control mc parte 1

LA HABANA, CUBA 2011

PhD Claudio Rodrguez Martnez,Centro Nacional de Biopreparados

[email protected]

Actualizar a los especialistas en las recomendaciones, guas y normas para el control de la calidad de medios de cultivo y reactivos como herramientafundamental para prevenir y/o corregir los fallos en los anlisismicrobiolgicos.

Brindar recomendacionesprcticas para la seleccin de los parmetros y mtodos de control de la calidad de mc y reactivos.

PhD Claudio Rodrguez Martnez

PRIMER DA Generalidades del Control de la Calidad (CC) de

los medios Funcionalidad-desempeo-control

microbiolgico (mtodos cuantitativos, semi-cuantitativos y cualitativos Indicadores especficos (productividad) paramedios slidos y lquidos


SEGUNDO DA Indicadores especficos (selectividad para

medios slidos y lquidos; especificidad; contaminacin microbiana)

Parmetros fsico-qumicos para el CC de los medios de cultivo pH, cantidad dispensada, propiedades del gel,

otros parmetros Estudios de estabilidad Control de la calidad de los reactivos

Agua, ingredientes, suplementos, tintes, discos antibiticos, antisueros

SEGN LA ISO 11133-1: formulacin de sustancias, en formalquida, semi-slida o slida, que contiene constituyentesnaturales y/o sintticos destinados a apoyar la multiplicacin,o a preservar la viabilidad de los microorganismos.

PhD Claudio Rodrguez MartnezNorma ISO/TS 11133-1:2000

Deben almacenarse siempre: en lugares frescos, a temperatura ambiente y protegidos contra la

humedad y la luz

La exposicin a la luz

puede conducir a la degradacin de los componentes (nutrientes)

Son higroscpicos

alteraciones en los constituyentes

Condiciones de almacenamiento

Medios de cultivo deshidratados Medios completos y Medios suplementados

La mayora de los medios preparados se

guardan en refrigeracin

CARACTERSTCAS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLGICOS QUE LOS HACEN VULNERABLES AL DETERIORO

cambios en el color del medio

variaciones del pH


ANLISIS MICROBIOLGICO FIABLE

Aceptabilidad de cada lote de medio, reactivos y juegos diagnstico

Adecuacin del diganosticador al objetivo

Constancia en el desempeo: fiabilidad, exactitud, robustez, rudeza


Proceso para detectar y corregir los defectos estableciendo lmites aceptables de desempeo

CONTROL DE LA CALIDAD (CC) EN MICROBIOLOGA

Khajornsak Tragoolpua. Department of Clinical MicrobiologyFaculty of Associated Medical Sciences. Chiang Mai UniversityDecember 30, 2004

CC


Seguir los Procedimientos Normalizativos de Operacin (PNO), polticas y protocolos para el CC

Emplear utensilios y procedimientos aspticos u otros procedimientosespecficos durante el CC

Utilizar equipamiento relevante de manera correcta y segura

Seleccionar mtodos de ensayo de CC apropiados, enmarcndose en suexperiencia prctica personal

Interpretar los resultados del CC con respecto a los resultados esperados

Completar todos los registros relevantes con cuidado y segn los protocolos

CHS189 Perform Quality Control of culture media and solutions. Performance criteria, 2007

REQUISITOS DE BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO (BPL) PARA EJECUTAR EL CC DE LOS MEDIOS DE CULTIVO (MC)


CC DURANTE LA RECEPCIN DE LOS MEDIOS EN EL LABORATORIO

Nombre del medioIngredientesSuplementos y sus cdigosCdigo o nmero de lotepH del medio antes o despus de prepararInformacin de la conservacin y fecha de vencimiento Evaluaciones de desempeo, m.o. ensayados y procedencia (eficacia,

criterios de aceptabilidad para m.o. diana, no diana y los que deben ser inhibidos)

Hoja tcnica del producto Especificaciones de calidad y fecha de emisin Certificado de calidad con la confirmacin del cumplimiento de las

especificaciones Datos sobre seguridad y/o toxicidad Para los Medios Listos Para el Uso (MLPU) el control de esterilidad Plan de muestreo Informacin sobre modificaciones a las especificaciones del producto

Exigir del fabricante las siguientes informaciones:


