designing peptides handbook · peptide 활용범위 2. 주문시 알아야 할 사항 a. peptide...

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DESIGNING PEPTIDES

Handbook2nd Edition

독자 개발한 Peptide 자동 합성기로 17년 동안 50,000여 종의 Peptide를 국내에서 자체

합성하였습니다. 전 세계 30여 개국의 500여 기업연구소, 병원 및 대학에서 ㈜펩트론의

Peptide를 사용하고 있으며, 1,000여 편 이상의 국내외 SCI 급 논문에 인용되었습니다.

DESIGNING PEPTIDES

Handbook

04 (주)펩트론

㈜펩트론은 전국의 대학, 병원 외 500여 국가 연구기관에 Peptide를 납품하고 있으며, 아래

표와 같이 전세계 30여개 국의 대학 및 연구소에서도 자사의 Peptide를 사용하고 있습니다.

해외 거래기관목록

국적 기관 국적 기관

Australia

The Walter And Eliza Hall Institute Of Medical Research

SudanInst i tu te of Endemic Diseases, University of Khartoum

University of New South Wales Sweden Karolinska Institute

Austria

University of Salzburg

Taiwan

Academia Sinica

University of ViennaIndustrial Technology Research Institute

Belgium K.U.Leuven Quality Systems Inc.

Brazil

Instituto Pelé Pequeno Príncipe Netherlands Sanbio B.V.

Universidad Federal do rio de Janeiro TurkeyGenetic Engineering and Biotechnology Institude

Universidade Federal do Paraná

United Kingdom

Durham University

Czech Elis Int. John Innes Centre

DenmarkUniversity of Aarhus The Sainsbury Laboratory

University of Copenhagen University of Glasgow

France

Institut Pasteur

Uruguay

Catedra de Inmunologia-Facultad de Quimica

Plant Molecular Biology Institute, Centre national de la recherche

Facultad de Química, Universidad de la República

scientifique University of Uruguay

Germany

Biomedizinisches Forschungszentrum

USA

Access Bio, Inc.

Phillipps University Marburg BD Biosciences-Pharmingen

TU Dortmund UniversityBrigham and Women's Hospital, Harvard Medical School

University of Erlangen Center for Heart and Regenerative Medicine/VTCRIFree university of Berlin

Hong Kong The Chinese University of Hong Kong CHEMICON International, Inc.

India

Biohouse Solutions Pvt. Ltd. eBioscience, Inc.

C-CAMP Fox Chase Cancer Center

Indian Immunologicals Limited Harvard University

Indian Institute of Science HHMI/UC San Diego

Institute of Bioinformatics and Applied Biotechnology

Howard Hughes Medical Institue, UCSD

International Centre for Genetic-Engineering and Biotechnology

Invitrogen Drug Discovery Solutions

Jawaharlal Nehru Centre for Advanced Scientific Research

Johns Hopkins University

05www.peptron.co.kr

We Give Life to Every Peptide

India

Jawaharlal Nehru University

USA

Joslin Diabetes Center

Link Biotech MD Anderson

National Brain Research Centre NCI/Rockland Inc.

National Centre for Biological Sciences New York Blood Center

National Institute of Immunology NIH/NCI

University of Delhi South Campus NYS Institute for Basic Research

Vector Control Research Centre Oregon Health & Science University

Iran

School of pharmacy, Mashhad university of medical science

Pacific Northwest National Laboratory

Takapou Zist Co. Provid Pharmaceuticals

IrelandTrinity College R&D Systems

University College Cork San Francisco State University

Israel

Ariel University Center of the Shomron Schering Plough Biopharma

Ben-Gurion University of the Negev Stanford University

Hutchison Water Texas A&M University

Landspitali University Hospital The Scripps Research Institue

National University Hospital UC Davis

Sheba Medical Center UC Irvine

Tel-Aviv University UCLA

ItalyM.B.S. S.R.L. Medical Biological Service

UC San Diego

JapanFunakoshi University of Davis-California

Sysmex Corporation University of Louisville

Latvia

Latvian Biomedical Research and Study Centre

University of Maryland

University of LatviaUniversity of Massachusetts Medical School

Mexico UNISSER, Fac. Medicina, UNAM. University of Texas at Dallas

PeruUniversidad Peruana Cayetano Heredia

University of Texas-Houston

PolandAcademic Center for Biotechnology of Lipid Aggregates

University of Washington

Singapore

Division of Biomedical Sciences, Johns Hopkins in Singapore

Vanderbilt University

Shizenature Pte LtdVanderbilt University/medical center/radiation oncology

Spain

Universidad Politécnica de Madrid (UPM)

