INTRODUCERE

CUPRINSIntroducere...............................................................................................................3CAPITOLUL I. CARACTERE GENERALE ASUPRA SPECIEI I VARIETILOR DE CALENDULA OFFICINALIS L.........................................81.1Rspndirea genului Calendula L.................................................................81.2 Importana ameliorrii speciilor de Calendula L.........................................81.3Diverse genotipuri de C. officinalis L. rspndire n Europa........................101.4Descrierea botanic a specieia Calendula officinalis L................................131.5Criterii de difereniere morfologic ntre specia Calendula officinalis L. i soiurile obinute prin hibridri n RM Diana i Natali..................................................13 1.6. Caracterizarea anatomic a speciei C. officinalis L..................................14 1.6.1. Caracterizarea anatomic ale frunzei de C. officinalis L................14 1.6.2. Caracterizarea anatomic ale inflorescenei de C. officinalis L....15 1.6.3. Caracterizarea anatomic a tulpinei de C. officinalis L................161.7. Particularitile i cerinele biologice............................................................171.8. Produsul vegetal medicinal obinut din specia de Calendula officinalis L.....181.9. Date privind compoziia chimic a speciei Calendula officinalis L...............19 1.9.1Compoziia chimic a inflorescenelor soiurile de C. officinalis L..........25 1.9.2. Date privind aciunea farmacologic a speciei.....................................251. 10. Produse fitoterapeutice obinute din specia C. officinalis L.......................29Capitolul II. PARTEA EXPERIMENTAL.....................................................292.1. Obinerea produsului vegetal.......................................................................292.2. Analiza calitativ prin reacii de identificare................................................30 2.2.1. Identificarea saponozidelor................................................................30 2.2.2. Identificarea alcaloizilor.....................................................................31 2.2.3. Identificarea substanelor tanante.......................................................32 2.2.4. Identificarea flavonozidelor................................................................33 2.2.5. Identificarea flavonozidelor prin cromatografia pe strat subire.........34 2.3. Dozarea totalului de flavonoide.................................................................352.4. Dozarea a diheperozidei izoramnetinei...........................................................382.5. Construireacurbei de calibrare pe baza absorbantelor corespunztoare unor soluii de rutozid de concentraii diferite....................................................................40Concluzii...................................................................................................................41Bibliografie...............................................................................................................42 INTRODUCERE Numele calendula officinalis, vine de la vechiul calendar roman. Numele i-a fost dat pentru c nflorea n fiecare luna a anului, chiar i iarna. Numele de officinalis se refer la munca unui alchimist, care poate transforma orice metal n aur. Despre glbenele se credea c, puteau reda frumuseea pielii, transformarea fiind asemanatoare cu a unui alchimist. Calendula mai era cunoscut i sub numele de solsequium. La fel ca i floarea soarelui, calendula era o plant care se mica in direcia soarelui.n Evul Mediu, glbenelele erau prescrise ca remediu pentru afeciunile intestinale i ale ficatului. n Europa i n America Latin, glbenelele erau folosite n ceremoniile religioase, de ziua morilor. n aceasta zi, florile erau mpratiate pe mormintele celor decedai. i n India, aceast floare era considerat cu puteri magice i era folosit n ceremoniile religioase.

n antichitate, plantele cu proprietai de vindecare erau considerate magice, iar glbenelele nu faceau exceptie. Lumea era atat de fascinat de aceast plant i de minunile pe care le fcea pentru piele, ncat credea c avea i alte puteri magice. Glbenelele erau folosite astfel i n ritualurile vrjitoarelor, care o foloseau n loiunile destinate celor singuri. olonitii foloseau acest plant i n supe, mancruri i fceau chiar i vin din glbenele. Se mai credea c glbenelele au puteri magice si pot induce vise profetice. Glbenelele erau asociate cu bogia. n Europa, glbenelele erau aeazate sub pat pentru a-l proteja pe cel care doarme de spirite malefice, boli si hoi. Glbenelele sunt plante care aduc noroc celor dinzodia leu. Florile proaspete deglbenelemarescenergia pozitivdin ncapere. Glbenele aezate sub pern, n timpul somnului, inducclarviziune. Dac faci baie n apa n care ai presrat flori de glbenele, atragi respectul i succesul n tot ce faci. Florile de glbenele presarate sub pat aduc un somn sanatos. Cunoaterea profund a plantelor medicinale, inclusiv a glbenelelor, lrgirea sferei lor de folosire a luat o amploare destul de mare, ndeosebi n a doua jumtate a secolului trecut, de cultivarea lor fiind interesai tot mai muli, datoritcalitilor terapeutice excepionale pe care le posed i care au la baz complexul de substane biologic active. Dioscorides, medic militar i filozof grec, a descris pentru prima dat glbenelele in tratatul su De materia medica (Despre medicamente, scris se pare intre anii 60-80 d. Hr.), ca fiind plant cu proprieti terapeutice, folosind infuzia acestora in tratamentul bolilor de ficat i ca mijloc de eliminare a durerilor organelor. Lucrarea a constituit o remarcabil sintez a cunotinelor medicale greco-romane i secole intregi a fost consultat de medici europeni (COIFAN, 2003). Pentru prima dat specia Calendula officinalis L. este introdus n ierarhia taxonomic de Carll Linn n lucrarea sa ,,Species Plantarum publicat n anul 1753 (Brnzil, 2005). n momentul de fa Calendula officinalis L. se afl printre primele zece, dintre cele mai cultivate plante medicinale n Europa (Hoppe, 1997). Proprietile terapeutice deosebite ale glbenelelor sunt determinate de complexul de substane biologic active, pe care le conine materia prim: carotenoide (provitamina A), sterine, triterpenoizi, flavonoizi, glicozizi flavonici, ulei volatil, cumarine, substane minerale i amare, gumirezine, mucilagii, vitamina C, esteri colesterolici, substane proteice (Britton, 1996). n rile n care se cultiv aceast specie, se urmrete obinerea prin lucrrile de ameliorare a unor forme cu antodii mari, involte, de culoare portocalie (Crciun, 1977). Dintre cele aproximativ 25 de specii ale genului Calendula, specia cea mai utilizat in cultur, in medicina uman, veterinar i in diferite ramuri industriale, este C. officinalis L. (glbenelele). Glbenelele au fost utilizate prima dat ca plante ornamentale datorit inflorescenelor decorative, i abia mai tarziu ca plante medicinale, dup descoperirea i aprecierea calitilor lor curative (KEMPER, 1999;Gonceariuc, 2001, 2003). Inc din antichitate, unele popoare, precum egiptenii, grecii, induii i arabii cultivau aceast plant pentru infrumusearea grdinilor (Verzea i Stoianov, 2001). Pentru decor se folosesc genotipuri cu inflorescene involte, colorate in galben, galben-portocaliu sau portocaliu intens, cu talia inalt i numr mare de flori ligulate (flori btute: btute nseamn involte!) (ELARU, 2004). O valoare ornamental deosebit au genotipurile cu florile din inflorescen diferit colorate i genotipurile cu inflorescene involte, intens colorate. n practica medical, datorit principiilor active este mult utilizat specia C. officinalis L., i mai puin utilizat specia C. arvensis L. (HEYN i colab., 1974; GONCEARIUC, 2003).

Glbenelele au o important valoare economic, cultivarea lor cunoscnd o cretere continu in ultimii ani, datorit lrgirii considerabile a spectrului de utilizare a materiei prime (inflorescene, flori, frunze i semine) ca surs de obinere a uleiurilor, apreciate in mod deosebit pentru compoziia lor (JANISZOWSKA i RIGIER, 1985). Astfel, n acest scop, in ultimul deceniu, in spaiul Uniunii Europene au fost adoptate Programe de cercetare i implementare a speciei Calendula officinalis L. (www.nf-2001.org.). Conform datelor statistice, dup popularitate i arealul de cultivare, glbenelele sunt depite doar de mueel, ins se situeaz cu mult inaintea jaleului, odoleanului, suntoarei i altor specii medicinale cunoscute (HOPPE, 1997). In medicina popular, plantele se culeg i se utilizeaz pentru flori, tulpin i frunze (PUN, 1995; MUNTEAN, 2007).

In medicina uman: plantele de Calendula se utilizeaz sub form de ceai, infuzii,

decocturi, tincturi (BLUMENTHAL, 1998), pentru boli gastro-intestinale, de ficat, crampe, ulcer stomacal, duodenal, icter, hemoroizi, ca vermifug, cicatrizant intern, in tratamentul de cancer al pielii (GRAF, 2000). Plantele au aciune: emanagog, coleretic, antispastic, bactericid, anticancerigen, pentru tratarea plgilor, rnilor, inepturilor de insecte, degerturilor, arsurilor, acneei (KLOUCHEK-POPOVA, 1982). Alifia se utilizeaz in: tratarea afeciunilor pielii, dermatitelor, ulceraiilor in flebite,ulcere varicoase, fistule, degerturi, arsuri, micoze. Extractele din flori uscate au fost menionate i pentru rolul inhibitor asupra replicrii virusului imunodeficienei umane (HIV-1) (KALVATCHEV i colab., 1997).

