falcataria

31


Gambar 14. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih P. falcataria

P. falcataria

32


5.3. 1. Standardisasi Prosedur

5.3. 1.1. Bahan dan Alat




5.3. 1.3.2. Sterilisasi dengan Larutan Natrium Hipoklorit




Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset,penggaris, oven, alat pengaduk, inkubator dan alat pembagi benih. Gambarbahan dan alat yang digunakan untuk uji hidrogen peroksida dapat dilihatLampiran 1.


Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, alat pengaduk, kertas merangdan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam.Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secaramerata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotantangan.

Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam larutannatrium hipoklorit (pengenceran 1 : 5) selama 15 menit, kemudian dibilasdengan aquades dan benih siap untuk diuji.



(1) Sterilkan benih dengan natrium hipoklorit (lihat 5.3.1.3.2.).

(2) Potong ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan guntingkuku.

(3) Rendam benih tersebut dalam larutan H O 0,5% (volume larutan H O= 3 x volume benih) dalam gelas piala yang ditutup dengan aluminiumfoil.


P. falcataria

2 2 2 2

33

(5) Ganti larutan H O dengan larutan H O yang baru pada hari ke-1 danke-4.



Kunci interpretasi untuk benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksidadidasarkan pada panjang radikel yang muncul pada akhir periode pengamatanBenih viabel memiliki panjang radikel 1 mm, sedangkan benih non viabelmemiliki panjang radikel < 1 mm atau tidak terjadi pemunculan radikel. Contohbenih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida dapat dilihat padaGambar 16.


Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, natrium hipoklorit, etanol 70%dan kertas saring. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas pialagunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, lup, semprotan tangan, oven,inkubator, laminar flow dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yangdigunakan untuk uji eksisi embrio dapat dilihat pada Lampiran 1.


Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benar-benar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedurpengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi PengujianMutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (B-FP, 2000), yang selengkapnyadisajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian iniadalah 4 x 100 butir benih.



Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas saring dipanaskandalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukandengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alattersebut dengan menggunakan semprotan tangan.


Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam larutannatrium hipoklorit (pengenceran 1: 5) selama 5 menit, kemudian dibilas denganaquades dan benih siap untuk diuji.

2 2 2 2




>

34




(2) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengangunting kuku.

(3) Rendam benih tersebut dalam aquades selama 24 jam dengan suhuperendaman 25 °C.

(4) Ganti air perendam 2 x sehari guna mencegah terakumulasinya eksudatyang dikeluarkan oleh benih.

(5) Belah benih dan keluarkan embrionya dengan menggunakan silet. Ketikamembelah, kondisi plumula dan radikel harus utuh (tidak boleh ikutterbelah atau cacat). Untuk menjamin kondisi aseptik selama kegiatanpemotongan, lakukan kegiatan di dalam laminar flow atau di tempatyang steril. Peralatan yang digunakan harus selalu dalam keadaan steril.

(6) Letakkan embrio pada cawan petri yang berisi media berupa 2 lembarkertas saring lembab.



(9) Kondisi radikel dan plumula yang diperoleh pada akhir pengamatan,dicocokkan dengan kunci interpretasi.

Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benih dapatpada Tabel 8, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabel hasil uji embrio dapatdilihat pada Gambar 17.

Tabel 8. Kunci Interpretasi Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih

P. falcataria

P. falcataria

P. falcataria


35

5.6. UJI BELAH




Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70% dan kertas merangAlat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset,silet, lup, semprotan tangan, oven dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alatyang digunakan untuk uji belah dapat dilihat pada Lampiran 1.




Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas merangdipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapatjuga dilakukan dengan cara menyemprotkan etanol 70% secara merata keseluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.



(1) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan dengan arah radikel) dengangunting kuku.

(2) Rendam benih tersebut dalam aquades selama 24 jam dalam gelas piala

(3) Kupas kulit benih dan belah benih searah keping (memanjang) denganmenggunakan silet. Radikel, plumula dan kotiledon harus terbagi dua.