VietnamVietnam Academy of Science and Technology

Cajal Institute

Universities Allied for Essential Medicines

06 (주)펩트론

1. Peptide 활용범위

2. 주문시 알아야 할 사항

A. Peptide 서열 디자인하기

B. Peptide Modification 종류

C. Unnatural Amino Acid 구조

D. 형광물질의 종류와 파장대

E. Peptide 항원

F. Peptide 순도 제안

G. Peptide 주문 방법

3. Peptide의 합성 및 정제 방법

4. 제공되는 Data Sheet 정보 보는법

5. 합성 후 포함될 수 있는 화합물

6. Peptide 녹이기

7. 용해된 Peptide의 안정성

8. Peptide 20종 아미노산 구조

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제공되는 Data Sheet 정보 보는법

07www.peptron.co.kr

Peptide 활용범위합성 Peptide는 서열의 다양성과 많은 실험적 기법을 적용 할 수 있는 장점이

있어 신약, 신소재 등 넓은 분야의 연구 소재로 활용되고 있습니다.

Epitope Mapping

단백질 항원에 대한 항체의 결합부위(Epitope)를 찾는 방법입니다. Epitope은 Linear형태와

Conformational형태로 나눌 수 있습니다. Linear 형태의 경우, 단백질 항원의 아미노산 서열

을 이용하여 Overlapping Peptide Library를 합성하고 Antibody Screening Test를 합니다.

Conformational형태의 경우, 항원의 정확한 3차원적 구조를 알아야 하고 불 연속적인 서열

로 구성되어 있기 때문에 Peptide를 합성하여 사용하는 것이 어렵습니다. Epitope의 Iden-

tification과 Characterization은 새로운 치료제, 백신 및 진단 키트의 개발 등에 활용됩니다.

Peptide Mimics (Peptidomimetic)

Peptide의 활성을 향상 시키기 위해 Modification된 아미노산을 사용하는 기술을 말합니다.

이러한 기술을 통해 기존의 Peptide의 취약점이었던 체내 안정성 증진은 물론 효능을 최적화

할 수 있습니다.

㈜펩트론 등록특허 10-1412119

생리적 안정성을 증가시킨 ＰＡＲ―2 활성화 Peptide 및 이를 함유하는 약제학적 조성물.

08 (주)펩트론

Receptor-Binding Domain Screening

세포 표면의 수용체에 결합하는 Peptide를 탐색하는 기술입니다. 다양한 군의 Peptide Li-

brary가 이용되고 있으며, 수용체에 결합하는 Peptide의 서열 분석을 통해 새로운 치료제,

진단 키트의 개발 분야에 활용되고 있습니다.

Phage Display

파지 표면에 다양한 Peptide를 발현시킨 후, 특정 대상에 잘 결합하는 Peptide를 탐색하는

기술입니다. 파지에 의한 증폭과 서열 분석이 가능하기 때문에 기능성 Peptide를 선별하는

연구에 활용되고 있습니다. 선별된 파지 Peptide는 반드시 합성 Peptide를 이용하여 활성을

재확인하는 과정이 필요합니다.

Cell Penetration Peptide (CPP), Skin Penetration Peptide (SPP)

세포막 혹은 상피세포 층을 투과하는 Peptide에 기반을 두는 약물전달 기술입니다. 투과도

가 좋은 Peptide(Delivery)에 유효물질(Cargo)을 링커로 연결하여 효과적인 약물전달 시스템

으로 활용되고 있습니다.

Cargo (Drug, Etc)

Linker

Delivery peptide

Peptide 활용범위

09www.peptron.co.kr

주문 시 알아야 할 사항

A. Peptide 서열 디자인하기

Peptide의 합성을 시작하기 전에 여러 사항을 고려해야 합니다.

Peptide를 읽는 방향은 N-말단에서 C-말단(왼쪽에서 오른쪽) 이지만, 실제 합성은 C-말단

에서 N-말단(오른쪽에서 왼쪽)으로 이루어 집니다.

Peptide를 구성하는 아미노산 하나를 1mer라 부릅니다.

위의 예는 Glycine 3mer Peptide로, 1 Letter Code는 GGG, 3 Letter Code는 Gly-Gly-Gly

로 표기됩니다.

Peptide 합성의 난이도는 서열을 구성하는 아미노산의 수 및 종류와 구성에 따라 크게 달라

집니다.

A-1. 서열의 길이

Peptide의 mer수가 증가할 수록 합성의 난이도는 어려워 집니다. 20mer 이하의 Peptide

들은 합성이 용이하며, 40mer 이상의 Peptide부터 합성 수율이 낮아지게 됩니다.

