determination of phosphorus by colorimeteric method - i
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Determinacion de fosforo por metodo de calorimetriaTRANSCRIPT
Instituto de Biociencias para el Desarrollo de la Amazonia Andina (IBDA)Av. Agricultura 126, Tingo Maria-Perú
DETERMINACIÓN DEL FÓSFORO POR COLORIMETRÍAPreparado por: Manuel Sandoval Chacón, Ph.D.
Director CientíficoEste método de determinación del fósforo es similar al método de Fiske y Subbarow (Anal Chem 28:.. 1756, 1925) Sin embargo, este método proporciona una mayor pendiente en la curva estándar por lo que es más sensible. Algunas de las ventajas incluyen la estabilidad de los reactivos aumentó durante un mayor período de tiempo si se almacena en botellas de color marrón, y el desarrollo de color estable durante al menos 6 horas. Esta característica proporciona flexibilidad con la cantidad de muestras que se puede leer de una sola vez.
I. PrincipioDetección de fósforo inorgánico depende de conversión de fósforo para fosfomolíbdico ácido y la posterior reducción de este ácido para producir solución de color azul. El fósforo en la solución reacciona con el molibdato de sodio ácido [Mo (VI)]. El Mo (VI) del fosfomolibdato se reduce por un agente reductor (p-metilaminofenol sulfato - reactivo de Elon), que tiene sólo un efecto insignificante en el Mo (VI) del ácido molíbdico sin combinar en la misma solución.La cantidad de fósforo presente está determinada por la medición de la intensidad del color azul del fosfomolibdato reducido. El color se debe a la reducción de óxidos coloidales de molibdeno. Para evitar enturbiamiento de la solución coloreada, las proteínas en el plasma sanguíneo, suero u orina deben ser precipitados utilizando ácido tricloroacético (TCA) antes de permitir que el fósforo para reaccionar con el molibdato de sodio.La intensidad del color desarrollado a partir de fosfomolibdato depende de la acidez y la temperatura de la solución. El color se hace estable en solución ácida.El uso de reactivo de Elon como agente reductor, en lugar de la utilización anteriormente de 1-amino-2- ácido naftol-4-sulfónico (ANS) ha sido adoptado por nuestro grupo, debido a la estabilidad de la solución de color final. Además, las pruebas administradas por nos han demostrado que la solución final utilizando el reactivo de Elon es estable por lo menos seis (06) horas.En el método de Fiske y Subbarow, la solución final tiene que ser leído exactamente 15 minutos después de la adición de la ANS. La curva estándar obtenida por el uso de los ANS dio una línea recta sólo para baja concentración (no más de 3 mg / kg) de fósforo. El presente método es tanto más adherente a la ley de Beer y menos dependiente del tiempo.
II. Reactivos2.1. Molibdato ácido: Disolver diez (10) gramos de molibdato de sodio (Na2MoO4) en 400 ml de ácido sulfúrico 2,5 N (34.7ml H2SO4 concentrado en 500 ml de agua destilada).2.2. Reactivo de Elon: Disolver una (01) gramos de sulfato de p-metilaminofenol en 10 ml de 3% de bisulfito de sodio solución (NaHSO3).
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Tube StandardP
(pg/ml)Working P Std.,(ml)
Acid molybdate (ml)
Elon's reagent (ml)
Water(ml)
Final vol. (ml)
1 AZ 0.0 0.0 1.0 1.0 8.0 10.02 S1 0.5 0.5 1.0 1.0 7.5 10.03 S2 1.0 1.0 1.0 1.0 7.0 10.04 S3 2.0 2.0 1.0 1.0 6.0 10.05 S4 4.0 4.0 1.0 1.0 4.0 10.06 S5 6.0 6.0 1.0 1.0 2.0 10.07 S6 8.0 8.0 1.0 1.0 0.0 10.0
Tube SampleID
Unknown P, (pg/ml)
Sample(ml)
Acid molybdate (ml)
Elon's reagent (ml)
Water,ml
Final vol. (ml)
8 003-1 ? 1.0 1.0 1.0 7.0 10.09 003-2 ? 1.0 1.0 1.0 7.0 10.010 003-3 ? 1.0 1.0 1.0 7.0 10.0
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III. Volumen de dilución final puede ser cambiada de 10 ml a lo que sea necesario. Simplemente calcular la cantidad de trabajo P estándar (10 pg / ml) .para ser utilizado para dar a través de 8 p / ml en el volumen final.
IV. V. Volumen de dilución Puede ser definitiva Cambiada de 10 ml una lo necessary mar que. Simplemente Calcular la Cantidad de Trabajo P Estándar (10 pg / ml) última .PARA Ser utilizado párr dar through 8 p / ml en el volumen.
VI. ml utilizar = (pg / ml con baño estándar) x (volumen de Estándar párr PreparAR a) / pg / ml en el Estándar de Trabajo.
Reference1. Harris, W.D. and P. Popat. 1954. Determination of phosphorus content of lipids. Amer. Oil. Chem. Soc. J. 31: 124.2. Fiske, C. H., Subbarow, Y. 1925. The colorimetric determination of phosphorus. J. Biol. Chem. 66: 375.
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