In medicina veterinar: materia prim de glbenele este utilizat la prepararea tincturii i a diferitelor extracte folosite pentru tratarea afeciunilor ceapar la animale (GRELA i SEMBRATOWICZ, 1998). Prin studii de ultrastructur a celulelor parenchimatice din ficatul animalelor ce prezint tumoarea Walker s-a demonstrat ca aceasta poate fi tratat folosind extractele din glbenele (MISCLENCU i colab., 1997). Tinctura obinut din C. officinalis L. i C. arvensis L. prezint proprieti homeopatice, antivirale, efect sedativ i hipotensiv. n Cluj-Napoca, au fost efectuate studii privind efectul benefic al extractului alcoolic de C. officinalis L. asupra imunitii celulare la ecvine (BOLF, 2010). Sub aspect alimentar, C. officinalis L. este destul de solicitat in multe ri europene, precum Germania, Anglia, Olanda, Frana. Planta are o arom dulce, uor rinoas, petalele (rectific: petalele la Calendula sunt flori ligulate) au gust delicat, aromat i puin amrui, frunzele sunt uor piperate. Utilizare: sub form de salate, ca ingredient sau condiment alimentar, avand avantajul unui pre redus in comparaie cu alte condimente orientale (ISMAGILOV i CARJA, 2000). In Europa, glbenelele se folosesc ca inlocuitor al ofranului (in ceea ce privete culoarea, nu i gustul), iar din florile ligulate se extrage un colorant alimentar, utilizat in industria margarinei, untului, pastelor finoase etc. (PUN, 1995).

Calendula ofcinalis L. este o specie important de plante medicinale att n Republica Moldova, ct i n alte ri, cum ar Germania, Marea Britanie, Olanda,

SUA, India, Romnia, Frana, Rusia pentru virtuile toterapeutice ale materiei prime (Flores Calendulae), nsuirile tehnologice i biologice de a valorica o mare diversitate de condiii pedoclimatice. Cultura este preuit datorit plasticitii ecologice deosebite [6].Unul dintre elementele de baz ale produciei la glbenele l constituie masa antodiului cu ori sau smn, care este determinat de involtitatea i numrul antodiilor unei plante. Unii cercettori consider c involtitatea poart un caracter genetic recisiv. Ea este determinat de numrul de ori ligulate (feminine), care se formeaz n partea exterioar a antodiului i sunt fertile. Ele au o importan mare, deoarece doar din ele se formeaz semine. Florile tubuloase formate la mijlocul antodiului sunt sterile [1,5]. Fiind o specie polimorf, plantele de Calendula ofcinalis L. formeaz n decursul vegetaiei attantodii involte cu peste 5 rnduri de ori ligulate, ct i antodii semiinvolte, cu 3-5 rnduri de ori ligulate, precum i ori simple cu 1-2 rnduri de ori ligulate (g. 1). Produsul vegetal a soiulor de C.officinalis Natali, Diana i populaie local au fost colectate la Institutul de Genetic i Fiziologie a Plantelor, n perioada iunie- iulie 2011.

Fig. 1. Involtitatea antodiilor la Calendula ofcinalis L.a antodii involte cu peste 5 rnduri de ori ligulate i semine omogene; b antodii semiinvolte cu 3-5 rnduri de ori ligulate i semine cu omogenitea redus; c antodii simple cu 1-2 rnduri de ori ligulate i semine neomogene.Scopul lucrrii const n studiul caracterelor chimice al soiurilor noi de galbinele obinute prin hibridri n Republica Moldova.

Obiectivele lucrrii:1. Colectarea, uscarea i pstrarea produselor vegetale.2. Studiul criteriilor de difereniere morfologic a soiurilor de Calendula officinalis L. din Republica Moldova.3. Analiza calitativ, prin: reacii de identificare i CSS ale diverselor grupuri de principii biologic active.4. Dozarea flavonoidelor prin tehnica spectrofotometric.

5. Dozarea izoramnetinei prin tehnica cromato-spectrofotometric.6. Analiza comparativ a rezultatelor obinute. CAPITOLUL I. CARACTERE GENERALE ASUPRA SPECIEI I VARIETILOR DE CALENDULA OFFICINALIS L.1.1. Rspndirea genului Calendula L.Genul Calendula L. ntrunete cca 25 de specii. Printre acestea: Calendula officinalis L., C. stellata Cav., C. marocana Ball., C. arvensis L. cu ssp. C. aegiptiaca Desf., C. persica C.A.Mey, C.gracilis DC, C. macranta Tin & Guss., C. bicolor Rafin.., C. maritima Guss., C. pachysperma Zoh., C. gracilis DC., C. palaestina Boiss., C. tripterocarpa Rupr., C. lazemaire, C. caracalensis Vass., C. suffruticosa Vahl. ssp. fulgida (Rafin.) Ohle, ssp. tomentosa Murb., C. algeriensis Boiss&Reut, (Brnzil, 2006 cu referin la Meusel et al., 1966; Heyn et al, 1974; Yurtzev et al., 1982; Gonceariuc, 2000, 2001; Ismagilov, Kostlev, 2000;)

Ca plante medicinale mai des sunt folosite speciile Calendula officinalis L. i Calendula arvensis L. Ambele specii se ntlnesc i n Republica Moldova (Geideman, 1986; Gonceariuc, 2000, 2001). Calendula officinalis L. se ntlnete numai n cultur ca plant medicinala, dar i ornamental. n flora spontan crete i Calendula arvensis L. (Geideman, 1986), care este rspndit n Europa, inclusiv n bazinul mediteranean, Balcani, Caucaz, precum i n Asia Mic (Balabas et al., 1965, Kemper, 1999). Alte specii Calendula stellata Cav., Calendula bicolor Rafin., Calendula marocana Ball. (Gonceariuc, 2001; Gonceariuc, Ganea, 2005) n Moldova nu se ntlnesc nici n cultur, nici n flora spontan.

1.2. Importana ameliorrii speciilor de Calendula L.Prin lucrrile de ameliorare la Calendula se urmrete crearea unor cultivaruri noi, valoroase, care s depeasc prin particularitile lor cultivarurile existente, sau s posede anumite caracteristici datorit crora s fie superioare formelor cultivate sau din flora spontan. Obinerea de noi genotipuri presupune existenaunor obiective precise i o variabilitate suficient de vast a materialului biologic,variabilitate care s permit depistarea unor forme noi, corespunztoare scopurilor vizate de ameliorator (ARDELEAN i colab., 2006).

Obiectivele de ameliorare, la plantele genului Calendula, dar mai ales a speciei

Calendula officinalis L. (glbenelele), sunt impuse de multiplele utilizri ale acesteia. Aceste obiective pot fi orientate spre urmtoarele direcii:

in scop ornamental, obinea genotipurilor cu talie inalt, inflorescene involte, aspect decorativ deosebit, meninerea caracteristicilor decorative o perioad cat mai lung, rezistena la factori de stres, la bolilor i duntorilor, rezistena plantelor ca flori tiate; in scop industrial, crearea genotipurilor cu inflorescene involte, cu un coninut al plantelor i seminelor cat mai bogat in uleiuri i substane utile;

in scop medicinal, obinerea genotipurilor cu flori intens colorate in portocaliu i portocaliu inchis, cu un coninut ridicat in uleiuri i principii active.

Talia i vigoare plantei la genotipurile utilizate in decorul grdinilor, parcurilor, a

interioarelor acest obiectiv de ameliorare este mai mult decat necesar. Pentru acest scop sunt de preferat genotipurile cu talia inalt, viguroase, habitus bogat, cu numr cat mai mare de ramificaii i inflorescene.

Formele taratoare prezint un interes sczut pentru lucrrile de creare a soiurilor ornamentale, dar pot fi de interes pentru obiective speciale, un exemplu relevant in acest sens fiind soiul Skyfire, din specia C. alata, folosit ca inlocuitor de gazon.

Rezistena ca i flori tiate - datorit frumuseii lor glbenele sunt apreciate, nu numai in decorul spaiilor verzi ci i in aranjamentele florale, sau pentru decorul interioarelor ca i flori tiate. Dup elaru (2004), durata de pstrare ca i flori tiate este de 4-5 zile, dac sunt inute in vase cu ap schimbat zilnic sau o dat la dou zile. Lucrrile de ameliorare, la speciile genului Calendula, ar putea fi direcionate spre crearea de noi soiuri cu o rezisten mare ca i flori tiate, indeosebi la specia Calendulaofficinalis L. (glbenelele).Tipul florilor (simple i involte): - dintre cele aproximativ 25 de specii ale genului Calendula flori involte sunt intalnite doar la specia C. officinalis L., la celelalte specii inflorescenele au doar flori simple. Diametrul inflorescenelor i lungimea petalelor au valoare decorativ, iar tipul inflorescenei influeneaz producia de materie prim la hectar. Cercetrile din domeniu confirm faptul c intre tipul inflorescenelor i producia de materie prim la hectar, exist o corelaie strans, pozitiv (VERZEA i STOIANOV, 2001; BRANZIL, 2005).

Culoarea inflorescenei: - culorile de baz ale glbenelelor sunt galben i portocaliu, dar exist i alte nuane ce deriv din culorile de baz: galben inchis, galben-portocaliu, portocaliu cu diferite striaii de alb, crmiziu, etc. O tem deosebit de interesant ar putea-o constituii obinerea genotipurilor cu inflorescene colorate in crmiziu, rou, viiniu inchis sau deschis, precum i crearea genotipurilor cu inflorescene bicolore.

Consider c una dintre cele mai mari realizri in domeniul geneticii i ameliorrii

glbenelelor ar fi obinerea glbenelelor roii.

Productivitatea - insuire biologic complex ce constituitei obiectivul principal al majoritii programelor de ameliorare (SESTRA, 2004). Capacitatea de producie este influenat atat de baza ereditar a genotipului cat i de condiiile de mediu. Vigoarea plantelor este dat de tipul de cretere, inlimea tulpinii, numrul i grosimea ramificaiilor. Ereditatea caracterului este controlat de poligene i din acest motiv analiza ereditii este dificil de efectuat la orice specie de plante (SESTRA i colab., 2009).