예를 들어, 만약 매번 아미노산의 결합이 99%의 수율로 이루어 진다면, 20개의 아미노산으로

구성된 Peptide의 경우 전체 수율은 81.8%가 됩니다(100 x 0.99^20 = 81.79). 그러나 40개

의 아미노산으로 구성된 Peptide는 전체 수율이 66.9%가 됩니다(100 x 0.99^40 = 66.89).

이러한 이유로 Peptide의 mer수가 증가할 수록 수율이 낮아지고 합성 회수량이 현저히 낮

아지는 원인이 됩니다.

읽는 방향

합성 방향

N-Terminal C-TerminalH2N OH

O

NH

HN

HN

O

O O

10 (주)펩트론

A-2. 서열의 용해도

Peptide의 용해도는 서열을 이루는 아미노산의 종류 및 구성에 따라 크게 영향을 받습니다.

소수성(Hydrophobic) 아미노산인 Leucine (L), Isoleucine (I), Valine (V), Methionine (M),

Phenyl-alanine (F), Tryptophan (W)이 다수 포함된 Peptide들은 수용액에서 잘 녹지 않습

니다. 낮은 용해도는 실험 중 Peptide의 사용을 어렵게 만드는 주 원인이며, Peptide의 합성

및 정제의 문제를 발생 시킬 수 있습니다.

RRRRRLLLLL, KLKLLLLLKLK, RRRVVVVVV, IIIIIIIIII, RRRRRVVVVVV, MMMNMIM


11www.peptron.co.kr


A-3. 합성이 어려운 아미노산 서열

1. Cysteine (C)이나 Methionine (M)이 포함된 Peptide

합성과정에서 자발적 산화 반응이 일어나기 쉬운 아미노산인 Cysteine (C)이나 Methionine

(M)이 포함되어있는 Peptide들은 높은 순도로 얻기 어렵습니다. 이러한 아미노산들은 다음과

같이 적절한 아미노산으로 치환하여 합성할 수 있습니다.

2. 연속적으로 소수성(Hydrophobic) 아미노산들이 포함된 Peptide

Glycine (G), Leucine (L), Isoleucine (I), Valine (V), Phenylalanine (F)과 같은 소수성(Hy-

drophobic) 아미노산들이 Peptide 서열 내에 연속하여 다수(4개 이상) 존재할 경우, 합성 및

정제의 어려움이 있습니다.

3. Serine (S)이 연속적으로 포함된 Peptide

Serine (S)이 Peptide 서열 내에 연속하여(3개 이상) 존재할 경우, Deletion된 Peptide가

생길 수 있습니다.

4. Phospho 아미노산이 포함된 Peptide

Phospho 아미노산 이후 도입되는 아미노산의 합성은 Coupling Efficiency가 크게 감소하게

되어 합성 난이도가 높아집니다.

Methionine

Cysteine

Norleucine

Serine

H2N-LLLL-OH H2N-SSSS-OH

12 (주)펩트론


5. N-말단 (N-Terminal)에 Glutamine (Q), Glutamic acid (E)가 포함된 Peptide

N-말단에 위치한 Glutamine (Q) 또는 glutamic acid (E)는 합성 및 보관과정에서 Pyroglu-

tamate 구조로 변성될 수 있습니다. 이를 방지하기 위하여 다른 아미노산으로 대체하거나

N-말단에 Acetylation을 할 수 있습니다.

위와 같이 Peptide 서열 내에 합성이 어려운 아미노산이 추가 되면, 합성 및 정제의

어려움이 있으며, 실험 시 사용에 제약이 될 수 있습니다.

13www.peptron.co.kr


B. Peptide Modification 종류

실험의 목적에 따라 다양한 Peptide의 Modification이 가능합니다.

1. 일반 Modification

㈜펩트론에서 제공해드리는 일반 Modification의 종류는 아래의 표1과 같습니다.

[표1: 일반 Modification]

구분 종류 약어

Hydroxy modification

phospho-Serine [pS]

phospho-Threonine [pT]

phospho-Tyrosine [pY]

Y(NO2)=nitro tyrosine [Y(NO2)]

Y(SO3H)=sulfated tyrosine [Y(SO3H)]

C(SO3H)=sulfated cysteine [C(SO3H)]

A(SO3H)=sulfated alanine=L-cysteric acid [A(SO3H)]

Terminal Blocking

N-terminal Acetylation [Ac]

N-terminal Formylation [Formyl]

N-terminal 2-Mercaptoacetic acid [Mercaptoacetyl]

N-terminal 3-Mercaptopropionic acid [Mercaptopropionyl]

N-terminal 6-Mercaptohexanoic acid [Mercaptohexanoyl]

N-terminal pyroglutamic acid [Pyr]

