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C-Peptide

IMMULITE® 2000 C-Peptide

2 IMMULITE 2000 C-Peptide (PIL2KPE-16, 2005-07-06)

English

Intended Use: For in vitro diagnostic usewith the IMMULITE 2000 Analyzer — forthe quantitative measurement of C-peptidein serum, heparinized plasma, or urine, asan aid in the diagnosis and treatment ofpatients with abnormal insulin secretion.Catalog Number: L2KPE2 (200 tests),L2KPE6 (600 tests)Test Code: CPE Color: Dark GrayCDC Analyte Identifier Code: 1040CDC Test System Identifier Code: 10418CLIA Complexity Category: Moderate

Summary and ExplanationHuman C-peptide is a 31 amino acid chainwith a molecular mass of approximately3,020 daltons. Metabolically inert, itoriginates in the pancreatic β-cells as a by-product of the enzymatic cleavage ofproinsulin to insulin.1,2,5 In this process,insulin and C-peptide are split from theprohormone and secreted into the portalcirculation in equimolar concentrations.4,5,7 Itis this fact which underlies the clinical interestin plasma determinations of C-peptide.Within limits, C-peptide levels can serve asa valuable index to insulin secretion. Thus,low C-peptide levels are to be expectedwhere insulin secretion is diminished, as ininsulin-dependent diabetes, or suppressed,as a normal response to exogenous insulin;whereas elevated C-peptide levels mayresult from the increased β-cell activityobserved in insulinomas. 3,4,6,9

Accordingly, in the differential diagnosis ofhypoglycemia, C-peptide determinationscan be used to supplement insulinmeasurements as an index to pancreaticactivity in the classic 72-hour fasting test,and as the sole indicator of pancreaticactivity where insulin itself is administeredto check for suppressibility.1,8 In addition,covert self-administration of insulin can bevirtually ruled out as the cause ofhyperinsulinemia by the finding of anelevated C-peptide level.2,3,8,9

Circulating anti-insulin antibodies arecommonly encountered in patients who

have undergone insulin therapy. Thesewould typically interfere with immunoassaysfor insulin, making it impossible to useinsulin measurements in this context tocheck on residual β-cell activity, even iftreatment were temporarily suspended.C-peptide measurements have thereforebeen used as an alternative in this context,to yield information on the natural history ofinsulin-dependent diabetes, to indirectlymonitor insulin secretion in the presence ofanti-insulin antibodies, and to help settle onan appropriate course of treatment.3,6,7,10

C-peptide has also been measured as anadditional means for evaluating glucosetolerance and glibenclamide-glucosetests.2,3,10

Principle of the ProcedureIMMULITE 2000 C-Peptide is a solid-phase, competitive chemiluminescentenzyme immunoassay.Incubation Cycles: 1 × 60 minutes.

Specimen Collection

Serum and Heparinized Plasma:The patient should be fasting. Collectblood by venipuncture,12 avoidinghemolysis, into plain tubes (withoutanticoagulant) or heparinized tubes,noting the time of collection, and separatethe serum or plasma from the cells.

The use of an ultracentrifuge isrecommended to clear lipemic samples.Hemolyzed samples may indicatemistreatment of a specimen before receiptby the laboratory; hence the results shouldbe interpreted with caution.EDTA plasma and sodium fluoride plasmaare unsuitable for use.Centrifuging serum samples before acomplete clot forms may result in thepresence of fibrin. To prevent erroneousresults due to the presence of fibrin,ensure that complete clot formation hastaken place prior to centrifugation ofsamples. Some samples, particularlythose from patients receivinganticoagulant therapy, may requireincreased clotting time.

IMMULITE 2000 C-Peptide (PIL2KPE-16, 2005-07-06) 3

Blood collection tubes from differentmanufacturers may yield differing values,depending on materials and additives,including gel or physical barriers, clotactivators and/or anticoagulants.IMMULITE 2000 C-Peptide has not beentested with all possible variations of tubetypes. Consult the section on AlternateSample Types for details on tubes thathave been tested.Storage: Assay within 2-3 hours, or storefrozen at –20°C for 1 week.11

Urine – Collection and Storage:Collect a 24-hour urine, withoutpreservative, keeping the specimenrefrigerated at 2–8°C during collection.Record the total volume of the collectionand retain a well-mixed aliquot foranalysis. Before assay, clear the sampleby centrifugation or filtration.

Storage: For longer storage, aliquot andfreeze: stable at –20°C for 30 days.Dilution Factor: At least 5. Using adilution factor of 20 will bring normal urinesamples within the assay’s calibrationrange. (For urine samples, select 5 or 20in the Dilution Factor window.)

Volume Required:75 µL serum, plasma, or urine sample.

Warnings and PrecautionsFor in vitro diagnostic use.

Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of inaccordance with applicable laws.Follow universal precautions, and handleall components as if capable oftransmitting infectious agents. Sourcematerials derived from human blood weretested and found nonreactive for syphilis;for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitisB surface antigen; and for antibodies tohepatitis C.Sodium azide, at concentrations less than0.1 g/dL, has been added as apreservative. On disposal, flush with largevolumes of water to prevent the buildup ofpotentially explosive metal azides in leadand copper plumbing.

Chemiluminescent Substrate: Avoidcontamination and exposure to directsunlight. (See insert.)Water: Use distilled or deionized water.

Materials SuppliedComponents are a matched set. Labels onthe inside box are needed for the assay.

C-Peptide Bead Pack (L2PE12)With barcode. 200 beads, coated withpolyclonal rabbit anti-C-peptide. Stable at2–8°C until expiration date.L2KPE2: 1 pack L2KPE6: 3 packs.

C-Peptide Reagent Wedge (L2PEA2)With barcode. 17.5 mL alkalinephosphatase (bovine calf intestine)conjugated to C-peptide in buffer. Stableat 2–8°C until expiration date.L2KPE2: 1 wedge. L2KPE6: 3 wedgesBefore use, tear off the top of the label atthe perforations, without damaging thebarcode. Remove the foil seal from the topof wedge; snap the sliding cover down intothe ramps on the reagent lid.

C-Peptide Adjustors (LPEL, LPEH)Two vials (Low and High) of lyophilizedC-peptide in buffered human albumin.Reconstitute each vial with 4.0 mL distilledor deionized water. Let stand for 30minutes. Mix by gentle swirling orinversion until the lyophilized material isfully dissolved. After reconstitution, aliquotand freeze. Stable at –20°C for 6 months.Discard aliquots after use.L2KPE2: 1 set. L2KPE6: 2 sets.Before making an adjustment, place theappropriate Aliquot Labels (supplied withthe kit) on test tubes so that the barcodescan be read by the on-board reader.

Kit Components SuppliedSeparately

C-Peptide Sample Diluent (L2PEZ)For the on-board dilution of urine samplesand high serum/plasma samples. 25 mL ofconcentrated (ready-to-use), processed,C-peptide-free buffered human albumin,with preservative. Stable at 2–8°C for30 days after opening, or for 6 months(aliquotted) at –20°C.

Barcode labels are provided for use withthe diluent. Before use, place anappropriate label on a 16 × 100 mm testtube, so that the barcode can be read bythe on-board reader.L2PEZ: 3 labels.


L2SUBM: Chemiluminescent SubstrateL2PWSM: Probe WashL2KPM: Probe Cleaning KitLRXT: Reaction Tubes (disposable)L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes(16 × 100 mm)L2ZC: 250 Sample Diluent Tube CapsPECM: Tri-level C-Peptide Control ModuleAlso RequiredDistilled or deionized water; test tubes;controls.

Assay ProcedureNote that for optimal performance, it isimportant to perform all routinemaintenance procedures as defined in theIMMULITE 2000 Operator's Manual.

See the IMMULITE 2000 Operator'sManual for: preparation, setup, dilutions,adjustment, assay and quality controlprocedures.

Recommended Adjustment Interval:2 weeks.Quality Control Samples: Use controlsor serum pools with at least two levels(low and high) of C-peptide.

Expected Values

Serum and Heparinized Plasma:Serum samples were collected from 71fasting laboratory volunteers and analyzedby the IMMULITE 2000 C-Peptideprocedure, with the median of 2.1 ng/mL(0.7 nmol/L; 695 pmol/L) and anonparametric central 95% referencerange of1.1 – 5.0 ng/mL(0.4 – 1.7 nmol/L; 364 – 1,655 pmol/L)

Urine: Mean ± SD of 79 ± 56 µg/day, witha range of 2 to 260 µg/day, representingthe central 95% of the observations.Consider these limits as guidelines only.Each laboratory should establish its ownreference ranges.

LimitationsBecause metabolism of C-peptide differsfrom that of insulin, C-peptide levels are atbest a semi-quantitative index of insulinsecretion. The half-life of C-peptide inplasma has been estimated asapproximately 30 minutes, compared to

approximately 5 minutes for insulin.Because of the difference in half-life,C-peptide circulates in plasma at a levelroughly five times that of insulin, eventhough the two molecules are secreted inan equimolar ratio. Again, the liver plays amajor role in clearing insulin, whereasC-peptide is removed by degradation andelimination mainly through the kidneys.Hepatic and renal complications willtherefore affect the circulatingC-peptide/insulin ratio.Heterophilic antibodies in human serumcan react with the immunoglobulinsincluded in the assay components causinginterference with in vitro immunoassays.[See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinelyexposed to animals or animal serumproducts can demonstrate this type ofinterference potentially causing ananomalous result. These reagents havebeen formulated to minimize the risk ofinterference; however, potentialinteractions between rare sera and testcomponents can occur. For diagnosticpurposes, the results obtained from thisassay should always be used incombination with the clinical examination,patient medical history, and other findings.

Performance DataSee Tables and Graphs for datarepresentative of the assay’s performance.Results are expressed in ng/mL. (Unlessotherwise noted, all were generated onserum samples collected in tubes withoutgel barriers or clot-promoting additives.)Conversion Factors:ng/mL × 0.331 → nmol/Lng/mL × 331 → pmol/LCalibration Range: 0.5 – 7 ng/mL(0.17 – 2.3 nmol/L; 166 – 2,317 pmol/L).Standardized to WHO 1st IRP 84/510.

Analytical Sensitivity: 0.3 ng/mL(0.10 nmol/L; 99 pmol/L).Precision: Serum samples were assayedin duplicate over the course of 20 days,two runs per day, for a total of 40 runs and80 replicates. (See “Precision” table.)Linearity: Samples were assayed undervarious dilutions. (See "Linearity" table forrepresentative data.)


Recovery: Serum samples spiked 1 to 19with three C-peptide solutions (15, 54 and112 ng/mL) were assayed. (See"Recovery" table for representative data.)Specificity: The antibody is highly specificfor C-peptide. (See "Specificity" table.)

Bilirubin: Presence of bilirubin inconcentrations up to 200 mg/L has noeffect on results, within the precision of theassay.