Rezistena la boli i duntori plantele ornamentale, sunt susceptibile la atacul bolilor i duntorilor care le pot deprecia aspectul decorativ. Boli intalnite in cultur: finarea, ptarea brun, ptarea cenuie, iar dintre duntori: Aphis spp. In materia prima depozitat au fost sesizate insecte de Ptinus fur L. i Atopus pulsatorium L. (BRANZIL, 2005). 1.3. Diverse genotipuri de C. officinalis L. rspndire n Europa

Tabelul 1.

Varietile de C. officinalis L. [12].Germania

1. Humboldt-Universitat zu Berlin,Institut fur Biologie,10115C.officinalisC.officinalis L.D.a

2.Botanische Garten der Universitat Gottingen 37073C.officinalisProlifera Nr.215

3. Botanische Garten der Universitat Gottingen 37073C.officinalisProlifera Nr.214

4.Okologisch-Botanischer Garten der Universitat Bayreuth,95440C.officinalisC.officinalis L.D.c

5. Okologisch-Botanischer Garten der Universitat Bayreuth,95440C.officinalisPacifec-Riesen

6. Botanischer Garten der Universitat Ulm,D-89069C.officinalisC.officinalis L.D.b

7. Okologisch-Botanischer Garten der Universitat Bayreuth,95440C.officinalisRadio

8. Botanisches Institut, J.W.Goethe Universitat Frankfurt, D-60054C.officinalisC.officinalis

9Botanischer Garten Martin-Luther Universitat, D-06108S.officinalisS.officinalis L.D.e

10Botanischer Garten, Grunflachenamt, ChemnitzC.officinalisS.officinalis L. D.f

11Botanischer Garten der Christian-Albrechts-Universitat zu KielC.officinalisC.officinalis D.g

12.Botanischer Garten der Christian-Albrechts-Universitat zu KielC.officinalisC.officinalis D.h

Ucraina

1.Ukraine Hortus Botanicus FominianusC.officinalisBon Bon Mix

2.Ukraine Hortus Botanicus FominianusC.officinalisC.officinalis UK

3.Natinal Botanical Gardens Timirjazevska,01014 KyivC.officinalisPrycosnovjenie

4.Natinal Botanical Gardens Timirjazevska,01014 KyivC.officinalisPacific Beauty

5. Natinal Botanical Gardens Timirjazevska,01014 KyivC.officinalisGaicha Gril

6.Natinal Botanical Gardens Timirjazevska,01014 KyivC.officinalisFiesta Hitana

7.Natinal Botanical Gardens Timirjazevska,01014 KyivC.officinalisZelenoy Serdtse

8.Natinal Botanical Gardens Timirjazevska,01014 KyivC.officinalisRozovyi Sjurpriz

Frana

1. Jardin des Plantes de Rouen 76100C.officinalisC.officinalis F.a

2.Jardin des Plantes de Rouen 76100C.arvensisC.arvensis F

3. Les Botaniques de ChevreloupC.officinalisC.officinalis L.F.b

4.Jardin des Botanique de Nantes, 44094C.officinalisC.officinalis L.F.c

Danemarca

1.Unisersity of Copenhagen Botanical GardenC.officinalis122GE2822-002

2.Unisersity of Copenhagen Botanical GardenC.officinalis123GEHortus Hudae

Belgia

1. Faculte universitaire des sciences agronomiques de GemblouxC.officinalisC.officinalis L.B

Slovenia

1.Botanical Garden of LjubljanaC.officinalisC.officinalis SLO

Karntneur Bota nikzentrum mit dem Lamdesherbar; Botanischer GartenC.officinalisC.officinalis A

Cehia

1.Univerzita Brno,66243C.officinalisPacific Masarykova

2Univerzita Brno,66243C.officinalisPlamen Masarykova

Lituania

1.National Botanic Garden of Latvia,Salaspils, LV-2169C.officinalisBon-Bon Orange

Italia

1.Insituto di Botanica e Orto Botanico Pierino Scamarel la,61029C.officinalisC.officinalis I

Dublin

1.Hortus Farmacognosticus

Academiae Medicinalis C.officinalis

C.officinalis L.PL

Azerbaijan

1.Central Botanical Garden, Badamer Highwai C.officinalisC.officinalis AZ

1.4. Descrierea botanic a specieia Calendula officinalis L.Calendula officinalis L. este o plant anual sau bianual, cu rdcin pivotant, lung de circa 20 cm i groas pn la 1 cm.

Tulpina este erect, nalt de 40 - 80 cm, cu 5 - 25 de ramificaii, foliat pn la inflorescene, pubescent.

Frunzele sunt alterne, sesile, ntregi, pubescente sau glabre; cele inferioare oblan-ceolate, lung atenuate, rotunjite la vrf, lungi pn la 16 cm; frunzele mijlocii i superioare sunt lanceolate, din ce n ce mai nguste i mai mici ctre vrful plantei.

Inflorescenele sunt antodii terminale (20 - 50 pe o tuf), formate din flori ligulate periferice, de culoare portocalie, i din flori centrale sterile, tubuloase, galbene-portocalii. Involucrul este campanulat, format din foliole ngust lanceolate, acute i proase.

Fructele sunt achene: cele exterioare mai puin curbate spre interior, lung rostrate, nearipate; cele interioare inelat curbate spre interior, adesea aripate sau nearipate, dorsal scurt spinoase, lungi de circa 18 mm.

Planta prezint un miros balsamic puternic [5,6].1.5. Criterii de difereniere morfologic ntre specia Calendula officinalis L. i soiurile obinute prin hibridri n RM Diana i Natali. n Republica Moldova au fost create i sunt omologate (incluse n registrul de Stat) soiurile cu inflorescene involte Natali i Diana. Soiurile sunt distinctive prin culoarea florilor tubulare. Astfel, soiul Natali are flori tubulare i ligulate de culoare portocalie, iar la soiul Diana florile tubulare sunt maronii, iar cele ligulate portocalii. Aceste soiuri se caracterizeaz prin antodii involte cu diametru de 7-9 cm (Gonceariuc, 2008) [5].Soiurile noi se deosebesc i prin caracterele morfologice ale fructelor (achenelor). Dup dimensiuni i form acestea se mpart n 3 fracii. Seminele cu cele mai mari dimensiuni n form de secer aparin fraciei I. Cele mai curbate i mai mrunte sunt din fracia III. La soiurile noi predomin anume fracia III de achene de dimensiuni mici i greutate mai mic (Tabelul 2) [15].

Tabelul 2.Particularitile morfologice ale achenelor la soiurile moldoveneti de C. officinalis L. SoiulFraciaFracia,

%Nr. achene n 1 gGreutatea a 1000 achene, g

NataliI18.97812.7

II6.21198.4

III74.91566.4

DianaI17.18511.7

II16.11277.9

III66.82224.5

Populaie local, martorI91.68112.3

II5.31128.9

III3.11476.8

1.6. Caracterizarea anatomic a speciei C. officinalis L.

1.6.1. Caracterizarea anatomic ale frunzei de C. officinalis L.

Nervuramedianestepronunatproeminentpepartea inferioaraafrunzelori moderatproeminent, pepartea superioar (Fig.2A). Mesofilulsub ambele epiderme este de tip palisadic, darceluleledinparteaadaxialsunt mai naltentreceledoucelule palisadice, celulele parenchimului asimilator sunt izodiametrice (Fig.2.C, D). Fascicululmedialestecolateraldeschis,avnd ca centur colenchim la fiecare din cei doi poli (Fig.2 B.).Toatecelelaltefasciculeconductoaresunt mici,celedin urmposeddoar elemente alefloemului. Pe epiderma superioar a frunzei se observ stomatede tipanomocitic i peri secretoae. Mai multe stomate apar pe suprafaa lamelei.n fascicululmedialestecolateraldeschis,avnd ca centurcolenchimala fiecare dincei doi poli. (Fig.2.B). Toatecelelaltefasciculeconductoaresunt mici,celedin urmposeddoar elemente alefloemului. Pe epiderma superioar a frunzei se observ stomatede tipanomocitic i perisecretoare.Mai multe stomataeapar pe suprafa lamelei.n afar de perisecretoare, se observ peritectori foartelungi,cu o celul terminal filiform [13].

Fig. 2. Seciunea transversal a frunzei de C. officinalisL.: A - seciunea transversal a nervurii mediane a frunzei, Bfascicul conductor, C- seciune transversal a limbului frunzei, D-mezofilul frunzei.

Fig.3. Frunz de C. officinalis L: A-peri tectori, B - peri glandulari uni- i biseriai.

Fig.4. Preparatul superficial al frunzei: A- epiderm superioar, B- epiderm inferioar.1.6.2. Caracterizarea anatomic ale inflorescenei de C. officinalis L. La baza florelor ligulate sunt n abuden peri tectori multecelulae, biseriate (Fig. 5A.) i peri glandulari, biseriate de lungime variabil ( Fig.5B). La baza florilor, pe lng acestea, exist ali peri tectori multecelulari uneserai, iar unii peri glandulari cu picior scurt i gland format din mai multe straturi de celule suprapuse ( Fig.5C) [4]. 16Fig. 5. Caractere anatomice a floarei: A - seciune longitudinal a floarelor ligulate cu abudena la baz de peri tectori biseriai i glandulari biseriae; B peri glandulari biseriae ale floarei; C-peri tectori biseriate, unaseriate i glandulari biseriate la baza florilor tubulare.1.6.3. Caracterizarea anatomic a tulpinei de C. officinalis L.