N-terminal Succinimide acid [Suc]

C-terminus amidation [NH2]

C-terminus Cystramine [Cysteamide]

C-terminus methyl ester [OMe]

C-terminus ethyl ester [OEt]

C-terminus benzyl ester [OBn]

Fatty Acids

Myristic acid [Myristoyl]

Stearic acid [Stearoyl]

Palmitic acid [Palmitoyl]

Cholesterole [Cholesteroly]

6-amino haxanoic acid [Ahx]

8-amino octanoic acid [Aoc]

miniPEG

8-Amino-3, 6-Dioxa-Octanoic acid [miniPEG2]

[dPEG2]

[dPEG4]

[dPEG6]

[dPEG8]

[dPEG12]

Protection

2-Chorobenzyloxy-carbonyl [Cbz]

t-Butyl [tBu]

9-fluorenylmethyloxy-carbonyl [Fmoc]

t-Buthloxycarbony [Boc]

14 (주)펩트론


Labeling

Biotin [Biotin]

Fluorescein isothiocyanate [FITC]

[5-(and-6)-carboxyfluorescein] [5(6)-FAM]

[9-(2-carboxyphoeyl)-6-diehtylamino-3-xanthenylideone]-diehylammonium chloride

[Rhodamine-B]

5-(6)-carboxytetramethylrhodamine[TAMRA]

[Rhodamine]

MCA:4-merhoxy coumarine acetic acid [MCA]

AMC:7-amino-4-methyl coumarine [AMC]

Dansyl [Dansyl]

Dabcyl [Dabcyl]

Edans:5-[(2-aminoethyl)amino]naphthalene-1-sulfonic acid

[Edans]

4-amino benzoic acid [Abz]

7-amino-4-tryfluoromethyl coumarinie [AFC]

p-nitro anilide [pNA]

HCC=7-hydroxycoumarin-3-carboxylic acid [HCC]

N-methyl anthranilic acid [Nma]

DNP:2.4-Dinitrophenyl [DNP]

AHA:Naphthylamide [AHA]

Branched Peptide4-branched MAP [4-MAP]

8-branched MAP [8-MAP]

Disulfide

Single intra disulfide [C-C]

Two intra disulfides [CX1-CX2, CX3-CX4]

homo dimer [homo dimer]

hetro disulfide [hetro disulfide]

Cyclo head to tail cyclic Cyclo[***]

선택적 cycle peptide [CX1-CX2, C3 free]

ConjugationKLH, OVA, BSA (KLH or OVA or BSA)

Affinity resin 제작 Affinity resin

Isotope Stable Isotope labeled amino acids(D, 13C,15N) [A*]

2. 특수 Modification

특수 Modification은 고객의 요청에 따라 협의 하에 제공할 수 있습니다.

특수 Modification의 예

DOTA, DOPA, COT (trans-4'-cotininecarboxylic acid), Glycated, Folate(folic acid), Sarco-

sine, Methylene blue, Lipoylic acid, Pemetrexed, coumarin343, DABMI, DBCO, Cy5ma-

leimide, Cy5.5maleimide, Ferrocenecarboxylic acid, Maleimide, Etc.

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C. Unnatural Amino Acid 구조

실험의 목적에 따라 다양한 Unnatural 아미노산들을 도입할 수 있습니다. ㈜펩트론에서 제공

해드리는 일반 Unnatural 아미노산들의 종류는 아래와 같습니다.

아래에 언급되지 않은 특수 Unnatural 아미노산은 고객의 요청에 따라 협의 하에 제공할 수

있습니다.

Space Linker

Solubility Enhance & Space Linker

Maleimido Linker for Thiol Conjugation

Thiol Linker

Beta Alanine[βA]

Mercapto Acetic acid[Mercaptoacetyl]

6-Amino Hexanoic acid[Ahx]

Mercapto Hexanoic acid[Mercaptohexanoyl]

Amino Butyric acid[GABA]

Mercapto Propionic acid[Mercaptopropionyl]

8-Amino-3,6-Dioxa-Octanoic acid[miniPEG2]

[dPEG2]

3-Maleimido Propionic acid[3-Maleimidopropionyl]

4-Maleimido Butyric acid[4-Maleimidobutyl]

16 (주)펩트론


Diamine

Diamino Propionic acid[Dap]

Diamino Butyric acid[Dab]

Ornithine[Orn]

4-Amino-Piperidine-4-Carboxylic acid[Pip]

Etc.