Hemolysis: Presence of hemoglobin inconcentrations up to 381 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.Lipemia: Presence of lipemia inconcentrations up to 3,000 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.Alternate Sample Type: No significanteffect for heparinized plasma. EDTAplasma and sodium fluoride plasma areunsuitable for use. By linear regression:(Heparin) = 0.97 (Serum) + 0.51 ng/mLr = 0.969

Means:4.7 ng/mL (Serum)5.1 ng/mL (Heparin)

Method Comparison: The assay wascompared to DPC's IMMULITE C-Peptideprocedure on 66 samples. (Concentrationrange: approximately 0.5 – 6.5 ng/mL.See graph.) By linear regression:(IML 2000) = 0.97 (IML) + 0.16 ng/mLr = 0.990

Means:2.84 ng/mL (IMMULITE 2000)2.76 ng/mL (IMMULITE)

References1) Beischer W. Proinsulin and C-peptide inhumans. In: Fotherby K, Pal S, editors.Hormones in Normal and Abnormal HumanTissues. Vol 3. Berlin: Walter DeGruyter, 1983:1-43. 2) Beyer J, Krause U, Cordes U. C-peptide: its biogenesis, structure, determinationand clinical significance. Giornale Ital Chem Clin1979;4 Suppl 1:9-22. 3) Bonser A, Garcia-WebbP. C-Peptide measurement: methods andclinical utility. CRC Crit Rev Clin Lab Sci1984;19:297-352. 4) Gonen G, Rubenstein AH,Horwitz DL, Blix PM. Clinical significance of C-peptide. In: Baba S, Kaneko T, Yanaihara N,editors. Proinsulin, Insulin, C-Peptide.Amsterdam: Excerpta Medica, 1979: 246-53. 5)Horwitz D, et al. Proinsulin, insulin and C-peptide concentrations in human portal and

peripheral blood. J Clin Invest 1975;55:1278-83. 6) Horwitz D, Kuzuya H, Rubenstein AH.Circulating serum C-peptide. N Engl J Med1976;295:207-9. 7) Polonsky KS, RubensteinAH. C-peptide as a measure of the secretionand hepatic extraction of insulin; pitfalls andlimitations. Diabetes 1984;33:486-93. 8)Rendell M. Expanding clinical use of C-peptideradioimmunoassay. Acta Diabetol Lat1983;20:105-13. 9) Rubenstein AH, Kuzuya H,Horwitz DL. Clinical significance of circulating C-peptide in diabetes mellitus and hypoglycemicdisorders. Arch Intern Med 1977;137:625-32. 10) Turkington RW, Estkowski A, Link M.Secretion of insulin or connecting peptide; apredictor of insulin dependence of obesediabetics'. Arch Intern Med 1982;142:1102-5. 11) Data on file. 12) National Committee forClinical Laboratory Standards. Procedures forthe collection of diagnostic blood specimens byvenipuncture; approved standard. 4th ed.NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS,1998.

Technical AssistanceIn the United States, contact DPC'sTechnical Services department.Tel: 800.372.1782 or 973.927.2828Fax: 973.927.4101. Outside the UnitedStates, contact your National Distributor.Manufactured by EURO/DPC Ltd. under aQuality System registered to ISO 13485:2003.

Tables and Graphs

Precision (ng/mL)

Within-Run1 Total2

Mean3 SD4 CV5 SD CV

1 0.74 0.105 14.1% 0.137 18.6%

2 1.49 0.093 6.3% 0.131 8.8%

3 3.02 0.210 7.0% 0.252 8.4%

4 6.45 0.319 4.9% 0.405 6.3%

Specificity

Compound1 Amount Added2% Cross-reactivity3

Insulin 200 µIU/mL ND

Glucagon 15,000 ng/mL ND

Secretin 15,000 ng/mL ND

Proinsulin 10 ng/mL 17%

ND: not detectable.4


Linearity (ng/mL)

Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 4 in 45 1.8 — —

2 in 4 0.82 0.9 91%

1 in 4 0.41 0.45 91%

2 8 in 8 3.7 — —

4 in 8 1.8 1.9 95%

2 in 8 0.87 0.93 94%

1 in 8 0.39 0.46 85%

3 8 in 8 4.9 — —

4 in 8 2.6 2.5 104%

2 in 8 1.2 1.2 100%

1 in 8 0.65 0.61 107%

4 8 in 8 6.2 — —

4 in 8 3.2 3.1 103%

2 in 8 1.6 1.6 100%

1 in 8 0.69 0.78 88%

Recovery (ng/mL)

Solution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 — 1.5 — —

A 2.1 2.2 96

B 3.9 4.1 95

C 6.5 7.0 93

2 — 1.8 — —

A 2.3 2.5 92

B 4.3 4.3 100

C 6.6 7.3 90

3 — 1.9 — —

A 2.5 2.6 96

B 4.3 4.5 96

C 6.8 7.4 88

4 — 2.0 — —

A 2.5 2.7 93

B 4.0 4.6 87

C 7.0 7.5 93

5 — 2.1 — —

A 2.5 2.8 89

B 5.1 4.7 109

C 6.9 7.6 91

Method Comparison

0

1

2

3

4

5

6

7

0 1 2 3 4 5 6 7

IMMULITE C-Peptide ng/mL

IMM

ULI

TE 2

000

C-P

eptid

e

(IML 2000) = 0.97 (IML) + 0.16 ng/mLr = 0.990

Deutsch. Precision: 1Intra-Assay, 2Gesamt,3Mittelwert, 4S (Standardabweichung), 5CV(Variationskoeffizient). Linearity: 1Verdünnung,2Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 54 in 4.Recovery: 1Probe, 2Beobachtet (B), 3Erwartet(E), 4% B/E. Specificity: 1Verbindung,2zugesetzte Menge, 3% Kreuzreaktivität, 4NN:Nicht nachweisbar. Method Comparison: C-Peptide: C-Peptid.

Español. Precision: 1Intraensayo, 2Total,3Media, 4DS, 5CV. Linearity: 1Dilución,2Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E, 54 en 4.Recovery: 1Solución, 2Observado (O),3Esperado (E), 4%O/E. Specificity:1Compuesto, 2Cantidad añadida, 3% Reaccióncruzada, 4ND: no detectable. MethodComparison: C-Peptide: Péptido-C

Français. Precision: 1Intraessai, 2Total,3Moyenne, 4SD, 5CV. Linearity: 1Dilution,2Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A, 54 dans 4.Recovery: 1Solution, 2Observé (O), 3Attendu(A), 4%O/A. Specificity: 1Composé, 2ajouté,3Réaction croisée %. 4ND: non détectable.Method Comparison: C-Peptide: C-Peptide

Italiano. Precision: 1Intra-serie, 2Totale, 3Media,4SD (Deviazione Standard), 5CV (Coefficiente diVariazione). Linearity: 1Diluizione, 2Osservato(O), 3Atteso (A), 4%O/A, 54 in 4. Recovery:1Soluzione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A.Specificity: 1Composto, 2quantità aggiunta,3Percentuale di Crossreattività, 4ND: nondeterminabile. Method Comparison: C-Peptide:C-Peptide

Português. Precision: 1Entre-ensaios, 2Total,3Média, 4Desvio padrão, 5Coeficiente devariação. Linearity: 1Diluição, 2Observado (O),3Esperado (E), 4%O/E, 54 em 4. Recovery:1Solução, 2Observado (O), 3Esperado (E),4%O/E. Specificity: 1Composto, 2Quantidadeadicionada, 3Percentagem de reacção cruzada,


4ND: não detectável. Method Comparison: C-Peptide: Péptido-C

Deutsch

C-Peptid - IMMULITE 2000Verwendungszweck: Für in-vitro-diagnostische Tests mit dem AnalysegerätIMMULITE 2000 – zur quantitativenMessung von C-Peptid im Serum,Heparin-Plasma und Urin, als Hilfe in derDiagnose und in der Behandlung vonPatienten mit anormaler Insulinsekretion.

Artikelnummer: L2KPE2 (200 tests),L2KPE6 (600 tests)Testcode: CPE Farbe: dunkelgrau

Klinische RelevanzHumanes C-Peptid ist ein einkettigesPolypeptid (31 Aminosäureeinheiten) miteinem Molekulargewicht von annähernd3 020 Dalton. In den ß-Zellen desPankreas entsteht das biologisch inaktiveC-Peptid als Nebenprodukt bei derenzymatischen Spaltung von Proinsulin inInsulin.1,2,5 Während dieses Prozesseswird das Insulin und C-Peptid von demProhormon abgespalten und gelangt inäquimolaren Mengen durch die Venaportae in den Kreislauf.4,5,7 Diese Tatsacheunterstreicht die klinische Bedeutung derC-Peptid-Bestimmung im Plasma.Innerhalb bestimmter Grenzen können dieC-Peptid Werte ein wertvoller Hinweis fürdie Insulinsekretion sein. Bei einer Insulin-abhängigen Diabetes können niedrige C-Peptid-Werte bei verminderter Insulin-Sekretion bzw. erniedrigte Werte alsReaktion auf exogenes Insulin erwartetwerden. Erhöhte C-Peptid-Werte könnenvon einer erhöhten Aktivität der β-Zellenbei Insulinomen herrühren.3,4,6,9

Zusätzlich können C-PeptidBestimmungen ergänzend zu den InsulinBestimmungen in der Differentialdiagnoseder Hypoglykämie als Maß für diePankreasaktivität nach dem klassischen72-Stunden-Fasten-Test oder auch alsalleiniger Indikator der Pankreasaktivität inVerbindung mit einem Insulin-Suppressionstest dienen.1,8 Außerdemkönnen heimliche Selbstverabreichungen

an Insulin bei erhöhten C-Peptid Wertenals Ursache für eine Hyperinsulinämiepraktisch ausgeschlossen werden.2,3,8,9

Anti-Insulin-Antikörper treten häufig beiPatienten auf, die einer Insulintherapieunterzogen worden sind. Diese würden ineinem Immunoassay zu Interferenzenführen, so dass die Insulinbestimmung indiesem Kontext zur Abklärung derRestaktivität der β-Zellen nicht benutztwerden kann, auch wenn die Therapiezeitweise unterbrochen wird. DieBestimmung des C-Peptid kann in diesenFällen als eine Alternative genutzt werden,um Informationen über den Verlauf derInsulin-abhängigen Diabetes zu gewinnen,um indirekt die Insulin-Sekretion in derAnwesenheit von Anti-Insulin-Antikörpernzu monitoren und um bei der Festlegungeiner geeigneten Theapie zu helfen.3,6,7,10

Die Bestimmung des C-Peptid kann alsein zusätzliches Hilfsmittel bei derBeurteilung der Glukosetoleranz- undGlibenclamid-Glukose-Tests eingesetztwerden.2,3,10

MethodikDer C-Peptid - IMMULITE-Test ist einkompetitiver Festphasen-,Chemilumineszenz-Immunoassay.Inkubationszyklen: 1 × 60 min.

Probenentnahme und Lagerung

Serum und Heparin- Plasma:Der Patient sollte nüchtern sein. DieBlutentnahme erfolgt in normale Gefäße(ohne Antigerinnungsmittel) oder inHeparin-Rörchenunter Vermeidung vonHämolyse.12 Den Entnahmezeitpunktnotieren und das Serum oder Plasma vonden Zellen trennen.Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zurKlärung von lipämischen Probenempfohlen.

Bei hämolysierten Proben besteht dieMöglichkeit einer unsachgemäßenHandhabung vor Eintreffen im Labor,daher sind die Ergebnisse mit Vorsicht zuinterpretieren.EDTA-Plasma und Natriumfluoridplasmasind für dieses Testsystem nichtempfehlenswert.


Die Zentrifugation der Serumproben vordem völligen Abschluss der Gerinnungkann zu Fibringerinnseln führen. Umfehlerhaften Analysenergebnissen infolgevon Gerinnseln vorzubeugen, istsicherzustellen, dass die Gerinnung vorder Zentrifugation der Proben vollständigabgeschlossen ist. Insbesondere Probenvon Patienten unter Antikoagulantien-therapie können eine verlängerteGerinnungszeit aufweisen.

Blutentnahmeröhrchen von verschiedenenHerstellern können differierende Werteverursachen. Dies hängt von denverwendeten Materialien und Additiven(Gel oder physische Trennbarrieren,Gerinnungsaktivatoren und /oderAntikoagulantien) ab. IMMULITE 2000 C-Peptid sind nicht mit allen möglichenRöhrchenvariationen ausgetestet worden.Details der getesteten Röhrchenarten sinddem Kapitel "Alternative Probenarten" zuentnehmen.Lagerung: Test innerhalb 2–3 Stunden,oder für 1 Woche bei –20°C eingefrorenwerden.11

Urinsammeln und Lagerung:24-Stunden-Urin ohneKonservierungsmittel sammeln. Währenddes Sammelns kühlen (2–8°C),Gesamtvolumen ermitteln, Urin gutmischen und in Teilmengen abfüllen.Urinproben vor dem Einsatz im Assaydurch Zentrifugation oder Filtration klären.Lagerung: Zur längeren Lagerung,aliquotieren und einfrieren. 30 Tage bei–20°C haltbar.

