Efectos de los reguladores de crecimiento vegetal y carbohidratos en la induccin de callos y la proliferacin de la hoja de explante de Lippia multiflora Moldenke ( verbenacea )

Efecto de los reguladores de crecimiento vegetal y carbohidratos en la induccin de callos y la proliferacin de la hoja de explante de Lippia multiflora Moldenke ( verbenacea )

Introduccin Lippia multiflora Moldenke, comnmente conocida como t de la sabana es una planta utilizada en la medicina tradicional africana para tratar diversas enfermedades como la hipertermia, presin arterial y malaria.Diversos estudios demuestran que el aceite esencial de esta planta tiene propiedades farmacolgicas, pesticidas y cosmticas. Ms de 42 compuestos voltiles han sido caracterizados en el aceite esencial de esta planta, los que se encuentran en mayor proporcin estn: limoneno (16%), -cariofileno (5.3%), trans--farneseno (16%), xido de cariofileno (22%) y farnesol (16.95%) Problemtica Para la produccin de este aceite esencial se necesita de mucho material vegetal variando el rendimiento entre los meses de enero y junio de 0.9 a 1.57 %.La disponibilidad de este material vegetal se ve amenazado por diferentes factores como incendios forestales, sequas y la explotacin del campo, adems de que la recoleccin tradicional de esta planta daa los tallos y ramas.Propuesta de solucinLas alternativas a la produccin de los metabolitos secundarios de esta planta puede ser de manera qumica o aplicando las tcnicas de biotecnologa vegetal. Diferentes plantas del gnero Lippia han sido cultivados in vitro de manera exitosa. Sin embargo no existe ningn trabajo que haga referencia a L. multiflora.El fin de este trabajo es establecer un protocolo para la induccin de callo en esta planta.MATERIALES Y MTODOSPREPARACION DE MEDIO DE CULTIVOINDUCCIN DE CALLO DESINFECCIN SUPERFICIAL DE LAS SEMILLAS Y GERMINACION IN VITROEVALUACIN DE LA INDUCCION DE CALLO Y PROLIFERACIN ANLISIS ESTADSTICO DE LOS DATOSPreparacin del medio de cultivo Desinfeccin superficial de las semillas y germinacin in vitro

Induccin de callo

Condicones generales de los experimentos.Para todos los experimentos, cinco explantes se colocaron en el medio y se replicaron tres veces por tratamiento.El tamao de un experimento independiente se constituy con 15 explantes para un total de 45 explantes por tratamiento. Todos los cultivos se transfieren en una sala de cultivo bajo un ciclo fotoperidico de 16 horas de luz y 8 horas de oscuridad y una temperatura de 25 2 C. La luz es proporcionada por lmparas fluorescentes con una intensidad de 3000 lux.EVALUACIN DE LA INDUCCION DE CALLO Y PROLIFERACIN

Despus de ocho semanas de cultivo , las respuestas a callognesis se registraron en trminos de tasa de induccin de callos y el peso fresco y seco de callo primario producido.

Para el registro del peso fresco y seco:El callo se retir cuidadosamente alrededor y parte superior de los explantes y se pes para obtener el peso fresco del callo (FW) . La muestra se coloca entonces en una placa de Petri y se incub en un horno a 60 C hasta un peso constante correspondiente al peso seco de callo (DW).

ANLISIS ESTADSTICO DE LOS DATOS

Los diferentes cultivos se incubaron en una cmara de crecimiento segn un diseo completamente al azar. Se utiliz el anlisis de varianza (ANOVA) para determinar las diferencias entre los tratamientos. Cuando se observ una diferencia, se realiz la prueba de rango mltiple de Newman-Keuls al 5 % a los medios de tratamiento separados. Las pruebas estadsticas se realizaron utilizando el software STATISTICA versin 7.0. Resultados Efecto del tipo y concentracin de las auxinas en la callognesis

Efecto de la combinacin de Picloram (PIC) con la citocinina en la induccin de la callognesis

Efecto del tipo carbohidratos en la induccin del callo

Efecto de la concentracin de fructosa en la induccin de callo

10 20 30 40 50 ConclusinA partir de esta investigacin, un protocolo estndar eficaz y reproducible para la produccin de callos utilizando explantes de hoja de Lippia multiflora Mold. se ha definido. En el medio basal MS suplementado con PIC ( 5M ) + KIN ( 25 M) a una concentracin de fructosa 3 % se encontr la mejor interaccin para expresar mxima proliferacin de callo . Los cultivos de callo, desarrollados en este estudio pueden ser utilizados para detectar, aislar y caracterizar diversas metabolitos secundarios de L. multiflora para futuras aplicaciones en los productos farmacuticos. Adems de explantes de hoja; tallo y segmentos de raz tambin se utilizarn como explantes para la iniciacin de callo . Los subcultivos que a continuacin, se llevan a cabo son para conseguir suficientes callos para el desarrollo de los cultivos en suspensin de clulas .