(4) Amati warna dan penampakan radikel, plumula dan kotiledon denganmata telanjang atau menggunakan kaca pembesar (lup), sehingga dapatditentukan benih tersebut viabel atau non viabel, sesuai dengan kunciinterpretasi.


P. falcataria

36

Tabel 9. Kunci Interpretasi Hasil Uji Belah untuk Benih P. falcataria

37

Gam

bar15.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Te

tra

zo

liu

mu

ntu

kBenih

P.fa

lcata

ria

Gam

bar16.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Hid

rogen

Pero

ksid

auntu

kBenih

P.fa

lcata

ria

Gam

bar17.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Eksis

iEm

bri

ountu

kBenih

P.fa

lcata

ria

Gam

bar18.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Bela

huntu

kB

enih

P.fa

lcata

ria

38

VI. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS

6.1. UMUM



Pinus merkusii

P. merkusii

P. merkusii

P. merkusii

P.merkusii

yang dikenal dengan nama tusam, termasuk ke dalam familiPinaceae. Uji viabilitas secara konvensional dengan mengecambahkan benih

melalui metode uji di atas kertas (UDK) memerlukan waktu lebihkurang 24 hari.

Fokus pengamatan pada uji cepat viabilitas benih dilakukan terhadapembrio dan endosperma (Gambar 19).



Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, garam tetrazolium (2,3,5–triphenil tetrazolium chlorida), Na HP .2H , KH PO , etanol 70%, kertasmerang, lembaran plastik dan aluminium foil.

Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset,silet, oven, alat pengaduk, saringan, semprotan tangan, timbangan dan alatpembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji tetrazoliumdapat dilihat pada Lampiran 1.


Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benar-benar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedurpengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi PengujianMutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BT-P, 2000), yang selengkapnyadisajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian iniadalah 4 x 100 butir benih.

2 O O4 2 2 4

39


Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, saringan,kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 Cselama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakansemprotan tangan.





(1) Kupas kulit benih dengan cara menggunting ujung kulit benihdengan gunting kuku atau pinset. Pengupasan kulit benih dilakukansecara hati-hati, jangan sampai endosperma cacat atau rusak.

(2) Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang basah selama24 jam. Tebarkan benih pada kertas merang basah, kemudian kertasdigulung dan dimasukkan ke dalam plastik agar benih tidak kering.

(3) Kupas kulit ari yang melekat pada benih dengan pinset. Selama kegiatanpengupasan kulit ari tersebut, benih harus selalu dalam keadaan lembab.

(4) Rendam benih tersebut dalam larutan tetrazolium 0,5% yang ditempatkandalam gelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnya dengan alu-minium foil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih).



(7) Belah benih tersebut dengan menggunakan silet. Pada saat membelah,kondisi embrio (radikel dan kotiledon) dan endosperma harus terbagidua.

(8) Tempatkan benih pada cawan petri yang berisi 2 lembar kertas meranglembab untuk dianalisis pola pewarnaan yang terbentuk pada embrio(radikel dan kotiledon) dan enclosperma.


Viabilitas benih yang diuji dapat diketahui dengan melihat persentasepola pewarnaan yang terbentuk dan mencocokkannya dengan kunci interpretasipada Tabel 10 dan Gambar 20, sedangkan contoh benih viabel dan non viabelhasil uji tetrazolium dapat dilihat pada Gambar 21.

O

P. merkusii

P. merkusii


40




Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, larutan hidrogen peroksida,

Tabel 10. Kunci Interpretasi Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih P.merkusii

Gambar 20. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih P. merkusii

41

natrium hipoklorit, etanol 70%, kertas merang dan aluminium foil.

Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset,penggaris, oven, alat pengaduk, inkubator dan alat pembagi benih. Gambarbahan dan alat yang digunakan untuk uji tetrazolium dapat dilihat pada Lampiran1.





Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, alat pengaduk, kertas merangdan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam.Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secaramerata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.


Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam larutannatrium hipoklorit (pengenceran 1 : 5) selama 5 menit, kemudian dibilas denganaquades dan benih siap untuk diuji.