Verdünnungsfaktor: mindestens 5. DieVerdünnung der Urinproben um denFaktor 20 bringt normale Urinproben inden Messbereich des Assays. (FürUrinproben Verdünnungsfaktor 5 oder 20im Fenster "Dilution Factor" auswählen.)

Erforderliche Menge:75 µl Probe (Serum, Plasma oder Urin).

Hinweise undVorsichtsmaßnahmenZur In-vitro-Diagnostik.Reagenzien: Bei 2–8°C lagern. UnterEinhaltung der geltenden gesetzlichenVorschriften entsorgen.

Die generell geltendenVorsichtsmaßnahmen sind einzuhaltenund alle Komponenten als potenziellinfektiös zu behandeln. Alle ausmenschlichem Blut gewonnenenMaterialien wurden auf Syphilis,Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2,Hepatitis-B-Oberflächenantigen undHepatitis-C-Antikörper untersucht undnegativ befundet.Bestimmten Komponenten wurdeNatriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Umdie Bildung von explosiven Metallaziden inBlei- und Kupferrohren zu vermeiden,sollten die Reagenzien nur zusammen mitgroßen Wassermengen in die Kanalisationgespült werden.Chemilumineszenz-Substrat:Kontamination und direkteSonneneinstrahlung vermeiden. SiehePackungsbeilage.Wasser: Destilliertes oder deionisiertesWasser verwenden.

Im Lieferumfang enthaltenDie Bestandteile sind aufeinanderabgestimmt. Die Aufkleber auf derInnenverpackung werden zurTestdurchführung gebraucht.

C-Peptid Kugel-Container (L2PE12)barcodiert, Kugel-Container enthält 200Kugeln, beschichtet mit polyklonalen anti-C-Peptid Antikörpern (Kaninchen).Gekühlt (2–8°C) haltbar bis zumangegebenen Verfallsdatum.L2KPE2: 1 ContainerL2KPE6: 3 Container

C-Peptid-Reagenzbehälter (L2PEA2)Barcodiert, Reagenz-Container enthält17,5 ml alkalische Phosphatase (Kalb).Konjugiert mit C-Peptid in Pufferlösung.Gekühlt (2–8°C) haltbar bis zumangegebenen Verfallsdatum.L2KPE2: 1 Behälter.L2KPE6: 3 Behälter

Vor Gebrauch den Aufkleber an derPerforation abreißen, ohne dabei dieBarcodierung zu beschädigen. Die Folievon der Oberseite des Containersentfernen. Den Schiebedeckel nach untenin die Führung des Reagenziendeckelseinrasten lassen.


C-Peptid- Kalibratoren (LPEL, LPEH)Zwei Fläschchen (Low und High) mitlyophilisiertem C-Peptid in einer humanenAlbumin-Lösung. Rekonstitution mit 4,0 mldestiliertem oder deionisiertem Wasser.Vorsichtig durchmischen. NachRekonstituierung aliquotieren undeinfrieren. 6 Monate bei –20°C haltbar.Aliquote nach Gebrauch verwerfen.L2KPE2: 1 Set. L2KPE6: 2 Sets.Vor der Kalibrierung die entsprechendenAufkleber (dem Kit beiliegend) aufRöhrchen kleben, so dass die Barcodesvom Barcode Reader des Systemsgelesen werden können.

Separat erhältliche Testsystem-Komponenten

C-Peptid -Verdünnungspuffer (L2PEZ)Zur on board Verdünnung von Urinprobenund von hoch Serum- und Plasmaproben.Enthält 25 ml prozessierte C-Peptid-freiehumane Albumin/Puffermatrix, mitKonservierungsmitteln. Lagerung: 30Tage nach dem Öffnen bei 2–8°C oder 6Monate bei –20°C (aliquotiert).Zum Einsatz des Verdünnungsreagenz(Diluents) werden Barcode Etikettenmitgeliefert. Vor Verwendung einentsprechendes Etikett auf ein16×100 mm Teströhrchen kleben, so dasses vom eingebauten Barcode Readergelesen werden kann.L2PEZ: 3 Etiketten

L2SUBM: Chemilumineszenz-SubstratmodulL2PWSM: WaschmodulL2KPM: ReinigungsmodulLRXT: (Einmal-) ReaktionsgefäßeZusätzlich erhältlichL2ZT: 250 Teströhrchen (16 × 100 mm)für die ProbenverdünnungL2ZC: 250 Röhrchenverschlüsse für dieProbenverdünnungPECM: Drei Konzentrationen C-Peptid-Kontrollmodul.

Ebenfalls benötigt:Destilliertes bzw. deionisiertes Wasser;Röhrchen; Kontrollen

TestdurchführungFür eine optimale Funktion des Gerätes istunbedingt zu beachten, dass dieWartungen, wie im IMMULITE 2000-

Handbuch beschrieben, regelmäßigdurchgeführt werden.

Die Angaben zur Vorbereitung,Einrichtung, Kalibration, Test- undQualitäts-kontrollverfahren entnehmen Siebitte dem IMMULITE 2000-Handbuch.Kalibrierungsintervall: 2 Wochen.

Qualitätskontrollseren: Kontrollen oderSeren mit C-Peptid in zumindest zweiKonzentrationen (niedrige und hohe)verwenden.

Referenzwerte

Serum und Heparin- Plasma:Serumproben wurden von 71 nüchternenLabormitarbeitern gesammelt und mit demIMMULITE 2000 C-Peptide Assayanalysiert. Es wurde ein Median von2,1 ng/mL (0,7 nmol/L; 695 pmol/L) undfolgender 95% Vertrauensbereich(nichtparametrische Verteilung) ermittelt:

1,1 – 5,0 ng/mL(0,4 – 1,7 nmol/L; 364 – 1 655 pmol/L)

UrinIn einer Studie des Herstellers wurdenfolgende Referenzwerte (24-Stunden-Sammelurin) ermittelt:

Mittelwert (± 1SD): 79 ± 56 µg/ Tag95 % Vertrauensbereich: 2 - 260 µg/ TagDa Referenzwerte von der Auswahl desProbandenkollektivs und von regionalenGegebenheiten abhängig sind, solltejedes Labor seine eigenen Referenzwerteermitteln.

Grenzen der MethodeDa der Metabolismus von Insulin sichdeutlich von dem des C-Peptidsunterscheidet, sind die C-Peptid Spiegelbestenfalls als semi-quantitativer Indexder Insulin Sekretion zu werten. DieHalbwertszeit des C-Peptids im Plasmabeträgt ca. 30 Minuten, die des Insulinsca. 5 Minuten. Aufgrund derunterschiedlichen Halbwertszeitenzirkuliert das C-Peptid im Plasma in ca. 5-fach höheren Konzentrationen imVergleich zum Insulin, obwohl beideMoleküle in equimolarem Verhältnissezerniert werden. Während die Leber dieHauptrolle im Abbau des Insulins spielt,wird das C-Peptid hauptsächlich in den


Nieren degradiert und eliminiert.Hepatische und renale Komplikationenbeeinflussen demnach die C-Peptid/Insulin Ratio im zirkulierendenPlasma.

Heterophile Antikörper in Humanserenkönnen mit Immunglobulinen aus denAssaykomponenten reagieren undInterferenzerscheinungen innerhalb des invitro Immunoassays verursachen. (Clin.Chem. 1988:34:27-33) Proben vonPatienten, die häufig mit Tier- bzw.Tierserumprodukten zu tun haben, könnendie erwähnten Interferenzen verursachenund zu anomalen Resultaten führen. Dieverwendeten Reagenzien sind sokonzipiert, dass das Risiko einerInterferenz mit den zu messenden Probenminimiert ist. Dennoch können potentiellInteraktionen zwischen seltenen Serenund den Testkomponenten auftreten. Zudiagnostischen Zwecken sollten die mitdem Assay erhaltenen Ergebnisse immerin Kombination mit der klinischenUntersuchung, der Patientenanamneseund anderen Befunden gesehen werden.

LeistungsdatenSiehe „Tables and Graphs“ mitrepräsentativen Daten für den Assay. DieErgebnisse sind in ng/ml ausgedrückt.(Alle Daten wurden – sofern nicht andersangegeben – mit Serumproben inRöhrchen ohne Gelbarrieren odergerinnungsfördernde Zusätze ermittelt.)Umrechnungsfaktor:ng/ml x 0,331 → nmol/lng/ml x 331 → pmol/lMessbereich: 0,5 – 7 ng/ml(0,17 – 2,3 nmol/l; 166 – 2 317 pmol/l)kalibriert nach WHO 1st IRP 84/510Analytische Sensitivität: 0,3 ng/ml(0,10 nmol/l; 99 pmol/l)Präzision: Proben wurden innerhalb von20 Tagen mit jeweils zwei Testansätzen inDoppelbestimmung gemessen (insgesamt40 Bestimmungen und 80Einzelmessungen; siehe Tabelle„Precision“).Linearität: Proben wurden inverschiedenen Verdünnungen getestet.(siehe Tabelle „Linearity“).

Wiederfindung: Proben wurden mit dreiC-Peptid-Lösungen (15, 54 und

112 ng/ml) 1:19 versetzt. (RepräsentativeDaten entnehmen Sie bitte der Tabelle„Recovery“.)Spezifität: Hochspezifischer C-Peptid(siehe Tabelle „Specifity“).Bilirubin: Bilirubin hat in Konzentrationenbis zu 200 mg/l keinen Einfluss auf dieErgebnisse, der größer als die Impräzisiondes Assays selbst ist.Hämolyse: Hämoglobin hat inKonzentrationen bis zu 381 mg/dl keinenEinfluss auf die Ergebnisse, der größer alsdie Impräzision des Assays selbst ist.Lipämie: Lipämie hat in Konzentrationenbis zu 3 000 mg/dl keinen Einfluss auf dieErgebnisse, der größer als die Impräzisiondes Assays selbst ist.Alternative Probenarten: keinsignifikanter Effekt durch Heparin-Plasma.EDTA- und Natriumfluorid-Plasma sind indiesem Testsystem nicht empfehlenswert.Eine lineare Regressionsanalyse ergibtfolgende Gleichung:(Heparin) = 0,97 (Serum) + 0,51 ng/mlr = 0,969

Mittelwerte:4,7 ng/ml (Serum)5,1 ng/ml (Heparin)

Methodenvergleich: Der Assay wurdeunter Verwendung von 66Patientenproben mit dem IMMULITE C-Peptid verglichen. (Konzentrationsbereichca. 0,5 – 6,5 ng/ml. Siehe Grafik.) Einelineare Regressionsanalyse ergibtfolgende Gleichung:(IML 2000) = 0,97 (IML) + 0,16 ng/mlr = 0,990

Mittelwerte:2,84 ng/ml (IMMULITE 2000)2,76 ng/ml (IMMULITE)

AnwendungsberatungBei Rückfragen wenden Sie sich bitte anIhre DPC Niederlassung.Hergestellt von Euro/DPC Ltd. unter demQualitätssystem ISO 13485:2003.


Español

IMMULITE 2000 Péptido-CUtilidad del análisis: Para el diagnósticoin vitro con el Analizador IMMULITE2000— para la medida cuantitativa delPéptido-C en suero, plasma heparinizado,o urina, para su uso en diagnóstico in vitrocomo ayuda en el diagnóstico ytratamiento de los pacientes consecreción anormal de insulina.

