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LAB 23 I-MET- 031 Ac benzoïque et sorbique HPLC-UV v.11 1/14
Agence fédérale
pour la Sécurité
de la Chaîne alimentaire
Laboratoire de Liège
LAB 23 I-MET-031
DETERMINATION DE LA TENEUR EN ACIDES BENZOÏQUE ET SORBIQUE DANS LES DENREES
ALIMENTAIRES PAR HPLC-UV
(BELAC : LIMONADES, COLAS, JUS DE FRUITS, CREVETTES)
Version 11
Date d’application 2014-10-06
Rédaction par : Thierry De Tandt (Expert technique) ; 2014-09-30
Révision par : BollenLuc (Quality manager) ;
Autorisation de publication par : Etienne–Thewissen Fabian ( Chef de section) ;
Gestion et localisation de la
version valide :
LFSAL : fichier M\Qualité\méthode\LAB23 I-MET031
Destinataires : Collaborateurs Section Phyto Résidus
Mots clefs : Méthode ; Dosage ; Acide Benzoïque ; Acide Sorbique ;
HPLC
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LAB 23 I-MET- 031 Ac benzoïque et sorbique HPLC-UV v.11 2/14
Aperçu des modifications
Révision
par/date*
Motif de la révision Partie du
texte/portée de la
révision
Ing. M.
Fourny
15-03-2007
Adaptation suite à l’audit BELAC Indicateur de
prestation
Y. Bouamar
25-06-2007
Modification du texte Tout le texte
Th. De Tandt
14-12-2007
Ajout d’indicateurs de prestation – Fusion avec la I-
MET 084 (Ac sorbique et benzoïque dans les
crevettes) – Ajout de la matrice confiture.
Toute la méthode
Th. De Tandt
27-11-2008
Ajout des annexes
V. Erven
2009-02-24
Adaptation au nouveau template Toute la méthode
M-C
Offermanne
2010-08-27
corrections Toute la méthode
V. Erven
2011-04-15
Adaptation Performances de la méthode et Contrôle
de qualité- reprise des jus de fruits et des salades de
viande
Ch 6 ; 10 et 11
V.Erven
2012-02-23
Suppression des parties modifiées/supprimées +
adaptations au nouveau template
tout
V. Erven
2012-03-23
Passage à une droite d’étalonnage à cinq points –
Révision des préparations des dopés à la norme
Ch 8 , 10
V.Erven
2012-10-05
Adaptation aux remarques d’audits Ch 3 et ch 13 .
Ch 8
DE TANDT
2014-09-30
Uniformisation de la préparation des échantillons
et adaptations de la droite de calibration, des
solutions de contrôle et des calculs.
Tout le texte
(adaptations non
marquées)
* L’écart entre la date actuelle et celle de la dernière révision ne peut pas dépasser 5 ans.
Les modifications par rapport à la version précédente sont reprises en rouge.