(2) Potong ujung kulit benih dengan gunting kuku.

(3) Rendam benih tersebut dalam larutan H O 1% (volume larutan H O =3 x volume benih) dalam gelas piala yang ditutup dengan aluminiumfoil.

4) Masukkan gelas piala tersebut ke dalam inkubator atau ruangan gelappada suhu 20 - 30 °C. Pengujian dilakukan selama 7 hari.

(5) Ganti larutan H O dengan larutan H O yang baru pada hari ke-1, ke-3dan ke-4.



P. merkusii

P. merkusii

2 2 2 2

2 2 2 2

42




Kunci interpretasi hasil uji hidrogen peroksida didasarkan pada panjang radikelyang muncul pada akhir periode pengamatan. Benih viabel memiliki panjangradikel 1 mm, sedangkan benih non viabel memiliki panjang radikel < 1 mmatau tidak terjadi pemunculan radikel. Contoh benih viabel dan non viabelhasil uji hidrogen peroksida dapat dilihat pada Gambar 22.


Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, natrium hipoklorit, etanol 70%,kertas saring, kertas merang dan lembaran plastik. Alat-alat yang digunakanadalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, lup,semprotan tangan, oven, inkubator, laminar flow dan alat pembagi benih.Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji eksisi embrio dapat dilihatpada Lampiran 1.





Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, kertas saring dan kertasmerang dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasidapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata keseluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.






(2) Kupas kulit benih dengan pinset atau gunting kuku.

(3) Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang basah selama

>

P. merkusii

43

24 jam. Tebarkan benih pada kertas merang basah, kemudian kertasdigulung dan dimasukkan ke dalam plastik agar benih tidak kering.

(4) Kupas kulit ari yang melekat pada benih dengan pinset. Selama kegiatanpengupasan kulit ari tersebut, benih harus selalu dalam keadaan lembab.

(5) Belah sedikit bagian endosperma dengan menggunakan silet dankeluarkan embrionya secara hati-hati. Ketika membelah, kondisi embrioharus utuh (tidak boleh ikut terbelah atau cacat). Untuk menjamin kondisiaseptik selama kegiatan pemotongan, lakukan kegiatan di dalam laminarflow atau di tempat yang steril. Peralatan yang digunakan harus selaludalam keadaan steril.

(6) Letakkan embrio pada cawan petri yang berisi media 3 lembar kertassaring lembab.



(9) Kondisi embrio (radikel dan kotiledon) yang diperoleh pada akhirpengamatan, dicocokkan dengan kunci interpretasi.

Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benih dapatdilihat pada Tabel 11, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabel hasil ujieksisi embrio dapat dilihat pada Gambar 23.

Tabel 11. Kunci Interpretasi Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih


Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70%, natrium hipoklorkkertas merang dan lembaran plastik. Alat-alat yang digunakan adalah cawanpetri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, lup, semprotan tangan, oven danalat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji belahdapat dilihat pada Lampiran 1.


6.5. UJI BELAH


P. merkusii

P. merkusii

44




Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas merangdipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapatjuga dilakukan dengan cara menyemprotkan etanol 70% secara merata keseluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.



(1) Sterilkan benih dengan natrium hipokiorit (lihat 6.5.1.3.2.).

(2) Kupas kulit benih dengan pinset atau gunting kuku.

(3) Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang basah selama24 jam. Kertas merang basah yang berisi benih tersebut dimasukkanke dalam plastik atau cawan petri agar benih tidak kering/mencegahpenguapan.

(4) Kupas kulit ari benih dengan pinset dan belah benih dengan menggunakansilet. Embrio dan endosperma harus terbagi dua.

(5) Amati warna dan penampakan embrio dan endosperma dengan matatelanjang atau menggunakan kaca pembesar (lup), sehingga dapatditentukan benih tersebut viabel atau non viabel, sesuai dengan kunciinterpretasi.