α-Amino Butyric acid[Abu]

Sarcosine, N-Methyl Glycine[Sar]

Amino isoButyric acid[Aib]

Pyroglutamic acid[Pyr]

β-(2-Naphthyl)-Alalnine[2Nal]

β-(1-Naphthyl)-Alalnine[1Nal]

gamma Glutamic acid[rGlu]

4-AminomethylBenzoic acid[AM2BA]

4-amino Benzoic acid[4-Abz]

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D. 형광물질의 종류와 파장대

Peptide에 형광체를 Conjugation하면, 형광 현미경으로 Peptide의 시각화가 가능합니다.

이는 분광학적 검출기를 이용한 분석에 이용됩니다.

㈜펩트론에서 Conjugation 가능한 형광물질의 종류는 아래의 표2와 같습니다.

FITC conjugated Cy5 conjugated

[표2: 형광물질의 종류 및 파장대]

구분 종류 약어Excitation

(nm)Emission

(nm)

Fluorophore

(7-methoxycoumarin-4-yl)acetyl [MCA] 325 392

7-amino-4-methyl coumarin [AMC] 360 405

5-[(2-aminoethyl)amino]-naphthalene-1-sulfonic acid

[Edans] 341 471

7-Amino-4-trifluoromethylcoumarin [AFC] 395 495

[5-(and-6)-carboxyfluorescein] [5(6)-FAM] 494 518

Fluorescein isothiocyanate [FITC] 490 520

5-(DimethylAmino)Naphthalene-1-Sulfonyl chloride

[Dansyl] 335 526

[9-(2-carboxyphenyl)-6-diethylamino-3-xanthenylidene]-diethylammonium chloride

[Rhodamine-B] 552 558

5-(6)-carboxytetramethylrhodamine[TAMRA]

[Rhodamine]555 580

Cyanine5 [Cy5] 650 670

Cyanine5.5 [Cy5.5] 673 707

Chromophore

2, 4-Dinitrophenyl [DNP] 365

p-nitro anilide [pNA] 405

4-((4-(dimethylamino)phenyl)azo)benzoic Acid

[Dabcyl] 453

18 (주)펩트론


Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET)

FRET Peptide는 Peptidase의 특이성 연구를 위한 도구입니다. Peptidase는 특정 Peptide

의 서열을 인지하여 그 결합을 끊는 Enzymatic Cleavage 능력이 있습니다. FRET Peptide가

Cleavage되기 전 Donor에서 방출된 빛은 Acceptor에서 흡수하게 되어 색이 나타나지 않습

니다. 그러나 Peptidase가 Enzymatic Cleavage를 하면, Donor에서 방출된 빛은 Acceptor

에서 흡수 할 수 없게 되어 색이 나타나게 됩니다.

FRET Peptide를 합성하는 경우 Efficiency가 좋은 FRET 형광체 쌍을 선택하는 것과 두 형

광물질 사이의 거리가 중요합니다. 좋은 Efficiency의 FRET 형광체 쌍은 아래의 표3과 같고,

두 형광물질의 최적거리는 15mer 이내입니다. 형광체 쌍의 거리가 최적거리보다 멀어질수록

FRET Efficiency는 낮아지게 됩니다.

[표3: FRET Peptide용 형광체 쌍 (Donor/Acceptor)]

Donor Emission (nm) Peptide Acceptor Excitation (nm)

[Ednas] 490 15mer 이내 [Dabcyl] 453

[MCA] 392 15mer 이내 [DNP] 348

[FAM] 494 15mer 이내 [Dabcyl] 453

19www.peptron.co.kr


E. Peptide 항원

Peptide 항원제작은 효과적인 면역 반응을 위해 Peptide의 항원성 및 Carrier Protein과의

Conjugation을 고려해야 합니다.

E-1. Peptide 항원의 항원성

항원이 될 Peptide를 정할 수 없는 경우, ㈜펩트론에서는 무료로 서열조사 프로그램을 이용

하여 항원의 모체가 되는 단백질을 분석해 드립니다.

Flexible Regions, Antigenic Index, Surface Probability를 고려하여 항원성이 높은 서열을

추천해 드립니다.

항원성의 분석은 Web 상에서도 가능합니다. 분석 가능한 사이트들은 다음과 같습니다.

http://imed.med.ucm.es/Tools/antigenic.pl

http://sysbio.unl.edu/SVMTriP/prediction.php

하지만 계산에 의한 항원성 Peptide는 면역세포에서 인식되지 않아 항체가 생성되지 않을

수도 있습니다. 따라서, 항원성 분석을 통해 합성된 Peptide가 반드시 항체가 생성 된다는

것을 보장하지는 않습니다.

20 (주)펩트론


E-2. Peptide 항원 제조

Carrier Protein과의 Conjugation

KLH, BSA 그리고 OVA 중 원하시는 단백질과의 Conjugation을 제공합니다.