Norma ISO/TS 11133-1:2000

CC del Medio Deshidratado

ColorApariencia (homogeneidad, fluidez)Presencia de grumos o partculas extraas

Caractersticas organolpticas (evaluacin visual)

PRDIDA POR DESECACIN

Mtodo gravimtrico hasta masa constante

SOLUBILIDAD Se debe disolver una cantidad de medio en 100 mLde agua destilada o desionizada que correspondacon las recomendaciones del fabricante y bajo lascondiciones para su preparacin

DENSIDAD APARENTE Determinacin de la masa de un volumen determinado

TAMAO DE PARTCULASPor tamizaje con determinado mesh(debe pasar no menosdel 95 % de la muestra)

PhD Claudio Rodrguez MartnezRodrguez Martnez C y col. Buenas Prcticas de Preparacin y Empleo de Mediosde Cultivo. Curso Maestra en Procesos Biotecnolgicos. IFAL, UH, La Habana, Cuba, 2011

CC DEL MEDIO RESTITUIDO Y DEL PREPARADO

Mtodo: evaluacin visual

Color Transparencia BrillantezPresencia

de precipitados

Medio restituido y/o preparado


CC del Medio Listo para el Uso

Los laboratorios pueden adoptar esquemas de CC ms sencillos

el proveedor de los MLPU posee un Sistema de Calidad(SC) acorde a lasISO 9001 un similar

y


provee certificadosde calidad de susproductos


FUNCIONALIDAD DESEMPEO -CONTROL MICROBIOLGICO

EVALUACIN MICROBIOLGICA DEL MEDIO LISTO PARA EL USO

Caractersticas morfolgicas de los m.o. objetoTamaoColor SuperficieOtras

Esterilidad

Inhibicin del crecimiento/Selectividad

Promocin del crecimiento/Productividad

Reacciones tpicas de los m.o. objeto y no objetoBioqumicasSerolgicasSensibilidad/ResistenciaOtras


EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL MLPU

Mtodos cuantitativosMtodos semi-cuantitativos Mtodos cualitativos

Empleocompulsorio de medio de referencia

Empleo recomendado de

medio de referencia

Medio de referencia:

Reaccin positivaCalidad probadaLotes recientemente liberados/de otroproveedor reconocido (calificado)/MLPU


EVALUACIN DEL DESEMPEO DE MEDIOS PREPARADOS A PARTIR DE FORMULACIONES DESHIDRATADAS DISPONIBLES COMERCIALMENTE

EXIGENCIAS MNIMAS PARA CADA LOTE

EXMENES CUALITATIVOS

MEDIOS SIN INDICADORES MEDIOS SELECTIVOS Y/O CON INDICADORES

Una cepa control +Una cepa control total- o parcialmenteinhibida(selectividad)

Una cepa control +

MEDIOS SELECTIVOS COMPLEJOS CON SUPLEMENTOS

Una cepa control +al suplemento

EXMENES CUANTITATIVO


MAYORES EXIGENCIAS

EVALUACIN DEL DESEMPEO DE MEDIOS PREPARADOS A PARTIR DE COMPONENTES BSICOS INDIVIDUALES

MILES Y MISRA

EXMENES CUANTITATIVOS ADICIONALESPARA EVALUAR PRODUCTIVIDAD

PLACA EN ESPIRAL (SPIRAL PLATE)


Garcia-Armesto MR y col. Modern microbiological methods for foods: Colony count and direct count methods. A review. Microbiologa.Volumen 9. No. 1. 1993.


PREPARACIN DEL INCULO Y LAS SUSPENSIONES

INOCULACIN DEL M.O. EN CALDO TRIPTONA SOYA (u otro caldo)

INCUBACIN POR 4-6 h HASTA DENSIDAD COMPARABLE CON ESTNDAR DE LA ESCALA DE McFarland* (0,5 comnmente)

107 108 ufc/ml (0,08 1 de absorbancia a 625 nm en espectrofotmetro)

PREPARACIN DE DILUCIONES DECIMALES (u otras) EN SOLUCIN SALINA FISIOLGICA (o en otro medio lquido)

INOCULACIN EN LOS MEDIOS(para medios slidos 15 ml de medio/placa)