Analiza efectuat cu tiofenat metil de0.1%-aseciunii transversaleprezintnervuri de

dimensiuni diferite, n timp ce celelulele colenchimatice au pereii mai groi (Fig.1.).Celuleleepidermice,cuperei zidurigroaseexterne,sunt acoperitede ocuticul groas. Spre deosebire de cele de referin,fasciculele suntmainumeroaseimai mari ce sunt prezentate de:18 cele mai marii cele intermediare8mici,avnd o structur primar(Fig.1,2); nmaimultefascicule,care conduc (6-7), posed exclusivelementeleliberiene(Fig.2, 4.). Cambiulestemai activ,fiind format dinmai multe straturi(3-4).Multe dintrenavelexilemuluiaparn procesuldeformare (Fig.3.).Coajaprezint 2-3fasciculemici,circularefiecarecu unbrusubire defibresclerenchimatice(fig.4.).Unele sunt fascicule de tip, structural

similare cu cele de la cilindrul central, altele (observate n principal la tulpin),reprezentndde fapt oformdetranziie circularhidrocentric vascular,

nconjurat la periferie, parial sau n n totalitate de liber.

Acestefasciculeanormale,rezultate din activitatea destimulareindus de tiofenat

Metil, au fost observate n diferite poziii la acest nivel de tulpin: n scoara, n apropiere sau n grosime de centuri de fibre peri floemice i chiar n interiorul liberuluidinfasciculeefectuarea decilindrul central(Fig.6 F.) [15.23].

Fig.6. Caractere anatomice a tulpinei: A-seciunea transversal a tulpinei; B-fascicul conductor; C- cambium intrafascicular; D, E - fascicle conductoareing colaterale; F-fascicul conductor n scoara tulpinei.1.7. Particularitile i cerinele biologiceTemperatura

Glbenelele au cerine moderate fa de temperatur. Seminele ncep s germineze la temperatura solului de peste 6-80 C i temperatura aerului 10-150 C. Germineaz seminele foarte bine la temperaturi ale aerului mai ridicate 20-300 C. Plantele sunt rezistente la brume, ngheuri de 2... 40 C (Pun i colab., 1986).

Apa

Specia este rezistent la secet. Cu toate acestea, n anii secetoi se micoreaz numrul de flori ligulate n antodii. n cazul unei secete ndelungate cu temperaturi nalte critice (36-380 C), cum au fost atestate n Moldova n 2007, unele plante rmn n faza rozetei de frznze i nu formeaz tulpini, respectiv, ramificaii, inflorescene. Din aceste considerente pe soluri uoare n perioadele de secet i ari pentru obinerea unei producii mai ridicate sunt necesare irigaii.

Lumina

Plantele sunt iubitoare de lumin. n condiii de umbr, insuficien a luminii se micoreaz talia plantei, numrul de ramificaii ale tulpinii, precum i numrul de inflorescene, diametrul acestora.

Solul

Glbenelele nu sunt pretenioase fa de sol i pot crete pe tpoate tipurile de sol (Pun i colab., 1986), dar se dezvolt mai bine i formeaz producii ridicate de inflorescene pe soluri uoare, fertile, afnate cu umiditate suficient [3,18].1.8. Produsul vegetal medicinal obinut din specia de Calendula officinalis L.Produsul vegetal medicinal folosit sunt florile marginale (ligulate) Clendulae flores.Farmacopeea European ed. 6 ( 2008)

Farmacopeea Rus ed. 10 pagina 189

Farmacopeea Roman ed. 10 [34] Prelucrarea materiei prime

UscareaInflorescenele i florile ligulate proaspat recoltate nu se patreaz n grmezi, deoarece se ncing i si pierd culoarea. Dup cel mult 3-4 h de la recoltare, florile ligulate i antodiile se usuc la umbra, n ncaperi curate i uscate, pe rame, site, hartie, n straturi subiri care se ntorc des.

Uscarea se poate realiza i n uscatorii cu aer cald, la temperaturi de 40-50 C, dup ce, n prealabil, florile au fost uscate la umbr 2-3 zile. Florile ligulate se pot usca i la soare, doarece ele nu se decoloreaz n 4-5 h, ct ine timpul de uscare.

nflorescenele isi pierd nsa culoarea portocalie, se albesc n timpul uscrii pentru c au nevoie de 1-2 zile pn la uscarea complet. Florile uscate n condiii bune trebuie sa-i menina culoarea natural. Randamentul de uscare este de 8-10 : 1 pentru florile lingulate, 7-8 : 1 pentru inflorescene i 5 : 1 pentru herba.

Ambalarea, pstrareaImediat dup uscare, florile ligulate uscate i inflorescenele se ambaleaz n lzi, cptuite cu hartie, pentru a se evita decolorarea lor. Pstrarea pna n momentul livrarii 1.9. Date privind compoziia chimic a speciei C. officinalis L. Studiilefitochimice au demonstratprezenaamai multor clase decompuichimici n flori de C. officinalis L., cei mai importani sunt terpenozide, flavonozide, cumarine, chinone,uleivolatil,carotenoideiaminoacizi. Proprietile terapeutice ale glbenelelor sunt determinate de complexul de substane biologic active, pe care acestea le conin. TerpenoideSaponine substane naturale vegetale, favorizeaz solubilizarea i absorbia unor produi. n florile de Calendula se gsesc saponozidele A, B, C, D, F, coninutul total fiind de aproximativ 6,25% (Vidal i Elias, 1989).

Alcooli triterpenici pot aprea n plantele de Calendula att sub form liber ct i esterificai (Pintea, 2001). Diferite terpenoide (Tabelul2)au fost raportaten extractulde eterde petrol din flori de C. officinalis. Acestea includ sitosteroli, stigmatoteroli,

diesterilordiolilor, 3-monoesteri de taraxasterol, taraxasterol, lupeol, eritrodiol, ursadiol [15], faradiol-3-O-palmitat, faradiol-3-O- miristat, faradiol-3-O-laurat

[16], arnidiol-3-O-palmitat, arnidiol-3-Omiristat, arnidiol-3-O-laurat,calenduladiol -3-O-palmitat,calenduladiol-3-O-miristat [17,18], acid oleanolic, saponine: calendulosid AH[19-22], glycosid oleanan triterpen: calendulaglicosid A, calendulaglicosid A6_-O-n-methyl ester, calendulaglicosid A6-O-n-butyl ester, calendulaglicosid B, calendulaglicosid B 6_-O-n-butyl ester,calendulaglycosid C, calendulaglycosid C6_-O-n-methyl ester, calendulaglycosid C 6_-O-n-butyl ester, calendulosid F6_-O-n-butylester, calndulosidG6_-O-n-metil ester[18], glucosid acidului oleanolic [7]. Calendulaglicosid A: R1=Glc, R2=Gal, R3=H, R4=Glc;

Calendulaglicosid A6-O-methyl ester: R1=Glc, R2=Gal, R3=Me, R4=Glc;

Calendulaglicosid A6-O-n-butyl ester: R1=Glc, R2= Gal, R3=n-Bu, R4=Glc;

Calendulaglicosid B: R1=Glc, R2=Gal, R3= H, R4= H;

Calendulaglicosid B6-O-n-butyl ester: R1=Glc, R2=Gal, R3=n-Bu, R4=H;

Calendulaglicosid C: R1=H, R2=Gal, R3=H, R4=Glc; Calendulaglicosid C6-O-methyl ester: R1= H,R2=Gal, R3=Me, R4=Glc;

Calendulaglicosid C6-O-n-butyl ester: R1=H, R2=Gal, R3=n-Bu, R4=Glc;

Calendulaglicosid F6-O-n-butyl ester: R1=H,R2=Gal, R3=Me, R4=H

Fig.1. Structuride saponinetriterpenici din Calendulae flores;

R1 = R2 = R3 = H : U r s a n R1 = R2 = R3 = H: -Taraxen

R1 = OH; R2 = R3 = H: -Amyrin R1 = OH; R2 = R3 = H -Taraxasterol

R1 = R2 = OH; R3 = H : B r e i n R1 = R2 = OH; R3 = H: Faradiol

R1 = R2 = R3 = OH: Ursatriol R1 = R2 = R3 = OH: Heliantriol B0

R1 = R2 = R3 = H : L u p a n R1 = R2 = R3 = H: Taraxen

R1 = OH; R2 = R3 = H : L u p e o l R1 = OH; R2 = R3 = H: Taraxasterol

R1 = R2 = OH; R3 = H: Calenduladiol R1 = R2 = OH; R3 = H: Arnidiol

R1 = R2 = R3 = OH: Heliantriol B2 R1 = R2 = R3 = OH: Heliantriol B1

R1 = OH; R2 = R3 = H: -Amirin

R1 = R2 = OH; R3 = H: Maniladiol

R1 = R2 = R3 = OH: Longispinogenin

R1 = R2 = R3 = H: Oleanane

Fig.2. Saponozide triterpenicidin flori deC. officinalis. FlavonozideConinutul flavonozidelordinflori sunt variatede la0.3 - 0.8%. Flavonozidele izolate cu alcool etilic, acestea sunt: quercetin, izoramnetin, izoquercetin, izoramnetin-3-O-glicozid, calendoflazid, rutin, calendoflavonozid izoramnetin-3-O-2- izoramnozilrutinozid,izoramnetin-3-Orutinoid,quercetin-3-O-glucozidai quercetin-3-O-rutinoside [11]. Isorhamnetin 3-O-neohesperidoside IsoramnetinFig. 3. Structuri de flavonozide. Uleivolatil Florile de Calendula officinalisconin maximal uleivolatil0,97% n faza de inflorire deplin i minimal n n faza de prenflorire(0,13%). Deasemenea n diferite etape al ciclului fenologic au fost determinate monoterpene, sesquiterpine.