P. merkusii

P. merkusii


45

Tabel 12. Kunci Interpretasi Hasil Uji Belah untuk Benih P. merkusii

46

Gam

bar21.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Te

tra

zo

liu

mu

ntu

kBenih

P.m

erk

usii

Gam

bar22.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Hid

rogen

Pero

ksid

auntu

kBenih

P.m

erk

usii

Gam

bar23.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Eksis

iEm

bri

ountu

kBenih

P.m

erk

usii

Gam

bar24.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Bela

huntu

kB

enih

P.m

erk

usii

47

VII. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS

7.1. UMUM



Swietenia macrophylla

S. macrophylla

S. macrophylla

yang dikenal dengan nama mahoni daun besar, termasuk

ke dalam famili Meliaceae. Uji viabilitas benih secarakonvensional yang dilakukan di persemaian pada media pasir tanah (1 : 1)memerlukan waktu lebih kurang 30 - 40 hari.

Fokus pengamatan pada uji cepat viabilitas benih dilakukanterhadap struktur tumbuh benihnya yang terdiri dari mikrofil (titik tumbuh)dan kotiledon (Gambar 25).



Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, garam tetrazolium (2,3,5-triphenil tetrazolium chlorida), Na HPO .2H , KH PO , etanol 70%, kertasmerang, lembaran plastik an aluminium foil.

Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, pinset, silet ataupisau tajam, oven, alat pengaduk, saringan, semprotan tangan, timbangandan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk ujitetrazolium dapat dilihat pada Lampiran 1.

S. macrophylla

S. macrophylla

2 4 2 2 4Od

49




Cawan petri, gelas piala, pinset, silet atau pisau tajam, alat pengaduk, saringan,kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °Cselama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakansemprotan tangan.





(1) Kupas kulit benih secara hati-hati dengan menggunakan silet. Pada saatmengupas kulit benih, silet tidak boleh mengenai benih, karena akanmempengaruhi pola pewarnaan yang terbentuk.

(2) Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang basah selama24 jam. Kertas merang basah yang berisi benih tersebut dimasukkanke dalam plastik untuk mencegah penguapan.

(3) Belah benih menjadi 2 bagian melalui titik tumbuhnya dengan silet ataupisau tajam. Pada saat membelah benih, usahakan tidak sampai terputus.

(4) Rendam benih dalam larutan tetrazolium 0,5% yang ditempatkan dalamgelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnya dengan aluminiumfoil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih).



(7) Tempatkan benih pada cawan petri yang berisi 2 lembar kertas meranglembab untuk dianalisis pola pewarnaan yang terbentuk pada titik tumbuhdan kotiledon.

(8) Amati intensitas dan luas pewarnaan yang terbentuk. Intensitas pewarnaandibagi menjadi warna merah (M), merah muda (Mm) dan putih (P),sedangkan penghitungan luas pewarnaan (%) dilakukan denganmembandingkan masing-masing warna yang terbentuk terhadap luaskeseluruhan permukaan bagian dalam keping benih. Pola pewarnaanyang terbentuk dicocokkan dengan kunci interpretasi.

50


Viabilitas benih yang diuji dapat diketahui dengan melihatpersentase pola pewarnaan yang terbentuk dan mencocokkannya dengan kunciinterpretasi pada Tabel 13 dan Gambar 26, sedangkan contoh benih viabel dannon viabel hasil uji tetrazolium dapat dilihat pada Gambar 27.


Gambar 26. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih

S. macrophylla

S. macrophylla

S. macrophylla

51

52





Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, pinset, silet, penggaris,oven, alat pengaduk, inkubator dan alat pembagi benih. Gambar bahan danalat yang digunakan untuk uji hidrogen peroksida dapat dilihat padaLampiran 1.



7.3.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat 7.3.1.3.1. Sterilisasi dengan Oven/Etanol

Cawan petri, gelas piala, pinset, silet, alat pengaduk, kertas merang dan alu-minium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasidapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata keseluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.







(1) Kupas kulit benih secara hati-hati dengan menggunakan silet. Pada saatmengupas kulit benih, silet tidak boleh mengenai benih.

(2) Sterilkan benih tersebut dengan natrium hipoklorit (lihat 7.3.1.3.2.).

