comment étudier la cytotoxicité?

Comment étudier la cytotoxicité?

Définition de « cytotoxicité »:

La cytotoxicité

A. La cytotoxicité est la propriété d'un agent chimique ou biologique à être toxique pour les cellules, éventuellement jusqu'à les détruire.

B. Les médicaments cytotoxiques inhibent ou empêchent le bon fonctionnement des cellules.

C. Est induite par des substances nocives pour les cellules, ayant donc la propriété de les détruire (exemple : un médicament cytotoxique).

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Méthodes d’étude de la cytotoxicité

• Comptage/dénombrement cellulaire

• Les perturbations de la perméabilité membranaire sont les plus nombreuses et les plus employées.

• On distingue 2 types de méthodes fondées sur :

- l'utilisation de colorants,

- le "relargage" de molécules biologiques dans le milieu extérieur


• Les colorants

• Principe : utilisation d’un colorant qui, en fonction de ses caractéristiques, pénètre dans les cellules vivantes OU mortes.La proportion relative des cellules colorées ou non est un reflet exact du nombre de cellules vivantes ou mortes et donc de la viabilité de l’ensemble de la population cellulaire, en relation directe avec la concentration du toxique étudié.

• Il existe 3 types de colorants :-les colorants vitaux ou d’exclusion (cellules mortes) -les colorants supravitaux ou d’inclusion (cellules vivantes) -les colorants nécessitant une étape de métabolisation (MTT -

mesure des capacités métaboliques)

• Colorant vital (d’exclusion) : le bleu trypanLes cellules intactes ne sont pas colorées


(3Z,3'Z)-3,3'-[(3,3'-dimethylbiphenyl-4,4'-diyl)di(1Z)hydrazin-2-yl-1-ylidene]bis(5-amino-4-oxo-3,4-dihydronaphthalene-2,7-disulfonic

Pourquoi qualifie-ton ces colorants d’exclusion?

A. ils excluent les cellules mortes

B. Le colorant est évacuer activement des cellules vivantes

C. Le colorant est importé dans lysosomes des cellules mortes

D. Le colorant est capté par les lysosomes des cellules vivantes

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• Colorant d’inclusion : le rouge neutreIncorporation par les cellules vivantes dans les lysosomes


http://www.aniara.com/pdf/INS-AKRN96.pdf Rouge neutre (rouge de toluylène)Chlorure de 3-amino-7-diméthylamino-2-méthylphénazine

Pourquoi qualifie-ton ces colorants d’inclusion?

A. ils sont inclus activement dans les cellules mortes

B. Le colorant est évacuer passivement des cellules vivantes

C. Le colorant est importé dans les cellules morte

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• Colorant supravital : MTTSeules les cellules vivantes et à activité mitochondriale intacte

sont colorées


Succinate

déshydrogénase

"MTT reaction" by Rogan Grant - Own work. Licensed under CC BY-SA 4.0 via Wikimedia Commons -http://commons.wikimedia.org/wiki/File:MTT_reaction.png#mediaviewer/File:MTT_reaction.png

• Colorant supravital : MTTSeules les cellules vivantes et à activité mitochondriale intacte

sont colorées


• Colorant nécessitant un étape de métabolisation :

test au MTTSeules les cellules vivantes et à activité mitochondriale intacte sont

colorées


Nombre de cellules croissant

• Fuite de molécule à l’extérieur de la celluleLes cellules dont la membrane est endommagée laissent échapper la

LDH (Lactate désHydrogénase)


noyau

LDH

Cellule vivante Cellule nécrotique

noyau

LDH

• Fuite de molécule à l’extérieur de la celluleLes cellules dont la membrane est endommagée laissent fuir la LDH

(Lactate désHydrogénase)


http://www.inserm.fr/var/inserm/storage/images/mediatheque/infr-grand-public/images/actualites/montage/414518-1-fre-FR/montage.jpg

Test de migration cellulaire

0 5h 10h 15h

Création d’une brèche

Test utilisé sur des cellules tumorales pour mesurer l’efficacité de molécules anticancéreuses

Qu’évalue-t-on dans le test de migration cellulaire?

A. La croissance des cellules

B. La prolifération des cellules qui vont, au final, combler la brèche

C. Le nombre de cellules qui franchissent la brèche

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Cytométrie en flux


Autres méthodes très nombreuses et très variés

-les méthodes morphologiques, qualitatives, non automatisables,

Hoechst 33258

DAPI (4’,6-diaminido-2-phenylindole)

Vous devez évaluer la toxicité d’une molécule. Comment faites

vous?

A. par un test (MTT ou dénombrement)

B. Dans plusieurs tests de même principes

C. Dans plusieurs tests utilisant des principes différents

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