Uleiuri volatile - confer miros caracteristic i difer n materia prim proaspt i cea uscat: florile proaspete conin ntre 0,1-0,2%, iar florile uscate 0,03% (Flora dItalia, 1994) [12].

Tabelul 3.ComponenaKIConinutul, %

-Tuien9080.10

-Pinen9282.00

Sabinen9600.80

- Pinen9690.90

Limonen10201.60

1,8 - Cineol102215.40

-Cimen10260.20

Trans--ocimen10331.20

-Terpinen10490.10

-3-Carinen10500.30

Nonanal10991.30

Terpinen-4-ol11741.20

3-Ciclohexinen-1-ol11750.30

-Felandrinen11760.10

-Terpeneol12050.40

Geraniol125719.80

Carvacrol12720.10

Bornilacetat12830.10

Sabinilacetat12880.00

-Cubenin13470.30

-Copenin13760.00

-Cuborbonin13850.10

-Cubenin13890.10

-Gurunen14090.40

Aromadendrin14100.60

-Cariofilen14200.10

-Langenin14500.30

-Humulen14541.30

Germacrenin D14811.90

Aloramandrenin14860.10

-Selinen14860.30

Calaren14942.70

Murolen14981.70

-Cadinen15227.40

Cadina 1,4-dien15311.40

-Cadinen15375.30

Nerolidol15591.10

Palustron15690.50

Endoburbonen15750.10

Oplonon16090.00

-Cadinol165510.50

T-murolol165917.60

Epi-biclo-Sesquifelandren16630.30

Randamentul uleiului (%)0.59

CarotenoiziCarotenoide - asigur culoarea galben, portocalie, roie sau albastr esuturilor n care sunt localizate. Florile de Calendula fac parte din categoria plantelor care sintetizeaz cantiti nsemnate de carotenoide (BACO, 2002).Carotenoiziculuteinasi zeaxantinafiindprincipali compui (88-92%),au fost identificatenflori.La speciile cu flori portacalii licopenul este responsabil pentru

culoare,n timp ce n speciixantofilecu florigalbenesunt dominante. n flori tubulare de culoare oranj coninutul de carotenoizi este egal cu 1.5g/100g [12,34]. CumarineExtractul etanolic din inflorescenile de C. officinalis L. conine cumarine: coumarin -scopoletin (7-hidroxi-6-metox cumarin), umbelliferone (7-hidroxicumarin), i esculetin(6, 7-hidroxcumarin) [7,17]. Chinone

n C. officinalis L.au fost nregistrate urmtoarele chinone: n cloroplaste- plastochinon, filochinon,-tocoferol; n mitocondrii ubichinon, filochinon,- tocoferol, nfrunze filochinon [7,9]. Aminoacizi

n extractul etanolic din flori de C. officinalis sunt prizeni 15 aminoacizi: alanin, arginin, acid aspartic, aspargin, valin, histidin, acid glutamic, leucin, lisin, prolin, serin, tirosin, treonin, metionin, fenilalanin. n frunze aproximativ se conin 5 % de aminoacizi, n tulpini-3,5%, n flori- 4,5 % [17,28].

Polizahariden extractul etanolic din nflorescene de C. officinalis L., s-a demonstrat prezena polizaharidelor, PS-I, - II, -III (13) --D- galactoza, -arabinoza, -L-rhamnoza [35].

Acizi grai.

Din totalul acizilor grai ai uleiului de calendula 50-60% sunt reprezentai de acidul calendic, un acid gras polinesaturat lipsit de toxicitate, cu proprieti antiinflamatoare in vivo i care acioneaz ca inhibitor (in vitro) (DELLA i colab., 1991). Unele cercetri au scos n eviden un coninut mai mic de acid calendic n seminele verzi (aprox. 8,62%), coninut ce crete la 26,6% la seminele imature i ajunge la 53,0% la cele mature (FRITSCHE i HORNUNG, 1999), sau chiar la 60,0% (Mclean i Clark, 1956).

Alte substane

Hidrocarburile saturate reprezint cca. 0,015% din greutatea florilor de glbenele. Vitamina C unul dintre nutrienii indispensabili pentru buna funcionare a tuturor organismelor vii, se gsete n cantiti cuprinse ntre 0,133% i 0,310%. Substane minerale: K, Ca, Mg, Fe, Mn, Cu, Zn, Mo, Cr, Se, Ni, I, Al, Sr, Pb; coninutul lor n cenu este de cca. 8,01% (Isaac, 1992).1.9.1Compoziia chimic a inflorescenelor soiurile de C. officinalis L. Tabelul 4.Coninutul de flavone i polifenoli n antodiile soiurilor moldoveneti de Calendula officinalis L.[6]. (Gonceariuc, 2003, 2008) SoiulConinutul de flavone, exprimat n rutin, g/%Coninutul de polifenoli exprimat n cinarin, g/%

200220032004X200220032004X

Natali0.8740.8710.8750.8730.9790.9890.9950.988

Diana0.6080.6050.6580.6241.0431.0101.0621.038

Populaie local, martor0.3840.3910.3880.3870.4580.4710.4610.463

1.9.2 Date privind aciunea farmacologic a speciei C. officinalis L.

Actiune farmacodinamica: imunostimulatoare (datorita prezentei

poliholozidelor omogene); antiinflamatorie, decongestiv, antiseptic;

antimicrobian (inhiba dezvoltarea E. colli, Stafilococul aureu, Candida albicans,

Trichomonas); cicatrizanta (saponozide, carotenoide, flavone), grabeste vindecarea

si regenerarea esuturilor, regleaz ciclurile menstruale, carminativ; regleaz funcia biliar prin principiile amare; hipolipemianta (saponozide); coleretic (esteri cafeilchinici); spermicid (saponozide); oestrogenic (steroli). Aciunea antibacterianPlantelecontinu s fieun ajutorterapeutic importantpentruatenuareaafectiuniale omenirii.Datorit cercetarelor ale diferitor parti(rdcin,frunzeiflori)ale plantelor deCalendula officinaliss-a demonstratactivitatea antibacterian mpotrivapotenialuluiunorbacteriiimportante,i anume deSalmonella typhi,Klebsiellapneumoniae,Enterobacteraerogenes,Escherichia coli i aleextractelor apoase,alcoolice,cu cloroformieter petroleic, folosindmetoda dediscde difuzien agar.Dei toateprile planteiau demonstrat o activitate semnificativ anti-micrbian,dar cea mai mare activitate antibacterian a fost

observatn extractul cueter petroleicdinfrunze uscate mpotrivaKlebsiella pneumoniae. Tabelul 5. Activitatea antibacterian aproduselor vegetale proaspetede C. officinalis L. Zona de inhibiie (mm)

Partea analizat a planteiExtracteE.coliSalmonella

typhiKlebsiella

pneumoniaeEnterobacter

aerogenesAgrobacterium

RdcinaApoase

Alcoolice

Cloroform

Eter4

6

6

7-

4

3

5-

-

3

43

11

11

12-

-

-

5

FrunzApoase

Alcoolice

Cloroform

Eter8

6

4

146

6

9

93

7

8

84

3

6

9-

5

6

8

FloareApoase

Alcoolice

Cloroform

Eter3

6

8

10-

8

6

9-

-

-

62

7

8

10-

3

6

6

Tabelul 6.Activitatea antibacterian aproduselor vegetale de C. officinalis L. Zona de inhibiie (mm)

Partea analizat a planteiExtracteE.coliSalmonella

typhiKlebsiella

pneumoniaeEnterobacter

aerogenesAgrobacterium

RdcinaApoase

Alcoolice

Cloroform

Eter5

5

-82

4

8

9-6

5

99

4

19

18-

-

5

8

FrunzApoase

Alcoolice

Cloroform

Eter8

11

7

109

7

12

1415

6

10

2079

11

13-4

4

6

FloareApoase

Alcoolice

Cloroform

Eter99

8

191510

10

1688

14

1555

10

12--

-5

Aciunea antioxidant

nextractul demetanolde 70% a fostextras succesiv cu eter cloroform,acetat deetil i n-butanol lasndu-se un rezidiu. Extractulaposfostanalizatpentru activitatea sa antioxidant,delipidelipozomal Fe2+ induse deperoxidarei acidascorbic.n eter,butanoliextractede ap, care conin flavonoide,antioxidani

i-auartat activitatea sa.Extractele depropilenglicoliau fostanalizatepentruactivitatea antioxidantprinperoxidarealipidelor,ce au fost indicate din petale, care sunt mai puternice dect florile pe baza analizei de plasm i urin malondialdehida(MDA)iurin inventrationizoprostan.AcestrezultataratcCalendula officinalisare un profund efectpesistemul de aprareantioxidant nvitro i n vivo. Aciunea anticancerogen

Fracia solubil a extractului metanolic din flori de C. officinalis a demonstrat n vitro activitatea citotoxic. Calendulozid F6' O -n butil ester activ mpotriva leichemiei, cancer la colon, melanomei. Calendulozid G6 O- metil esteractiv mpotriva cancerului ovarian, cancerului renal. Activitatea hepotoprotectoareExtractulhidroalcoolicdinflorile de C. officinalis, avnd n vedereintoxicaia cu CCl4 obolanilor albinoi, Wistar, lao dozde10 ml / kg, a dus lao reducereahepatocitolisei cu 28,5%,datoritreduceriin glutamo-oxalat de-transaminazei (GOT)iglutamo- piruvat-transaminazei (GPT). Cu toate acestea, histoenzimologia artatreducereade lactat dehidrogenazei(LDH),succinatdehidrogenazei(SDH),citochromoxidasei(Cyox)iMg2+-dependente adenozintriphosphatasei(ATP-aza). Extractul apos de C. officinalis este efectiv mpotriva celulelor canceroase n ficatul uman HepG2/C3A,SK-HEP-1,HA22T/VGH,Hep3BiPLC/PRF/5-, cuun efectinhibitorde 25 pn la26%lao doz de 2000micrograme/ml.