Rodrguez Martnez C y col. Buenas Prcticas de Preparacin y Empleo de Mediosde Cultivo. Curso Maestra en Procesos Biotecnolgicos. IFAL, UH, La Habana, Cuba, 2011

ENSAYOS CUANTITATIVOS EN MEDIOS SLIDOS


Definicin: Rendimiento, recuperacin, crecimientode un microorganismo que se espera que se desarrolleen el medio de cultivo

Para evaluar la productividad de los mediosde cultivo preparados, los mismos debenser inoculados con una cepa de referenciaapropiada (OBJETO)


Ns recuento total promedio, o en al menos en una placa delmedio a ensayar;

donde:

No recuento total promedio, o en al menos una placa del medio de referencia (n 100 ufc)

PR = Ns / No

Inculo = 102 ufcRazn de Productividad


para m.o.objeto en medio de propsito general PR 0,7

para m.o. objeto en medio selectivo

PR 0,1

lmite mnimo

definido de la productividad


La norma ISO/TS 11133-2:2000 especifica:

Los microorganismosTiempo y temperatura de incubacinCriterios de aceptacinMedios de referencia


Ejemplo de clculo de la productividad de un medio de propsito general

Recuento promedio del m.o. objeto en el medio de propsito general a ensayar: 80 ufc/placa

Recuento promedio del m.o. objeto en el medio de propsito general de referencia: 100 ufc/placa

PR = Ns/No = 80/100 = 0,8 > 0,7

El lote de medio evaluado resulta conforme


Ejemplo de clculo de la productividad de un medio selectivo

Recuento promedio del m.o. objeto en el medio selectivoa ensayar: 20 ufc/placa

Recuento promedio del m.o. objeto en el medio de propsito general de referencia: 100 ufc/placa

PR = Ns/No = 20/100 = 0,2 > 0,1

El medio evaluado resulta conforme


Herramientas para analizar datos distribuidossegn Poisson.

Otro enfoque (el ms propagado) es latransformacin de datos hasta lograr ladistribucin normal (log10 (n+1) u otra).

Comparacin de los recuentos segn pruebade Student u otra herramienta estadstica.

TRATAMIENTO ESTADSTICO PARA LA COMPARACIN DE LOS RECUENTOS


Se deben emplear ensayos cuantitativos para evaluar nuevos proveedores o nuevos medios de cultivo


donde:N poblacin microbianaa - la sumatoria de ufc en todas las placasV volumen del inculon1 nmero de placas en la primera dilucin n2 nmero de placas en la segunda dilucin d factor de dilucin correspondiente a la primera dilucin

Clculo de N (poblacin microbiana): basado en el volumen distribuido en la superficie de la placa y el factor de dilucin

POBLACIN MICROBIANA

PhD Claudio Rodrguez MartnezISO 4833: 1993

Ejemplo simplificado:

Dilucin Recuento10-2 60 y 70 colonias

10-3 5 y 7 colonias

60 + 70 + 5 + 7 142N = ---------------------------------- = ------------------ = 64 545,5 = 6,5 x 104

0,1 *(2 + (0,1 * 2)) * 10-2 0,1 * 2,2 * 0,01


Prueba de Student, basada en determinar:

ACCREDITATION SCHEME FOR LABORATORIES. A Guide on Measurement Uncertainty in Chemical & Microbiological Analysis. Technical Guide 2, Second Edition, March 2008. The SAC Accreditation Programme. SPRING. Singapore PhD Claudio Rodrguez Martnez

donde:S2p- cuadrado de la desviacin estndar de la poblacin1 LOG de los recuentos/lote de referencia2 LOG de los recuentos/lote de ensayon1, n2 nmero de muestras de cada lotet - estadgrafo t de Student

Ejemplo de Prueba de Student

COMPARACIN DEL CRECIMIENTO DE NUEVO LOTE DEL MEDIO CromoCen CC (102011) CONTRA EL LOTE DE REFERENCIA (102010)

Lote 102011 (A) LOG A LOG A - Media (LOG A - Media)2 Lote 102010 (B) LOG B LOG B - Media (LOG B - Media)2

100 2,000000 0,009955 0,000099 89 1,949390 -0,035427 0,00125599 1,995635 0,005590 0,000031 100 2,000000 0,015183 0,000231