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DETERMINATION DE LA TENEUR EN ACIDES BENZOÏQUE ET SORBIQUE DANS LES DENREES ALIMENTAIRES PAR HPLC-UV
LAB 23 I-MET- 031 Ac benzoïque et sorbique HPLC-UV v.11 3/14
TABLE DES MATIERES
1 OBJECTIF .......................................................................................................................... 4
2 CHAMP D’APPLICATION ................................................................................................. 4
3 DOCUMENTS LÉGAUX ET NORMATIFS ........................................................................ 4
4 DÉFINITIONS ET ABRÉVIATIONS ................................................................................... 4
5 PRINCIPE ........................................................................................................................... 5
6 CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE ................................................................... 5
7 CONSIGNES DE SÉCURITÉ ET MESURES SPÉCIFIQUES ........................................... 5
8 RÉACTIFS ET ADDITIFS .................................................................................................. 5
8.1 RÉACTIFS .................................................................................................................................... 5 8.2 SOLUTIONS ................................................................................................................................. 5
8.2.1 Phase mobile ..................................................................................................................... 5 8.2.2 Mélange d’extraction ........................................................................................................ 5 8.2.3 Solutions d’étalonnage ..................................................................................................... 6 8.2.4 Solutions de contrôle ........................................................................................................ 6
9 APPAREILS ....................................................................................................................... 7
10 METHODE .......................................................................................................................... 7
10.1 CONDITIONS CHROMATOGRAPHIQUES .................................................................................... 7 10.2 LE BLANC MÉTHODE ............................................................................................................... 8 10.3 PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS ......................................................................................... 8 10.4 PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS DOPÉS .............................................................................. 8 10.5 INJECTION DES SOLUTIONS ..................................................................................................... 9
11 CONTRÔLE DE LA QUALITÉ ......................................................................................... 10
11.1 VÉRIFICATION DE LA STABILITÉ DU SYSTÈME CHROMATOGRAPHIQUE ................................. 10 11.2 IDENTIFICATION DES PICS ..................................................................................................... 10 11.3 CONTRÔLES DE PREMIÈRE LIGNE .......................................................................................... 10
11.3.1 Courbe d’étalonnage ...................................................................................................... 10 11.3.2 Blanc méthode ................................................................................................................ 10 11.3.3 Echantillons dopés .......................................................................................................... 11
11.4 CONTRÔLE DE DEUXIÈME ET DE TROISIÈME LIGNE ............................................................... 11
12 CALCUL ET RAPPORTAGE ........................................................................................... 11
12.1 DROITE D’ÉTALONNAGE ....................................................................................................... 11 12.2 TENEUR DES ANALYTES DANS LES SOLUTIONS INJECTÉES .................................................... 11 12.3 TENEUR EN ACIDES BENZOÏQUE ET SORBIQUE DANS LES ÉCHANTILLONS ............................. 12 12.4 RENDEMENT DES ÉCHANTILLONS DOPÉS .............................................................................. 12
13 RÉFÉRENCE AUX PROCÉDURES, INSTRUCTIONS, DOCUMENTS, FORMULAIRES OU LISTES Y AFFÉRENTS .................................................................................................... 13
13.1 PROCÉDURES ........................................................................................................................ 13 13.2 FORMULAIRES ...................................................................................................................... 13 13.3 LISTES .................................................................................................................................. 13
14 ANNEXES ........................................................................................................................ 13
Annexe : Flowchart de la préparation des échantillons ................................................................. 14
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1 Objectif
Détermination de la teneur en acide benzoïque et en acide sorbique et leurs sels dans les
denrées alimentaires dont les limonades, les colas, les crevettes, les salades de viande, les
édulcorants de table, les nappages, les suppléments alimentaires, la présure et les confitures.
2 Champ d’application
Cette méthode s’applique à la détermination par HPLC-UV de la teneur en acide benzoïque,
sorbique et leurs sels dans les limonades (avec pulpe ou non), les colas, les confitures, les
salades de viande, les édulcorants de table, les nappages, les suppléments alimentaires, la
présure et les crevettes. Les normes maximales dans ces matrices varient de l’absence à
12000 mg/kg.
La méthode devrait être applicable à d’autres matrices tant qu’elles n’apportent pas de pic
interférent.
3 Documents légaux et normatifs
Règlement européen 1129/2011 modifiant l’annexe II du règlement (CE) 1333/2008 du
Parlement européen et du Conseil en vue d’y inclure une liste de l’Union des additifs
alimentaires.
Arrêté Royal 01-03-1998 portant sur les additifs autorisés dans les denrées alimentaires
à l’exception des colorants et des édulcorants.
Arrêté Royal 12-03-2008 modifiant l’arrêté royal du 17 février 1997 concernant les
édulcorants destinés à être utilisés dans les denrées alimentaires et l’arrêté royal du 1er
mars 1998 relatif aux additifs autorisés dans les denrées alimentaires à l’exception des
colorants et des édulcorants.
