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CONGRESO DE LA SEAP-AIP
ZARAGOZA 19-21 Mayo 2001
DETERMINACIÓN INMUNOHISTOQUÍMICA DE HER-2 EN
CÁNCER DE MAMA Y GÁSTRICO
Inmaculada García Pérez
Rodrigo López Castro
Angel Concha López
HUVN. Granada
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ESTANDARES DE HER2 OBTENIDOS A PARTIR DE TEJIDO
NORMAL DE MAMA
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Figure 1. b) Clustering based on the expression of 143 genes with higher expression in HER2-positive tumors. Tumors with HER2
amplification appear in grey color while tumors without HER2 amplification are in red color. Blue color represents down-regulation in the
gene expression and red means over-expression.
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Y CÁNCER DE ESTÓMAGO
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Pronóstico Predictivo
(Terapia)
Status HER2/neu
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HER2, aspectos moleculares
• Oncogen, localizado en el cromosoma
17q11.2-q12
• Codifica para una glicoproteína
transmembrana de 185 kDa (p185HER2)
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HER2, familia de receptores
• Proteína HER2 es un receptor de
membrana perteneciente a la familia de los
EGFR con actividad tirosín-quinasa.• EGFR (erbB-1, HER-1)
• HER-2/neu (erbB-2)
• HER-3 (erbB-3)
• HER-4 (erbB-4)
• Formación de Heterodímeros
• Diferentes ligandos
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HER2, estructura de la proteína
Dominio Extracelular
Dominio Intracelular
Membrana Citoplasmática
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SELECCIÓN DE PACIENTES
PARA HERCEPTIN :
¿IHQ, FISH O AMBOS?
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Algoritmo del estudio de HER2
-
Terapia con Herceptin
+
Retestado con FISH
2+
Terapia con Herceptin
3+
IHQ
Terapia con Herceptin
+ -
FISH
Caso tumor del paciente
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IHQ• Método más común para el testado de HER2
• -bien establecido, relativamente simple de usar
• -ampliamente disponible
• Metodología y puntuación/interpretación
• -diferentes anticuerpos (TAB250, CB11,
A0485, 4D5), sistemas de puntuación (%
positividad, intensidad de tinción, puntuación)
y fijadores
• -necesidad para optimizar los reactivos y
controles apropiados; interpretación subjetiva;
incertidumbre sobre la puntuación 2+
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Hercep Test-pros y contras
• PROS
• Estandarizado
• Controles
positivos
• Sistema de
puntuación
• Test sensible
• CONTRAS
• Costoso
• Problemas con los fijadores alcohólicos
• Número limitado de controles
• Falsos positivos
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Intensidad
de tinciónDAKO
policlonal
PAB-1
policlonal
TAB250
monoclonal
CB11
monoclonal
# % # % # % # %
0/1+ 76 54 60 42 110 77 99 70
2+ 25 18 33 23 10 7 12 8
3+ 41 29 49 35 22 15 31 22
2/3+ 66 46 82 58 32 23 43 30
TOTAL 142 142 142 142
INMUNORREACTIVIDAD DE HER2/neu EN 142
CARCINOMAS DE MAMA INVASIVOS: ESTUDIO
COMPARATIVO USANDO CUATRO ANTICUERPOS
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FISH
• 100% específico
• 96.5% sensible
• Baja variación interlaboratorio
• Equipamiento costoso y
especializado
• Disponibilidad limitada
• Algunos problemas con fijadores
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Estudio de la concordancia
FISH/IHQ de cortes de tejido
IHQ
207 28 67 21
FISH
7 2 21 176
3% 7% 24% 9%
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COMPARACIÓN DE DIFERENTES ANTICUERPOS
EMPLEADOS EN IHQ PARA ESTUDIO DE HER2/neu EN
CÁNCER METASTÁTICO DE MAMA.
N=42 DAKO PAB1 TAB250 CB11
FISH - + - + - + - +
<2.0 15 4 13 6 19 0 19 0
>/=2.0 2 21 1 22 5 18 2 21
Concordancia 36/42 (86%) 35/42(83%) 37/42(88%) 40/42(95%)
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Comparación entre CISH y FISH en la
detección de la amplificación de HER2/neu en
157 cánceres de mama
CISH
FISHNo
amplificación
(%)
Amplificación
(%)
No
amplificación120 (76.4) 0 (0)
Amplificación 10 (6.4) 27 (17.2)
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DISCORDANCIA ENTRE DIFERENTES
TÉCNICAS PARA DETERMINAR EL STATUS
DE HER2/neu EN CARCINOMA DE MAMA
CONCORDANCIA DISCORDANCIA
95% 5%
14%IHQ+/PCR+
81%IHQ-/PCR-
3%PCR-/FISH+
2%IHQ-/FISH+
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DISCORDANCIA EN LA IHQ DE HER2/neu EN
CARCINOMA DE MAMA PRIMARIO (CP) Y
METASTÁTICO (CM)
9/23 CP-/CM-
CONCORDANTES 23/3614/23 CP+/CM+
9/13 CP-/CM+
DISCORDANTES 13/364/13 CP+/CM-
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Q
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G
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Q
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N
