8/18/2019 Diskusi kimfor

1/2

Diskusi

Pemanfaatan yang sukses dari GRP sebagai bagian dari prosedur penyaringan sampel

rutin bergantung pada imina yang terbentuk antara GRP dan molekul keton yang bersifat

reversibel. Pembentukan produk dapat maksimal ketika reaksi dilakukan pada kisaran pH 4-

5. Oleh karena itu, untuk kepekaan dan presisi kuantitatif, lebih baik untuk tidak memurnikan

molekul analit dari kelebihan reagen GRP sebelum ineksi. !i ba"ah kondisi HP#$ yang

digunakan, % &g GRP diineksikan untuk dielusi selama ',5 menit pertama, sehingga

kemudian dapat se(ara otomatis menuu ke penampungan limbah. )ifat hidrofilik dari GRP

memungkinkan dengan mudah dibilas dari instrumentasi #$-*) , tidak menimbulkan

 penumpukan pada instrumen, atau pemeliharaan tambahan. )etelah proses pemisahan tidak 

diperlukan adanya pembersihan, reaksi pemisahan uga tidak lebih rumit daripada

rekonstitusi sampel di fase gerak HP#$. 

Hanya sekitar setengah dari analit dalam metode ini yang dikonversi ke dalam bentuk 

amina kuartener yang mengandung derivat GRP. +nalit yang tersisa tidak terpengaruh oleh

reagen GRP dan hanya terprotonasi, atau terprotonasi dan dehidrasi selama proses

ele(trospray. *eskipun mereka tetap dalam bentuk underivat, telah diamati selama

 pengembangan metode sensitivitas setara atau lebih baik untuk sebagian analit underivat

ketika GRP ditambahkan kedalam ekstrak urin dibandingkan dengan ketika tidak 

ditambahkan. *ekanisme di balik penelitian ini masih belum elas, tetapi kemungkinan

karena derivatisasi metabolit endogen urin tidak dimonitor, menyebabkan "aktu retensi

mereka bergeser auh dari underivatnya, pemantauan steroid menyebabkan penekanan

ionisasi menurun.  $lenbuterol adalah penge(ualian untuk pengamatan ini #O! meningkat

mesikun tidak ada GRP. Hal ini disebabkan (o-elusi dengan kromatografi kelebihan reagen

GRP yang diduga dapat menyebabkan penekanan ionisasi (lenbuterol, namun #O! untuk 

(lenbuterol saat ada GRP masih auh di ba"ah +!+/s *RP#.

!erivatisasi kelompok keton dengan hasil GRP menghasilkan pembentukan isomer 

(is 0 trans. 1ntuk epitrenbolone, gestrinon, 2HG, dan standar baku internal metiltestosteron,

isomer kromatografi ini dihasilkan diba"ah gradien HP#$. Pemisahan kromatografi isomer 

ini menyebabkan dilusi sinyal analit tetapi mengasilkan pun(ak kromatografi peak yang

dapat digunakan sebagai bagian tambahan bukti konfirmasi untuk sampel positif.

*etode yang dielaskan di dalam urnal ini tidak berguna untuk analisisandrostenedion dan dion yang mengandung metabolit 3 -hydroyandrostenedione. 2urunan

 bis-GRP terlalu hidrofilik untuk mengelusi kelebihan GRP, dan umlah yang tidak signifikan

dari turunan mono-GRP dibentuk untuk memenuhi persyaratan sensitivitas.  )kenario ini

diberlakukan untuk semua dion yang mengandung steroid.  !alam salah satu pengamatan,

menunukkan bah"a hal itu tidak mungkin6 7- hydroymethyl-'8- metilandrosta-',4-diena-

'', '89-diol-:-one metabolit formebolone dan mestanolone metabolit Oymetholone

mengandung kelompok fungsional keton, namun lebih baik untuk dianalisis dalam bentuk 

turunan mereka, hal tersebut kemungkinan karena asosiasi kesetimbangan reaksi konstan ; 

d ke(il dan 0 atau karena tingkat disosiasi reaksi konstan ; d terlalu besar menyebabkankerugian derivatif yang (epat pada penghapusan kelebihan GRP ketika sampel disuntikkan ke

8/18/2019 Diskusi kimfor

2/2

kolom HP#$. ;arena hal tersebut, mungkin ada dion yang mengandung steroid yang se(ara

efektif memperoleh hanya satu turunan GRP, memungkinkan untuk dilakukan analisis dengan

metode yang dielaskan di dalam urnal ini.

!i ba"ah kondisi yang dielaskan didalam ural ini, fulvestrant yang tidak tidak 

mengandung gugus keton atau aldehida yang diderivatisasi oleh GRP, kemungkinan

merupakan kelompok sulfoksida. *enariknya, meskipun derivatif benar-benar dihilangkan

selama proses ionisasi dan menghasilkan underivat, ion fulvestrant akan terprotonasi. Reaksi

ini karena underivat fulvestrant tidak terelusi dalam kolom HP#$ atau dari kolom !