101 2,004321 0,014277 0,000204 106 2,025306 0,040489 0,00163998 1,991226 0,001181 0,000001 89 1,949390 -0,035427 0,00125591 1,959041 -0,031003 0,000961 100 2,000000 0,015183 0,000231

Media=1,990045 Media=1,984817Suma= 0,001297 Suma= 0,004611DSA2=suma/n-1 = 0,000324 DSB2=suma/n-1 = 0,001153

Sp2=(4 X 0,000324) + (4 x 0,0001153) / (5 + 5 - 2)= 0,000738Sp= 0,027173803

Sp x (1/nA + 1/nB)= 0,017186

t=(1,990045 - 1,984817)/(Sp x 0,2 + 0,2) 0,30417572F=DSA2/DSB2 0,281265554

Se compara el valor de la t calculada delestadgrafo con el valor crtico para 95 % = 2,306para (n1 + n2) 2 grados de libertad

Como el valor calculado (0,304) es < que el valor crtico (2,306)

pues no hay diferencias significativas entre lacapacidad promotora del crecimiento de loslotes

Prueba de Student


El lote no se rechaza

RECUENTO PARA EL MTODO DE FILTRACIN POR MEMBRANA

donde:

Vtot volumen total de la muestra original inoculada y filtrada en las placas enumeradas;

n1, n2, ..., ni - nmero de placas o membranas contadas para las diluciones d1, d2, ..., di;

V1, V2, ..., Vi volumen de muestra empleado para las diluciones d1, d2, ..., di;

d1, d2, ..., di dilucin empleada para ensayar los volmenes V1, V2, ..., Vi (d = 1 en la muestra sin diluir, d = 0,1 para la dilucin decimal, etc.).

ISO 8199. Second edition. 2005-06-15PhD Claudio Rodrguez Martnez

Cs estimado de ufc en el volumen de referencia Vs de la muestra;

Z suma de colonias contadas en las placas o membranas a partir de lasdiluciones d1, d2, ..., di, derivadas de volmenes separados de la porcin de ensayo (muestra o la dilucin);

Vs volumen de referencia seleccionado para expresar la concentracinde los m.o. en la muestra de ensayo;

Vtot volumen total calculado de la muestra original que comprende lasplacas o membranas enumeradas.



IC - intervalo de confianza

Ejemplo:

Dilucin Recuento10-2 60 y 70 colonias

10-3 5 y 7 coloniasSi Vi = 100 ml

Z = 60 + 70 + 5 + 7 = 142

Vtot = (2 x 100 x 0,01) + (2 X 100 X 0,001) = 2 + 0,2 = 2,2

Vs = 1 ml

Cs = (142/2,2) x 1 ml = 64,54 = 65 ufc/ml



m.o. objeto

NMP ensayo + IC ens NMP ref IC ref

Medio de ensayo Medio de referencia

Incubar Incubar

CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS PARA LA TCNICA DE NMP

3, 5 10 tubos

Criterio de aceptacin:

Scott Sutton, Quality Control of MicrobiologicalCulture Media. PMF Newsletter. January, 2006


Inocular 1 ml (20-100 ufc/ml)m.o. ensayo

Aguas potables, naturales, minerales, ros, potables envasadas, fuentes privadas, hielo (fundido), aguas de mataderos y de equipos de clima

Placa vertida15-20 ml de medio

Incubar a 37 C 1 C Incubar a 22 C 1 C Incubar a 37 C 1 C Incubar a 22 C 1 C

Ejecutar los clculos de productividad y comparacin de recuentos

CONTROL DE LA CALIDAD DE MEDIOS PARA ANLISIS DE AGUASPLACAS VERTIDAS


Hpa standard method. Aerobic colony count by the pour plate method w 4.Centre for Infections. Issue no: 4.2 Issue date: 08.08.08 Issued by Standards Unit, Evaluations and Standards Laboratory in conjunction with the Regional Food, Water and Environmental. Coordinators Forum Page no: 1 of 14. W 4i4.2. National Public Health Service for Wales