단백질의 Amine 그룹을 이용한 Conjugation 방법은 다음과 같습니다.

1) Carrier Protein의 Activation

Carrier Protein의 Lysine 잔기에 있는 Amine과 GMBS (N-γ-maleimidobutyryloxy succin-

imide ester)를 반응하여 Carrier Protein을 활성화 시킵니다.

2) Conjugation

Epitope Peptide의 Thiol기를 Carrier Protein의 Maleimido기와 반응시켜 Conjugation 합니다.

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F. Peptide 순도 제안

> 70%

- 항체 제작

- 항체 측정을 위한 ELISA의 표준물질

2차 항체를 이용하여, Sandwich 방식을 이용하므로 고 순도의 Peptide가 필요하지

않을 수 있습니다.

> 80%~90%

- 비 정량적인 Enzyme-substrate 연구

- Phosphorylation 반응

- Western blotting에서 비 정량적인 Blocking 연구

- immunocytochemistry와 in vitro Bioassays

- Affinity purification 용도로 Resin에 Coupling할 경우

- 조직배양 플레이트에 세포를 붙이기 위해 코팅할 경우

- Protein 전기영동에 사용할 경우

> 95% 이상

- 정량적인 ELISA나 RIA에 표준물질로 사용할 경우

- Receptor-ligand 상호작용 연구를 정량적으로 할 때

- in vitro Bioassays

- in vivo 연구

- 블로킹이나 Competition assay를 정량적으로 할 때

- Protease 연구를 정량적으로 할 때

- 효소 연구

- Monoclonal antibody 제작

> 98% 이상

- NMR 연구

22 (주)펩트론


G. Peptide 주문 방법

1) 견적 의뢰

아래의 6가지 주문정보를 포함하여 견적의뢰를 주시면, 30분 이내에 총알 같이 빠르게 견적

서를 보내 드립니다.

2) 주문 확인

견적서를 확인하신 후, 꼭 최종 주문 여부에 대해 연락 바랍니다.

(전화, 팩스, 이메일)

3) 주문 접수

주문 접수 완료 시, Lot. No.를 이메일로 알려 드립니다.

* 주문 후, Lot. No.를 받지 못 하셨을 경우 주문이 누락되었을 경우가 있으니, 꼭 확인 전화

부탁 드립니다.

* 주문 정보

주문자이름

기관 연락처 서열 순도 양

- 홈페이지 접속 후 www.peptron.co.kr 주문 및 견적의뢰.

- [email protected]로 메일 송부.

- 전화나 팩스로 견적의뢰.

Tel 042-360-8801~2 Fax 042-360-8808 H.P 010-4224-5417

견적 의뢰 방법

23www.peptron.co.kr


Peptide 주문, 합성, 발송 Flow Chart

1) 고객 주문

견적 문의 → 견적서 발송 → 주문 접수 → Lot. No. 부여

2) 합성

20 mer 이하 펩타이드의 1차 합성 기간은 일주일 정도입니다.

주문접수 일주일 후, 합성의 진척사항을 이메일로 보고 드립니다.

3) 분석

합성 완료 후, 분석은 1~2일 소요됩니다.

(분석 결과가 좋지 않으면, 고객에게 보고 후 재합성을 합니다.)

4) 정제

분석완료 후, 정제는 1~2일 소요됩니다. (주문양에 따라 정제 기간은 늘어 날수 있습니다.)

정제 진척사항을 이메일로 2차 보고 드립니다.

5) 동결건조

정제 후, 동결건조는 2~3일 소요됩니다.

(Peptide가 Hydrophilic하여 성상이 Crystal일 경우, 재 동결건조를 진행합니다.)

6) 발송

고객에게 합성이 완료됨을 보고하고, Peptide를 발송합니다.

1차 합성 기간: 2주일1차 진행보고 2차 진행보고

고객주문

합성 분석 정제동결건조

발송

1주일1~2일

1~2일2~3일

택배 발송 후 1일

합성 실패시

정제 실패시

24 (주)펩트론

Peptide 합성은 유기화학적 반응을 이용하여, 연속적인 Flow Condition을 통한 고상 Fmoc

Chemistry 방법을 이용합니다. 이는 각각의 아미노산을 정해진 순서에 따라 Resin에 하나씩

합성해 가는 방법으로, ㈜펩트론에서는 자체 개발한 자동 합성기를 이용하여 하나의 기계가

동시에 48개의 서로 다른 Peptide를 합성합니다. 합성한 Crude Peptide는 역상 HPLC를

이용하여 정제하고 동결건조기를 이용하여 건조합니다.

