del laboratorio al paciente. ctcs en cáncer colorrectal...
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Coordinación científica:
Dr. Rafael López López
Complejo Hospitalario Universitario de Santiago de
Compostela
Organizado por: Sede:
San Francisco Hotel Monumento
Campillo de San Francisco, 3 - Santiago de
Compostela
Del laboratorio al paciente. CTCs en cáncer colorrectal: Resultados preliminares del ensayo VISNÚ
Dr. Javier Sastre
Servicio de Oncología Médica
HC San Carlos de Madrid
> 2 CTCs were detected in 30%
of patients with metastatic
colorectal cancer.
The median number of CTCs in
gastrointestinal tumors is relatively
low compared with other
carcinomas.
Patients with nonmalignant
diseases had < 2 CTCs
Cuestiones clínicas relevantes sobre
CTCs ¿Tienen relación con variables clínico-patológicas?
¿Tienen valor pronóstico o predictivo de respuesta al tratamiento?
¿Se pueden encontrar en la enfermedad limitada como dato indicativo de diseminación tumoral?
¿Es un factor predictivo de recurrencia en enfermedad limitada?
Methods
97 consecutive patients and 30 controls were included Blood samples were collected at:
From 4-12 weeks after surgery and immediately before adjuvant chemotherapy (if indicated) for patients diagnosed in stage I-III.
Immediately before palliative chemotherapy in patients with advanced disease.
Samples were stored in CellSave Preservative tubes for not more than 72h Enumeration of CTCs in 7.5ml of blood was carried out with the Cell Search System (Veridex) A cut-off of > 2 CTCs was chosen to define the test as positive for CTCs presence
ULN: Upper Limit Normal
Table II. Correlation among CTCs and clinical / morphological variables
p = 0.153
6 (46.2%)
46 (66.7%)
7 (53.8%)
27 (33.3%)
LDH levels
> 1 x ULN
< 1 x ULN
p = 0.079
9 (45%)
46 (66.7%)
11 (55%)
23 (33.3%)
CEA levels
> 5 ng/ml
< 5 ng/ml
p = 0.364
12 (57.1%)
34 (72.3%)
1 (100%)
9 (42.9%)
13 (27.7%)
0
Grade of differentiation
Well
Moderate
Undifferentiated
p = 0.329
26 (74.3%)
2 (33.3%)
6 (66.7%)
18 (58.1%)
8 (66.7%)
9 (25.7%)
4 (66.7%)
3 (33.3%)
13 (41.9%)
4 (33.3%)
Tumor location
Ascending
Transverse
Descending
Sigmoid
Rectum
4 (50%)
23 (79.3%)
22 (75.9%)
11 (39.3%)
4 (50%)
6 (20.7%)
7 (24.1%)
17 (60.7%)
Stage
I
II
III
IV
< 2 CTCs > 2 CTCs
p value Number of CTCs/ 7.5 ml Clinical or pathological variables
p =0.005
CTCs > 2 per 7.5ml were not found in controls
El recuento de CTCs por Veridex CellSearch es un factor pronóstico de la enfermedad
Sastre J et al. The Oncologist 2012
Objetivos
1. Analizar la correlación entre la expresión del panel de biomarcadores y la cuantificación de CTCs en el cribado de población del programa VISNU.
2. Analizar la correlación entre la expresión del panel de biomarcadores y la cuantificación de CTC con variables pronósticas clínico-patológicas de pacientes incluidos en los estudios VISNU-1 y VISNU-2.
Métodos (I)
Se seleccionaron 1208 pts para CTCs y mutación RAS y 590 de ellos
fueron elegibles para los estudios VISNU-1 y VISNU-2.
Evaluación de CTC en sangre periférica:
Muestra: 10 ml de muestra de sangre basal.
Técnica de análisis: método Cell Search® (Menarini Silicon Biosystems, Incl.)
Métodos (II)
Determinación del estado mutacional KRAS-NRAS-BRAF-PIK3CA,
Muestra: Bloques de tejido fijados en parafina.
Técnica de análisis:
KRAS exones 2 y 3, BRAF y Pi3K: COBAS test ®, utilizando los siguientes kits:
Prueba de mutación Cobas 4800 KRAs
Prueba de mutación Cobas 4800 BRAF V600
Prueba de mutación Cobas 4800 PIK3CA
Exones KRAS exón 4 y NRAS 2,3 4: técnica pirosecuenciación Qiagen utilizando kit
Qiagen NRAS y kit Ras extensión piro. En 2016, ambos kits fueron reemplazados por
"therascreen RAS Extensión Pyro Kit".
La determinación se realizó regionalmente en 5 laboratorios centrales, excepto para MSI que fue por PCR en 2
laboratorios centrales. Se recogieron las características clínicas y patológicas de todos los pacientes incluidos
en los estudios VISNU-1 y VISNU-2.