Inocular 1 ml (20-100 ufc/ml)m.o. de ensayo

Lote de ensayo Lote de referencia

Placa vertida15-20 ml de medio

Incubar a 37 C 1 C Incubar a 37 C 1 C

CONTROL DE LA CALIDAD DE MEDIOS PARA ANLISIS DE AGUASPLACAS VERTIDAS

Aguas de piscinas


Hpa standard method. Aerobic colony count by the pour plate method w 4. Centre forInfections. Issue no: 4.2 Issue date: 08.08.08 Issued by Standards Unit, Evaluations and Standards Laboratory in conjunction with the Regional Food, Water and Environmental. Coordinators Forum Page no: 1 of 14. W 4i4.2. National PublicHealth Service for Wales

Ashraf M and Ashraf H, Pak J Med Sci . 2007; 23(3): 415-9

Pueden ser utilizados los mtodos:

Miles-Misra

Siembra en espiral

Otros mtodos de recuento

Mossel DA y col. Quality assurance of selective culture media for bacteria, moulds and yeasts: an attempt at standardization at the international level. J Appl Bacteriol. 1983; Jun; 54(3):313-27

PhD Claudio Rodrguez MartnezMiles AA & Misra SS. J Hyg (London).1938; 38:732

Garcia-Armesto MR y col. Modern microbiological methods for foods: Colony count and direct count methods. A review. Microbiologa.Volumen 9. No. 1. 1993.

Mtodo suplementario para medios slidos

Necesidad de secar la superficie de manerareproducible


Diluciones del m.o. de ensayo (10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6)Placas con los medios de referencia y del lote a ensayar, divididas encuadrantesCada cuadrante rotulado con la dilucin que se aplicarSe adicionan 0,01 ml (10 l) de cada dilucin sobre cada cuadrante,dejndola caer desde una altura de 2,5 cm con ayuda de unamicropipeta automtica correctamente calibradaCada gota se dispersa por un rea de aproximadamente 1,5 a 2,0 cm dedimetroLas placas se incuban a la temperatura y tiempo indicados en la normaSe ejecuta el recuento en los sectores donde sea posibleSe pueden ensayar ms de dos placas por muestra, en ese caso, sepromedian los recuentos

MTODO DE MILES-MISRAMODIFICADO

Grupo colaborador GEGMIC. Recomendaciones generales para el control de calidad interno en Microbiologa ClnicaCCI-SEIMC-00. 16-05-04 Versin: 1

PRODUCTIVIDAD MTODO DE MILES-MISRA MODIFICADO

No. de colonias en el medio exper. x factor de dilucin P = -----------------------------------------------------------------------------

No. de colonias en el medio control x factor de dilucin Ejemplo: Medio experimental: 20 colonias a la dilucin 10-3 Medio control: 25 colonias a la dilucin 10-4 20 x 3 60 P = --------------- = --------- = 0,6 x 100 % = 60 % 25 x 4 100


ENSAYOS CUANTITATIVOS EN MEDIOS LQUIDOS


Prueba de dilucin cuantitativa en medios lquidos Tubos con un volumen de 10 ml del medio a evaluar y el de referencia

m.o. objeto

Inocular una dilucin alta

(10-100 ufc)

m.o. no objeto

Inocular una dilucin baja(> 1000 ufc)

Mezcla de m.o. objetoy no objeto:

caldos selectivos

Incubar segn norma y despus de la incubacin

del caldo

Tomar un volumen (alcuota, ej., 10 l) y si esnecesario se recomienda preparar diluciones

Sembrar en un medio agarizado no inhibitorio eincubar por 6 12 h

Evaluar productividadPara la evaluacin de las mezclas de cultivo se recomienda utilizar un medioagarizado no selectivo el cual permita la diferenciacin de las especies contenidasen la mezclaEjemplo: PCA con MUG (diferencia E. coli y Salmonella)


m.o. objeto (10-100 ufc)m.o. no objeto (> 1000 ufc)


Para la mayora de los medios el PR de los m.o.objeto no debe ser < 0,1, sea, la diferencia encrecimiento no debe exceder un orden de magnitud

PR = Ns / No

Prueba de dilucin cuantitativa en medios lquidos (continuacin)


En determinados medios los m.o. objetodeben alcanzar entre 106 ufc/ml y 108 ufc/ml y los no objeto en medios selectivosno > 104 ufc/ml

Para otros casos:

Para las mezclas de m.o. los diana deben prevalecer sobre los no diana


Prueba de dilucin cuantitativa de diluyentesIdem a los medios, pero se incuban a temperatura ambiente por 45 min