Activitate imunostimulatoareFraciunea depolizaharide din extractul florilor de C. officinalis a artat efectulimunostimulator, bazndu-se pe testul de granulocitare in vitro. Polizaharide III au artatcel mai mare procent de fagocitoz(54- 100%),lao concentraie de 10-5-10-6mg/ml,n timp cePS I iPS-II au demonstrat 40 57mg/ml i respectiv 20- 30% de fagocitoz. Aciune antiinflamatoare i antiedematoasFracia solubil de etil acetat a extractului metanolic din flori de C. officinalis a demonstrat inhibarea cea mai puternic (84%) a 12-o-tetradecanol-forbol-13-acetat(TPA) inflamaie indus (1mg/ureche) la oareci cu ID50 valoare de 0.05-0.20 mg/ureche fa de indometacin-medicament de referin. O dz de 1200 mg/ureche a extractului hidro alcoolic a demonstrat inhibarea de 20 % AU provocat oaricului cu ulei din croton. Activitatea a fost atribuit triterpenoidelor, cei mai activi compui fiind: faradiol-3-miristic acid, faradiol-3-palmitic acid i 4-taraxasterol .1.10. Produse fitoterapeutice obinute din specia C. officinalis L. Extractul de Calendula se folosete n industria cosmetic, sub form de past de dini,ampoane, loiuni, creme , cu efecte remarcabile asupra tenului i

cavitii bucale. Florile pot fi utilizate n calitate de repeleni, deoarece

semnate lng trandafiri reduc atacul de afide [34].Tincturile i infuziile de glbenele pot fi utilizate cu succes pentru anihilarea aciuniifluturilor, narilor [34,35].Din semine se extrage uleiul calendic, utilizat industrial i n arta picturii, iar roturile desemine bogate n proteine se folosesc n furajareaanimalelor. Ca plante melifere, glbenelele sunt intens vizitate de albine, atrase de culoarea iconinutul n polen al inflorescenelor [28,30].

Produse nregistrate n Republica Moldova [31,33]1.Unguent din Calendula off. 50,0 gr Dr. Thheiss( Rusia)

2.Crem cu Glbenele 50,0 ml- Rombalsam (Romania)

3.Tinctur de Glbenele 50,0 ml Depafarm (Moldova)

4.Flori de Calendul 50,0 gr (Moldova) [34]CAPITOLUU II. PARTEA EXPERIMENTAL2.1. Obinerea produsului vegetalPerioada de recoltare la glbenele ncepe n luna iunie. Recoltatul, de regul, se face dup ora 9 dimineaa, cnd s-au deschis primele rnduri de flori ligulate n inflorescene. Se recolteaz pe timp nsorit pn seara. Sunt recoltate antodiile ntregi, sau numai florile ligulate de la antodiile deschise. Nu se recolteaz pe timp de ploae sau dac nc nu s-a ridicat roua. Nu se admite presarea inflorescenelor recoltate n recipientele de recoltare. Pentru fabricarea alifiei de glbenele se recoltez mecanizat plantele ntregi la nlimea tulpininii unde sunt formate inflorescene.

Materia prim recoltat nu se pstreaz n grmezi pentru a evita ncingerea i pierderea culorii. Uscarea se face n ncperi bine aerisite, curate, la umbr, pe rame, hrtie n straturi subiri. Se pot usca i n usctorii la temperaturi de 40-450C. Uscarea se poate efectua i n instalaii cu microunde sub flux continuu. Randamentul de uscare este 6-8:1 n dependen de gradul de invoaltare a antodiilor pentru florile cu receptacul (inflorescene) i 8-10:1 pentru florile ligulate. Productivitatea culturii depinde de soi, condiii de cultivare i de numrul de recoltri. Plantaiile recoltate de 3 ori pe sptmn n care nu au rmas inflorescene ce au format semine sunt mai productive. De pe 1 ha se obin 1,3 t/ha inflorescene uscate.

Dup uscare materia prim de culoare portocalie cu miros specific se pstreaz n cutii, lzi cptuite cu hrtie. ncperile unde se depoziteaz lzile, cutiile vor fi curate, bine aerisite, uscate i ntunecoase pentru a evita decolorarea florilor.

Fig.3. Produse vegetale (Flores) de: A- C. officinalis L. populaie local, B - C. officinalis L. soi Diana, C - C. officinalis L. soi Natali. 2.2. Analiza calitativ prin reacii de identificare.2.2.1. Identificarea saponozidelor.1. Reacia de formare a spumei: bazic se formeaz spum de cteva ori mai mult dup volum i mai stabil. Se iau dou eprubete , n una se toarn 5 ml de HCl 0,1 n ,iar n alta 5 ml NaOH 0,1 n. Pe urm n ambele eprubete se adaug cte 2-3 picaturi de extract sau soluie a saponozidelor i se agit energic. La prezena n produsul vegetal a saponozidelor triterpenice n ambele eprubete se formeaz spum egal dup volum i stabilitate [9,13]. Tabelul 7.

Reacia de identificare a saponozidelor.ReactiveRezultatele reaciilor

C. officinalis L. (populaie local)C. officinalis L.

(soi Diana)C. officinalis L(soi Natali)

1.0,1 . NaOH+++

0,1 . HCl+++

Legenda: > absena efectului analitic;

> prezena efectului analitic.Cocluzie: Analiza rezultatelor denot, c saponozidele sunt prezente n toate probele analizate.2.2.2. Identificarea alcaloizilor1. Reactivul Bouchardat: Cu majoritatea alcaloizilor n soluiile slab acide aceste reactive formeaz precipitat brun.

2. Reactivul Draghendorff: Muli alcaloizi n soluii acide formeaz precipitat de culoare roie portocalie sau roie crmizie.

3. Soluia de tanin: n soluiile de acid alcaloizii formeaz cu taninul un precipitat amorf albui sau glbui.

4. Soluia acidului fosfomolibdenic: Acesta e unul dintre cele mai sensibile reactive. Cu alcaloizii el formeaz precipitat glbui, ce capt peste un timp o nuana albastr sau verde, n urma reducerii acidului molibdenic.

5. Soluia acidului fosfowolframic: Acidul fosfowolframic cu muli alcaloizi formeaz precipitat albui.

6. Soluia acidului picric: Acidul picric formeaz cu o serie de alcaloizi precipitat (picrat) de culoare galben. Unii alcaloizi nu reacioneaz cu acidul picric (cafeina, morfina, aconitina ) [36]. Tabelul 8. Reacia de identificare al alcaloizelor. ReactiveRezultatele reaciilor dup metodRezultate obinute

C. officinalis, populaie localC. officinalis,

soi DianaC. officinalis, soi Natali

1.Reactivul DraghendorffPrecipitat de culoare roie-caramezie

2.Reactivul BouchardatPrecipitat brun

3.Soluie de taninPrecipitat amorf alb sau glbui

4.Soluia acidului fosfomolibdenicPrecipitat glbui+++

5.Soluia acidului fosfowolframicPrecipitat alb

6.Soluia acidului picricPrecipitat galben

Legenda: > absena efectului analitic; > prezena efectului analitic.Concluzie: Analiza reacilor efectuate denot , c nici una din speciile de C. studiate nu conin alcaloizi.2.2.3. Identificarea substanelor tanante.1.La 2-3 ml de extract se adaug 4-5 picturi de soluie de alaun de fier i amoniu. n cazul substanelor tanante hidrolizabile apare culoare sau precipitat negru albastru iar n cazul celor condesate precipitat negru verde. 2.La 2-3 ml de extract se adaug 3-4 picaturi de acid acetic de 10% i acetat de plumb de 10%. na cazul substanelor tanante condensate apare o coloraie negru verde iar n zull celor hidrolizabile precipitat de culoare neagr.

3. La 2-3 ml de extract se adaug 4-5 picturi de nitrat de sodiu i acid clorhidric de 0,1 n. n prezena substanelor tanante hidrolizabile apare o coloraie cafenie. Reacia de identificare al substanelor tanante. Tabelul 9. ReactiveRezultatele reaciilor dup metodRezultate obinute

C. officinalis L. (control) C. officinalis L. (soi Diana)C.officinalis L. (soi natali)

1.Soluie de alauni de fier i amoniuculoare sau precipitat negru-albastru (t. hidrolizabile)

precipitat negru-verde (t.condensate)+++

2.Acid acetic 10% i acetat de plumb 10%precipitat

(t. hidrolizabile)

coloraia negru-verde(t.condensate)+++

+

3.NaNO3 i 0,1 n. lcoloraie cafenie(t. hidrolizabile)

Legenda: > absena efectului analitic; > prezena efectului analitic.Cocluzie: Analiza rezultatelor denot, c n toate speciile analizate se conin substane tanante condensate. 2.2.4. Identificarea flavonozidelor 1. Proba cianidinic (proba Chinoda). 2 ml d extract se adaug 5-7 picturi de HCl concentrat i 10-15 mg Zn metalic, peste 3-5 min se observ o coloraie roie, portocalie, roz. Pentru accelerarea reaciei i identificarea culorii se recomand a nclzi amestecul de reacie (2-3 min) la baia de ap fierbinte.

