![Page 1: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/1.jpg)
การศกษาวงศวานววฒนาการของไมในสกล Hibiscus ของไทย และสกลใกลเคยงโดยใชขอมลดเอนเอในสวนของยนส nadhF
The phylogenetic analysis of Hibiscus (Malvaceae) of Thailand and allies genera using gene nadhF
นายสมบรณ เฉยสวสด สาขาวทยาศาสตรชวภาพปาไม ภาควชาชววทยาปาไม คณะวนศาสตร มหาวทยาลยเกษตรศาสตร
ทมารปภาพ : http://www.thaiarcheep.com
![Page 2: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/2.jpg)
หวขอบรรยาย
อปกรณ สรปและขอเสนอแนะ
วตถประสงค
บทน า
ผลและวจารณ
วธการ
![Page 3: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/3.jpg)
ดอก เกสร ใบและผล
บทน ำ บทน า ลกษณะทวไปของพรรณไมสกลชบา (Hibiscus)
ทมารปภาพ : http://www.thaiarcheep.com
![Page 4: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/4.jpg)
บทน า(ตอ) แผนภมตนไม (Phylogenetic tree)
คอ แผนภมทแสดงถงสายววฒนาการซงมอยหลายลกษณะ โดยใชกง หรอแตละสาขาแทนสายยอยในการววฒนาการ
(ทมารปภาพ: http://imgkid.com/phylogenetic-tree-of-life.shtml)
![Page 5: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/5.jpg)
วตถประสงค วตถประสงค
เพอศกษาวงศวานววฒนาการของไมในสกล Hibiscus และสกล ใกลเคยงโดย ใชขอมล ดเอนเอสวนของยนส nadhF
เพอตรวจสอบวงศวานสายเดยว (monophyletic) ของไมในสกล Hibiscus และสกลใกลเคยง
![Page 6: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/6.jpg)
อปกรณ อปกรณ
3. เครองท าพซอาร
5. เครองปนเหวยง
2. โกรงบดยา 1. อปกรณเกบตวอยางพรรณไม
4. ชดอเลกโตรโฟรซส
6. อางน าควบคมอณหภม
ทมารปภาพ : http://www.b2bthai.com
![Page 7: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/7.jpg)
1. การสกดดเอนเอ
1.1) จดหาตวอยางพรรณไม
1.2) น าตวอยางมาบดกบไนโตรเจนเหลวแลวน าใสหลอดขนาด 1.5 มลลลตร จ านวน 3 หลอด
วธการ วธการ
![Page 8: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/8.jpg)
วธการ (ตอ)
1.4 เตม CTAB high salt ปรมาณ 600 ไมโครลตร และ sarkosyl ปรมาณ 50 ไมโครลตร แลวน าไปบมทอณหภม 60 องศาเซลเซยส นาน 60 นาท แลวเขยาทกๆ 10 นาท
1.3 เตม sorbital buffer 1 มลลลตร ลงไปแลวน าไปปนเหวยง 10 นาท เทของเหลวใสทง ท าจนกวาตวอยางจะไมหนดเหนยว
วธการ(ตอ)
![Page 9: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/9.jpg)
1.6) ท าขอ 1.4 และ 1.5 ซ าอกรอบ แตทงสวนทเปนตะกอนไปเกบไวแตสวนทเปนของเหลวใส
1.5) เตม CIA ปรมาณ 550 ไมโครลตร เขยาใหเขากน แลวน าไปปนเหวยง เปนเวลา 10 นาท ดดสวนทเปนของเหลวใสออกไปใสหลอดใหม
วธการ(ตอ)
![Page 10: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/10.jpg)
1.7) น าหลอดทเปนของเหลวใสทไดจากขอ 1.6 มาเตม Isopropanal ปรมาณ 500-600 ไมโครลตร และ 3M Sodium Acetate ปรมาณ 30 ไมโครลตรน าไปปนเหวยง เปนเวลา 10 นาท แลวเทสวนใสออกจะไดสวนทเปนตะกอนของดเอนเอ
1.8) เตม 70% Ethanal ปรมาณ 500 ไมโครลตร เพอลางดเอนเอ น าไปปนเหวยง เปนเวลา 10 นาท แลวเทสวนทเปนของเหลวใสทง ท าซ า 2 รอบ