Referencia: L2KPE2 (200 tests),L2KPE6 (600 tests)Código del Test: CPECódigo de Color: Gris Oscuro

Resumen y Explicación delTestEl Péptido-C humáno es una cadena de 31aminoácidos con un peso molecular deaproximadamente 3 020 daltons.Metabólicamente inerte, se origina en lascélulas β del páncreas como un subproductodel corte enzimático de la proinsulina.1,2,5 Eneste proceso, la insulina y el Péptido-C seseparan a partir de la prohormona y sesecretan a la circulación portal enconcentraciones equimoleculares.4,5,7 Eneste hecho redunda el interés clínico de ladeterminación en plasma del Péptido-C.Con limitaciones, los niveles de Péptido-Cpueden ser utilizados como un índicevalorable de secreción de insulina. Así, seesperarán bajos niveles de Péptido-Ccuando la secreción de insulina se veadisminuida, como en el caso de unadiabetes insulino-dependiente, o suprimida,como en una respuesta normal a laadministración de insulina exógena;mientras que valores altos de Péptido-Cpueden ser resultado de un incremento deactividad de las células β, como se observaen los insulinomas.3,4,6,9

Por consiguiente, en el diagnósticodiferencial de la hipoglucemia, lasdeterminaciones de Péptido-C pueden serutilizadas junto con las medidas deinsulina como un índice de actividadpancreática en el test clásico de 72 horasen ayuno, y como único indicador de laactividad pancreática cuando la insulinapor si sola es administrada para

comprobar el grado de supresión.1,8

Además, la auto-administraciónencubierta de insulina puede serprácticamente descartada como causa deuna hiperinsulinemia cuando seencuentran altos niveles dePéptido-C.2,3,8,9

Normalmente, en pacientes que llevan acabo un tratamiento con insulina, seencuentran anticuerpos anti-insulinacirculantes. Esto puede interferir con losinmunoensayos de insulina, haciendoimposible en este contexto lacuantificación de insulina para comprobarla actividad residual de las células β,incluso cuando el tratamiento haya sidosuspendido temporalmente. Por tanto, lascuantificaciones de Péptido-C pueden serutilizadas como un alternativa en estecontexto, para proporcionar informaciónadicional a la historia natural de unadiabetes insulino-dependiente, paramonitorizar indirectamente la secreción deinsulina en presencia de anticuerpo anti-insulina, y para ayudar a establecer unadecuado programa de tratamiento.3,6,7,10

El Péptido-C tambien puede ser utilizadocomo un medio adicional para evaluar latolerancia la glucosa y los test deglibenclamida-glucosa.2,3,10

Principio del TestIMMULITE 2000 Péptido-C es uninmunoensayo competitivoquimioluminiscente en fase sólida.Ciclos de incubación: 1 × 60 minutos.

Recogida de la muestra

Suero y Plasma heparinizadoEl paciente debe estar en ayunas.Recoger la sangre por venopunción,12

evitando la hemólisis, en tubos sinanticoagulante o con heparina, anotandola hora de recogida y proceder a laseparación del suero de las células.Se recomienda el uso de unaultracentrífuga para aclarar las muestraslipémicas.Las muestras hemolizadas podrían indicaruna mala manipulación de la muestraantes de ser recibida por el laboratorio; eneste caso, los resultados debeninterpretarse con precaución.


No se recomienda el uso de plasma conEDTA ni de plasma con fluoruro sódico eneste ensayo.La centrifugacion de las muestras desuero antes de que se forme el coagulopuede ocasionar la presencia de fibrina.Para evitar resultados erroneos debidos ala presencia de fibrina, asegurarse que seha formado el coagulo completamenteantes de centrifugar las muestras.Algunas muestras, particularmenteaquellas de pacientes sometidos a terapiaanticoagulante, pueden requerir mayortiempo de coagulacion.Los tubos para recoger sangre dedistintos fabricantes pueden producirvalores diferentes, dependiendo delmaterial del tubo y de los aditivos,incluyendo barreras de gel o barrerasfísicas, activadores de la coagulación y/oanticoagulantes. El Péptido-C IMMULITE2000 no ha sido analizado con todos losdistintos tipos de tubos. Para obtenerdetalles sobre los tipos tubos que se hananalizado, consulte la sección de Tipos deMuestras Alternativos.

Conservación: utilizar en las 2-3 horastras l arecogida de muestra, o mantenercongeladas a –20°C durante unasemana.11

Recogida de la Orina y Conservación:Recoger una muestra de orina de 24horas sin conservador, manteniendo lamuestra refrigerada a 2–8°C durante larecolección. Registrar el volumen totalrecogido y guardar una alícuota bienmezclada para analizar. Antes de analizar,aclarar la muestra por centrifugación ofiltración.Conservación: Para almacenamientoprolongado, alicuotar y congelar: estable a–20°C durante 30 dias.

Factor de dilución: por lo menos 5. Eluso de un factor de dilución de 20 darálugar a muestras de orina normales dentrodel rango de la calibración del análisis.(Para muestras de orina, elegir 5 o 20 enla ventana de Factor de Dilución.)

Volumen de Muestra75 µL de la muestra (suero, plasma, oorina).

Advertencias y precaucionesPara uso diagnóstico in vitro.Reactivos: Mantener a 2–8°C. Desecharde acuerdo con las normas aplicables.

Siga las precauciones universales ymanipule todos los componentes como sifueran capaces de transmitir agentesinfecciosos. Los materiales derivados desangre humana han sido analizados y sonnegativos para sífilis; para anticuerposfrente al HIV 1 y 2; para el antígeno desuperficie de hepatitis B y para losanticuerpos de hepatitis C.Se ha usado Azida sodica, enconcentraciones menores de 0,1 g/dl,como conservante. Para su eliminacion,lavar con grandes cantidades de aguapara evitar la constitucion de residuos deazidas metalicas, potencialmenteexplosivas, en las cañerias de cobre yplomo.Sustrato quimioluminiscente: evite lacontaminación y exposición a la luzdirecta del sol. (Ver el prospecto.)Agua: Use agua destilada o desionizada.

Materiales SuministradosLos componentes representan un juegocompleto. Las etiquetas incluidas en lacaja son necesarias para el ensayo.

Cartucho de bolas de Péptido-C(L2PE12)Con códigos de barras. 200 bolas,recubiertas con anticuerpo policlonal deconejo anti-Péptido-C. Estable a 2–8°Chasta la fecha de caducidad.L2KPE2: 1 cartucho.L2KPE6: 3 cartuchos.

Vial de Reactivo de Péptido-C (L2PEA2)Con códigos de barras. 17,5 ml confosfatasa alcalina (intestino de ternera)conjugada al Peptido-C en una solucióntampón. Guardar tapado y refrigerado:estable a 2–8°C hasta la fecha decaducidad.L2KPE2: 1 vial. L2KPE6 3 viales.Antes de usar, quitar la tira adhesiva de laparte superior sin dañar el código debarras. Quitar el precinto que cubren losorificios del vial; encajar la cubiertadeslizante en las rampas de la tapa delreactivo.


Ajustadores de Péptido-C (LPEL,LPEH)Dos viales (bajo y alto) de péptido Cliofilizado en albúmina humanatamponada, con conservante. Reconstituircada vial añadiendo 4,0 ml de aguadestilada. Mezcle por agitación o inversiónsuave. Deje reposar 30 minutos. Mezclepor agitación o inversión suave hasta quese haya disuelto completamente elmaterial liofilizado. Después de lareconstitución, alicuotar y congelar.Estable a –20°C durante 6 meses.L2KPE2: 1 juego. L2KPE6: 2 juegos.Antes de hacer un ajuste, colocar lasetiquetas a las alícuotas apropiadas(suministradas con el kit) sobre tubos deensayo, de forma tal que los códigos debarras puedan ser leídos por el lector.

Componentes del kit que sesuministran por separado

Diluyente de muestra de Péptido-C(L2PEZ)Para diluciones automaticas de muestrasde orina ó muestras de suero o plasma deelevada concentración. 25 ml de unconcentrado listo para su uso de albúminahumana tamponada libre de Péptido-Ccon conservante. Estable a 2–8°C durante30 días después de abrise, o hasta6 meses (alicuotados) a –20°C.Se suministran etiquetas con códigos debarras para usarse con este diluyente.Antes de uso, colocar la etiqueta con elcódigo de barras en un tubo de ensayo de16 × 100 mm, así los código de barraspueden ser identificados por el lector delinstrumento.L2PEZ: 3 etiquetasL2SUBM: Substrato quimioluminiscenteL2PWSM: Lavado de sondaL2KPM: Kit de limpieza de sondaLRXT: Tubos de reacción (desechables)L2ZT: 250 tubos del diluyente de muestra(16 × 100 mm)L2ZC: 250 tapones de los tubos deldiluyente de muestra.

PECM: Módulo Control de Péptido-C contres niveles.También necesariosAgua destilada o desionizada; tubos deensayo; controles.

EnsayoAviso: para obtener un funcionamientoóptimo, es importante realizar todos losprocedimientos del mantenimiento generalsegún lo definido en el manual deloperador de IMMULITE 2000.

Consulte el Manual del operador deIMMULITE 2000 para: la preparación,instalación, ajuste, ensayo yprocedimientos de control de calidad.Intervalo de ajuste: 2 semanas.

Muestras de Control de calidad: Usarcontroles o pools de suero con al menosdos niveles diferentes (bajo y alto) dePéptido-C.

Valores esperados

Suero y Plasma heparinizado:Las muestras del suero fueron recogidasa partir de 71 voluntarios en ayunas, yanalizadas por el procedimiento deIMMULITE 2000 Péptido-C, con unamediana de 2,1 ng/mL (0,7 nmol/L;695 pmol/L) y un rango de referencia 95%no paramétrico central de:

1,1 – 5,0 ng/ml(0,4 – 1,7 nmol/l; 364 – 1 655 pmol/lOrina: Media ± SD de 79 ± 56 µg/día, conun intervalo de 2 a 260 µg/día,representando un rango central 95% delas observaciones.Estos límites han de considerarse sólocomo una guía. Cada laboratorio deberáestablecer sus propios intervalos dereferencia.

LimitaciónesDebido a que el metabolismo delPéptido-C difiere del metabolismo de lainsulina, los niveles de Péptido-C son elmejor índice semicuantitativo de lasecrección de insulina. La vida media delPéptido-C plasmático está estimada en 30minutos, en comparación con los 5minutos de la insulina plasmática. Debidoa esta diferencia en su vida media, losniveles de Péptido-C plasmáticos soncinco veces más elevados que los deinsulina, aunque estas dos moléculas sesegreguen en cantidades equimolares.Además, el hígado es la principal vía dedegradación de la insulina, mientras queel Péptido-C se degrada y elimina por vía


renal. Las complicaciones hepáticas yrenales van a afectar a la proporciónPéptido-C/ Insulina.Los anticuerpos heterofílicos en el suerohumano pueden reaccionar con lasinmunoglobulinas de los componentes delensayo provocando interferencias con losinmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Las muestras de lospacientes que frecuentemente estánexpuestos a animales o a productosséricos animales pueden presentar estetipo de interferencia que potencialmenteocasione un resultado anómalo. Estosreactivos han sido formulados paraminimizar el riesgo de interferencia; noobstante, pueden darse interaccionesanómalas entre sueros conflictivos y loscomponentes del ensayo. Con fines dediagnóstico, los resultados obtenidos coneste ensayo siempre deben ser usados encombinación con el examen clínico, lahistoria médica del paciente y cualquierotro dato clínico relevante.