2. Reacia cu soluie de acetat de plumb bazic. La 1 ml de extract se adaug 3-5 picturi soluie de 2% de acetat de plumb bazic. Apariia coloraiei galbene-portocalii denot prezena flavonoidelor.

Fig. 1. . Proba cianidinic cu extract din flori de C. officinalis: 1- populaie local, 2 - soi Diana, 3 - soi Natali.Concluzie: Efectund proba cianidic am constatat c n C. officinalis L. populaie local, sunt prezente aurone i calcone iar n restul probelor sunt flavone i flavonoli.Fig. 2. Reacia cu soluie de acetat de plumb bazic cu extract din flori de C. officinalis: 1 - populaie local, 2 - soi Diana, 3 - soi Natali.Concluzie: : Reacia cu soluia de acett de plumb bazic denot prezena flavonoidelor n toate probele analizate. Concluzie: Efectund analiza calitativ prin reacii de identificare am constatat cn toate probele analizate sunt prezente substane tanante condensate, lipsesc alcaloizi, sunt prezente saponozide i flavonozide, efectund proba cianidicinc am observat coloraia roz la C.officinalis ceea ce denot prezena auronelor i calconelor, iar in celelalte dou probe prezena flavonelor i flavonolilor.

2.2.5. Identificarea flavonozidelor prin cromatografia pe strat subire

Tehnica de analiz.Soluie test s-a obinut din 1g de pulbere (flori de galbenele mrunite) care se amestec cu 30ml de alcool etilic 70% l i se menine pe baie de ap timp de 15 min apoi se filtreaz.Soluia de referin: soluie de 0,1% de rutozid, hiperozid, izoquercitrozid, quercitrozid, quercitol, acid clorogenic, acid cafeic n metanol.

Faza staionar: plci de silicagel GF 254 (Merk).

Faza mobil : acetat de etil : ap : ac. formic : ac. acetic (72:14:7:7 V/V/V)

Aplicare: 10 ml din soluiile test i 5L din soluiile de referin sub form de benzi de 10 mm. Migrare: 10 cm. Uscarea plcilor: 100-105 C timp de 10 min.

Detecie: - se pulverizeaz placa cu o soluie de 10g/l de reactiv NEU (esterul acidului difenilboric cu aminoetanol) n metanol i apoi cu o soluie de 50g/l de polietilenglicol 4000 n metanol. Dup 30min se examineaz placa n lumin UV la 365nm

Fig.1. CSS extractelor hidro - alcoolice la lumina UV 366 nm din flori de C. officinalis: 1 populaie local, 2 soi Diana, 3 soi Natali., 4- rutozida. Martori: 5 hiperozida, 6 -izoquercitrozida, 7 quercitozida, 8-quercitolul, 9 acid cafeic, 10- acid clorogenic.

Prin cromatografie pe strat subire (CSS) s-a demonstrat prezena flavonoidelor n nfloriscenele analizate. n urma examinrii cromatogramei se observ prezenarutozidei (Rf=0.52), hiperozidei (Rf =0,74), quercetolului ( Rf =0,98). Se observ c culoarea spoturilor la lumina zilei este oranj. La lumina UV spoturile, corespunztoare flavonelor, fluoresceaz galben-portocaliu. S-a demonstrat prezena acizii fenolici: acidului cafeic (Rf = 0,97) i acidului clorogenic (Rf = 0,61). Spoturile corespunztoare acidului clorogenic i acidului cafeic n lumina UV sunt de culoare albastr. Cocluzie: Prin metoda spectrofotometric am identificat prezena unor flavonozide i fenoli n UV la o lungime de und de 366 nm.2.3. Dozarea totalului de flavonoideDozarea totalului de flavonoide n inflorescene de C. oficinalis populaii local (martor), C. officinalis soi ,,Diana, C. officinalis soi ,,Natali s-a efectuat prin tehnica spectrofotomertric elaborat de Kurkin et. al. (2009). Analiza contitativ a flavonoidei izoramnetinei, s-a efectuat prin tehnica cromatospectrofotomertric elaborat de V. N. Abdullabecova et al.(2001). Metoda de dozare a totalului de flavonozideDozarea totalului de flavonozide n inflorescene de Calendula oficinalis populaii local (martor), Calendula officinalis soi ,,Diana, Calendula officinalis soi ,,Natali s-a efectuat prin tehnica spectrofotomertric. 1g produs vegetal (prob exact) mrunit, trecut prin sita cu orificiile de 1 mm, se plaseaz n balon cu dop rodat de 100 ml, se adaug 50 ml de alcool etilic 70%. Balonul se cntrete, apoi se nclzete la fierbere, n baia de ap, la reflux, timp de 90 min. Dup aceasta balonul se cntrete i se adaug alcool etilic pn la masa iniial. Extactul se filtreaz i se rcorete timp de 30 min (soluie extractiv).

Prepararea soluiei de analizat: 1 ml de soluie extactiv se transfer ntrun balon cotat de 50 ml, se adaug 2 ml soluie alcoolic de AlCl3 3% i se completeaz cu alcool etilic 95% (soluia de analizat A). Soluia de referin se pregtete n felul urmtor: 1 ml de soluie extactiv se transfer ntrun balon cotat de 50 ml, se adaug 2-3 picturi de soluie de acid acetic i se completeaz cu alcool etilic 95% pn la cot ( soluia de referin A).

n paralel se determin absorbanta unei soluii etalon de rutozid. 0,025 g (prob exact) de rutozid se transfer ntr - un balon cotat de 50 ml i se dizolv n 30 ml de alcool etilic 70 % la fierbere n baia de ap. Apoi se rcorete i se aduce pn la cot cu etanol de 70% (soluia A de rutozid). 1 ml soluie A de rutozid se transfer ntr-un balon cotat de 25 ml, se adaug 1ml de soluie alcoolica de AlCl3 3% i se aduce pn la cot cu alcool etilic de 95% (soluia de analizat a rutozidei B). Soluia de referin a rutozidei: 1ml soluia A de rutozid se transfer ntr - un balon cotat de 25 ml, se adaug 1 pictur de soluie de acid acetic i se aduce pn la cot cu alcool etilic de 95% ( soluia de referin a rutozidei B) [19,23].

Absorbana soluiilor analizate s msoar la lungimea de und 412 nm, peste 40 min dup prepararea soluiilor [10]. S-a efectuat cu spectrofotometru Agilent 8453.

Unde: D densitatea optic a soluiei de analizat;m masa produsului vegetal;W pierderea n mas la uscare.

Fig.2. Spectre de absorbie n UV a extractelor hidro alcoolice de:1- rutin, 2- C. officinalis, populaie local, 3- C. officinalis, soi Diana, 4 - C. officinalis, soi Natali.

Concluzie: Din literatur cunoatem c aciunea antioxidant se datoreaz flavonozidei- izoramnetinei care am dozat-o prin tehnica spctrofotometric i am obinut urmatoarele rezultate: coninutul maximal de flavonoide n recalcul la rutozid se conine n C. officinalis soi Natali- 2.48 % i coninutul minim de flavonide n C. officinalis L.-1.9 %.2.4 Dozarea a diheperozidei izoramnetinei Metoda de dozare a diheperozidei izoramnetinei5g produs vegetal (prob exact) mrunit, se plaseaz n balon cu dop rodat de 100 ml, se adaug 40 ml de alcool etilic 70%. Balonul se nclzete la fierbere, n baia de ap, la reflux, timp de 40 min. Dup aceasta extractul se rcorete la temperatura camerei, se filtreaz ntrun balon cotat de 100 ml. Apoi n balon cu produs se mai adaug 40ml de alcool etilic 70% i se continue nclzirea n baia de ap, la reflux, timp de 30 min. Dup rcire extractul alcoolic se filtreaz n balon cotat, iar produsul se prelucreaz cu 10 ml alcool etilic 70%, dupa care se filtreaza in aceealai balon. Volumul balonului pin la cot se aduce cu alcool etilic 70%, apoi se agit. Pe linia de start a plcii de ,,Silufol 15 x 15 cm cu micropipeta de 0,1 ml se aplic 0,05 ml de extract hidro-alcoolic i 0,02 ml solutie standart de rutin n form de benzi de 2 cm . Cromatografia se petrece in sistemul butanol acid acetic-apa (4:1:5). Dupa ce frontul solventului trece 10 cm, placa se scoate din camer i se usuc la aer 30 de minute. Placa se analizeaz la lumina UV cu lungimea de unda 254 nm. Zonele marcate cu rutin i zona probei martor cantitativ se trec n balon, se elueaz cu 10 ml alcool etilic 40%, agitnd 30 de minute Soluia se trece prin filtru de hrtie. Densitatea optic se masoar la spectrofotometru cu lungimea de und 355 i 360 nm (rutina) n cuv cu grosimea stratului de 10 mm.Soluia de referin- se ia eluatul plcii cromatografice de aceeai marime ca i spotul de rutin.Pregatirea solutiei rutin-standart.0,1 g (prob exact) de rutin-standart, uscat pn la greutate constant la 130 0C, se dizolv n alcool etilic de 95% n balon cotat de 25 ml i se adduce pn la cot cu alcool etilicde de 9 5%. Spectrofotometru Metertech UV/VIS SP 8001.