(3) Rendam benih tersebut dalam larutan H O 1% (volume larutan H O =3 x volume benih) dalam gelas piala yang ditutup dengan aluminium foil.

2 2 2 2

53


(5) Ganti larutan H O dengan larutan H O yang baru pada hari ke-1 dan ke-4.



Kunci interpretasi untuk benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksidadidasarkan pada panjang radikel yang muncul pada akhir periode pengamatan.Benih viabel memiliki panjang radikel 1 mm, sedangkan benih non viabelmemiiiki panjang radikel < 1 mm atau tidak terjadi pemunculan radikel. Contohbenih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida dapat dilihat padaGambar 28.


Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, natrium hipoklorit, etanol 70%,kertas saring, kertas merang dan lembaran plastik.

Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, pinset, sifet, lup,semprotan tangan, oven, inkubator, laminar flow dan alat pembagi benih.Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji eksisi embrio dapat dilihatpada Lampiran 1.





Cawan petri, gelas piala, pinset, silet, kertas saring dan kertas merangdipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat jugadilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagianalat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.

2 2 2 2




>




Pegkondisian, pemotongan embrio dan pengujian dilakukan dengan cara sebagaiberikut :

(1) Sterilkan benih yang akan diuji dengan natrium hipoklorit (lihat 7.4.1.3.2.).


(3) Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang basah selama24 jam. Kertas merang basah yang berisi benih tersebut dimasukkanke dalam plastik untuk mencegah penguapan.

(4) Potong bagian di sekeliling titik tumbuh dengan menggunakan siletsehingga membentuk potongan segitiga. Kondisi titik tumbuh harus utuh(tidak boleh cacat atau terpotong). Untuk menjamin kondisi aseptik selamakegiatan pemotongan, lakukan kegiatan di dalam laminar flow atau ditempat yang steril. Peralatan yang digunakan harus selalu dalam keadaansteril.

(5) Letakkan embrio (titik tumbuh) pada cawan petri yang berisi media 2lembar kertas saring lembab.

(6) Masukkan cawan petri tersebut ke dalam inkubator atau ruang kamar padasuhu konstan (20 - 25 °C) selama 6 hari dengan periode pencahayaanminimal 8 jam per hari.


(8) Kondisi embrio (titik tumbuh) yang diperoleh pada akhir pengamatan,dicocokkan dengan kunci interpretasi.

Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benihdapat dilihat pada Tabel 14, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabelhasil uji eksisi embrio dapat dilihat pada Gambar 29.


S.macrophylla

54

Tabel 14. Kunci Interpretasi Hasil Uji Eksisi Embrio untuk BenihS. macrophylla

7.5. UJI BELAH



Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70% dan kertas merang.Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, silet atau pisau tajam, lup,semprotan tangan, oven dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alatyang digunakan untuk uji belah dapat dilihat pada Lampiran 1.




Cawan petri, pinset, silet atau pisau tajam dan kertas merang dipanaskandalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukandengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alattersebut dengan menggunakan semprotan tangan.




(2) Belah benih menjadi 2 bagian melalui titik tumbuhnya dengan silet ataupisau tajam.

(3) Amati warna dan penampakan titik tumbuh dan kotiledon dengan matatelanjang atau menggunakan kaca pembesar (lup), sehingga dapatditentukan benih tersebut hidup atau mati, sesuai dengan kunciinterpretasi.

55



Tabel 15. Kunci Interpretasi Hasil Uji Belah untuk Benih

S. macrophylla

S. macrophylla

56

Gam

bar27.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Tetrazoli

um

un

tu

kBenih

s.m

acro

phylla

Gam

bar28.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Hid

rogen

Pero

ksid

auntu

kBenih

s.m

acro

phylla

Gam

bar29.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Eksis

iEm

bri

ountu

kBenih

s.m

acro

phylla

Gam

bar30.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Bela

huntu

kB

enih

s.m

acro

phylla

57

DAFTAR PUSTAKA

Bhodthipuks, J., P. Pukkitayacame, B. P. S. Wang, S. Saelim and S. L. Yu.1994. Rapid Viability Testing of Tropical Tree Seed. Training CourseProceeding No. 4. ASEAN Forest Tree Seed Centre Project. Thailand.