Arrêté royal 01-10-2008 modifiant l'arrêté royal du 14 juillet 1997 relatif aux critères de
pureté des additifs pouvant être utilisés dans les denrées alimentaires et l'arrêté royal du
1er mars 1998 relatif aux additifs autorisés dans les denrées alimentaires à l'exception
des colorants et des édulcorants.
4 Définitions et abréviations
HPLC-UV : Chromatographie liquide à haute performance – détecteur UV
UV : Ultraviolet
Vis : Visible
(v/v/v) : Dilution ( volume/volume/volume )
p.a. : Pour analyse
CRM : Certified reference material ( matériel certifié de référence )
T/min : Tour par minute (vitesse de rotation)
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5 Principe
L’échantillon est additionné d’un mélange acétonitrile/eau/acide acétique 500+500+20 (v/v/v).
L’extraction se fait par ultrasons et agitation mécanique. La purification par centrifugation et
filtration. Les acides benzoïque et sorbique sont séparés sur une colonne
chromatographique en phase inverse spécialement adaptée aux phases très aqueuses puis
dosés par détection UV.
6 Caractéristiques de performance
Voir le dossier de validation
7 Consignes de sécurité et mesures spécifiques
Suivre les instructions de sécurité spécifiées sur les fiches de sécurité des réactifs et dans le
logbook de l’appareil.
Toutes les manipulations de solvants se font sous hotte.
8 Réactifs et additifs
8.1 Réactifs
8.1.1. Eau ultrapure
8.1.2. Acétonitrile de qualité HPLC
8.1.3. Acide acétique 99 - 100%
8.1.4. Tétrahydrofurane de qualité HPLC
8.1.5. Acide benzoïque certifié p.a
8.1.6. Acide sorbique certifié p.a
8.1.7. Acide benzoïque certifié (standard analytique)
8.1.8. Acide sorbique certifié (standard analytique)
8.2 Solutions
8.2.1 Phase mobile
Mélanger 800 ml d’eau (8.1.1.), 200 ml de tétrahydrofurane (8.1.4.) et 1 ml d’acide acétique
(8.1.3.). Homogénéiser puis dégazer 5 minutes au bain à ultrasons.
8.2.2 Mélange d’extraction
Mélanger 500 ml d’eau (8.1.1.), 500 ml d’acétonitrile (8.1.2.) et 20 ml d’acide acétique
(8.1.3.). Homogénéiser puis dégazer 5 minutes au bain à ultrasons.
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8.2.3 Solutions d’étalonnage
Toutes ces solutions sont conservées au réfrigérateur entre 0 et 8°C.
8.2.3.1 Solution stock à 2000 mg/l en acides benzoïque et sorbique
Peser, à 0,1 mg près, environ 100 mg d’acide benzoïque (8.1.5.) et 100 mg d’acide sorbique
(8.1.6.) dans un ballon jaugé de 50 ml. Dissoudre puis porter au volume avec le mélange
d’extraction (8.2.2). Homogénéiser.
8.2.3.2 Solutions d’étalonnage L1 à L5
Ces solutions doivent être préparées avec la même micropipette à volume variable suivant le
tableau ci-dessous :
Solution Prélèvement Volume du jaugé
Concentration
L5 500 µl sol. stock 10 ml 100 mg/ml
L4 250 µl sol. stock 20 ml 25 mg/ml
L3 150 µl sol. stock 50 ml 6 mg/ml
L2 500 µl sol. L5 25 ml 2 mg/ml
L1 250 µl sol. L5 50 ml 0,5 mg/ml
Porter au volume avec le mélange d’extraction (8.2.2). Homogénéiser.
8.2.4 Solutions de contrôle
Toutes ces solutions sont préparées à chaque nouvelle série d’échantillon afin de contrôler la
courbe d’étalonnage.