Unde: A0- masa rutozidei-standard, g; A- masa produsului vegetal, g; V2 volumul soluiei de analizat, aplicat pe cromatogram, ml; V3 volumul extractolui etanolic, ml; V1- volumul soluiei de rutozid-standart, aplicat pe cromatogram, ml; V0 volumul soluiei de rutozid-standard, ml; D0, D1 densitatea optic a soluilor analizate [27,28].

Fig.4. Coninutul izoramnetinei n probele analizate, n recalcul la rutozid, %. Concluzie: Am dozat izoramnetina prin tehnica spectrofotometric cu rezultatele: coninutul maximal al izoramnetinei n probele analizate, n recalcul la rutozid l are C. officinalis soi Natali- 1.75 i coninutul minim C.officinalis soi Diana-0.8%. 2.5. Construireacurbei de calibrare pe baza absorbantelor corespunztoare unor soluii de rutozid de concentraii diferite

Se pregateste o serie de solutii standart de rutina. Aproximativ 0,1 g (prob exact) de rutozid standart se apun ntr-o colb cu capacitatea de 25 ml i se dizolva n 15 ml de alcool etilic de 95% la baia de apa , se racete i se adduce pin la cot. Pe linia de start a plcii de ,,Silufol 15 x 15 cm se pune 0,01; 0,02; 0,03; 0,04; 0,05; 0,06; 0,07 ml soluie pregatit. Cromatografia se petrece in sistemul butanol-acid acetic-apa (4:1:5), se usuc i se elueaz n 10ml de alcool etilic 40 % n timp de 30 minute ,periodic agitnd , se masoar densitatea optic n cuve cu grosimea stratului de 10 mmla lungimea de unda de 355 nm [9,34] .

Fig.5.Graficul de etalonare a soluiei standart de rutozid. Concluzii:

1. S-a demonstrat prezena n toate probele analizate: flavonoidelor (rutozidei (Rf = 0.52), hiperozidei (Rf = 0.74),quercitolului (Rf = 0.98), substanelor tanante; saponozidelor, acizilor clorogenic (Rf = 0.61) i cafeic (Rf = 0.97).

2. Studiu comparativ a totalului flavonoidelor a demonstrat c: totalul flavonoidelor n produsele analizate este egal cu: 2.45% C. officinalis L. soi Diana, 2.48% C. officinalis L. soi Natali, 1.9% specia C. officinalis L. 3.Coninutul izoramnetinei prin tehnica cromato-spectrofotometric este egal cu: 0.8% la C. officinalis L. soi Diana, 1.78% C. officinalis L. soi Natali.

4. A fost dovedit opurtunitatea studiului chimic a soiurilor noi de C. officinalis L. obinute n Republica Moldova, ca n viitor s fie folosite nu numai n scop ornamental dar i medicinal.Bibliografia.

1. Baciu Adriana-Daniela, Mihalte Lucica, Sestras Adriana F., Sestras Radu E. Variability of Decorative Traits, Response to the Aphis fabae Attack and RAPD Diversity in Different Genotypes of Calendula. Notulae Botanicae Horti Agrobotanici Cluj-Napoca, 38 (3) 2010, p. 265-270.

2. Baciu Adriana-Daniela Cercetri privind mbogirea fondului genetic la Calendula, Rezumat al tezei de doctoran, Cluj-Napoca 2011, p. 4.

3. Brnzil Ion, Vornicu Zina, Jelezneac Tamara, Rusu Ludmila , Baranova Natalia Calitatea materiei prime de glbinele (Calendula offiCinalis L.) nFuncie de invoaltarea antodiilor. Mediul ambian,3 (27), 2006, p. 6-8.4. Brnzil Ion Involitatea antodiilor la Calendula officinalis L. Mediul ambiant Nr. 1 (18) 2005, p. 15-18. 5. Gonceariuc Maria. Contribuii n ameliorarea speciei Calendula officinalis L. Buletinul Academiei de tiine a Moldovei, t. biolog. chim. agricole, 2003, nr.2(291), p.101-103, Chiinu.6. Gonceariuc Maria. Calendula officinalis L./ Plante medicinale i aromatice cultivate. CE UASM, Chiinu, 2008, p. 60-75.7. Moscovici Miu, PopaAlina et. al. Curs: Utilizarea plantelor msdicinale n terapie, Romnia-Bulgaria, 2011, p. 33-35.

8. Mustea G., BRNZIL I. Plante medicinale pentru sntatea dumneavoastr. Chiinu: TC. 2002, p. 30.

9. Abajova RL, Aslanov SM, Mamedova ME. Amino acids of calendula officinalis. Chemistry of Natural Compounds, 1994; 30(15): 641-641.10. Azzaz N. A., Hassan E. A., Elemarey F.A. Physiological, anatomical, and biochemical studies on pot marigold (Calendula officinalis L.) plants. African Crop Science Conference Proceedings Vol. 8. pp.1727-1738.11. Bissa S., Bohra A. Antibacterial potential of pot marigold. Journal of Microbiology and Antimicrobials Vol. 3(3), pp. 51-54, March 2011.12.Bisset N.G. Herbal drugs and phitopharmaceuticals. Stuttgart: MedPharm CRC Press, p.566. 13. Chakraborthy Guno Sindhu Phytochemical screening of Calendula officinalis Linn leaf extract by TLC. IJRAP 2010, 1 (1) p. 131-134.14.Gonceariuc Maria. New gene sources of Calendula officinalis L. Acta Phytoterapica Romanica, VI, nr.1-2, p.8-10.15.Gonceariuc Maria, Balmu Zinaida. Studies of Genetics and Breeding of Aromatic and Medicinal Plants carried out in the Republic of Moldova. / Plant genetic stoks the basis of agriculture of today. IPGR, Plovdiv, 2008.16.Goodwin TW. Studies in carotenogenesis: the carotenoids of the flower petals of calendula officinalis. Biochem J, 1954; 58: 90-94.

17. Huanu-Bashtawi Luminia, Toma C. A Histo-Anatomical study of the modifications induced by thiophanate methyl on the Calendula officinalis L. Strain Analele tiinifice ale Universitii Al. I. Cuza Iai Tomul LIV, fasc. 2, s.II a. Biologie vegetal, 2008, P. 63-72.18. Pun E., Mihalea A., Dumitrescu A, Verzea M., Coocariu O. Tratat de plante medicinale i aromatice. Edit. Academiei Romne, Bucureti, 1986, V.I, p.137-144. 19. Treben Maria. Sntatea din farmacia naturii. Hunga-print, Budapesta, 1992, p. 68

20. Lin L. T., Liu L.T., Chiang L.C., Lin C.C. In vitro antihepatoma activity of fifteen natural medicines from Canada. Phytother Res, 2002; 16: p. 440-444. 21. Muley BP, Khadabadi SS and Banarase NB Phytochemical Constituents and Pharmacological Activities of Calendula officinalis Linn (Asteraceae). Tropical Journal of Pharmaceutical Research, October 2009; 8 (5): p. 455-465.

22. Neelesh Kumar, Joni Sharma, Sakshy Sharma Pharmacognostical and Phytochemical Investigation of Calendula Officinalis. Journal of Advanced Scientific Research, 2010, 1(1); p. 61-66.23. Okoh O.O., Sadimenko A.A., Afolayan A.J. The Effects of age on the Yield and Composition of the essential oils of calendula officinalis. Journal of applied sciences 7 (23): 2007, p. 3806-3810.24. Kemper Kathi J. Calindula. The longwood herbal task force and center for holistic pediatric education and research. 1999 (www.mcp.edu/herbal/default.htm).

25. Preethi K.C., Girija Kuttan, Ramadasan Kuttan Antioxidant Potential of an Extract of Calendula officinalis Flowers in Vitro and in Vivo. Journal Pharmaceutical Biology 2006, Vol. 44, No. 9, pp. 691697.26. Rasu M. A., Tamas M., Puica C., Roman. I., Sabadas M. The hepatoprotective action of ten herbal extracts I n CCl4 intoxicated liver. Phytother Res, 2005; 19: 744-749.27. alamon Ivan, Labun Pavol Cultivation differences between pot maringold (Calendula officinalis l.) varieties... 4th Conference on Medicinal and Aromatic Plants of South-East European Countries - Iai, Romnia, 2006, p.49.

28. Toma Liana Doina, Jitreanu Carmen Doina, Nechita Bogdan, Tinc Gabriela Effect of biofertilization on the inflorescences yield and the content of chlorophyll and carotenoid pigments in marigold (Calendula officinalis L.). 4th Conference on Medicinal and Aromatic Plants of South-East European Countries - Iai, Romnia, 2006, p. 51.29. . ., . . . - . 35, 10. 2001.

30. c P. P., . . . - :. 2000, c.102.

31. ., . ., .., .. . . 2009, 4 (9), .33-36.

32. . . . , . ,.40, 106, 118.33.Verzea M., Stoianov R. Tehnologia glbenelelor (Calendula officinalis L.) n Tehnologii de cultur la plantele medicinale i aromatice. 2001, p.120-126.34.Ghigul Farmacoterapeutic (2004).

35.Analiza chimic a plantelor medicinale. 1993.

Fig.3. Totalul de flavonoide (%), n recalcul la rutozid.

b

c

b

B

A

A

B

D

C

B

A

PAGE 1

_1376768092.unknown

_1397243206.unknown