Proyecto Tesis II

Autores: Lissette Gioanna, Horna Acevedo Carlos Wilfredo, Lpez Cenizario UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLLO

TIPO DE INVESTIGACINDe Acuerdo al fin que persigue: De Acuerdo a la tcnica de Contrastacin: Bsica Descriptiva

RGIMEN DE INVESTIGACIN:

Libre

DEPARTAMENTO Y SECCIN AL QUE PERTENECE

EL PROYECTO Departamento Acadmico de Farmacotcnia Seccin Acadmica de Farmacognosia y Farmacobotnica

LOCALIDAD E INSTITUCIN DONDE SE EJECUTARA

EL PROYECTO Localidad: Trujillo Per Institucin: Universidad Nacional de Trujillo

BIENES: Material Biolgico:

Hojas de Sambucus peruviana (sauco) provenientes de la ciudad de Huamachuco. Materiales y Equipos:

Material De uso comn en el Laboratorio.

Equipos:

Balanza Triple Brazo 700/800 series OHAUS US PAT. N 2, 729,439.

Equipo de Lixiviacin

Balanza Analtica OHAUS GA 200 (precisin 0.0001 g)

Espectrofotmetro THERMO modelo GENESSIS 10 UV

Estufa Elctrica Memmert TY U40

Bao Maria Precisterm S- 140

Bomba al vaco Thomas Scientific Mod 5KH33DN68

Tamiz Resh

Solventes: Agua destilada. Alcohol etlico de 96 GL. Reactivos: 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH*) Lab. Sigma Acido sulfrico 10% calidad Merck

PRESUPUESTO Segn Clasificador de Gastos Pblicos para el ao 2012 Cdigo Gastos Presupuestario Costo2.3.1 1.1 1 2.3.1 5.1 2 2.3.1.8.2.1 Alimentos y bebidas de consumo humano Papelera en general, tiles y materiales de oficina Material de Laboratorio S/.18.00 S/.20.00 S/.617.00 S/.150.00 S/.120.00 S/.330.00 2.3. 1 10. 1 2 Material biolgico 2.3.1 99.1 2 2.3.2 1.2 1 2.3.2 2.2 2.3.2 2.4 4 Productos qumicos Pasajes y gastos de transporte Servicios de Telefona e Internet Servicio de impresiones, encuadernacin y empastado TOTAL S/. 1486.00 FINANCIAMIENTO Autofinanciado Recursos de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo S/ 31.00 S/.200.00

PLAN DE INVESTIGACINRealidad Problemtica

JustificacinEl presente trabajo no solo pretende demostrar la actividad antioxidante in vitro de los flavonoides totales obtenidos de la hoja de Sambucus peruviana, sino canalizar la posibilidad de su utilizacin en la prevencin de enfermedades producidas por radicales libres, contribuyendo de esta manera a fomentar estudios cientficos que demuestran su actividad antioxidante in vivo.

PROBLEMA

Cul es la Capacidad Antioxidante in vitro de los Flavonoides Totales obtenidos de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. (sauco) proveniente de la ciudad de Huamachuco? OBJETIVOS

Objetivo General:

Determinar la capacidad antioxidante in vitro de los flavonoides totales obtenidos de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. (sauco) Objetivos Especficos:

Cuantificar flavonoides totales de la hoja de Sambucus peruviana H.B.K. (sauco) proveniente de la ciudad de Huamachuco. Determinar la capacidad antioxidante in vitro de los

DISEO DE CONTRASTACIONDiseo de estudio

MTODO

Parte area de la planta. rbol en periodo de floracin

Recoleccin

Hojas en buen estado

Obtener tamao de partcula adecuada

Preparacin del extracto fluido

Cuantificacion de Flavonoides totales del extracto fluido de Sambucus peruvianaPreparacin de la curva de calibracinPesar 80 mg de quercetina patrn y transferir a una fiola y aforar a 100 mL,

Soluci n Patrn

1.6 ppm

3.2 ppm

4.8 ppm

6.4 ppm

8.0 ppm Realizar un espectro, para obtener el max

9.6 ppm

Realizar 3 lecturas en el espectrofotmetro

Preparacin del BlancoPreparar etanol a 96 GL como solucin blanco

tomar una alcuota de 3mL aproximadamente para la calibracin del espectrofotmetro

Preparacin de la muestra problemaMedir 20 ml del extracto fluido y reflujar con 20 ml de cido sulfrico al 10 % durante dos horas.

Llevar a Bao Maria y concentrar a la mitad

Llevar a refrigeracin y filtrar al vacio

Solubilizar los cristales con 100 ml d etanol 96 GL + 100 ml de agua

Llevar el papel filtro que contiene los flavonoides totales, en forma de cristales, a la estufa a 40C durante 2 horas.

Lavar el residuo con agua helada

Los cristales purificados disolver en etanol de 96 GL y aforar con este a un volumen de 100 ml.

Medir 1 ml de la solucin y aforar a 100 ml

SOLUCION PROBLEMA

Medir 3 ml y realizar la lectura en el espectrofotmetro

Determinacin de la capacidad antioxidante in vitro de los flavonoides totales obtenidos de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. Fundamento del mtodo

2,2-difenil-1picrilhidrazilo

Preparacin del Reactivo: Solucin 2,2-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH*) Preparar una solucin de DPPH* con etanol de 96 GL a una concentracin de DPPH 0.1 mM (0.03943 mg/ml)

Preparacin de la recta de calibracin para la solucin de radical DPPH*

Determinacin de los porcentajes de captura del radical DPPH*

Enfrentar con la muestra problema segn la tabla

Solucin DPPH* + muestra (Para cada tubo)

Tubo

ul demuestra

Tubo

ul demuestra

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

5 10 15 20 25 30 35 40 45 50

11 12 13 14 15 16 17 18 19 20

55 60 65 70 75 80 85 90 95 100Leer 3 absorbancias de cada tubo en el espectrofotmetro(Se monitorea las absorbancia desde un tiempo cero hasta 30 minutos)

Calcular el porcentaje de radicales DPPH* capturados, con la siguiente formula

Determinacin de la cantidad necesaria de la muestra (antioxidante) para reducir en un 50% la concentracin inicial del radical DPPH (IC50)

5b 5 IC5 = 5 m

Donde: IC50 : cantidad necesaria de la muestra para reducir en un 50% la concentracin inicial del radical DPPH (l) b : Intercepto de lnea de regresin lineal m : Pendiente de la lnea de regresin lineal

Determinacin del % inhibicin (%I)

Donde: A : Absorbancia del blanco A1 : Absorbancia de la muestra

Anlisis de DatosLos datos sern procesados en el programa X Microsoft Office Excel 2007. Caracterizados mediante parmetros estadsticos descriptivos: Media Aritmtica ( ) y Desviacin Estndar ()