วธการ(ตอ)
![Page 11: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/11.jpg)
1.9) คว าหลอดตวอยางลงบนกระดาษ ซบใหแหงแลวตากทงไว 1 คน แลวเตม TE buffer ปรมาณ 50 ไมโครลตร เกบไวทอณหภม 4 องศาเซลเซยส เพอรอท าขนตอไป
วธการ(ตอ)
![Page 12: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/12.jpg)
2. การตรวจคณภาพและปรมาณ ดเอนเอ
2.1) เตรยมเตรยมเจลอะกาโรสเขมขน 0.8%
2.2) หยดตวอยางดเอนเอทผสมส ลงในชองเจล
วธการ(ตอ)
![Page 13: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/13.jpg)
2.3 เปดเครองแลวปรบกระแสไฟฟา 100 โวลต นาน 25-30 นาท ปดเครอง ยายแผนเจลลงในน ากลนทมเอธเดยมโบรไมด ความเขมขน 0.5 ไมโครกรม/มลลลตร นาน 10 นาท
2.4 ลางแผนเจลในน าไหลนาน 10 นาท แลวน าไปดภายใตแสงอลตราไวโอเลทโดยใชเครองเจลดอกคเมนทแลวตรวจสอบคณภาพดเอนเอทได
วธการ(ตอ)
![Page 14: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/14.jpg)
3. การเพมปรมาณดเอนเอดวยวธพซอาร
3.1) น าดเอนเอทได มาผสมกบสารละลายทใชในการท า พซอาร
3.2) น าสารละลายทผสมกนแลว เขาเครอง พซอาร โดยใชโปรแกรม CP 65
วธการ(ตอ)
![Page 15: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/15.jpg)
วธการ(ตอ) No. Forward Primer Reward Primer
1 ndhF1F mal ndhF803R
2 ndhFd536F ndhFd1318R
3 ndhFd1201F ndhFd2110R
คไพรเมอรทเหมาะสมทใชในขนตอน พซอาร
![Page 16: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/16.jpg)
ชอ โพธทะเลชอดอกตง(Thespecia populnea) หมายเลขตวอยางคอ H4
ชอ พดตาล (Hibiscus mutabilis) หมายเลขตวอยางคอ H3
ผลและวจารณ
ตวอยางพรรณไมแหงทเกบมาท าการศกษา
![Page 17: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/17.jpg)
ชอ กระเจยบเขยว (Abelmoschus esculentus) หมายเลขตวอยางคอ H6
ชอ กระเจยบแดง (Hibiscus sadariffa) หมายเลขตวอยางคอ H5
ผลและวจารณ
ตวอยางพรรณไมแหงทเกบมาท าการศกษา
![Page 18: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/18.jpg)
ชอ โพธทะเลชอดอกยอย (Thespesia populneoides) หมายเลขตวอยางคอ H7
ชอ ทองพนดล (Decaschistia parviflora) หมายเลขตวอยางคอ H8
ตวอยางพรรณไมแหงทเกบมาท าการศกษา
ผลและวจารณ
![Page 19: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/19.jpg)
ชอ พนตะวน (Hibiscus grewiifolius) หมายเลขตวอยางคอ H9
ผลและวจารณ
ตวอยางพรรณไมแหงทเกบมาท าการศกษา
![Page 20: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/20.jpg)
ผลการสกดดเอนเอของพรรณไมสกล Hibiscus และสกลใกลเคยงดวยวธ Modified CTAB พบวาดเอนเอมความสมบรณ ไมมการแตกหก
ผลและวจารณ H1
H3 H4
H5 H6 H7 H8 H9 H10
![Page 21: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/21.jpg)
ปรมาณของดเอนเอทไดจากการท าพซอารดวยคไพรเมอรทง 3 ค สามารถเพมปรมาณไดทง 9 ตวอยาง
a b c
ผลและวจารณ (ตอ)
![Page 22: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/22.jpg)
การวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมของพรรณไม สกล Hibiscus และ สกลใกลเคยง เมอน ามาสรางเปนแผนภมตนไม (Phylogenetic tree) สามารถจดแบงออกไดทงหมด 10 เครด
ผลและวจารณ (ตอ)
![Page 23: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/23.jpg)
เครด 1 มคา boostap support นอยกวา 50 จดอยในกลมท 5 มสมาชกอยในเครดน 13 ชนด
ผลและวจารณ (ตอ)
![Page 24: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/24.jpg)
เครด 2 มคา boostap support นอยกวา 50 มสมาชกอยในเครดน 7 ชนด
ผลและวจารณ (ตอ)
![Page 25: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/25.jpg)
เครด 3 มคา boostap support นอยกวา 50 จดอยในกลมท 4 มสมาชกอยในเครดน 17 ชนด ซงเปนเครดทมจ านวนสมาชกเยอะทสด
เครด 1, 2 และ 3 มความสมพนธทใกลเคยงกนเนองจากกงของความสมพนธเปนแบบแขนค (Binary)
ผลและวจารณ (ตอ)
![Page 26: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/26.jpg)
ในเครด 4, 5, 6 และ7 นนมกงของความสมพนธแบบแขนเดยว (Mononary)
ผลและวจารณ (ตอ)
![Page 27: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/27.jpg)
เครด 8-10 นนเปนเครดของพนธไมสกลอน ซงไมมสกล Hibiscus รวมอยในเครดเหลานดวย
ผลและวจารณ (ตอ)
![Page 28: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/28.jpg)
สรป
ไมในสกลชบาและสกลใกลเคยงสามารถจดแบงออกไดทงหมด 10 เครด และ เครดท 1-7 เปนกลมของพวกสกลชบา ซงอยในเผา Hibisceae
โพธทะเลชอดอกตง (Thespecia populnea) และ โพธทะเลชอดอกยอย (Thespesia populneoides) ทถกจดอยในเครดท 9 นนอยในเผา Gossypieae ซงไมมสกล Hibiscus แทรกอย
![Page 29: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/29.jpg)
สรป (ตอ) ไมในสกลชบามวงศวานววฒนาการเปนวงศวานคขนาน (Paraphyletic) เนองจากมสกลอนเขามาแทรกบางชนด คอสกล Decaschistia, สกล Malvaviscus,สกล Abelmoschus, สกล Pavonia, สกล Kosteletzkya และสกล Macrostelia
การปรากฏของลกษณะแบบนบงบอกวา อาจจะตองมการรวมทกสกล ใหเขามาอยในสกล Hibiscus หรอแบงแยกสกล Hibiscus ออกเปนสกลยอย ทงนกขนอยกบขอมลทางสณฐานวทยา (Morphology) หรอขอมลในสวนอนทเกยวของ
![Page 30: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/30.jpg)
ขอเสนอแนะ
ตวอยางทท าการศกษาควรมจ านวนชนดมากกวาน เพอใหการวเคราะหหาความสมพนธมความสมบรณมากยงขน
ในระหวางการสกดดเอนเอควรระมดระวงเปนอยางมาก เนองจากตวอยางมาปนกนท าใหเกดความผดพลาดในการทดลอง
การแกไขขอมลของล าดบนวคลโอไทดตองใชความช านาญและรอบคอบ ควรมผเชยวชาญคอยใหค าปรกษาในระหวางการท าการแกไข
![Page 31: การศึกษาวงศ์วานวิวัฒนาการของไม้ในสกุล Hibiscus ของไทย และ ...bioff.forest.ku.ac.th/PDF_FILE/APIRL_2015/6.pdf ·](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022041222/5e0c41c86c798c282e7afbe1/html5/thumbnails/31.jpg)
ขอขอบพระคณ
ขอขอบพระคณ ผชวยศาสตราจารย ดร.สธร ดวงใจ อาจารยทปรกษาโครงงานทคอยใหค าแนะน าตลอดการท าโครงงาน และอาจารยทกทาน เพอนๆ พๆ นองๆ ทกคนทคอยใหความชวยเหลอและใหค าปรกษา และขอขอบคณ
ครอบครวทเปนก าลงใจตลอดการท าโครงงานในครงน