Se transfiere a placas, se incuba y se procede al clculo

El perodo de incubacin en placas es reducido(entre 6 y 10 h)

El nmero de m.o. despus de incubar debeencontrarse en 50 % del recuento inicial (para esto se inoculan placas a partir de los tubos sin incubar a t ambiente)

No se requieren nmeros reducidos o elevados de m.o. objeto y no objeto


Prueba de dilucin cuantitativa de medios de transporte

Idem a los medios, pero se incuban a la temperatura y por el perodo de tiempo acostumbrados a su uso comn

Se transfiere a placas, se incuba y se procede al clculo

El perodo de incubacin en placas es reducido(entre 6 y 10-12 h)

El nmero de m.o. despus de incubar debeencontrarse en 50 % del recuento inicial (para esto seinoculan placas a partir de los tubos sin incubar a tambiente)

No se requieren nmeros reducidos o elevados dem.o. objeto y no objeto


ENSAYOS SEMI-CUANTITATIVOS EN MEDIOS SLIDOS


Mtodo ecomtrico

Inculo de 103 104 ufc

Superficie de los medios secas por igual

Utilizando un asa de 1 l, se trazan 4 lneas paralelasa intervalos de 0,5 cm (sector A)

El rayado es repetido para el sector B y C

Se concluye en el sector D con una simple lnea acompaada de un estriado

Puede usarse una plantilla bajo la placa para facilitar el rayado exacto

.

PRUEBAS SEMI-CUANTITATIVAS


Slo la vuelta (asa), no el alambre que sostiene el asa debe sumergirse en el cultivo y llenarse completamente.

El lquido en exceso debe ser eliminado apretando la parte ms ancha del asa tres veces contra el borde del recipiente (placa).

Al rayar las placas el ngulo entre la vuelta y la superficie del agar debe ser 20 a 30 .

La presin del asa sobre la superficie del agar y la rapidez de rayar debe ser consistente.

Nunca se debe quemar el asa para pasar a lassiguientes estras.

Como excepcin, en algunos casos, se permite cambiar el asa o esterilizarla para pasar de la seccin A a la B.

PRUEBAS SEMI-CUANTITATIVASMtodo ecomtrico (continuacin 1)



Las cuentas se suman para obtener el G1

Luego de la incubacin de las placas de acuerdo con los requisitos del mediode cultivo, se evala la apariencia y tamao de las colonias y se calcula elndice de crecimiento (G1)

Cada lnea que muestre crecimiento se evala con un score (puntuacin) de 1

El mximo score obtenido por placa es 16

Si el estriado no muestra crecimiento hasta la mitad de su longitud se evalacon un score de 0,5

Si el estriado no muestra crecimiento o manifiesta un crecimiento escaso(menos de la mitad la longitud) se evala con un score de 0

Interpretacin: Para un m.o. objeto el G1 debe ser al menos 6 para concluir que el medio es aceptable. Para medios de cultivo no selectivos G1 es normalmente > 6.

PRUEBAS SEMI-CUANTITATIVASMtodo ecomtrico (continuacin 2)


Medios slidos: Por el mtodo ecomtrico

Medios fluidos: Por el mtodo de control de la calidad de los medios fluidos

EVALUACIN MICROBIOLGICA

NDICE ABSOLUTO DE CRECIMIENTO NDICE RELATIVO DE CRECIMIENTO

IACvalor absoluto obtenido de acuerdo al mtodo

IRCrelacin entre el valorabsoluto obtenido en elmedio evaluado y elmedio de referencia

IRC= IACexp/IACref

OTRAS PRUEBAS SEMI-CUANTITATIVAS


Mossel DAA. Microbiologa de los alimentos, 2 edicin, Acribia, Zaragoza, Espaa, 2003; 703.