Características analíticasLos resultados de Péptido-C se expresancomo nanogramos por mililitro (ng/ml). Amenos que se especifique lo contrario,todos los resultados se obtuvieron conmuestras de suero recogidas en tubos sinanticoagulantes, geles separadores oaditivos promotores de la coagulación.Factors de Conversión:ng/ml × 0,331 → nmol/lng/ml × 331 → pmol/lIntervalo de calibración: 0,5 – 7 ng/ml(0,17 – 2,3 nmol/l; 166 – 2 317 pmol/l),(WHO 1st IRP 84/510)Sensibilidad: 0,3 ng/ml(0,10 nmol/l; 99 pmol/l)Precisión: Las muestras fueronprocesadas por duplicado durante 20 días,en dos tandas de trabajo por día, para untotal de 40 tandas y 80 replicados. (Véasela tabla "Precision").

Linealidad: las muestras fueronanalizadas con varias diluciones. (Véasela tabla "Linearity" para resultadosrepresentativos).

Recuperación: Se analizaron muestrassobrecargadas 1 en 19 con tres

soluciones de Péptido-C (15, 54 y112 ng/ml). (Ver la tabla "Recovery" pararesultados representativos).Especificidad: El anticuerpo es altamenteespecífico para Péptido-C. (Véase la tabla"Specificity").

Bilirrubina: La presencia de bilirrubina,en concentraciones hasta 200 mg/l, notienen ningún efecto sobre los resultadosen términos de precisión.

Hemolisis: La presencia de hemoglobina,en concentraciones hasta 381 mg/dl, notienen ningún efecto sobre los resultadosen términos de precisión.Lipemia: La presencia de lipemia, enconcentraciones hasta 3 000 mg/dl, notienen ningún efecto sobre los resultadosen términos de precisión.Tipo alternativo de muestra: Sin efectosignificativo para plasma heparinizado. Nose recomienda el uso de plasma conEDTA ni de plasma con fluoruro sódico eneste ensayo. Por regresión lineal:(Heparina) = 0,97 (Suero) + 0,51 ng/mlr = 0,969

Medias:4,7 ng/ml (Suero)5,1 ng/ml (Heparina)

Comparación de los métodos: Elensayo se ha comparado con elPéptido-C IMMULITE de DPC en 66muestras de pacientes. (Intervalo deconcentración: aproximadamente 0,5 a6,5 ng/ml. Ver la gráfico). Por regresiónlineal::(IML 2000) = 0,97 (IML) + 0,16 ng/mlr = 0,990

Medias:2,84 ng/ml (IMMULITE 2000)2,76 ng/ml (IMMULITE)

Asistencia técnicaPóngase en contacto con su DistribuidorNacional.Fabricado por EURO/DPC Ltd. bajo un Sistemade Calidad acorde con la ISO 13485:2003.


Français

IMMULITE 2000 C-PeptideDomaine d’utilisation : Dosagequantitatif du C-Peptide dans le sérum, leplasma hépariné ou l’urine. Ce test estréservé à un usage diagnostique in vitroavec l'Analyseur IMMULITE 2000 etconstitue une aide au diagnostic et autraitement de patients présentant unesécrétion anormale d'insuline.

Référence catalogue :L2KPE2 (200 tests), L2KPE6 (600 tests)Code produit : CPECode couleur : gris foncé

IntroductionLe C-Peptide humain est constitué d'unechaîne peptidique de 31 acides aminés,son poids moléculaire est d'environ 3 020daltons. Métaboliquement inerte, ilprovient des cellules β du pancréas où ilest issu du clivage enzymatique de la pro-insuline en insuline.1,2,5 Au cours de cetteréaction, l'insuline et le C-Peptide sontdonc libérés à partir de cette pro-hormoneet sécrétés dans la circulation portale àdes concentrations équimolaires.4,5,7 Cemode de sécrétion explique l’intérêtclinique de la détermination du taux de C-Peptide plasmatique.Dans certaines limites, le taux de C-Peptide peut donc constituer un indexvalable de la sécrétion d'insuline. Defaibles taux de C-Peptide seront ainsitrouvés lors d'une diminution de lasécrétion d'insuline dans le diabèteinsulino-dépendant, ou en l'absence detoute sécrétion, lors de l'apport d'insulineexogène. En revanche, des taux élevésde C-Peptide peuvent être le résultat del'augmentation de l'activité des cellules β observée dans les insulinomes.3,4,6,9

Par conséquent dans le diagnosticdifférentiel de l'hypoglycémie, le dosagedu C-Peptide, en complément du dosagede l'insuline, sera utilisé comme un indexde l'activité pancréatique dans un testclassique de diète de 72 heures et commele seul indicateur de l'activité pancréatiquelorsque l'insuline est administrée pourdéfinir le taux de suppression.1,8 Enfin,une administration cachée d'insuline peut

être virtuellement éliminée des causesd'hyperinsulinémie si le taux de C-Peptideest élevé.2,3,8,9

Des anticorps circulants anti-insuline sontfréquemment trouvés chez des patientssous traitement à l'insuline. Ces anticorpsinterfèrent dans le dosage de l'insuline,rendant alors impossible tout contrôle parle dosage de l’insuline de l'activitérésiduelle des cellules β, même si letraitement est suspendu temporairement.Le dosage du C-Peptide remplace alorsdans ce contexte celui de l'insuline etpermet de définir l'origine d'un diabèteinsulino-dépendant, de suivreindirectement la sécrétion d'insuline enprésence d'anticorps anti-insuline etd'aider à la mise en place d'un traitementapproprié.3,6,7,10

Le dosage du C-Peptide peut égalementpermettre d'évaluer la tolérance, lors destests au glucose et au glibenclamide –glucose.2,3,10

Principe du testLe test IMMULITE 2000 C-Peptide est unimmunodosage par compétition,chimiluminescent, en phase solide.Cycles d'incubation : 1 × 60 minutes.

Recueil des échantillons

Sérum et plasma hépariné:Le patient doit être à jeun. Prélever parponction12 veineuse, en évitantl’hémolyse, sur tubes secs (sansanticoagulant) ou sur tubes héparinés.Noter l'heure du prélèvement et séparer lesérum ou le plasma des cellules.Il est recommandé de clarifier leséchantillons hyperlipémiques parultracentrifugation.Des échantillons hémolysés peuvent êtrerévélateurs d’une préparation inadéquatedu prélèvement avant son envoi aulaboratoire ; il faudra donc interpréter lesrésultats avec prudence.Les plasmas EDTA et fluorure de sodiumne doivent pas être utilisés.La centrifugation des échantillonssériques avant la formation complète ducaillot peut entraîner la présence defibrine. Pour éviter les résultats erronésdûs à la présence de fibrine, s'assurer de


la formation complète du caillot avant decentrifuger les échantillons. Certainséchantillons, en particulier ceux provenantde patients sous anti-coagulants, peuventnécessiter un temps plus long pour laformation du caillot.Des tubes pour prélèvements sanguinsprovenant de fabricants différents peuventdonner des résultats différents, selon lesmatériaux et additifs utilisés, y comprisgels ou barrières physiques, activateursde la coagulation et/ou anticoagulants. Lecoffret C-Peptide IMMULITE 2000 n'a pasété testé sur tous les types de tubespossibles. Veuillez consulter le chapitreintitulé Autres Types d'Échantillons pourplus de renseignements sur les tubes quiont été évalués.Conditions de conservation : Doserdans les 2 à 3 heures suivantes ouconserver congelé à –20°C pendant 1semaine.11

Urine – Recueil des échantillons etConservation :Collecter les urines de 24 heures sansconservateur et conserver les échantillonsréfrigérés à +2–8°C durant leprélèvement. Inscrire le volume total desurines et conserver une partie bienhomogénéisée pour l'analyse. Avantd'effectuer le dosage, clarifier leséchantillons par une centrifugation ou parune filtration.

Conservation : Pour une conservationplus longue, aliquoter et congeler: stable30 jours à –20°C.Facteur de dilution : au moins 5.L'utilisation d'un facteur de dilution de 20amènera les échantillons d'urine normauxdans le domaine de mesure du dosage.(Pour les échantillons d’urine, choisir 5 ou20 dans la fenêtre Facteur de Dilution.)

Volume nécessaire :75 µl de sérum, de plasma ou d’urine.

Précautions d’emploiRéservé à un usage diagnostique in vitro.Réactifs : conserver les réactifs à +2/+8 °C. Eliminer les déchets conformémentà la réglementation en vigueur.

Respecter les précautions d’emploi etmanipuler tous les composants du coffretcomme des produits potentiellement

infectieux. Les réactifs dérivés de produitshumains et utilisés dans ce coffret ont subiun test sérologique pour la Syphilis et destests de dépistage pour les anticorps anti-VIH1 et 2, anti-HCV et pour l’antigène desurface de l’hépatite B, qui se sont tousavérés négatifs.De l’azide de sodium à des concentrationsinférieures à 0,1 g/dl a été ajouté commeconservateur ; lors de l’élimination,l’évacuer avec de grandes quantités d’eaupour éviter une accumulation d’azidesmétalliques explosifs dans lescanalisations.Substrat chimiluminescent : éviter lacontamination et l’exposition directe ausoleil. (Voir notice).

Eau : utiliser de l’eau distillée oudésionisée.

Matériel fourniLes composants de la trousse ne peuventêtre utilisés que conjointement. Lesétiquettes à l’intérieur du coffret sontnécessaires au dosage.

Cartouche de billes C-Peptide (L2PE12)Avec code-barres. 200 billes revêtues d’unanticorps polyclonal de lapin anti-C-Peptide. Stable à +2°C/+8°C jusqu’à ladate de péremption.L2KPE2 : 1 cartouche.L2KPE6 : 3 cartouches.

Cartouche à réactif C-Peptide (L2PEA2)Avec code-barres. 17,5 ml de C-Peptidemarqué à la phosphatase alcaline(intestins de veau) dans un tampon.Stableà +2°C/+8°C jusqu’à la date depéremption.L2KPE2 : 1 cartouche.L2KPE6 : 3 cartouches.Avant l’emploi, retirer la partie supérieurede l’étiquette au niveau des perforationsen ayant soin de ne pas endommager lecode-barres. Retirer le film protecteursitué sur la partie supérieure de lacartouche-réactif ; insérer le couverclecoulissant entre les glissières sur ledessus de la cartouche-réactif.

Ajusteurs C-Peptide (LPEL, LPEH)2 flacons ("Haut" et "Bas") de C-Peptidelyophilisé dans de l'albumine humainetamponnée. Reconstituer chaque flaconavec 4,0 ml d'eau distillée ou désionisée.


Laisser reposer 30 mn. Agiter doucementjusqu’à complète dissolution du produitlyophilisé. Après reconstitution, aliquoteret congeler. Stable à –20 °C pendant6 mois. Jeter les aliquots après utilisationL2KPE2 : 1 jeu. L2KPE6 : 2 jeux.Avant de procéder à un ajustement, placerles étiquettes correspondant à l’aliquot(fournies avec le coffret) sur des tubes àessai de sorte que les code-barres soientlisibles par le lecteur.

Composants du coffret fournisséparément

Diluant C-Peptide (L2PEZ)Pour la dilution à bord des échantillonsd’urine et des échantillons desérum/plasma de concentration élevée.25 ml d’un concentré prétraité, prêt àl’emploi, composé d’albumine humainetamponnée sans C-peptide avecconservateur. Stable à +2°C/+8°Cpendant 30 jours après ouverture ou6 mois (aliquoté) à -20 °C.

Les étiquttes code-barres sont fourniesavec le Diluant. Avant utilisation placerl'étiquette appropriée sur un tube de16 x 100 mm de telle façon que le code-barre puisse être lu par le lecteur del'appareil.L2PEZ : 3 étiquettes.

L2SUBM : Substrat chimiluminescentL2PWSM : Solution de lavageL2KPM : Coffret de décontamination del’aiguille de prélèvementLRXT : Godets réactionnels (jetables)L2ZT : 250 Tubes À essai De Diluantéchantillon (16 × 100 mm)L2ZC : 250 Chapeaux De Tube DeDiluantPECM : Contrôle C-Peptide à troisniveaux.Egalement requisEau distillée ou désionisée ; tubes ;contrôles.