Bonner, F. T, J. A. Vozzo, W. W. Elam and S. B. Land Jr. 1994. Tree SeedTechnology Training Course: Instructor's Manual. United StateDepartemen of Agriculture, Forest Service, Southern Forest ExperimentStation. New Orleans.

Byrd, H. W. 1988. Pedoman Teknologi Benih (Terjemahan). State College.Mississipi.

Gordon, A. G. 1992. Seed Testing in Seed Manual for Forest Trees. ForestryCommision. London.

ISTA. 1985. Seed Science and Technology. International Seed TestingAssociation. Zurich, Switzerland.

_________. 1991. Buku Pegangan Benih Pohon dan Belukar, Terjemahandari Tree and Shrub Seed Hand Book. Indonesia Forest Seed Project,Directorate of Forest Seed Ministry of Forestry and Estate Crops, DanishInternational Development Assiatance. Indonesia - Denmark.

Laloup, M. 1955. Seed Testing. FAO of United Nation. Rome.

Leadem, C. L. 1984. Quick Test for Tree Seed Viability. Management ReportNo. 18 ISSN. 0702 - 9861. B. C. Ministry Forest Land Research Branch.

Manan, S. 1976. Silvikultur. Proyek Pengembangan Peningkatan Mutu PerguruanTinggi IPB. Bogor.

Mugnisjah, W. Q. dan A. setiawan. 1990. Pengantar Produksi benih. RajawaliPress. Jakarta.

Sadjad, S. 1980. Panduan Pembinaan Mutu Benih tanaman Hutan. KerjasamaProyek Pusat Perbenihan Kehutanan Direktorat Reboisasi dan RehabilitasiDirektorat Jenderal Kehutanan dengan Lembaga Afiliasi Institut PertanianBogor. Bogor.

________. 1993. Dari Benih Kepada Benih. PT Gramedia WidiasaranaIndonesia. Jakarta.

Sutopo, L. 1993. Teknologi Benih. CV Rajawali Pers. Jakarta.

Willan, R. L. 1985. A Guide to Forest Seed Handling. DANIDA Forest SeedCentre Hunlebaek Denmark- FAO.

Zanzibar, M. 1996. Aplikasi Uji Cepat Viabilitas pada benih Tanaman Hutan.Prosiding Ekpose Program dan Hasil-Hasil Penelitian Perbenihan Kehutanan.Balai Teknologi Perbenihan, Badan Penelitian dan PengembanganDepartemen Kehutanan. Bogor.

59

61

Lampiran 1. Bahan dan Alat yang Digunakan untuk Uji Cepat Viabilitas Benih (a).Uji Tetrazolium, (b). Uji Hidrogen Peroksida, (c). Uji Eksisi Embrio dan(e). Uji Belah

(a) (b)

(c) (d)

Lampiran 2. Prosedur Pengambilan Contoh Benih Untuk Pengujian (BTP, 2000)

1. Contoh kirim dan komposit dihamparkan, kemudian dibagi menjadi4 bagian, yaitu 1, 2, 3 dan 4.

2. Bagian 1 dan 3 dicampur, kemudian dihamparkan dan selanjutnyadibagi menjadi 4 bagian yaitu 5, 6, 7 dan 8.

3. Langkah 2 selanjutnya hingga diperoleh contoh kerja sesuai denganketentuan.

62

Lampiran 3. Cara Pembuatan Larutan Tetrazolium

Pembuatan larutan tetrazolium dilakukan dengan cara sebagai berikut :

(1) Larutan I : Larutkan 9,078 gram KH PO, d m aquades

1000 ml

(2) Larutan II : Larutkan 11,876 gram Na HP0 .2H 0 dalam

aquades 1000 ml

(3) Larutan Penyangga : Campurkan 400 ml Larutan I dengan 600 mlLarutan II (2 : 3)