Alteraciones moleculares en la población de screening (1202pts)
CTCs
> 3
< 3
40.8%
59.2%
RAS
Nativo
Mutado
48.6%
51.4%
BRAF
Nativo
Mutado
92.5%
7.5%
PIK3CA
Nativo
Mutado
88.7%
11.3%
MSI
MSI-H
MSI-L / MSS
1.7%
98.3%
MACRO: Cox Multivariate Analysis for OS
Univariate and Multivariate Significant Factor Not Significant Factor
PARAMETER
UNIVARIATE ANALYSIS MULTIVARIATE ANALYSIS
Prob H. R. 95% CI Hazard Ratio Prob H. R. 95% CI Hazard Ratio
KRAS(MT vs WT) 0.017 1.606 1.089 2.369 0.006 1.755 1.171 2.628
CTC(≥3 vs <3) 0.007 1.703 1.158 2.504 0.001 2.063 1.361 3.127
Age (≥70 vs <70) 0.079 1.426 0.960 2.120 0.338 1.234 0.803 1.897
Sex (Female vs Male) 0.853 0.963 0.645 1.438 0.834 0.957 0.636 1.439
PS (2 vs 0-1) 0.843 0.867 0.211 3.564 0.826 0.850 0.200 3.620
# Affected organs (≥2 vs 1) 0.245 1.262 0.853 1.869 0.099 1.449 0.933 2.251
Group (XELOX-BEV vs s/a_BEV) 0.875 1.031 0.703 1.514 0.449 1.173 0.781 1.761
J. Sastre et a. Clin Colorectal Cancer 2013
Overall survival according to CTCs-KRAS
Refence cell:
CTC<3&WT KRAS
Hazard
Ratio
95% Hazard Ratio
Confidence Limits Prob > χ2
CTC<3 & MT KRAS 1.555 0.885 2.734 0.1248
CTC≥3 & WT KRAS 1.656 0.982 2.794 0.0587
CTC≥3 & MT KRAS 3.253 1.829 5.784 <.0001
13.5m 28.8m
J. Sastre et a. Clin Colorectal Cancer 2013
MSI N (%) < 3 CTC (N=231) >3 CTC (N=331) P value
MSI-HIGH 7 (3.0) 3 (0.91) 0.1005
MSI-S or LOW 224 (97) 328 (99)
Gender N (%) < 3 CTC (N=240) >3 CTC (N=350) P value
Male 164 (68) 238 (68) 0.9320
Female 76 (32) 112 (32)
ECOG N (%) < 3 CTC (N=240) >3 CTC (N=350) P value
0 141 (59) 166 (47) 0.0069
1 99 (41) 184 (53)
Primary location N (%) < 3 CTC (N=239) >3 CTC (N=349) P value
Right 50 (21) 89 (26) 0.4273
Right and left 3 (1.3) 5 (1.4)
Left 186 (78) 255 (73)
Correlación CTCs , Características clínico-patológicas (590 pts)
Correlación MSI-H - Características clínico-patológicas (590 pts)
Existe correlación entre MSI-H y BRAF mutado (p 0.0011)
Limitaciones del estudio
1. Exclusión de los pacientes con < 3 CTCs + RAS mutado
2. Limitación de la edad de inclusión a < 70 años
3. La baja incidencia de algunas de las mutaciones ( BRAF, PIK3CA) y de la presencia de MSI-H
Conclusiones (I)
1. Los porcentajes de pacientes con CTCs > 3 (40.8%), RAS mutado (51.4%), BRAF mutado (7.5%), PIK3CA mutado (11.3%) y con MSI-H (1,7%) están dentro de los rangos de lo publicado en la literatura.
2. No existe correlación entre presencia de CTCs elevadas y mutaciones de RAS, BRAF, PIK3CA o MSI-H.
3. Existe correlación entre BRAF mutado y MSI-H.
Conclusiones (II) 4. La presencia de CTCs > 3 y las mutaciones de RAS se correlacionan
con factores clínicos clásicamente relacionados con mal pronóstico como:
Peor ECOG
Estadio IV al diagnóstico
Afectación hepática
Mas de 2 localizaciones metastásicas
CEA elevado
Localización derecha (solo RAS mut)
5. Las mutaciones de BRAF se correlacionan con MSI-H, localización derecha, afectación hepática, peritoneal y ganglionar a distancia y alta tendencia con género femenino.