Peptide자동합성기

정제용 Reverse-Phase HPLC 동결 건조기

Peptide의 합성 및 정제 방법

25www.peptron.co.kr


Peptide의 QC(Quality Control)에는 분석용 Reverse-Phase HPLC와 LC/Mass 질량분석기를

이용합니다.

고객이 의뢰한 Peptide에 대한 모든 정보는 철저히 기밀로 유지되고 있습니다.

주문 조건에 맞는 Peptide의 합성과 정제가 완료되면, HPLC 및 Mass Data가 첨부되어 발송

됩니다.

고객이 요구하는 순도의 Peptide가 완성되지 않을 경우, 상담 후 무상 제공을 원칙으로 하고

있습니다.

LC/Mass 분석용 Reverse-Phase HPLC

㈜펩트론의 모든 Peptide 합성 서비스는 철저한 품질 관리하에 이루어집니다.

(ISO9001 인증)

26 (주)펩트론

Peptide 발송 시, Peptide Analysis Data Sheet와

함께 HPLC, Mass Data가 제공됩니다.

A. Peptide Analysis Data Sheet

Peptide Analysis Data Sheet에는 주문하신 Peptide의 기본 자료 (서열, 주문양, 발송양,

HPLC 분석방법, 순도, Mass 값 및 용해도)가 포함되어 있습니다.

Peptide 서열

Peptide 주문양 Peptide 발송양

HPCL 분석조건

Mass Expected : 분자량 Mass Found : 분석값(M+)

Solubility test

A. DW 10mg/ml로 녹입니다. 녹지 않으면, 1mg/ml로 녹입니다.

B. DMSO DW에 녹지 않을 경우, DMSO로 표기됩니다.

순도

제공되는 Data Sheet 정보 보는법

27www.peptron.co.kr


B. HPLC Data Sheet

HPLC Data에는 주문하신 Peptide의 순도(Purity) 측정값이 기재되어 있습니다.

Peptide의 검출은 220nm에서 이루어 지고, Peak의 Area%를 기준으로 발송되는 Peptide의

순도가 표기됩니다.

28 (주)펩트론

제공되는 Data Sheet

C. Mass Data Sheet

Mass Data에는 합성된 Peptide의 실제 측정값이 나타납니다.

Molecular Weight에 표기된 분자량을 기준으로 발송되는 Peptide의 분자량이 표기됩니다.

29www.peptron.co.kr

Peptide 및 포함될 수 있는 화합물의 종류는 정제의 여부에 따라 달라집니다.

* 정제된 Peptide의 경우, 정제하지 않은 Peptide와 비교하면 원하는 Peptide 이외의 부

생성물이 크게 줄어 듭니다. ‘주문 시 알아야 할 사항’의 정보를 고려하여 주문 주시면 부

생성물의 비율을 크게 낮출 수 있습니다.

* TFA Salt 형태의 Peptide 이외에 Acetate 및 Ammonium 형태의 Peptide도 합성 가능합니다.

정제된 Peptide의 화합물 정제하지 않은 Peptide내의 화합물

• 원하는 Peptide• 부 반응이 일어난 Peptide • 서열 중 일부 아미노산이 빠진 Peptide• TFA (Trifluoroacetic acid)

• 원하는 Peptide• 부 반응이 일어난 Peptide • 서열 중 일부 아미노산이 빠진 Peptide• TFA (Trifluoroacetic acid)• Peptide합성에 사용된 시약• 아미노산의 보호기• 아미노산의 보호기가 완전히 제거되지 않은 Peptide• Cleavage 과정 중 변형된 Peptide

합성 후 포함될 수 있는 화합물

30 (주)펩트론

Peptide 녹이기

Peptide를 녹이는 과정은 합성 Peptide를 이용하면서 가장 문제가 될 수 있는 부분입니다.

㈜펩트론에서는 Peptide가 완성되면 DW나 DMSO에 대한 Solubility Test를 해드립니다.

Peptide를 녹이기 전, Peptide Analysis Data Sheet의 Solubility를 참고하여 사용하는 것

을 추천합니다.

* 만약 용매로 DMSO를 사용하셔야 한다면, DMSO에 의한 Peptide의 변성 및 Cell Damage를

낮추기 위해 고농도로 Stock Solution을 만든 후, 사용하는 용매에 Serial Dilution을 하여

원하는 농도로 사용하는 것을 추천 드립니다.

* 고객님이 사용하는 용매가 있는 경우, 주문 시 말씀 해주시면 Solubility Test에 포함해

드립니다.

* Peptide의 무게 측정 시, 차고 건조한 곳에서 정전기에 주의 하여 측정 해야 합니다. Pep-

tide는 동결 건조한 물질의 특성상 쉽게 대기 중 수분을 머금어 무게가 증가 할 수 있고,

정전기에 의해 날리거나 주위 물체 표면에 달라 붙을 수 있습니다.