Protocole de dosageNoter que pour des performancesoptimales, il est important de réalisertoutes les procédures de maintenance deroutine selon les instructions du Manueld'Utilisation IMMULITE 2000.Voir le manuel d’utilisation del’IMMULITE 2000 pour la préparation, le

démarrage du système, les ajustements,le dosage et les procédures de contrôlede qualité.Intervalle d’ajustement : 2 semaines.Echantillons pour le contrôle de qualité :Utiliser des contrôles ou des pools desérums avec au moins deux niveaux deconcentration (faible ou élevé) de C-Peptide.

Valeurs attendues

Sérum et plasma hépariné :Des échantillons de sérum provenant de71 volontaires à jeun ont été analysés parle dosage IMMULITE 2000 C-Peptide,avec une médiane de 2,1 ng/mL(0,7 nmol/L; 695 pmol/L) et un domaine deréférence non paramétrique centré à 95%de :1,1 – 5,0 ng/ml(0,4 – 1,7 nmol/l; 364 – 1 655 pmol/l)

Urine : Moyenne ± SD de 79 ± 56 µg/jour,avec un domaine de 2 à 260 µg/jour,représentant le domaine central à 95%des observations.

Ces valeurs sont fournies à titre indicatifuniquement. Chaque laboratoire devraitétablir ses propres valeurs de référence.

LimitesPuisque le métabolisme du C-Peptide estdifférent de celui de l'insuline, les taux duC-Peptide représentent un index semi-quantitatif de la sécrétion d'insuline. Eneffet, la demi-vie du C-Peptide dans leplasma est approximativement de 30minutes et celle de l'insuline n'est que de5 minutes. Pour cette raison, le tauxplasmatique circulant du C-Peptide estgrossièrement 5 fois celui de l'insulinebien que les deux molécules soientsécrétées selon un rapport équimolaire.Une fois encore, le foie joue un rôlemajeur dans la clairance de l'insuline,alors que le C-Peptide est dégradé etéliminé principalement au niveau rénal.Par conséquent, les complications rénalesou hépatiques affectent le ratio C-Peptide/Insuline circulant.Les anticorps hétérophiles du sérumhumain peuvent réagir avec lesimmunoglobulines faisant partie descomposants du coffret et interférer avecles immunodosages in vitro. [Voir Boscato


LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Les échantillonsprovenant de patients fréquemmentexposés aux animaux ou aux produitssériques d'origine animale peuventprésenter ce type d'interférence pouvantpotentiellement donner un résultatanormal. Ces réactifs ont été mis au pointafin de minimiser le risque d'interférence,cependant des interactions potentiellesentre des sérums rares et les composantsdu test peuvent se produire. Dans un butdiagnostique, les résultats obtenus avecce dosage doivent toujours être utilisés enassociation avec un examen clinique,l'histoire médicale du patient et d'autresrésultats.

Performances du testConsulter les tableaux et graphiques pourobtenir les données représentatives desperformances du test. Les résultats sontdonnés en ng/mL. (En l’absence deprécision supplémentaire, tous lesrésultats ont été obtenus sur deséchantillons sériques prélevés sur tubessans gel, ni activateur de la coagulation).Facteurs de conversion :ng/ml × 0,331 → nmol/l.ng/ml x 331 → pmol/l.Domaine de mesure : 0,5 – 7 ng/ml(0,17 to 2,3 nmol/l; 166 – 2 317 pmol/l).Standardisé par rapport au 1st IRP 84/510de l’OMS.

Sensibilité analytique : 0,3 ng/ml(0,10 nmol/l ; 99 pmol/l).Précision : les valeurs ont été établies àpartir de doublets dosés dans deux sériesdifférentes chaque jour pendant 20 jourssoit au total 40 séries et 80 résultats. (Voirle tableau “ Precision ”.)Linéarité : les échantillons ont été testésavec des taux de dilution variés (Voir letableau “ Linearity ” pour des donnéesreprésentatives.)Récupération : les échantillons testés ontété chargés dans un rapport de 1 à 19avec trois solutions (15, 54 et 112 ng/ml).(Voir le tableau “ Recovery ” pour desdonnées représentatives.)Spécificité : L’anticorps est hautementspécifique du C-Peptide. (Voir le tableau

“ Specificity ” pour des donnéesreprésentatives.)

Bilirubine : La présence de bilirubine neprésente aucun effet sur les résultats nisur la précision du dosage si laconcentration ne dépasse pas 200 mg/l.

Hémolyse : La présence d'hémoglobinene présente aucun effet sur les résultats nisur la précision du dosage si laconcentration ne dépasse pas 381 mg/dl.

Lipémie : La présence de lipémie neprésente aucun effet sur les résultats nisur la précision du dosage si laconcentration ne dépasse pas3 000 mg/dl.

Utilisation de différents typesd'échantillons : aucun effet significatifpour le plasma hépariné. Les plasmasEDTA et fluorure de sodium ne doiventpas être utilisés. Par régression linéaire :(Héparine) = 0,97 (Sérum) + 0,51 ng/mlr = 0,969

Moyennes :4,7 ng/ml (Sérum)5,1 ng/ml (Héparine)

Comparaison de méthodes : le test a étécomparé au test IMMULITE C-Peptide deDPC sur 66 échantillons (dont lesconcentrations allaient d’environ 0,5 –6,5 ng/ml. Voir graphique.) Par régressionlinéaire :(IML 2000) = 0,97 (IML) + 0,16 ng/mlr = 0,990

Moyennes :2,84 ng/ml (IMMULITE 2000)2,76 ng/ml (IMMULITE)

Assistance techniqueContacter votre distributeur national. EnFrance distribué par DPC France 90 bdNational 92257 La Garenne-Colombes.Fabriqué par EURO/DPC Ltd. dans le cadred’un Système Qualité enregistré sousISO 13485:2003.

Italiano

IMMULITE 2000 C-PeptideUso: A solo uso diagnostico in vitro conl’analizzatore IMMULITE 2000 — per lamisurazione quantitativa del C-Peptide nelsiero, nel plasma eparinizzato o nell’urina,


quale ausilio nella diagnosi e neltrattamento di pazienti con una secrezioneanomala di insulina.Numero di Codice: L2KPE2 (200 test),L2KPE6 (600 test)Codice del Test: CPEColore: Grigio Scuro

Riassunto e Spiegazione delTestIl C-peptide umano è costituito da unacatena di 31 aminoacidi con una massamolecolare di circa 3 020 dalton.Metabolicamente inerte, ha origine nellecellule pancreatiche β quale sottoprodottodella scissione enzimatica dallaproinsulina all’insulina.1,2,5 In questoprocesso, l’insulina ed il C-peptide sonodivisi dal proormone e distribuiti nel circoloportale in concentrazioni equimolari.4,5,7 E’questo fatto che sottolinea l’interesseclinico nelle determinazioni del C-Peptide.

Entro dei limiti, i livelli di C-peptidepossono servire come indice importante disecrezione dell’insulina. Per questomotivo, sono da attendersi livelli bassi diC-Peptide nei casi in cui la secrezionedell’insulina sia diminuita, come neldiabete insulino-dipendente, o soppressi,quale risposta normale all’insulinaesogena; mentre livelli elevati di C-peptidepossono essere causati dall’aumentodell’attività delle cellule-β osservatonell’insulinoma.3,4,6,9

Per questo motivo, nella diagnosidifferenziale di ipoglicemia, ledeterminazioni del C-Peptide possonoessere utilizzate in aggiunta allemisurazioni dell’insulina quale indicedell’attività pancreatica nel classico testdel digiuno di 72 ore, e come unicoindicatore dell’attività pancreatica nei casiin cui l’insulina stessa vengasomministrata per controllare lasoppressione.1,8 Inoltre,l’autosomministrazione celata di insulinapuò essere virtualmente eliminata comecausa di iperinsulinemia mediante lascoperta di un livello di C-peptideelevato.2,3,8,9

Anticorpi anti-insulina circolanti sonospesso riscontrati in pazienti sottoposti aterapia con insulina. Di solito questiinterferiscono con gli immunodosaggi dellainsulina, rendendo impossibile l’uso delle

determinazioni di insulina in questocontesto per controllare l’attività residuadelle cellule-β, anche se il trattamentofosse temporaneamente sospeso. Perquesto motivo, le misurazioni del C-peptide sono state utilizzate comealternativa in questo contesto, perottenere informazioni sull’andamento deldiabete insulino-dipendente, percontrollare indirettamente la secrezione diinsulina in presenza di anticorpi anti-insulina, e per aiutare nella scelta dellaterapia idonea.3,6,7,10

Il C-Peptide è stato misurato anche comeulteriore strumento di valutazione dellatolleranza al glucosio e nei dosaggi delglibenclamide-glucosio.2,3,10

Principio del MetodoIl dosaggio IMMULITE 2000 C-Peptide èun dosaggio immunoenzimaticocompetitivo chemiluminescente in fasesolida.Cicli d'incubazione: 1 × 60 minuti.

Raccolta del Campione

Siero e plasma eparinizzato:Il paziente deve essere a digiuno.Effettuare il prelievo di sangue,12 evitandol’emolisi, in provette semplici (senzaanticoagulante) o in provette eparinizzate,annotando l’ora del prelievo, e separare ilsiero o il plasma dalle cellule.Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifugaper schiarire i campioni lipemici.I campioni emolizzati posson indicare iltrattamento non idoneo del campioneprima dell’arrivo al laboratorio; per questomotivo, i risultati devono essereinterpretati con prudenza.

Non si consiglia l’utilizzo di plasma EDTAe di fluoruro di sodio.

La centrifugazione di campioni di sieroprima che la coagulazione sia completapuò produrre fibrina. Per evitare risultatierrati dovuti alla presenza di fibrina,assicurarsi che il processo dicoagulazione sia completo prima dicentrifugare i campioni. Alcuni campioni,in modo particolare quelli di pazientisottoposti a terapia con anticoagulanti,possono richiedere tempi di coagulazionepiù lunghi.


Provette per il prelievo di sangue diproduttori diversi possono dare valoridifferenti, a seconda dei materiali e degliadditivi usati, incluso gel o barriere fisiche,attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.L'IMMULITE 2000 C-Peptide non é statoverificato con tutte le possibili variazioni ditipi di provette. Consultare la sezioneriguardante Campioni Alternativi perdettagli sulle provette testate.Conservazione: I campioni di siero e diplasma non analizzati entro 2–3 orepossono essere congelati a –20°C peruna settimana.11

Urina – Raccolta e Conservazione:Prelevare le urine nelle 24 ore, senzaconservanti, mantenendo il campionerefrigerato a 2–8°C durante il prelievo.Annotare il volume totale del prelievo econservare un’aliquota ben mescolata perl’analisi. Prima del dosaggio, schiarire ilcampione attraverso centrifugazione efiltrazione.

Conservazione: Per una conservazioneprolungata: aliquotare e congelare: stabilea –20°C per 30 giorni.Fattore di diluizione: almeno 5. L’utilizzodi un fattore di diluizione di 20 porterà icampioni di urine normali entro il range dicalibrazione del test. (Per i campioni diurina, scegliere 5 o 20 nella finestra delFattore di Diluizione.)Volume Richiesto:75 µl di siero, plasma, o urina.

Avvertenze e PrecauzioniAd uso diagnostico in vitro.Reagenti: Conservare i reagenti a 2–8°C.Eliminare in conformità alle leggi vigenti.Seguire le precauzioni generali emanipolare tutti i componenti come sefossero potenzialmente infetti. I materialiderivati dal sangue umano sono statitestati con esito negativo per la Sifilide, gliAnticorpi anti-HIV 1 e 2, l'Antigene diSuperficie dell'Epatite B e gli anticorpiAnti-Epatite C.