8.2.4.1 Solution mère de contrôle à 400 mg/L en acides benzoïque et sorbique
Peser, à 0,1 mg près, environ 20 mg de standard anlytique de chaque acide (8.1.7. et 8.1.8.)
dans un ballon jaugé de 50 ml. Dissoudre puis porter au volume avec le mélange d’extraction
(8.2.2). Homogénéiser.
8.2.4.2 Solutions filles de contrôle C1 et C2
Ces solutions sont préparées suivant le tableau ci-dessous :
Solution Prélèvement Volume du jaugé
Concentration (
C1 100 µl sol. mère 25 ml 1,6 mg/l
C2 1000 µl sol. mère 10 ml 40 mg/l
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Porter au volume avec le mélange d’extraction (8.2.2). Homogénéiser.
9 Appareils
Chaîne HPLC équipée de :
- une pompe à débit variable de 0,1 à 2 ml/min ;
- une colonne analytique C18, 4,6 mm i.d. x 150 mm, 5 µm spécialement adaptée
aux phases mobiles très aqueuses type Zorbax SB-AQ ou équivalente ;
- une colonne de garde RP C18 ou équivalente ;
- un détecteur UV-Vis à longueurs d’onde variables ou, de préférence, à barrette
de diodes ;
- une boucle d’injection de 10 µl ;
- un échantillonneur automatique ;
- un four pour colonne ;
- un système de pilotage de la chaîne et d’acquisition et de gestion des données.
Balance analytique avec une précision au dixième de mg ;
Bain à ultrasons pour la mise en solution et le dégazage des solutions ;
Filtre en nylon de type Acrodisk®, 0,2 µm (ou 0,45 µm si 0,2 µm trop fin) ;
Seringue porte-filtre type Hamilton® ;
Réfrigérateur entre 0 et 8°C pour la conservation des solutions d’étalonnage ;
Verrerie classique de laboratoire ;
Centrifugeuse adaptée pour tubes Falcon de 50 ml et permettant une vitesse de
minimum 5000 T/min ;
Agitateur à plateau.
10 Méthode
10.1 Conditions chromatographiques
- Phase mobile (8.2.1.)
- Débit : 1,0 ml/min
- Volume d’injection : 10 µl
- Détecteur : 240,5 nm
- Température de la colonne : 37°C
- Temps de rétention : acide sorbique : ± 9 min ; acide benzoïque : ± 12 min
- Durée de l’analyse : 15 min.
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10.2 Le blanc méthode
En parallèle à la préparation des échantillons, préparer un blanc méthode en suivant la même
procédure que pour un échantillon mais sans prise d’essai et sans dilution après filtration.
10.3 Préparation des échantillons
prélever la prise d’essai (P) dans un Falcon de 50 ml (à 0,01 g près pour un solide) ;
ajouter 40 ml du mélange d’extraction (8.2.2) ;
mettre au bain à ultrasons pendant 5 minutes ;
agiter fortement sur un agitateur à plateau pendant 20 minutes;
centrifuger 5 min à 5000 rpm ;
filtrer une aliquote du surnageant sur Acrodisk 0,2 µm (ou 0,45 µm si filtration
impossible sur 0,2 µm) ;
diluer (D) fois dans un vial d’injection avec le mélange d’extraction (8.2.2) et
homogénéiser.
Matrice P
(g ou ml) Vol.mél. solvants
D (dilution)
confiture 5 40 ml 5
crevette rose cuite 5 40 ml 10
crevette grise cuite 5 40 ml 25
édulcorant de table 5 40 ml 2
jus d'orange 5 40 ml -
limonade 5 40 ml -
nappage 5 40 ml 2
présure 2,5 40 ml 25
salade de viande 5 40 ml 10
sup.alim sirop 5 40 ml -
sup.alim.liquide (autre que sirop) 5 40 ml 10
sup.alim.solide avec vitamine A/D 5 40 ml 5
sup.alim.solide sans vitamine A/D 5 40 ml -
10.4 Préparation des échantillons dopés
Ne disposant pas de CRM pour cette analyse, le contrôle de première ligne est réalisé à
l’aide d’un échantillon dopé préparé lors de chaque séquence d’analyse.