31www.peptron.co.kr

Peptide의 화학적 안정성은 아미노산 종류와 구성 따라 결정됩니다.

고체상의 Peptide는 용매에 녹아있는 상태보다 안정합니다. Peptide가 변성되는 것을 방지

하기 위해 동결 건조된 상태로 냉장 보관합니다. 만약 용매에 녹아있다면 -20℃ 이하로

냉동 보관하는 것을 추천 드립니다.

다음은 용해된 Peptide의 Pyro glutamate, Oxidation, Hydrolysis, Deamination을 통해 변성이

일어나는 예 입니다.

1. 1회 사용량씩 소분해 두는 것이 좋습니다. 사용할 때 마다 반복적으로 녹이고 얼리는

과정에서 변성이 생길 수 있습니다.

2. 대기 중에 노출되는 것을 최소화 하는 것이 좋습니다. 대기 중 산소와 반응하여 산화

물을 형성할 수 있습니다.

3. pH 8 이상의 조건이 되지 않도록 해야 합니다. 만일 Peptide를 사용하는 조건이 pH

8 이상이면, 용액을 차게 유지하는 것이 좋습니다.

다음 사항에 주의하십시오.

Pyro glutamate

N-term에 위치한 Glutamine (Q)는 사용하는 Buffer의 pH에 따라 Pyro glutamate 형태로

변성됩니다.

Glutamine Pyro glutamate

용해된 Peptide의 안정성

32 (주)펩트론

Oxidation

Cysteine (C)이나 Methionine (M)의 경우, 황(Sulfur) 원자에 산화반응이 잘 일어 납니다. 특히

DMSO에 녹인 경우 더욱 잘 일어납니다.

Cysteine (C)은 산화반응을 통해 Peptide의 inter 혹은 intra Disulfide 결합을 형성할 수

있습니다.

Inter Disulfide

Intra Disulfide

Methionine SulfoxideMethionine

Methionine (M)은 산화반응을 통해 Sulfoxide가 형성됩니다.

용해된 Peptide의 안정성

33www.peptron.co.kr


Hydrolysis

Aspartic acid (D)를 포함하는 서열에서 드물게 나타나는 반응입니다. 물이 제거되고 Suc-

cinimide 형태의 중간체가 형성된 후, iso-Aspartic acid가 형성됩니다.

Deamination

Asparagine (N)를 포함하는 서열에서 드물게 나타나는 반응입니다. Amine이 제거되고 Suc-

cinimide 형태의 중간체가 형성된 후, Aspartic acid 또는 iso-Aspartic acid가 형성됩니다.

Succinimide

Iso-Aspartic acid

Iso-Aspartic acidAspartic acid

34 (주)펩트론

Cys

Cysteine0.17

C121.16103.14C3H7NO2S

Phe

Phenylalanine2.5

F165.19147.18C9H11NO2

Ile

Isoleucine3.1

I131.18113.16C6H13NO2

His

Histidine-1.7

H155.16137.14C6H9N3O2

Gly

Glycine0.67

G75.0757.05C2H5NO2

Tyr

Tyrosine0.08

Y181.19163.17C9H11NO3

Ala

Alanine1.0

A89.0971.08C3H7NO2

Trp

Tryptophan1.5

W204.23186.21C11H12N2O2

Arg

Arginine-7.5

R174.20156.19C6H14N4O2

Gln

Glutamine-2.9

Q146.15128.13C5H10N2O3

Thr

Threonine-0.75

T119.12101.10C4H9NO3

Leu

Leucine2.2

L131.17113.16C6H13NO2

Pro

Proline0.29

P115.1397.12C5H9NO2

Lys

Lysine-4.6

K146.19128.17C6H14N2O2

Asn

Asparagine-2.7

N132.12114.10C4H8N2O3

Glu

Glutamic Acid-2.6

E147.13129.11C5H9NO4

Met

Methionine1.1

M149.21131.20C5H11NO2S

Val

Valine2.3

V117.1599.13C5H11NO2

Cys

Cysteine0.17

C121.16103.14C3H7NO2S

Ser

Serine-1.1

S105.0987.08C3H7NO3

Asp

Aspartic Acid-3.0

D133.10115.09C4H7NO4

1-Letter AminoAcid Code 3-Letter Amino

Acid Code

Chemical Structure

Nonpolar(hydrophobia)

Basic

Polar, uncharged

Acidic Chemical Name

Relative MolecularMass

Mr-H2OMolecular Formula

Hydrophobicity

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l주l펩트론 305-811 대전광역시 유성구 유성대로 1628번길 37-24 (전민동)

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