E' stata aggiunta Sodio Azide aconcentrazioni inferiori a 0,1 g/dL comeconservante. Al momentodell'eliminazione, irrorare con molta acquaper evitare la formazione di azidimetalliche potenzialmente esplosive nelletubature di piombo e di rame.

Substrato Chemiluminescente: Evitarela contaminazione e l'esposizione alla lucesolare diretta. (Vedi metodica.)Acqua: Utilizzare solo acqua distillata odeionizzata.

Materiali FornitiI componenti costituiscono un unico set.Le etichette all'interno della confezionesono necessarie per eseguire i dosaggi.

Contenitore di Sferette C-Peptide(L2PE12)Con codice a barre. 200 sferette coattatecon un anticorpo policlonale di coniglio anti-C-peptide. Stabile a 2–8°C fino alla data discadenza.L2KPE2: 1 confezione.L2KPE6: 3 confezioni.

Porta Reagente C-Peptide (L2PEA2)Con codice a barre. 17,5 ml di fosfatasialcalina (intestino di vitello) coniugata conC-peptide in un tampone. Conservare nelfrigorifero chiuso: stabile a 2–8°C fino alladata di scadenza.L2KPE2: 1 Porta Reagente.L2KPE6: 3 Porta Reagenti.Prima dell’utilizzo rimuovere la partesuperiore dell'etichetta lungo laperforazione senza danneggiare il codicea barre. Togliere il foglio protettivo dallaparte superiore del flacone. Far scattarenella corretta posizione il coperchioscorrevole lungo le guide del coperchiodel reagente.

Calibratori C-Peptide (LPEL, LPEH)Due flaconi (uno Basso e uno Alto) diC-Peptide liofilo in un tampone dialbumina umana. Ricostituire ogni flaconecon 4,0 ml di acqua distillata odeionizzata. Lasciar riposare per 30minuti. Mescolare agitando delicatamenteo invertendo la miscela finchè il materialeliofio sia completamente dissolto. Dopo laricostituzione, aliquotare e congelare.Stabile a –20°C per 6 mesi. Scartare lealiquote dopo l’uso.L2KPE2: 1 set. L2KPE6: 2 set.Prima di ricalibrare collocare le etichettegiuste sulle provette delle aliquote (fornitecol kit) cosicché i codici a barre possanoessere registrati dal lettore.


Componenti del kit fornitiseparatamente

Diluente del C-Peptide (L2PEZ)Per la diluizione interna dei campioni diurina e dei campioni elevati disiero/plasma. 25 ml di un tampone dialbumina umana concentrata eprocessata (pronta all'uso) priva di C-peptide con conservanti. Stabile a 2–8°Cper 30 giorni dopo l’apertura, o per 6 mesi(aliquotato) a –20°C.

Vengono Fornite Le provette da utilizzarsicon il diluente. Prima dell'utilizzo,collocare una etichetta appropriata su unaprovetta 16 × 100 mm, cosicchè il codicea barre possa essere letto dal lettoreinternoL2PEZ: 3 etichetteL2SUBM: Substrato ChemiluminescenteL2PWSM: Tampone di lavaggio dell’AgoL2KPM: Kit di Pulizia dell'AgoLRXT: Tubi di Reazione (monouso)L2ZT: 250 Provette (16 x 100 mm) perDiluente del CampioneL2ZC: 250 Tappini per Provette perDiluente del CampionePECM: Controllo C-Peptide tri-levello

Materiali richiestiAcqua distillata o deionizzata; provette divetro; controlli.

Procedura del DosaggioAttenzione: per avere prestazioni ottimali,è importante effettuare le procedure dimanutenzione di routine cosiccomedefinito nel Manuale dell'Operatoredell'IMMULITE 2000.

Consultare il Manuale d'Uso dellostrumento IMMULITE 2000 per:preparazione, messa a punto, diluizioni,calibrazione, dosaggi e procedure dicontrollo di qualità.Intervallo di ricalibrazione: 2 settimane.

Controllo di Qualità: Utilizzare controlli opool di sieri con almeno due livelli (Alto eBasso) di C-Peptide.

Valori Attesi

Siero e plasma eparinizzato:I campioni di siero sono stati prelevati da71 volontari a digiuno ed analizzati con ildosaggio IMMULITE 2000 C-Peptide, con

la un valore mediano di 2,1 ng/ml(0,7 nmol/L; 695 pmol/L) e un range diriferimento non parametrico centrale 95%di:1,1 – 5,0 ng/ml(0,4 – 1,7 nmol/l; 364 – 1 655 pmol/l)

UrinaMedia ± SD di 79 ± 56 µg/giorno, con unrange da 2 a 260 µg/giorno cherappresenta un range centrale del 95%delle osservazioni.Detti valori dovrebbero essere consideratisolo come suggerimento. Ogni laboratoriodovrebbe stabilire i propri range diriferimento.

LimitiPoiché il metabolismo del C-peptidedifferisce dal metabolismo dell’insulina, ilivelli di C-peptide sono un indice semi-quantitativo della secrezione di insulina. E’stata stimata l’emivita del C-peptide nelplasma di circa 30 minuti, paragonata acirca 5 minuti dell’insulina. A causa delladifferenza nell’emivita, il C-peptide circolanel plasma ad un livello cinque voltesuperiore a quello dell’insulina, anche sele due molecole sono secrete in rapportoequimolare. E’ chiaro che il fegato ha unruolo chiave nell’eliminazione dell’insulina,mentre il C-peptide viene rimossomediante degradazione ed eliminazioneprincipalmente attraverso i reni. Perquesto motivo, complicazioni epatiche erenali avranno un effetto sul rapporto C-peptide/insulina circolante.

Gli anticorpi eterofili presenti nel sieroumano possono reagire con leimmunoglobuline presenti nellecomponenti del dosaggio provocandoun'interferenza con i dosaggi in vitro. [VediBoscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Campioni di pazienti routinariamenteesposti agli animali o a prodotti derivati dasiero di animali possono presentarequesto tipo di interferenza causapotenziale di risultati anomali. Questireagenti sono stati formulati perminimizzare il rischio di interferenze,tuttavia, possono verificarsi interazionipotenziali tra sieri rari e componenti deltest. A scopo diagnostico, i risultati ottenutida questo dosaggio devono sempre


essere utilizzati unitamente all'esameclinico, all'anamnesi del paziente e adaltre indagini di laboratorio.

Prestazioni del DosaggioVedere le tabelle ed i grafici per datirappresentativi delle prestazioni deldosaggio. I risultati sono espressi inng/mL. (Se non diversamente specificato,tutti i risultati sono stati generati sucampioni di siero, prelevati in provettesenza anticoagulanti, barriere di gel oadditivi che favoriscano la formazione dicoaguli).Fattore di Conversione:ng/ml × 0,331 → nmol/Lng/ml × 331 → pmol/LRange di calibrazione: 0,5 – 7 ng/mL(0,17 to 2,3 nmol/l; 166 – 2 317 pmol/L),(WHO 1st IRP 84/510)

Sensibilità analitica: 0,3 ng/mL(0,10 nmol/L; 99 pmol/L)Precisione: I campioni di siero sono statidosati in duplicato nel corso di 20 giorni,due sedute al giorno, per un totale di 40sedute ed 80 replicati. (Vedere la tabella“Precision”)Linearità: Sono stati dosati campioni invarie forme diluite. (Vedi la Tabella"Linearity" per dati rappresentativi.)Recupero: Sono stati dosati campioni1:19 ai quali sono state aggiunte tresoluzioni (15, 54 e 112 ng/ml). (Vedi laTabella "Recovery" per datirappresentativi.)Specificità: L’anticorpo è molto specificoper il C-Peptide. (Vedere la tabella"Specificity")Bilirubina: La presenza di bilirubina inconcentrazioni fino a 200 mg/L non hanessun effetto sui risultati entro il range diprecisione del dosaggio.Emolisi: La presenza di emoglobina inconcentrazioni fino a 381 mg/dL non hanessun effetto sui risultati entro il range diprecisione del dosaggio.

Lipemia: La presenza di lipemia inconcentrazioni fino a 3 000 mg/dL non hanessun Effetto sui risultati entro il range diprecisione del dosaggio.

Tipo di Campione Alternativo: Nessuneffetto significativo per il plasmaeparinizzato. Non si consiglia l’utilizzo di

plasma EDTA e di fluoruro di sodio conquesto dosaggio. Mediante regressionelineare:(Eparina) = 0,97 (Siero) + 0,51 ng/mLr = 0,969

Valore Medio:4,7 ng/mL (Siero)5,1 ng/mL (Eparina)

Comparazione di Metodi: Il dosaggio èstato comparato al dosaggio IMMULITEC-Peptide della DPC su 66 campioni disiero e di urina. (Range di concentrazione:0,5 – 6,5 ng/ml. Vedi grafico.) Conregressione lineare:(IML 2000) = 0,97 (IML) + 0,16 ng/mlr = 0,990

Valore Medio:2,84 ng/ml (IMMULITE 2000)2,76 ng/ml (IMMULITE)

Assistenza TecnicaAll'estero: Si prega di contattare il proprioDistributore DPC Nazionale.Prodotto dalla EURO/DPC Ltd. nell’ambito di unSistema di Qualità Certificato ISO 13485:2003.

Português

IMMULITE 2000Péptido-CUtilização: Para o doseamento in vitro dePeptido C em soro, plasma heparinizadoou urina, no auxílio ao diagnóstico etratamento de doentes com secreçãoanormal de insulina, em conjunto com oAnalisador IMMULITE 2000.

Números de catálogo:L2KPE2 (200 testes) L2KPE6 (600 testes)Código do teste: CPECor: Cinzento escuro

Sumário e explicação do testeO Péptido-C humano é uma cadeia de 31aminoácidos com uma massa molecularde aproximadamente 3 020 daltons.Metabólicamente inerte,tem origem nas β-células pancreáticas como um subprodutoda segmentação enzimática de pró-insulina para insulina.1,2,5 Neste processo,a insulina e o Peptido C são separados dapró-hormona e segregados na circulação


portal em concentrações equimolares.4,5,7

É este factor que determina a base dointeresse clínico nas determinações noplasma do Péptido-C.Dentro de certos limites, os níveis dePéptido-C podem actuar como um índicevalioso para a secreção de insulina. Destemodo, esperam-se baixos níveis dePéptido-C onde a secreção de insulinaestiver diminuída, como no caso dediabetes dependente de insulina, ousuprimida, como resposta normal àinsulina exógena; enquanto níveiselevados de Péptido-C podem resultar doaumento de actividade das β-célulasobservado em insulinomas.3,4,6,9

Deste modo, no diagnóstico diferencial dehipoglicémia, as determinações doPéptido-C podem ser utilizadas paracomplementar medições de insulina comoum índice da actividade pancreática noclássico teste de jejum de 72 horas, ecomo o único indicador de actividadepancreática onde a própria insulina fôradministrada para verificar asupressibilidade.1,8 Além disso, a auto-administração dissimulada de insulinapode ser praticamente excluída como acausa de hiperinsulinémia peladescoberta de um nível elevado dePéptido-C.2,3,8,9

Os anticorpos anti-insulina circulantes sãonormalmente encontrados em doentesque se submeteram à terapia de insulina.Estes anticorpos poderiam tipicamenteinterferir com imunoensaios para insulina,impossibilitando o uso de medições deinsulina neste contexto para verificar aactividade residual de β-células, mesmose o tratamento fosse suspensotemporariamente. Deste modo, asmedições de Péptido-C têm sido utilizadascomo uma alternativa neste contexto, paraproduzir informações sobre a histórianatural de diabetes dependente deinsulina, para monitorizar indirectamente asecreção de insulina na presença deanticorpos anti-insulina, e para auxiliar nadeterminação de um tratamentoadequado. 3,6,7,10

O Péptido-C também é medido comomeio adicional para avaliar a tolerância àglicose e testes de glicose-glibenclamide.2,3,10

Princípio do procedimentoO IMMULITE 2000 C-Péptido é umimunoensaio competitivo de fase sólida,de enzimas quimico-luminosas.Ciclos de incubação: 1 × 60 minutos.