Il faut préparer un dopé par type de matrice.
prélever la prise d’essai (P) dans un Falcon de 50 ml (à 0,01 g près pour un solide) ;
ajouter le volume (X) de solution stock (8.2.3.1) ;
ajouter (V) ml du mélange d’extraction (8.2.2) ;
mettre au bain à ultrasons pendant 5 minutes ;
agiter fortement sur un agitateur à plateau pendant 20 minutes;
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centrifuger 5 min à 5000 rpm ;
filtrer une aliquote du surnageant sur Acrodisk 0,2 µm (ou 0,45 µm si filtration
impossible sur 0,2 µm) ;
diluer (D) fois dans un vial d’injection avec le mélange d’extraction (8.2.2) et
homogénéiser.
Matrice P
(g ou ml) X
sol.stock V mél.
solvants D
(dilution)
confiture 5 2,5 ml 37,5 ml 5
crevette.rose cuite 5 5 ml 35 ml 10
crevette grise cuite 5 15 ml 25 ml 25
édulcorant de table 5 1,25 ml 40 ml 2
jus d'orange 5 12,5 µl 40 ml -
limonade 5 750 µl 40 ml -
nappage 5 2,5 ml 37,5 ml 5
présure 2,5 15 ml 25 ml 25
salade de viande 5 4 ml 36 ml 10
sup.alim sirop 5 12,5 µl 40 ml -
sup.alim.liquide (autre que sirop) 5 5 ml 35 ml 10
sup.alim.solide avec vitamine A/D 5 2,5 ml 37,5 ml 5
sup.alim.solide sans vitamine A/D 5 12,5 µl 40 ml -
10.5 Injection des solutions
Injecter, dans l’ordre, les solution d’étalonnage L1 à L5 (8.2.3.2), le blanc (8.2.3) et chacune
des solutions de contrôle (8.2.4.2).
Injecter ensuite les solutions d’échantillons en intercalant une injection de chacune des
solutions de contrôle tous les dix échantillons au maximum tel que décrit ci-dessous.
Chaque série d’injections sera clôturée par une injection de chacune des solutions de
contrôle quel que soit le nombre d’échantillons dans la série d’analyse.
Séquence d’injection :
Solution d’étalonnage L1
Solution d’étalonnage L2
Solution d’étalonnage L3
Solution d’étalonnage L4
Solution d’étalonnage L5
Blanc
Solution de contrôle C1
Solution de contrôle C2
Solution de l’échantillon 1
Solution de l’échantillon 2
…
Solution de l’échantillon 10
Solution de contrôle C1
Solution de contrôle C2
Solution de l’échantillon 11
Solution de l’échantillon 12
…
Solution du dernier échantillon
Solution de contrôle C1
Solution de contrôle C2
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LAB 23 I-MET- 031 Ac benzoïque et sorbique HPLC-UV v.11 10/14
11 Contrôle de la qualité
11.1 Vérification de la stabilité du système chromatographique
Laisser le chromatographe fonctionner avec de la phase mobile (8.2.1.) jusqu’à stabilisation
de la ligne de base avant de démarrer tout contrôle de l’appareil (la dérive de la ligne de base
doit être inférieure à 0,1 mAU/min.).
11.2 Identification des pics
Identifier les acides sorbique et benzoïque dans la solution d’échantillon en comparant le
temps de rétention avec ceux des solutions de contrôle l’encadrant. Les temps de rétention
ne peuvent différer de plus de 5 % (paramètre introduit dans le logiciel pour la
reconnaissance des pics).
Si le détecteur permet de prendre le spectre, on peut en plus vérifier la correspondance des
spectres UV-Vis et du facteur de pureté du pic d’un standard et du pic de la solution
échantillon (partie ascendante, sommet et partie descendante du pic).