Conclusiones (III)
6. Las mutaciones de PIK3CA se correlacionan con localización derecha, CEA
elevado
7. La presencia de MSI-H se correlaciona con BRAF mutado, localización
derecha, localización ganglionar a distancia y menor incidencia de CEA
elevado
La relevancia y el impacto clínico de estas alteraciones moleculares están a la espera de los resultados de supervivencia libre de progresión y global de los pacientes tratados dentro del proyecto VISNÚ, que estarán disponibles próximamente
Agradecimientos
H. Universitario Central de Asturias, Dr. J. Mª. Viéitez; -H. Gregorio Marañón (Madrid), Dra. P. García Alfonso; -H. Regional Universitario (Málaga), Dra. S. Gil Calle; -H. Universitario Reina Sofía (Córdoba), Dr. E. Aranda Aguilar; -H. de Lleida Arnau de Vilanova (Lérida), Dra. A. Salud; -C. Lucus Augusti (Lugo), Dr. G. Quintero; -H. Marqués de Valdecilla (Santander), Dr. F. Rivera; -C. H. Virgen de la Macarena (Sevilla), Dr. J. J. Reina; -H. 12 de Octubre (Madrid), Dr. L. Robles; -C. H. Universitario (La Coruña), Dra. B. Graña; -H. Miguel Servet (Zaragoza), Dres. V. Alonso/ E. Polo; -H. General Universitario (Valencia), Dra. Mª J. Safont; -H. de Donostia (Guipúzcoa), Dras. A. La Casta/S. Arévalo; -H. Virgen de las Nieves (Granada), Dra. E. González Flores; -H. Ramón y Cajal (Madrid), Dra. C. Guillén; -H. Puerta de Hierro (Madrid), Dra. A. Ruiz Casado; -H. Universitario Clínico San Carlos (Madrid), Dres. E. Díaz-Rubio/ J. Sastre; -H. General Universitario (Alicante), Dr. B. Massutí; -H. Clínico de Santiago (La Coruña), Dr. R. López López; -H. General Universitario de Elche (Alicante), Dr. J. Gallego; -H. Son Espases (Palma de Mallorca), Dra. M. Guillot; -H. Virgen del Rocío (Sevilla), Dra. Mª J. Flor; -C. H. Universitario (Orense), Dra. M. Salgado; -H. Ciudad de Jaén, Dra. R. Dueñas; -H. C. Universitario Lozano Blesa (Zaragoza), Dra. P. Escudero; -H. Nuestra Señora de Valme (Sevilla), Dra. A. López-Ladrón; -H. C. Univ. Virgen de la Victoria (Málaga), Dra. E. Torres Sánchez; -H. Universitario La Fe (Valencia), Dr. J. Aparicio; -H. San Joan de Reus (Tarragona), Dra. I. Cabezas; -H. Arnau de Vilanova (Valencia), Dra. A. Albert; -H. Son Llatzer (Palma de Mallorca), Dra. E. Falcó; -ICO. H. U. Josep Trueta (Gerona), Dr. X. Hernández Yagüe; -H. La Zarzuela (Madrid), Dr. P. Salinas; -H. Virgen de la Arrixaca (Murcia), Dr. M. Marín; -H. General de Elda (Alicante), Dra. A. Juárez; -H. del Mar (Barcelona), Dra. C. Montagut; -H. San Pedro de Alcántara (Cáceres), Dr. J. Muñoz; -C. H. La Mancha Centro (Ciudad Real), Dra. A. Mª García Tapiador; -H. Universitario de Burgos, Dr. C. García-Girón; -H. de Sagunto (Valencia), Dra. M. Gil Raga; -H. Can Misses (Ibiza), Dr. I. López; -C. Sanitari de Terrasa (Barcelona), Dr. J. Alfaro; -H. de Mataró (Barcelona), Dra. M. Zanui; -H. Universitario Quirón (Madrid), Dr. F. J. González González; -H. de Fuenlabrada (Madrid), Dr. D. Gutiérrez Abad; -H. Dr. Peset (Valencia), Dr. C. Bosch; -H. de Basurto (Vizcaya), Dra. P. Martínez de Prado; -H. Provincial (Castellón), Dr. J. Molina Saera; -C. Rotger (Palma de Mallorca), Dr. A. Arrivi; -C. Asistencial (Zamora), Dra. M. Navalón; -H. Costa del Sol (Málaga), Dra. J. Alcaide Centro de datos del TTD: I Ruiz de Mena y S. Rodríguez. Monitorización, Estadística y Proceso de datos: Pivotal Financiación: Roche Farma, S.A.
Coordinadores: Dr. E. Aranda, Dr. E. Díaz-Rubio, Dr. J. Sastre Laboratorio de CTCs del HC San Carlos Laboratorios de Biología molecular del HC San Carlos, H Reina Sofía, H Central de Asturias, H. Del Mar y H. La Fe. y al Servicio de Patología del H Gregorio Marañón Miembros del TTD participantes en el ensayo: