diagnóstico imunológico. aplicaÇÕes dos testes sorolÓgicos diagnóstico acompanhamento...
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Diagnóstico Imunológico
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APLICAÇÕES DOS TESTES SOROLÓGICOSAPLICAÇÕES DOS TESTES SOROLÓGICOS
Diagnóstico
Acompanhamento terapêutico
Epidemiologia
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Diagnóstico de uma doença e a janela imunológica
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DETECÇÃO DE ANTÍGENOS E ANTICORPOSDETECÇÃO DE ANTÍGENOS E ANTICORPOS
AC SISTEMAREVELADORAG
Íntegro
Recombinante
Peptídeo
Monoclonais
PrecipitaçãoAglutinação
Enzima
Radioisótopo
Extrato
Policlonais
FluorocromoPurificado
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Fluorocromos são substâncias que absorvem luz ultravioleta e emitem luz visível, ou seja, ficam fluorescentes
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Anticorpos - a chave para um diagnóstico
• Todas as reações de diagnóstico que usam Ag-Ac, têm por base a capacidade de um Ac reconhecer um dado epítopo- parte estrutural reativa de um antigénio.
• Tipos de Anticorpos:Monoclonais - reagem apenas com
um epítopo específico de um Ag.
Policlonais - ligam-se a vários epítopos de um antígeno.
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• Os anticorpos monoclonais (década de 70): representaram um grande avanço na linha de diagnóstico imunológico dos laboratórios, com eles foi possível aumentar a especificidade dos "kits" e assim, obter resultados mais confiáveis.
• Anticorpos monoclonais: são anticorpos que possuem especificidade para apenas um determinado epítopo do antígeno, diferente dos anticorpos policlonais, onde temos varias imunoglobulinas respondendo a diferentes epítopos de uma mesma molécula antigênica.
Anticorpos Monoclonais (mAb)
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Como é a nossa resposta humoral para um antígeno?
• Nossa resposta imunológica normal a um antígeno é uma resposta policlonal, ou seja, há uma estimulação múltipla de vários clones formadores de anticorpos, cujos produtos representam uma mistura de imunoglobulinas.
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Estratégias para produção de mAbs
• Célula plasmática produtora do anticorpo de interesse.
• Objetivo: imortalizar linfócitos B - Fusão com mieloma.
• Mieloma: Linfócito imortal.
• Células de mieloma escolhidas devem ter características principais: (1) não produzir imunoglobulinas; (2) crescer em meio normal e não em meio de seleção.
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Produção de Anticorpos Monoclonais
• Por fim, você terá hibridomas (células híbridas) que podem ser mantidas in vitro indefinidamente e que irão secretar anticorpos com especificidade definida.
OS ANTICORPOS PRODUZIDOS POR HIBRIDOMAS, DERIVADOS DE UM ÚNICO CLONE, SÃO CONHECIDOS COMO ANTICORPOS MONOCLONAIS (AcMo)
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1- Imuniza-se o rato, camundongos ou hamsters com antígeno e retira-se o baço ou o linfonodo desses animais, ricos em linfócitos B.
2- Essas células são misturadas com o mieloma (não secretor de Ig e que não cresce em meio seletivo)
3- Os hibridomas são testados quanto à presença de anticorpos reativos para o antígeno usado na imunização
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4- Assim que o sobrenadante do poço revela a presença de anticorpos, as células são clonadas e os seus sobrenadantes testados novamente;
5- Os poços positivos são reclonados para garantir a monoclonalidade e a isotipia
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• Por que é necessário usar células de mieloma que cresça em meio de cultura normal, mas não cresça em meio “seletivo”?
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CARACTERÍSTICAS DOS ANTICORPOS MONOCLONAIS
Homogeneidade
Especificidade
Habilidade para ser produzido em quantidades ilimitadas
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Diagnóstico e terapia de tumores
Imunodiagnóstico de doenças infecciosas
APLICAÇÕES DOS ANTICORPOS MONOCLONAISAPLICAÇÕES DOS ANTICORPOS MONOCLONAIS
Identificação de marcadores fenotípicos e análise funcional de moléculas de superfície celular
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Terapia para algumas doenças
• OKT3, se liga a molécula de CD3 na superfície de linfócitos T, é utilizado para prevenir rejeição aguda de órgãos transplantados, por exemplo, rim;