11.3 Contrôles de première ligne
11.3.1 Courbe d’étalonnage
La concentration trouvée pour les levels de calibration ainsi que pour les solutions de contrôle
ne peut différer de plus de 10 % de la concentration théorique.
Sinon, recommencer la préparation des solutions de contrôle et/ou d’étalonnage et réinjecter
la séquence (toutes les solutions peuvent être réinjectées dans les 24 heures suivant leur
préparation si elles ont été conservées dans un réfrigérateur en flacon fermé).
Ces paramètres sont vérifiés via les formulaires LAB23 F543 PR12 : RAPPORT
D'EXECUTION – DOSAGE DES ACIDES SORBIQUE ET BENZOIQUE – MET-LFSAL-031
(B,C,D,S)
11.3.2 Blanc méthode
Afin de vérifier que la quantité d’acides sorbique et benzoïque apportée par le matériel utilisé
pour la préparation des échantillons est négligeable par rapport aux quantités déterminées
dans ceux-ci, la valeur du blanc ne devra pas dépasser 0,5 mg / l pour chacun des acides.
Sinon, recommencer la préparation du blanc et des solutions d’échantillons et réinjecter les
en les encadrant avec les solutions de contrôle comme décrit dans la séquence d’injections.
Ce paramètre est vérifié via les formulaires LAB23 F543 PR12 : RAPPORT D'EXECUTION –
DOSAGE DES ACIDES SORBIQUE ET BENZOIQUE – MET-LFSAL-031 (B,C,D,S)
DETERMINATION DE LA TENEUR EN ACIDES BENZOÏQUE ET SORBIQUE DANS LES DENREES ALIMENTAIRES PAR HPLC-UV
LAB 23 I-MET- 031 Ac benzoïque et sorbique HPLC-UV v.11 11/14
11.3.3 Echantillons dopés
Pour chaque acide, le taux de récupération (%) obtenu pour l’échantillon dopé doit être
compris dans l’intervalle 100 ± IM (incertitude de mesure exprimée en % ; voir LAB 23 L01-04
Liste des incertitudes de mesures).
Si le rendement obtenu est en dehors de cet intervalle, recommencer la préparation de la
solution échantillon, y compris le dopé et les réinjecter en les encadrant avec les solutions de
contrôle comme décrit dans la séquence d’injections.
Le rendement obtenu pour un échantillon liquide ou solide dopé est calculé via le formulaire
LAB23 F543 PR12 : RAPPORT D'EXECUTION – DOSAGE DES ACIDES SORBIQUE ET
BENZOIQUE – MET-LFSAL-031 (B,C,D,S).
La conformité du rendement obtenu est contrôlé via le formulaire LAB 23 P018 F01
« Rendement des échantillons de première ligne »
11.4 Contrôle de deuxième et de troisième ligne
Des contrôles deuxième et troisième ligne sont réalisés selon la procédure LAB23 P020
« Gestion des contrôles qualités ».
12 Calcul et rapportage
Les calculs sont informatisés dans le fichier Excel LAB23 F543 PR12 : RAPPORT
D'EXECUTION – DOSAGE DES ACIDES SORBIQUE ET BENZOIQUE – MET-LFSAL-031
(B,C,D,S)
12.1 Droite d’étalonnage
Établir la droite d’étalonnage à partir des aires des pics selon la procédure décrite dans le
logbook de l’appareil ou manuellement comme décrit ci-dessous :
Rapporter les surfaces des pics des solutions étalons par rapport aux concentrations
massiques correspondantes en µg/ml ou en mg/l.
La droite d’étalonnage est du type y = ax + b,
où y = aire du pic de l’analyte dans la solution d’échantillon
a = y intercept
b = pente
12.2 Teneur des analytes dans les solutions injectées
On peut déterminer la quantité d’analyte x présente dans la solution d’échantillon en µg/ml ou
en mg/l :
DETERMINATION DE LA TENEUR EN ACIDES BENZOÏQUE ET SORBIQUE DANS LES DENREES ALIMENTAIRES PAR HPLC-UV
LAB 23 I-MET- 031 Ac benzoïque et sorbique HPLC-UV v.11 12/14
a
by
Le logiciel HPLC calcule cette teneur.