Rodrguez Martnez C y col. Buenas Prcticas de Preparacin y Empleo de Medios de Cultivo. CursoMaestra en Procesos Biotecnolgicos. IFAL, UH, La Habana, Cuba, 2011

ESQUEMA DE INOCULACIN SEGN EL MTODO ECOMTRICO (variante anterior) A1 = 5 B1 = 10 C1 = 15 D1 = 20

A2 = 25 B2 = 30 C2 = 35 D2 = 40

A3 = 45 B3 = 50 C3 = 55 D3 = 60

A4 = 65 B4 = 70 C4 = 75 D4 = 80

A5 = 85 B5 = 90 C5 = 95 D5 = 100

IAC exp. 75IRC =------------ x 100 = ----- x 100 = 88,24 %

IAC ref. 85

Ejemplo:Medio referencia: Crec.- ltimo punto A5, IAC=85Medio experimental: Crec.- ltimo punto C4, IAC=75

Mtodoecomtricode Mossel(1983)

Estriado en 5 zonas

MTODO ECOMTRICO


Barbara M. Lund and oth,The microbiological safety and quality of food, Volumen 2. 2000

MOSSEL, D.A. and oth. Quality assurance of selective culturemedia for bacteria, moulds and yeasts: an attempt at standardization at the international level. Journal Applied Bacteriology, 1983, 54(3), 313-27.

Recuperabilidad y reproducibilidad

Cada estra tiene un valor de 0.2 y la estra central de 1.0

ndice Relativo de Crecimiento (IRC) 1

ndice Absoluto de Crecimiento (IAC) 2.5 3 para m.o. objeto

Alfonso Cabeza HE. Manual Prctico de Microbiologa de Alimentos. 2006

Mtodo Ecomtrico(versin de la USP)

Crecimiento IAC

Todas las estras 5,0

Todas menos la central 4,0

Todas en los cuadrantes 1, 2 y 3, la mitad en el cuadrante 4 y ningn crecimiento en la central

3,5

Todas en los cuadrantes 1, 2 y 3, ninguna en el cuadrante 4 en la central

3,0

Los crecimientos registrados en la mitad de los cuadrantes se recogen como 2,5; 2,0; 1,5 y as sucesivamente


Scott Sutton, Quality Control of Microbiological Culture Media, PFM newsletter. Volume 12, Number 1 January, 2006

ENSAYOS SEMI-CUANTITATIVOS EN MEDIOS LQUIDOS


Prueba semi-cuantitativa (medios lquidos) Mtodo de tubo simple con MEZCLA DE M.O.

Tubos con un volumen de 10 ml del medio exp. y el de ref.

m.o. objeto

Inocular una dilucin alta (10-100 ufc)

m.o. no objeto

Inocular una dilucin baja (> 1000 ufc)

Medio selectivo especfico Medio no selectivo (ATS)

Interpretacin: La PR es satisfactoria si al menos 10 colonias del m.o. objeto crecen en el medio selectivo

Estriar un asa de 10 l en


Preparar diluciones hasta 10-12 de los m.o. a evaluar

Adicionar 1 ml de cada dilucin a 9 ml de los medios de cultivo (exp. y ref.)

Examinar los caldos y anotar la mxima dilucin en la cual se observ el crecimiento por la turbiedad del caldo

Incubar por 18 h a 37 C

Ejemplo: Medio exp. se observ crecimiento

a la dilucin 10-7: IACexp=7

Medio ref. se observ crecimiento a la dilucin 10-8: IACref=8

IRC= 7/8 = 0,875 = 87,5 %

MTODO DE CONTROL DE LA CALIDAD DE LOS MEDIOS FLUIDOS

Calcular el IAC y el IRC


Rodrguez Martnez C y col. Buenas Prcticas de Preparacin y Empleo de Medios de Cultivo. Curso Maestra en Procesos Biotecnolgicos. IFAL, UH, La Habana, Cuba, 2011

MTODO DE PUNTO FINAL (USP)m.o. objeto

Inocular una dilucin alta (< 5 ufc) del m.o. ensayo en los dos medios a comparar

Hasta 100 tubos del lote de ensayo

100 tubos del lote de referencia

Incubar

Contar el nmero de tubos con crecimiento en cada lote de medio

Comparacin estadstica (2 o Fisher)


Scott Sutton, Quality Control of Microbiological CultureMedia, PFM newsletter. Volume 12, Number 1 January, 2006

ENSAYOS CUALITATIVOS EN MEDIOS SLIDOS

Pruebas cualitativas

El inculo de trabajo: 103 104 ufcUtilizando un asa de 1 l, se realizan estriados en lneas sobre la superficie del medio (preferiblemente lneas paralelas)Se pueden estriar ms de 1 m.o.