(4) Larutan Tetrazolium 1% : Masukkan 10 gram garam tetrazolium (2,3,5triphenil tetrazolium chlorida) ke dalam1000 ml Larutan Penyangga

(5) Larutan Tetrazolium 0,5% : Masukkan 5 gram garam tetrazolium (2,3,5triphenil tetrazolium chlorida) ke dalam1000 ml Larutan Penyangga

(6) Larutan Tetrazolium harus dihindarkan dari cahaya langsung, yaitu dengancara menempatkan larutan tersebut ke dalam gelas piala yang telah dilapisialuminium foil. Pencampuran benih dengan larutan tersebut dilakukandalam kamar gelap. Selain itu, apabila tidak digunakan, larutan tersebutdisimpan dalam lemari es.

2 ala

2 4 2

63

Lampiran 4. Cara Pembuatan Larutan Hidrogen Peroksida

Larutan H O yang dijual di pasaran umumnya memiliki konsentrasi yang masihtinggi, yaitu 35%, sedangkan yang digunakan untuk uji H O ini berkisar antara0,5 - 2%. Oleh karena itu arutan H O 35% harus diencerkan terlebihdahulu. Rumus yang diguna ntuk reaksi pengenceran adalah sebagaiberikut :

dimana : C = konsentrasi larutan asli

C, = konsentrasi larutan yang diinginkanV, = volume larutan asli yang diperlukan untuk memperoleh

larutan yang diinginkanV, = volume larutan yang diinginkan

Pembuatan larutan hidrogen peroksida dilakukan dengan cara sebagaiberikut :

(1) Larutan H O 0,5% : Campurkan 14,29 ml larutan H O 35% ke dalam985,71 ml aquades sehingga diperoleh 1000 mllarutan H 0,5%.

(2) Larutan H O 1% : Campurkan 28,57 ml larutan H O 35% ke dalam971,43 ml aquades sehingga diperoleh 1000 mllarutan H O 1%.

(3) Larutan H O 2% : Campurkan 57,14 ml larutan H O 35% ke dalam942,86 ml aquades sehingga diperoleh 1000 mllarutan H O 2%.

2 2

2 2

2 2

2 2 2 2

2 2

2 2 2 2

2 2

2 2 2 2

2 2

lkan u

O

C xV =C xV1 1 Z Z

I

64

Lampiran 5. Glosari

Benih (botanis) : Biji tumbuhan yang digunakan manusia untuk tujuanpertanaman.

Benih (perundang- : Semua bahan tanaman baik yang dihasilkan secarageneratif maupun vegetatif.

Benih ortodoks : Watak/sifat dapat disimpan lama (tidak cepat menurunviabilitasnya) pada kondisi kadar air benih yang rendah (4 -8 %) dalam penyimpanan.

Benih rekalsitran : Watak/sifat benih benih cepat menurun viabilitasnya danmemerlukan kadar air yang tinggi (20 - 50 %) dalampenyimpanannya yang mendekati atau sama dengan kadarair benih segar.

Contoh benih : Sejumlah benih, baik dalam ukuran volume atau berat yangditarik dari masing-masing lot benih dengan cara acak,untuk kepentingan pengujian benih.

Contoh kerja : Sebagian contoh kiriman yang akan diuji

Contoh kiriman : Sebagian atau seluruh contoh komposit yang dikirim kelaboratorium pengujian.

Contoh komposit : Campuran semua contoh primer yang diambil dari lotbenih.

Contoh primer : Sejumlah benih yang diambil dari satu titik di dalam lotbenih.

Dormansi : Proses beristirahatnya suatu tanaman, bagian tanamanatau jaringan yang dalam kondisi petumbuhan yang optimum tidak menunjukan pertumbuhan sewajarnya.

Embrio : Satu tanaman baru yang terjadi dan bersatunya gametjantan dan gamet betina pada proses pembuahan.