12.3 Teneur en acides benzoïque et sorbique dans les échantillons
Teneur (mg/kg ou mg/l) = C x V x F / PE
Où C = concentration calculée par le système HPLC (mg/l)
V = volume de la phase liquide lors de l’extraction (ml)
Pour un échantillon solide non dopé : V = volume de mélange d’extraction
(8.2.2)
Pour un échantillon solide dopé : V = volume de mélange d’extraction (8.2.2) +
volume de solution de dopage (8.2.3.1)
Pour un échantillon liquide non dopé : V = volume prise d’essai + volume de
mélange d’extraction (8.2.2)
Pour un échantillon liquide dopé : V = volume prise d’essai + volume de
mélange d’extraction (8.2.2) + volume de solution de dopage (8.2.3.1)
F = facteur de dilution supplémentaire éventuelle
PE = prise d’essai de l’échantillon (g ou ml)
On utilise également cette formule pour calculer la LOQ définie comme la teneur théorique en
acide sorbique ou benzoïque dans l’échantillon calculée sur la base d’une réponse
équivalente au premier niveau d’étalonnage (C = concentration de la solution L1).
12.4 Rendement des échantillons dopés
Taux de récupération :
T
A
T
T 100(%)
où :
TA = teneur trouvée analytiquement dans l’échantillon dopé (en mg/kg ou mg/l) et calculée
selon la formule en 12.3.
TT = teneur théorique dans l’échantillon dopé (en mg/kg ou mg/l)
DETERMINATION DE LA TENEUR EN ACIDES BENZOÏQUE ET SORBIQUE DANS LES DENREES ALIMENTAIRES PAR HPLC-UV
LAB 23 I-MET- 031 Ac benzoïque et sorbique HPLC-UV v.11 13/14
Avec :
PE
VCPETT
DDT
)(
où :
T = teneur trouvée analytiquement (en mg/kg ou mg/l) dans l’échantillon à l’origine (non dopé)
et calculée selon la formule en 12.3.
PE = prise d’essai de l’échantillon dopé (en kg ou l)
CD = concentration de la solution utilisée pour le dopage (en mg/l)
VD = volume de solution ajouté pour le dopage (en l)
Délai d’analyse prévu : 10 jours ouvrables
13 Référence aux procédures, instructions, documents, formulaires ou
listes y afférents
13.1 Procédures
LAB 23 P 018 « Création et suivi des cartes de contrôle qualité »
13.2 Formulaires
LAB 23 F 543 PR 12 Rapport d’exécution « dosage des acides sorbique et benzoïque »
LAB 23 P 018 F01 Fichier « Rendements des échantillons de première ligne »
13.3 Listes
LAB23 L01-04 « Liste des incertitudes de mesures »
14 Annexes
Flowchart de la préparation des échantillons.
DETERMINATION DE LA TENEUR EN ACIDES BENZOÏQUE ET SORBIQUE DANS LES DENREES ALIMENTAIRES PAR HPLC-UV
LAB 23 I-MET- 031 Ac benzoïque et sorbique HPLC-UV v.11 14/14
Annexe : Flowchart de la préparation des échantillons
ETAPE 3 : Purification et injection 5 min centrifugation (5000 t/min) Filtration sur acrodisc Injection HPLC-UV (+ dilution éventuelle)
ETAPE 2 : Extraction
5 min bain ultra-sons 20 min agitateur (300 rpm)
ETAPE 1 : Préparation de l’échantillon en tube Falcon de 50 ml Prélever en Falcon 5 g (ou ml) + 40 ml mélange solvant d’échantillon homogénéisé (+ sol. de dopage)