cartografiado genético en bacteriasTransformación (tema 24)Conjugación (tema 25)Transducción (tema 26)

virus (tema 27)

Staphylococcus aureusBacillus cereus

Serratia marcescensProteus mirabilis

Tema 24. Transformación

Avery, McLeod y McCarty (1944):determinan que el ’principio transformante’ es el DNA

mecanismo de transformación

las bacterias pueden transferir genes

mediante la transformación

heteroduplex

célula competente

¡dos sobrecruzamientos!

Electroporación

mapeo genético mediante transformación

la frecuencia de cotransformación es inversamente proporcional a la distancia entre los genes

1.Sólo células transformantes (sólo ‘recombinantes’, no parentales)

2. Distancia en unidades de transformación:unidades de transformación =

= transformantes sencillos / total de transformantes

3. Relación entre dos genes:transformación doble (no ligados)cotransformación (ligados)

Genes ligados: en el mismo fragmento transformante (lineal), porque ¡siempre en el mismo cromosoma!

mapas genéticos por transformación

Medios de cultivo trp his tyr

colonias genotipos de crecen nº último genotipo

- - - 11.940 +++ 11.940+ - - 15.600 +++ -++ 3.660- + - 12.047 +++ +-+ 107- - + 13.120 +++ ++- 1.180+ + - 16.392 +++ -++ +-+ --+ 685+ - + 17.198 +++ -++ ++- -+- 418- + + 15.827 +++ +-+ ++- +-- 2.600

elaboración de un mapa genético mediante transformación

Transformación: trp+ his+ tyr+ trp– his– tyr–

Medios de cultivo trp his tyr

colonias genotipos de crecen nº último genotipo

- - - 11.940 +++ 11.940+ - - 15.600 +++ -++ 3.660- + - 12.047 +++ +-+ 107- - + 13.120 +++ ++- 1.180+ + - 16.392 +++ -++ +-+ --+ 685+ - + 17.198 +++ -++ ++- -+- 418- + + 15.827 +++ +-+ ++- +-- 2.600

genotipos número+ + + 11.940- + + 3.660+ - + 107+ + - 1.180+ - - 2.600- + - 418- - + 685 trp his tyr

,34 ,13 ,40

unidades de transformación = = transformantes sencillos / total de transformantes

marcadores (genes) se estudian dos a dos

distancia trp-his =(+-) + (-+)

(+-) + (-+) + (++)= 0,34

distancia his-tyr = 0,13 distancia trp-tyr = 0,40 ojo: orden

Medios de cultivo trp his tyr

colonias genotipos de crecen nº último genotipo

- - - 11.940 +++ 11.940+ - - 15.600 +++ -++ 3.660- + - 12.047 +++ +-+ 107- - + 13.120 +++ ++- 1.180+ + - 16.392 +++ -++ +-+ --+ 685+ - + 17.198 +++ -++ ++- -+- 418- + + 15.827 +++ +-+ ++- +-- 2.600

genotipos número+ + + 11.940- + + 3.660+ - + 107+ + - 1.180+ - - 2.600- + - 418- - + 685

transformantes frec.trp his tyr

+ ,768 + ,835 + ,796+ + ,637 + + ,757+ + ,585

distancia trp-his = (+-) + (-+)(+-) + (-+) + (++)

= 0,34

distancia his-tyr = 0,13 distancia trp-tyr = 0,40

trp his tyr

,34 ,13 ,40

Ligados o independientes

frec. de cotransformación vs.

transformación independiente

Medios de cultivo trp his tyr

colonias genotipos de crecen nº último genotipo

- - - 11.940 +++ 11.940+ - - 15.600 +++ -++ 3.660- + - 12.047 +++ +-+ 107- - + 13.120 +++ ++- 1.180+ + - 16.392 +++ -++ +-+ --+ 685+ - + 17.198 +++ -++ ++- -+- 418- + + 15.827 +++ +-+ ++- +-- 2.600

genotipos número+ + + 11.940- + + 3.660+ - + 107+ + - 1.180+ - - 2.600- + - 418- - + 685

transformantes frec.trp his tyr

+ ,768 + ,835 + ,796+ + ,637 + + ,757+ + ,585

distancia trp-his = (+-) + (-+)(+-) + (-+) + (++)

= 0,34

distancia his-tyr = 0,13 distancia trp-tyr = 0,40

,768x,835=,641 ≈ ,637

,768x,796=,611 > ,585 lejanos

,835x,796=,664 < ,757 cercanos

trp his tyr

,34 ,13 ,40

independiente vs cotransformación

ingeniería genética

capítulo 8

problemas

aprox. 1h de clase: 17 de abril de 2009

problemas: 1-6