Garam tetrazolium : Merupakan suatu senyawa kimia dengan rumus 2,3,5triphenyl tetrazolium clorida atau bromida yang di-gunakan sebagai pewarna untuk menbedakan sel hidupdengan sel mati pada uji tetrazoliurn,

Germinator : Alat pengecambah yang memenuhi syarat optimum dalamfaktor tumbuh, yaitu kelembaban udara, suhu dan cahayayang optimum.

Hidrogen : Suatu larutan yang tidak stabil dan tidak berwarna, larutanini dapat larut dalam air dan alkohol serta mudahdidekomposisikan dalam air dan oksigen bila disimpanpada suhu yang terlalu tinggi/rendah atau di bawah cahayalangsung.

undangan

peroksida (HzOz)

65

Kecambah normal : Kecambah benih yang tumbuh normal sesuai ketentuanbaku dalam pengujian viabilitas benih, untuk mensimu-lasikan pertumbuhan normal tanaman di lapangan.

Kotiledon : Bagian dari struktur tumbuh benih yang berfungsisebagai jaringan cadangan makanan.

Lot : Sejumlah benih yang akan diuji mutunya.

Plumula : Bagian dari struktur tumbuh benih yang akan mem-bentuk organ batang.

Radikel : Bagian dari struktur tumbuh benih yang akan mem-bentuk organ akar.

Ragum : Uji daya berkecambah benih, di mana contoh kerjadiletakan di antara substrat kertas yang telah dilembabkan.

Sterilisasi : Kegiatan pembebasan/pembersihan suatu objek (alat,bahan atau media) dari organisme yang tidak diinginkan,seperti fungi, bakteri, virus atau yang lainnya.

UAK : Uji daya berkecambah benih, di mana contoh kerjadiletakan di antara substrat kertas yang telahdilembabkan.

UDK : Uji daya berkecambah benih, di mana contoh kerjadiletakan di atas substrat kertas yang telah dilembabkan.

Uji belah : Merupakan salah satu uji cepat viabilitas benih dengancara melihat langsung penampakan struktur tumbuhnyayang menunjukan kondisi yang baik (hidup).

Uji cepat viabilitas : Metode pengujian viabilitas benih yang didasarkan padaproses metabolisme benih yang merupakan indikasi taklangsung.

Uji eksisi embrio : Merupakan salah satu uji cepat viabilitas benih yangdilakukan dengan mengamati perilaku embrio dalamkondisi jaringan setelah pemotongan dan inkubasiselanjutnya, di mana embrio yang viabel akan memper-lihatkan warna hijau, tumbuh atau tetap segar sementa raembrio yang non viabel akan rusak.

Uji hidrogen : Merupakan salah satu uji cepat viabilitas benihdengan memanfaatkan sifat larutan hidrogenperoksida yang dapat merangsang perkecambah-an benih dan dapat digunakan untuk mempercepatperkecambahan.

peroksida

(cutting test)

(uji antar kertas)

(uji di atas kertas)

66

Uji tetrazolium : Merupakan salah satu uji cepat viabilitas benih secarabiokimia yang didasarkan kepada pewarnaan yangdihasilkan setiap sel hidup dengan garam tetrazoliumyang membentuk endapan formazan merah sedangkansel-sel yang mati menunjukan warna putih

Viabel : Hidup

Viabilitas benih : Kemampuan benih untuk hidup, yang ditunjukan olehgejala pertumbuhan atau gejala metabolismenya dandapat pula ditunjukkan oleh keadaan organel sitoplasmaatau kromosom.

Viablitas potensial : Viabilitas benih yang menunjukkan kemampuan benihtumbuh normal dalam kondisi optimim menghasilkantanaman normal yang berproduksi normal.

Viabilitas total : Mencerminkan daya hidup benih yang hanya ditunjuk-kan oleh sekedar gejala hidup benih melalui metabolismebenih, misalnya kemampuan benih mengambil oksigenpada saat tertentu.

Vigor benih : Viabilitas benih yang menunjukkan kemampuan benih

67

buku 1 - forda-mof.org · pedoman ujicepat viabilitas benih tanaman hutan (acacia mangium, gmelina...

Documents