Mtodo de estriado por agotamiento

Interpretacin: Se llevar a cabo visualmente asignando un score de crecimiento:

0 no hubo crecimiento1 crecimiento dbil2 buen crecimiento

Los m.o. objeto deben presentar su apariencia tpica, tamao y morfologa colonial(score de 2)


Pruebas cualitativas

El inculo de trabajo: 103 104 ufc

Mtodo por inundacin de la superficie

Interpretacin: Visualmente asignando un score de crecimiento:

0 no hubo crecimiento1 crecimiento dbil2 buen crecimiento

Los m.o. objeto deben presentar su apariencia tpica, tamao y morfologa colonial(score de 2)

1 L


ENSAYOS CUALITATIVOS EN MEDIOS LQUIDOS

Prueba cualitativa Mtodo de tubo simple

Los resultados son slo indicativos

El m.o. de trabajo se inocula directamente utilizando un asa microbiolgica de 1 L

Interpretacin: Se llevar a cabo visualmente asignando un score de crecimiento:

0 no tiene turbiedad1 turbiedad dbil2 turbiedad fuerte

Otras caractersticas pueden ser evaluadas: precipitados, agregacin celular, gas, hidrlisis, etc.


Crecimiento copiosom.o. se ionocula a un nivel muy bajo (< 100 ufc/unidad)Se incuba por perodo descrito (3 das 5 das)Se compara el nuevo lote con el de referenciaSe considera un ensayo de punto final con n=1

Mtodo de tubo simple (USP)Los resultados son slo indicativos


Scott Sutton, Quality Control of MicrobiologicalCulture Media, PFM newsletter. Volume 12, Number 1 January, 2006

OTROS ENSAYOS PARA MEDIOS ESPECIALES

PARA MEDIOS ESPECIALES, CONDICIONES ESPECIALES

Medios de cultivo para anlisis de sangre (hemocultivos)


Agar de Mueller-Hinton para ensayos de susceptibilidad

EFECTIVIDAD DE LOS MEDIOS LQUIDOS

BIOSCREEN (LabSystems)Rodrguez Martnez C y col. Buenas Prcticas de Preparacin y Empleo de Medios de Cultivo. Curso

Maestra en Procesos Biotecnolgicos. IFAL, UH, La Habana, Cuba, 2011

CONTROL DE LA CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLGICOSASPECTOS GENERALES, PRODUCTIVIDADNmero de diapositiva 2Nmero de diapositiva 3Nmero de diapositiva 4Nmero de diapositiva 5Nmero de diapositiva 6Nmero de diapositiva 7Nmero de diapositiva 8Nmero de diapositiva 9Nmero de diapositiva 10Nmero de diapositiva 11Nmero de diapositiva 12Nmero de diapositiva 13Nmero de diapositiva 14Nmero de diapositiva 15Nmero de diapositiva 16Nmero de diapositiva 17INDICADORES ESPECFICOS DEL DESEMPEONmero de diapositiva 19Nmero de diapositiva 20Nmero de diapositiva 21Nmero de diapositiva 22Nmero de diapositiva 23Nmero de diapositiva 24Nmero de diapositiva 25Nmero de diapositiva 26Nmero de diapositiva 27Nmero de diapositiva 28Nmero de diapositiva 29Nmero de diapositiva 30Nmero de diapositiva 31Nmero de diapositiva 32Nmero de diapositiva 33Nmero de diapositiva 34Nmero de diapositiva 35Nmero de diapositiva 36Nmero de diapositiva 37Nmero de diapositiva 38Nmero de diapositiva 39Nmero de diapositiva 40Nmero de diapositiva 41Nmero de diapositiva 42Nmero de diapositiva 43Nmero de diapositiva 44Nmero de diapositiva 45Nmero de diapositiva 46Nmero de diapositiva 47Nmero de diapositiva 48Nmero de diapositiva 49Nmero de diapositiva 50Nmero de diapositiva 51Nmero de diapositiva 52Nmero de diapositiva 53Nmero de diapositiva 54Nmero de diapositiva 55Nmero de diapositiva 56Nmero de diapositiva 57Nmero de diapositiva 58Nmero de diapositiva 59Nmero de diapositiva 60Nmero de diapositiva 61Nmero de diapositiva 62Nmero de diapositiva 63

control mc parte 1

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