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N
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N
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Z
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S
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N
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![Page 70: CONGRESO DE LA SEAP-AIP · 2012-07-13 · CONGRESO DE LA SEAP-AIP ZARAGOZA 19-21 Mayo 2001 DETERMINACIÓN INMUNOHISTOQUÍMICA DE HER-2 EN CÁNCER DE MAMA Y GÁSTRICO Inmaculada García](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022043021/5f3ce066769780195f0c6abc/html5/thumbnails/70.jpg)
HUVN: REGISTRO 2
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REGISTRO 20.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
1.1
1.2
1.3
1.4
1.6.1
1.6.2
1.6.3
1.7
1.8
1.9
1.10
2.1
2.2
0
+1
+2
+3
6%
31% 63%
PUNTUACIÓN H.U. VIRGEN DE LAS NIEVES .- +3/0 infiltrante; +3 in situ
En un recuadro el porcentaje dehospitales que coinciden con el dereferencia
*
* + 2 CDI/+3 CID
RESULTADO DETERMINACIÓN FISH: NEGATIVO (1-2 HER-2/centrómero)
0
+1
+2
+3
A. Evaluación de las tincionesrealizadas en el H.U. Virgen de lasNieves
TÉCNICA DE TINCIÓN UTILIZADA: HERCEPTEST
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HUVN: REGISTRO 7
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REGISTRO 7
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
1.1
1.2
1.3
1.4
1.6.1
1.6.2
1.6.3
1.7
1.8
1.9
1.10
2.1
2.2
0
+1
+2
+3
PUNTUACIÓN H.U. VIRGEN DE LAS NIEVES .- +2
En un recuadro el porcentaje dehospitales que coinciden con el dereferencia
*
* +2/+3
RESULTADO DETERMINACIÓN FISH:NEGATIVO (1-2 HER-2/centrómero)
A. Evaluación de las tincionesrealizadas en el H.U. Virgen de lasNieves
0
+1
+2
+3
31% 69%
TÉCNICA DE TINCIÓN UTILIZADA: HERCEPTEST
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0
+1
+2
+3
1 2 3 4 5 6
Hospital origen
Observador 1 HUVN
Observador 2 HUVN
Observador 3 HUVN
Observador 4 HUVN
HOSPITAL CON CÓDIGO 0.2
TÉCNICA HOSPITAL DE ORIGEN: KIT COMERCIAL ZYMED CON EL ANTICUERPO PRIMARIO TAB250
TÉCNICA H.U. VIRGEN DE LAS NIEVES: HERCEPTEST
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HOSPITAL CON CÓDIGO 2.4
0
+1
+2
+3
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Resultado inicial tinción HUVN
Resultado hospital participante
Resultado observador 1 HUVN
Resultado observador 2 HUVN
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HOSPITAL CON CÓDIGO 0.6
0
+1
+2
+3
1 2 3 4 5 6
Hospital origen
Observador 1 HUVN
Observador 2 HUVN
Observador 3 HUVN
Observador 4 HUVN
TÉCNICA HOSPITAL DE ORIGEN: HERCEPTEST (DAKOCYTOMATION )SEGÚN INSTRUCCIONES DEL FABRICANTE, UTILIZANDO INMUNOTEÑIDOR DAKO-AUTOSTAINER
TÉCNICA H.U. VIRGEN DE LAS NIEVES: HERCEPTEST
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HOSPITAL CON CÓDIGO 1.1
FISH REGISTRO 4: NEGATIVO (1-2 HER-2/centrómero)
FISH REGISTRO 5: NEGATIVO (1-2 HER-2/centrómero)
0
+1
+2
+3
1 2 3 4 5 6
Hospital origen
Observador 1 HUVN
Observador 2 HUVN
Observador 3 HUVN
Observador 4 HUVN
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RESULTADOS EXPRESIÓN
0 +1 +2 +3
PULMÓN 70% (14/20) 10% (2/20) 5% (1/20) 15% (3/20)
VEJIGA 20% (9/45) 15,5% (7/45) 20% (9/45) 44,5%
(20/45)
OVARIO 47,5%
(19/40)
25% (10/40) 22,5% (9/40) 5% (2/40)
PRÓSTATA 66,7%
(16/24)
8,3% (2/24) 12,5% (3/24) 12,5% (3/24)
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VEJIGA
• 17-70% IHQ (+)» INVASIÓN
» ESTADIO AVANZADO/METÁSTASIS
» GRADO DE DIFERENCIACIÓN
» MAL PRONÓSTICO (p53)
» LESIONES PRECURSORAS (“IN SITU” PLANO) 45%
» CAMBIOS REACTIVOS/DISPLÁSICOS (12%)
» MODIFICACIONES CON BCG (Mitomicina?)
» HER-2/HER-3: MAYOR AGRESIVIDAD
• FISH» ANEUSOMÍA 17 (70%)
» COPIAS HER-2 (41%)
» RELACIÓN HER-2/CROMOSOMA 17 (4%)
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2587-06
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![Page 82: CONGRESO DE LA SEAP-AIP · 2012-07-13 · CONGRESO DE LA SEAP-AIP ZARAGOZA 19-21 Mayo 2001 DETERMINACIÓN INMUNOHISTOQUÍMICA DE HER-2 EN CÁNCER DE MAMA Y GÁSTRICO Inmaculada García](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022043021/5f3ce066769780195f0c6abc/html5/thumbnails/82.jpg)
![Page 83: CONGRESO DE LA SEAP-AIP · 2012-07-13 · CONGRESO DE LA SEAP-AIP ZARAGOZA 19-21 Mayo 2001 DETERMINACIÓN INMUNOHISTOQUÍMICA DE HER-2 EN CÁNCER DE MAMA Y GÁSTRICO Inmaculada García](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022043021/5f3ce066769780195f0c6abc/html5/thumbnails/83.jpg)
• DETERMINACIÓN HER-2 EN DISTINTOS MOMENTOS Y EN DIFERENTES LESIONES.
• FISH COMO MÉTODO DE REFERENCIA: PROBLEMAS Y LIMITACIONES.
• ESTABLECIMIENTO CRITERIOS REPRODUCIBLES: APRENDIZAJE.
• NORMALIZACIÓNDE PROCEMIENTOS: CONSENSO.
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GRACIAS