Colheita

Soro e Plasma heparinizado:O doente deve estar em jejum. Tirarsangue da veia,12 evitando hemólise, emtubos simples (sem anticoagulante) outubos heparinizados, anotando a hora, eseparando o soro ou plasma das células.Recomenda-se o uso de uma ultracentrífuga para clarear amostraslipémicas.Amostras hemolisadas podem indicartratamento incorrecto de uma amostraantes do envio para o laboratório; portantoos resultados devem ser interpretadoscom cuidado.Plasma EDTA e plasma de fluoreto desódio não são apropriados para uso.

A centrifugação de amostras de soroantes da formação completa do coágulopode resultar na presença de fibrina. Paraprevenir resultados errados devido àpresença de fibrina, certifique-se que aformação do coágulo foi completa antesda centrifugação das amostras. Algumasamostras, em especial as de doentes querecebem terapia anticoagulante podemrequerer um maior tempo de formação docoágulo.Os tubos para colheita sanguínea dediferentes fabricantes, podem originardiferentes valores, dependendo dosmateriais e aditivos, incluíndo gel oubarreiras fisicas, activadores do coáguloe/ou anti coagulantes. IMMULITE 2000Péptido-C não foram ainda testados comtodas as possiveis variações originadaspelos tipos de tubos. Consultar a secçãoTipos de Amostras Alternativas para obterdetalhes sobre os tubos que foramtestados.Estabilidade: Amostras de soro e plasmanão doseadas dentro de 2–3 horas podemser armazenadas congeladas a –20°C até1 semana.11


Urina – Colheita e Armazenamento:Colher urina de 24 horas, semconservante mantendo o espécimenrefrigerado a uma temperatura de 2–8ºCdurante a colheita. Registar o volume totalda colheita e reter uma alíquota bemmisturada para análise. Antes do ensaio,clarificar a amostra por centrifugação oufiltração.Estabilidade: Para armazenamento porperíodos maiores, separe em alíquotas econgele: estável por 30 dias a –20°C.Fator de dilução: use pelo menos 5.Usando um fator de diluição de 20 vezestrará as amostras de urinas normaisdentro da calibracao. (Para amostras deurina, selecione o fator de 5 ou 20 najanela de Fator de Dilução.)Volume de amostra: 75 µL de amostrade doente.

PrecauçõesPara uso de diagnóstico in vitro.Reagentes: Manter a 2–8°C. Elimine deacordo com as normas aplicadas.

Manipule com as devidas precauçõestodos os materiais capazes de transmitirdoenças infecciosas. As matérias primasobtidas de soro humano foram testadas,dando resultados negativos para a sífilis,para os anticorpos do vírus daimunodeficiência humana (HIV) 1 e 2;para o antigénio de superfície da hepatiteB (HBsAg) e para os anticorpos do vírusda hepatite C.

Azida de sódio, com concentraçõesmenores que 0,1 g/dL, foi adicionada acertos componentes como conservante.Ao eliminar, dilua com grandes volumesde água para evitar a acumulação deazidas metálicas explosivas emcanalizações de chumbo e cobre.Substrato quimioluminescente: Evitecontaminação e exposição à luz directa(ver bula).Água: Utilize água destilada oudesionizada.

Materiais fornecidosOs componentes formam um conjunto unoe indivisível. Os códigos de barras nointerior das caixas são necessários para oensaio.

Embalagem de pérolas de Péptido-C(L2PE12)Com código de barras. Contém 200esferas revestidas com anti-Péptido-Cpoliclonal de coelho. Estável até a data devalidade a 2–8°C.L2KPE2: 1 embalagem.L2KPE6: 3 embalagens.

Embalagem de reagentes de Péptido-C(L2PEA2)Com código de barras. 17,5 mL defosfatase alcalina (de intestino de vitela)conjugada com Péptido-C tamponizado.Estável até à data de validade a 2–8°C.L2KPE2: 1 embalagem.L2KPE6: 3 embalagens.

Antes de utilizar, retire a etiqueta deprotecção da tampa deslizante; levante atampa,remova o remanescente daetiqueta com o cuidado de não danificar ocódigo de barras. Remova o selo dealumínio do topo da embalagem, encaixea tampa deslizante nas ranhuras everifique se a tampa desliza.

Ajustes de Peptido-C (LPEL, LPEH)Contém dois frascos (nível alto e baixo) dePeptídeo C liofilizado em albuminahumana tamponizada. Reconstitua cadafrasco com 4,0 mL de água destilada oudesionizada. Deixe repousar durante 30minutos. Misture por inversão oumovimentos lentos até o materialliofilizado dissolver completamente. Apósreconstituição, divida em alíquotas econgele. Estável por 6 meses a –20°C.Rejeite as alíquotas após uso.L2KPE2: 1 conjunto.L2KPE6: 2 conjuntos.Antes de realizar qualquer ajuste, coloqueas etiquetas da alíquota apropriadas(fornecidas com o "kit") em tubos deamostra de forma que os códigos debarras possam ser lidos pelo dispositivode leitura do aparelho.

Componentes do kit fornecidosseparadamente

Diluente de amostra para Péptido-C(L2PEZ)Para a diluição a bordo de amostras deurina o amostras de soro o plasmaelevadas. 25 ml de concentrado (pronto ausar), processado, constituido poralbumina humana em tampão livre de


Péptido-C, com conservante. Estável,após a abertura, durante 30 dias a 2–8°C,ou por 6 meses (aliquotado) a –20°C.Elimine de acordo com as normasaplicadas.

Etiquetas de código de barras sãofornecidas para usar com o diluente.Antes de usar, colocar a etiquetaapropriada num tubo de teste(16 × 100 mm) de modo a que o códigode barras possa ser lido pelo dispositivode leitura do aparelho.L2PEZ: 3 etiquetas

L2SUBM: Substrato quimioluminescenteL2PWSM: Solução de lavagemL2KPM: Kit de limpeza do pipetadorLRXT: Tubos de reacção (descartáveis)L2ZT: 250 Tubos de diluente da amostra(16 x 100 mm)L2ZC: 250 Tampas para tubos de diluenteda amostraPECM: Controlo de três níveis dePéptido-CTambém necessário:Água destilada ou desionizada; tubos deamostra; controlos.

DoseamentoTêr em atenção que para obter umdesempenho óptimo, é importanteefectuar todos os procedimentos demanutenção de rotina conforme definidono Manual de Operador do IMMULITE2000.

Ver o manual do operador do SistemaIMMULITE 2000 para instruções sobrepreparação, ajuste, doseamento eprocedimentos de controlo de qualidade.Intervalo entre ajustes: 2 semanas.Amostras de controlo de qualidade:utilize controlos ou "pools" com, pelomenos, dois níveis (alto e baixo) dePéptido-C.

Valores de Referência

Soro e Plasma heparinizado:As amostras do serum foram coletadas de71 voluntários fasting do laboratório eanalisadas pelo procedimento deIMMULITE 2000 C-Peptide, com onúmero médio de 2,1 ng/mL (0,7 nmol/L;695 pmol/L) e uma escala de referêncianonparametric da central 95% de:

1,1 – 5,0 ng/mL(0,4 – 1,7 nmol/L; 364 – 1 655 pmol/L)

UrinaMédia de SD (desvio padrão) de79 ± 56 µg/dia, com um intervalo de 2 a260 µg/dia, representando o centro de95% das observações.Estes valores devem ser consideradosapenas como directrizes. Cada laboratóriodeve estabelecer os seus própriosvalores.

LimitaçõesComo o metabolismo do Péptido-C diferedo da insulina, os níveis de Péptido-Csão, no melhor dos casos, um índicesemi-quantitativo da secreção de insulina.A semi vida do Péptido-C em plasma temsido estimado em aproximadamente 30minutos, comparado comaproximadamente 5 minutos para ainsulina. Devido à diferença de tempo desemi vida, o Péptido-C circula no plasmaa um nível aproximado 5 vezes superiorao da insulina, mesmo que as duasmoléculas sejam segregadas numaproporção equimolar. Uma vez mais seinsiste que o fígado tem um papelimportante na eliminação de insulina,enquanto o Péptido-C é removido pordegradação e eliminação, principalmenteatravés dos rins. Complicações hepáticase renais irão, portanto, afectar aproporção de circulação deinsulina/Péptido-C.

Os anticorpos heterófilicos no sorohumano podem reagir com asimunoglobulinas presentes no ensaio,causando interferência com osimunoensaios in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Amostras de doentesexpostas em rotina a produtos ou sorosde animais podem demonstrar este tipode interferência, potencial causador deresultados anómalos. Estes reagentesforam formulados para minimizar o riscode interferência, contudo podem ocorrerpotenciais interacções entre soros (raros)e componentes do teste. Para fins dediagnóstico, os resultados obtidos nesteensaio devem ser sempre analisados emcombinação com o exame clínico, históriade medicação do doente e outrosachados que possam correlacionar.


Características do EnsaioVer tabelas e gráficos para dadosrepresentativos do desempenho dodoseamento. Os resultados sãoapresentados em ng/mL. (Salvo referênciaem contrário, todos os dados provêm deamostras de soro colhidas em tubos semanticoagulantes, barreiras de gel ouaditivos promotores de coagulação para oPeptido)Factor de conversão:ng/mL × 0,331 → nmol/Lng/mL × 331 → pmol/LCalibração: 0,5 – 7 ng/mL(0,17 – 2,3 nmol/L; 166 – 2 317 pmol/L),(WHO 1st IRP 84/510)Sensibilidade Analítica: 0,3 ng/mL(0,10 nmol/L; 99 pmol/L)Precisão: Amostras de soro foramprocessadas em duplicado num período de20 dias, dois ensaios por dia, perfazendoum total de 40 ensaios e 80 réplicas.(Consulte a tabela “Precision”.)

Linearidade: As amostras foramdoseadas sob vários níveis de diluição.(Ver a tabela de "Linearity" para dadosrepresentativos.)

Recuperação: As amostras foramadicionadas na relação de 1 para 19 comtrês soluções (15, 54 e 112 ng/mL) antesdo doseamento. (Ver tabela de"Recovery" para dados representativos.)Especificidade: O doseamento éespecífico para Peptido C. (Ver tabela de"Specificity".)

Bilirrubina: A presença de bilirrubina emconcentrações até 200 mg/L não temefeito em resultados, dentro da precisãodo ensaio.

Hemolise: A presença de hemoglobinaem concentrações até 381 mg/dL não temefeito em resultados, dentro da precisãodo ensaio.

Lipémia: A presença de lipémia iemconcentrações até 3 000 mg/dL não temefeito em resultados, dentro da precisãodo ensaio.Tipo de amostras alternativas: Nenhumefeito significativo para o plasmaheparinizado. Plasma EDTA ou plasma defluoreto de sódio não são apropriadospara uso. Regressão linear:

(Heparina) = 0,97 (Soro) + 0,51 ng/mLr = 0,969

Médias:4,7 ng/mL (Soro)5,1 ng/mL (Heparina)

Comparação de Métodos: Odoseamento do comparado ao Kit dePéptido-C IMMULITE da DPC em 66amostras de soro e urina. (Valores deconcentração: approx. 0,5 – 6,5 ng/mL.Ver gráfico.) Regressão linear:(IML 2000) = 0,97 (IML) + 0,16 ng/mLr = 0,990

Médias:2,84 ng/mL (IMMULITE 2000)2,76 ng/mL (IMMULITE)

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