citogenetica i · 2013-10-23 · lm sc.biosanitarie ricerca diagnostica 2013-14 by na citogenetica...

LM Sc.Biosanitarie Ricerca Diagnostica 2013-14

By NA

Citogenetica I

La citogenetica e` lo studio dei fenomeni genetici attraverso l’analisi citologica dei cromosomi al microscopio. Ferguson-SmithLezione 13


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1-3 gruppo A 4-5 gruppo B

X-6-12 gruppo C

13-15 gruppo D 16-18 gruppo E

19-20 gruppo F Y-21-22 gruppo G

Cariotipi a confronto


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G-bande


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Selezione delle metafasi

J Ottimama…..


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L Puo’essere anche cosi’...MCromosomi non ben

riconoscibili, difficili anche da

contare.Scartare! (potendo)


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L .. O cosi’Selezione delle metafasi

M Troppo contrattipero’ si puo’ usareper contarli.Scartare! (potendo)


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Selezione delle metafasiKSufficienteM Si possono contarePuo’ essere utile peranalizzare i cromosominon sovrapposti


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KDiscretaM Si possono contare, e anchese ci sono alcunesovrapposizioni,si possono analizzare



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Selezione delle metafasiK Buona

M Si possono contare, e anchese ci sono alcunesovrapposizioni,la morfologia deicromosomi e’buona


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1. SI CONTANO I CROMOSOMI : IMPORTANTE PER SOSPETTARE LA PRESENZA DI ALTERAZIONI NEL NUMERO CROMOSOMICO

2. SI APPAIANO GLI OMOLOGHI PER SIMILARITA’

3. SI METTONO IN ORDINE SECONDO LA CONVENZIONE

Come si fa il cariotipo?


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10

1611

9

46

Fare il cariotipo


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CARIOTIPO IN QM (indicare il bandeggio)

Cariotipo ordinato


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Diagramma


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46,XX - cariotipo normale Femminile

46,XY - cariotipo normale Maschile

Questo modo di scrivere ci da’ due informazioni:- numero totale dei cromosomi (46)- sesso dell’organismo

47,XY,+21Maschio con 47 cromosomi (invece di 46) ed un cromosoma 21 in piu’ (sindrome di Down)

46,XX,del(14)(q23) del=delezione 46,XY,dup(14)(q22q25) dup= duplicazione 46,XX,r(7)(p22q36) r=ring (cromosoma ad anello)

Terminologia


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FISH


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doppia elicadi DNA

A T C G G T A T C C T AT A G G C A T A G G A T

osservazionedel vetrino

A T C G G T A T C C T A

T A G G C A T A G G A T

denaturazione

cromosomasul vetrino

sintesi di una sonda complementare marcata con un fluorocromo

ibridazione della sonda suicromosomi denaturati sul vetrino

AT C G G

TA T C C T A

A T C G G T A T C C T AT A G G C A T A G G A TTT A G G C A T A G G A

FISH

A T C G G T A T C C T AT A G G C A T A G G A T

A T C G G T A T C C T A

T A G G C A T A G G A T

denaturazione


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Principio della fluorescenza


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:

filtro di emissione

specchio dicroico

filtro di eccitaz ione

obiettivo/condensatore

Ç

¹ # fotografia

CCD camera

Lampada a vaporidi mercurio

Elaborazione alcomputer

FISH : microscopio a fluorescenzaN Osservazione

al microscopio


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Cromosomi 1. denaturati2. colorati con DAPI

FISH: metafase in DAPI


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Sonde puntiformifluorescenti

FISH: segnali


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Sovrapposizione dell’immagine della sonda sull’immagine del DAPI

FISH: merge


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SONDE PER FISH


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DAPI

SONDA

MERGE

WCP


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DAPI

SONDA

MERGE

PCP


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2 SONDE PUNTIFORMI 3 SONDE PUNTIFORMI

COIBRIDAZIONI


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Duplicazione braccio corto del cromosoma Y

crom Ynormale

Yp duplicato

Alfoide crom Y

SRY46X -Y + mar(dupYp)

Individuo di sesso maschile azospermico


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Inversione pericentrica:4(inv)

liquido amniotico

4 inv(4)


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Traslocazione 1/15 in diagnosi prenatale

Prelievo di villi corialiSangue periferico madre

1 1/15 15/1 1546,XY,der(1)t(1;15)(1pter,15q23)matishder(1)t(1p;15q)(p36.33;q24.2)mat(pcp1p36;pcp15q)


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Traslocazione(3/22)

3 3/22 22/3 22


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Traslocazione 5/11

Liquido amnioticoSangue periferico padre


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Traslocazione 5/11

5 5/11 11/5 11


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insinv6/7

6 6del 7/6 y


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isocromosoma 21

21 isodic21

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